Name: effects of blast-induced neurotrauma on pressurized rodent middle cerebral arteries
Uploaded: 2019-04-01T14:00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries at JoVE.com

Studier avslutades som en del av ett team som stöds av The Moody Project för translationell traumatisk skada hjärnforskning och W81XWH-08-2-0132 award från US Army Medical Research och Material kommando - försvarsdepartementet.

Alla experimentella protokoll godkändes av den institutionella djur vård och användning kommittén (IACUC) vid University of Texas Medical Branch, en förening för bedömning och ackreditering av laboratorier Djurvård (AAALAC) ackrediterade anläggning.
1. animaliskt förberedelse för ABS Blast skada
<ol><li>Slå på mekaniska gnagare volym ventilatorn och Ställ andningsfrekvens mellan 40 – 45 andetag per minut.</li>
	<li>Switch termostatiskt kontrollerad värmande filt ON och tejpa en blå filtdyna över den.</li>
	<li>Fästa fläkt slang till ventilatorn.</li>
	<li>Samla endotrakeal intubering släde, laryngoskopet, länge pickup pincett, mandrängen endotrakealtub och en bomullstuss indränkt med 0,05 mL 1% lidokain HCl. Ordna på blå pad.</li>
	<li>Bekräfta att gnagare bedövningsmedel ”bubbla” kammare, ventilator, luftkammare och isofluran kammare slangarna ordentligt ansluten och knutna till deras respektive plug eller uttag. Bedövningsmedel bubbelkammare klämman ska vara öppen; ventilator klämman ska stängas.</li>
	<li>På luftkammare, Ställ vredet för rumsluften 2 L/min och vredet för syre till 1 L/min.</li>
	<li>Slå på isofluran och Ställ vredet till 4% av volymen blandning.</li>
	<li>Starta en timer och placera en ung vuxen (≈3 månader gamla), manliga Sprague-Dawley råtta (350 – 400 g) i narkos bubbla kammaren för 4 – 6 min.</li>
	<li>Väga råtta i 2 min märket.</li>
	<li>Bekräfta råtta är fullt anesthetized genom att försiktigt nypa hind tass tår. Om inga tass uttag observeras, minska luften och Ställ in vredet till 1 L/min, syre till 0,4 L/min och isofluran till 2% av volymen blandning.</li>
	<li>Slå på rektal registrerande fjärrtermometer temperaturvakt.</li>
	<li>Öppna klämman till ventilatorn och stäng klämman till narkos bubbla kammaren.</li>
	<li>Ta bort råtta från narkos bubbelkammare och position på endotrakeal intubering släde.</li>
	<li>Intubation råtta. Placera laryngoskopet i djurets mun, Använd långa pickup pincett när du placerar tungan ur vägen, provstickan lidokain-indränkt bomull svabb spets längs insidan av halsen och försiktigt in Mandrängen Innehållande endotrakealtub i råttans luftstrupen.</li>
	<li>När intuberade, ände ventilator slangen till utsidan slutet av endotrakealtub och iaktta och bekräfta råtta andas stadigt och utan svårighet.</li>
	<li>Knyta ner endotrakealtub in plats ta hand att tungan är fri från Knut.</li>
	<li>Applicera vit vaselin att Rektalblödning registrerande fjärrtermometer sonden och sätt direkt under svansen.</li>
	<li>Ta bort ABS preparatet facket från preparatet kammaren och placera under värmelampa för uppvärmningen innan råtta placering på bricka.</li>
	<li>Raka toppen av råttans hårbotten börjar ovanför ögonen och ner till mellan öronen.</li>
	<li>Skär en standardstorlek skum öra plugg i identiska halvor med sax. Börja i mitten av basen av kontakten och skär rakt upp till den runda sidan. Infoga en halverad bit i varje öra spets först längs hörselgången tills kontakt sker med trumhinnan.</li>
	<li>Övervaka rektaltemperatur. När en temperatur av 37 ° C har uppnåtts, är råtta redo att lastas i ABS preparatet facket.</li>
	<li>Säkra råtta på ABS preparatet facket. Ta bort respiratorn slangen från endotrakealtub och snabbt men mjukt Skjut råtta i den övre änden av facket, försiktigt vägleda huvudet genom rakhuvudshållaren öppning och gummikrage. Tillbaka ventilator slangen tillbaka in i endotrakealtub, kontrollera gummi halsbandet så att det är säkert men inte tätt runt halsen och verifierar att råttan är att lägga i en liggande sidoläge (figur 3).</li>
	<li>Stäng av isofluran och ta bort respiratorn slangen från endotrakealtub.</li>
	<li>Lås och säkra ABS preparatet facket som innehåller sövda råtta in i ABS preparatet kammaren.</li>
	<li>Försiktigt nypa hind paw tår med lång pincett varje 3 s tills ett tillbakadragande reflex svar framkallas.</li>
</ol>2. ABS Blast enhet förberedelse och Blast-TBI induktion
Obs: Protokollstegen 2.1 – 2.10 färdigställs normalt samtidigt som steg 1,1 – 1,22 så ABS är redo för blast skada administration rätt efter råttan är lastad och säkrade in preparatet kammare.
<ol><li>Lossa hydraulisk hand pumpen (figur 4A) vredet för att möjliggöra eventuella kvarvarande instängd luft fly från föraren kammaren (figur 4B) och att lossa kammaren från dess förseglar.</li>
	<li>Lossa locket muttrarna (figur 4C) från all-tråd stängerna (figur 4D) omger föraren kammaren och skjut kammaren till vänster och bort från expansionskammare (figur 4E).</li>
	<li>Helt ta bort två all-tråd stavar och deras motsvarande kupolmuttrar ligger högst upp på föraren avdelningen för att möjliggöra placering av mylar täcker mellan föraren och expansionskammare.</li>
	<li>Stack och tejp tillsammans längs övre kanten fyra före snittet och uppmätta (30 cm längd, bredd 20 cm, 0,004 tum tjock) mylar blad (bildar en mylar ' membran') med en 2,54 cm bit maskeringstejp. Använder en andra bit tejp, tejpa ordentligt den övre kanten av mylar membranet till toppen av expansionskammare och mitt över öppningen mellan föraren och expansion kamrarna (figur 4F).</li>
	<li>Säkra förare kammaren mot mylar membranet genom att ersätta två all-tråd stavar längst upp på avdelningen och hand-skärpning alla kupolmuttrar kring kammaren.</li>
	<li>Placera tillbehöret stålblockets mot hydraulisk hand pumpen block och driver kammaren tills säkert passa.</li>
	<li>Dra åt hydraulisk hand pumpen vredet och bekräfta driver kammaren förblir trycksatt med inga läckor genom att observera ett konstant tryck tröskelvärde på hydrauliska mätaren.</li>
	<li>Öppna filen utlösare förvärv som registrerar ABS blast enhet trycket spår på ABS blast enhet datorn.</li>
	<li>Lossa tryckluft tankens (figur 4G) huvudknappen nog något öppna luftvägarna.</li>
	<li>Driva den hydraulisk handpumpen tills indikatorn mätaren når den röda pilen anger en önskad kammare trycknivå av ≈5, 000 psi.</li>
	<li>Säkra och placera den sövda djuren på ABS preparatet facket (figur 4H) i en liggande sidoläge (figur 3) och låsa preparatet facket in i kammaren av ABS-exemplaret (figur 4jag).</li>
	<li>Försiktigt nypa en hind tass med lång pincett varje 3 s tills ett tillbakadragande reflex svar framkallas.</li>
	<li>Klicka på Start på sidan öppnade förvärv på ABS blast enhet datorn.</li>
	<li>När fönstret 'Acquisitioning' visas på skärmen, tryck på och håll ner den ABS blast enhetstrigger tills explosionen slocknar, spricker mylar membranet och administrera den ABS blast skadan (20,9 psi ±1.14, 138 kPa ±7.9) till råtta. Direkt efter explosionen detonerar, starta en andra timer för att hålla koll på hur mycket tid (i min och s) förflutit efter skada.</li>
	<li>Ta bort råttan från ABS preparatet facket och återgå till blå filtdyna och värmande filt, placera honom fullt ut på hans rygg för bedömning av rätande reflex dämpning.</li>
	<li>Registrera tiden för återkomst den rätande reflexen. Att observera andra timern, dokument i min och s hur lång tid efter skada som det tar för råttan att rulla från rygg till sin mage tre på varandra följande gånger. Återgå till råtta till narkos bubbla kammaren.</li>
	<li>Lossa hydraulisk hand pumpen vredet för att möjliggöra driver kammare lossa och rörelse.</li>
	<li>Dra åt tryckluft tankens huvudknappen för att stänga luftvägarna.</li>
</ol><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58792/58792fig3.jpg"> Figur 3 : Råtta placering på ABS preparatet bricka och släpper ABS. Riktning och orientering av studien djur släpper ABS. När den placeras i ABS, är djuret i en tvärgående liggande position med den dorsala ytan av huvudet vinkelrätt mot chock våg (Röda pilar). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58792/58792fig3large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58792/58792fig4.jpg"> Figur 4 : Avancerad Blast Simulator (ABS) shock tube enhet Schematisk. Huvudkomponenterna på ABS. A = hydraulisk handpump; B = föraren kammare; C = kupolmuttrar; D = all-tråd stavar;  E = expansionskammare; F = läge av mylar membran placering; G = komprimerad luftcylindrar; H = preparatet bricka; Jag = prov kammare.  <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58792/58792fig4large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a> 
3. beredning av gnagare MCA PSS lösning
Obs: Protokollstegen 3.1 – 3.3 färdigställs normalt samtidigt som steg 1,1 – 1,22 till har PSS lösningen är klar för användning.
<ol><li>Förbereda och blanda en 1 000 mL fysiologisk saltlösning (PSS) av följande sammansättning och koncentrationer: 130 mM NaCl. 4.7 mM KCl; 1.17 mM MgSO4∙7H2O; 5 mM glukos; 1,5 mM CaCl2; 15 mM NaHCO3.</li>
	<li>Temperera PSS med en gasblandning av 21% O2 och 5% CO2 i en balans av N2. Lösningen är klar när pH läser 7,4. Obs: Alla gaser erhålls från komprimerad gasflaskor i de ovan nämnda koncentrationerna.</li>
	<li>Fyll på behållaren flaskor och slangar med beredd PSS lösning och chill återstående lösningen.</li>
</ol>4. utvinning av gnagare MCA segment
<ol><li>Efter dokumentera hur länge den rätande reflex, återvända råtta till narkos bubbla kammaren. Stäng klämman till ventilatorn och öppna klämman till kammaren. Sväng av isofluran vidare till 4% av volymen blandning och håll råttan i kammaren för 2 – 3 min tills djupt sövda.</li>
	<li>När råttan är sövda, öppna klämman till ventilatorn och stäng klämman till narkos bubbla kammaren. Minska isofluran till 2% av volymen blandning, och ta bort honom från bubbla kammaren. Placera honom på magen på den värmande filten och Stick in änden ventilator till utsidan slutet av endotrakealtub.</li>
	<li>Upprätthålla mekanisk ventilation på en andningsfrekvens mellan 40 – 45 andetag per minut och anestesi på 2% av volymen blandning för antingen 30 eller 60 min omedelbart post-bTBI skada.</li>
	<li>Efter slutförandet av antingen 30 eller 60 min överlevnadstid, öka isofluran till 4% av volymen blandning, och djupt söva för 5 – 6 min. omedelbart avliva genom halshuggning med en gnagarspecifika giljotin. Obs: I dessa experiment höll vi djuren bedövas och mekaniskt ventilerade efter återlämnande av rätande reflex till halshuggning.  Om studien kräver längre överlevnad tidpunkter, bör analgetika ges till djuret innan uppkomsten från anestesi.</li>
	<li>Ta försiktigt bort hjärnan från skallen. Använd en #10 skalpell blad för att göra en central, 1,5 tum vertikalt, ben djup snitt från toppen av Rakad hårbotten ner till den occipital condylen.</li>
	<li>Använd små ben rongeurs öppna och separera hårbotten huden från skallbenet.</li>
	<li>Använd stort ben rongeurs att skära och extrahera occipital, interparietal och nedre halvan av de pannben innesluta hjärnan.</li>
	<li>Använd en kirurgisk spatel för att försiktigt gräva hjärnan ur skallen när hjärnan är gratis för omgivande ben. Obs: Ta extrem försiktighet när separera hjärnan från skallen så att inte onödigt bogserbåt, jerk eller dra känsliga MCA segment från kraniala väggen.</li>
	<li>Sätta in skördade hjärnan på den kylda PSS lösningen i ett litet glas petriskål som vilar direkt ovanpå en solid isblock.</li>
	<li>Ta försiktigt bort både vänster och höger MCA början på den Circle of Willis. Fortsätta att ta bort segmentet sidled och dorsalt för cirka 4 – 5 mm.</li>
	<li>Försiktigt rengöra insamlade MCA segment av cirka 4 – 5 mm i längd av någon bindväv som använder microforceps.</li>
	<li>Montera MCAS på arteriograph. Cannulate den proximala änden av varje segment med den första glas mikropipett (diameter ≈70 µm) och säkra med en 10-0 nylon sutur.</li>
	<li>Mjukt BEGJUTA lumina med PSS att ta bort eventuella kvarvarande blod och annat innehåll från lumen.</li>
	<li>Cannulate den distala änden av varje segment med den andra mikropipett utan stretching segmentet MCA och säkra med en 10-0 nylon sutur.</li>
	<li>Efter framgångsrika montering av MCA-segmentet, placera kammaren ovanpå en inverterad mikroskopets scenen för förstoring av fartygen. Mikroskopet är utrustad med en videokamera, monitor och en video scaler kalibreras med en optisk mikrometer för arteriell diameter mätningar.</li>
	<li>Fyll varje segment och omgivande arteriograph badet med kontinuerligt cirkulerade PSS värmas från rumstemperatur till 37 ° C och jämviktas med gasblandningen av 21% O2 och 5% CO2 i en balans av N2.</li>
	<li>Temperera segmenten MCA vid ett tryck på 50 mmHg för 60 min genom att höja reservoar flaskorna ansluten till Mikropipetter till lämplig höjd ovan segment. Tryckgivare som ligger mellan Mikropipetter och reservoar flaskor kommer bedöma transmural tryck inom segmentet MCA som anger när önskat 50 mmHg tryck uppnås.</li>
	<li>Efter avslutningen av perioden Jämviktstiden, öka intravaskulär trycket till 100 mmHg genom att ange den reservoar flaskor i olika höjder.</li>
	<li>Leverera 30 mM K+ (för bekräftelse av fartyget kontraktion) via den luminala perfusatet och åtgärd arteriell diametrar. Cirka 10 min senare leverera 10-5 M Ach (för fartyget dilatation) och mäta arteriell diametrar.</li>
	<li>Undersöka fartyget förhalande svar. Lägre reservoar flaskorna att minska intravaskulär trycket från 100 mmHg till 80 mmHg. Tillåta segmenten MCA temperera för 10 min. mått arteriell diametrar.</li>
	<li>Minska det intravaskulära trycket från 80 mmHg till 60 mmHg. Tillåta segmenten MCA temperera för 10 min. mått arteriell diametrar.</li>
	<li>Minska det intravaskulära trycket från 60 mmHg till 40 mmHg. Tillåta segmenten MCA temperera för 10 min. mått arteriell diametrar.</li>
	<li>Minska det intravaskulära trycket från 40 mmHg till 20 mmHg. Tillåta segmenten MCA temperera för 10 min. mått arteriell diametrar.</li>
</ol>

Författarna har något att avslöja.

Som med alla protokoll och instruktioner, är det absolut nödvändigt att vissa steg för protokollet i denna särskilda undersökning följs så exakt och så exakt som möjligt. Efter den inledande intubation av råtta är det viktigt att bekräfta att det är att andas lugnt och utan svårighet. Av misstag sätter endotrakealtub i matstrupen i stället för luftstrupen resulterar i rasping, svårt andetag, blödning och den efterföljande medryckande råttans på grund av bristfällig smärtlindring leverans till lungorna.
När tejpning mylar membranet täcker över centrum av öppningen mellan föraren och expansion kammaren, är det nödvändigt att arken är centrerade och täcker hela öppning39,41. Misaligning täcker över öppningen kommer att resultera i luftläckage från föraren kammaren, en droppe i erforderligt tryck för burst-membranpotentialen och förnekande av administrationen av den blast skadan. Korrekt placera och säkert passande tillbehör stål blocket mot hydraulisk handpump block och föraren avdelningen är också viktigt som är åtdragning hydraulisk hand pumpen vredet och bekräftar driver kammaren förblir trycksatt utan läckor. Korrekt placering av stålblockets tillåter föraren kammaren till tätt nära mot den expansionskammare, vilket skapar den obligatoriska tätningen krävs över kammaren öppning av Mylar membran arken och mellan föraren och expansion kammaren.
Under förberedelserna innan de MCA fartyget extraktioner, gasning PSS med nödvändiga blandningen av 21% O2 och 5% CO2 i en balans av N2 balanserar lösningen och underlättar necessitated neutrala fysiologiska pH behövs för en arbetar PSS lösning21,33,34.
Equilibrating segmenten på ett konstant tryck för 60 min21,32,33,34 är extremt obligatoriskt eftersom detta steg tillåter segmenten att tygla följande en maximal dilatation visas under deras första primära trycksättning. Denna händelse visar förekomsten av spontana tonen, en egenskap som tyder på en frisk artär32,33,34. Även om diverse trycknivåer för segmentet Jämviktstiden använts i andra studier33,34,42, denna studie och de av Mathew et al.21, Golding et al.35 och Golding et al.43 jämviktas segmenten på 50 mmHg. Medan equilibrating insamlade segment någonstans mellan 40 mmHg – 100 mmHg32 möjliggör vissa flexibilitet och modifiering för steget i protokollet, en Jämviktstiden timmarsperiod inom de parametrarna som tryck slutligen bekräftar friska artärer behövs för fortsätta experimentet.
Ta extrem försiktighet när du tar bort hjärnan från skallen och de vänstra och högra MCA-segment från den Circle of Willis samtidigt som dessa fartyg intakt är kanske det viktigaste steget i hela protokollet. Punktera hjärnan med den ben rongeurs, kommer att riva eller svår stretching av segmenten under borttagning eller av misstag dra kärlen med kirurgisk spateln när grävning hjärnan ur skallen slutändan resultera i förstörelsen av den avver- MCA'S, orsakar oanvändbar segment och avbröt användning av denna uppsättning artärer, slutligen tömning hela experimentet för detta djur.
Även mäta cerebral vaskulär Svaren till förhalande eller constrictory stimuli i MCA segment ex vivo samlas in efter effekt eller blast TBI Invivo har gett framgång, är metoden inte utan dess svårigheter eller begränsningar. Kanske en av mer märkbara komplexiteten kopplad till att undersöka konsekvenserna av TBI om avyttring av de cerebrala kärl du lossar TBI explicit effekter på fartyg från implicita effekterna som uppstår på grund av de olika material och element som genereras av de skada hjärnan44. Denna tänkbara rådlöshet kan potentiellt kringgås genom att analysera ex vivo vasoconstrictory och vasodilaterande reaktioner skördas, perfusion och/eller trycksatt MCA'S. I ett försök att minska varaktigheten av tid som cerebrala artärer i vivo utsätts för lokalt urladdat parenkymal vasoaktiva materialet före döden, samling av cerebrala artärer direkt efter TBI kan minska graden av sådan långvarig exponering effekter. Ex vivo-studier på isolerade MCAS dessutom presentera utsikterna att analysera mekanismer av traumatisk vaskulär skada genom användning av särskilda receptoragonister och antagonister eller välrenommerade fordon av vaskulär skada som inte skulle ha råd med granskning som effektivt eller som diskriminerande i vivo. Därefter kan detta ex vivo metoden kombineras med ex vivo exponering för droger att testa resulterande myogenic svaren (vasokonstriktion eller dilatation av kärl segment på grund av intravaskulär eller extravaskulär läkemedelsexponering).
Andra begränsningar är ungefär eller otåligt att ta bort MCAS från skördade hjärnan vilket kan resultera i förtida avrivning av fartygen, således upphäva deras användning. Dessutom att låta mer än ett par minuter förflyta mellan avlivning av djuret, samling av fartygen och deras placering i den beredda PSS-lösningen kan också att förneka deras livskraft. När korrekt utfört och följde, kan de metoder som beskrivs i detta protokoll för provning av MCA'S myogenic svar efter bTBI tar flera timmar från början till slut och försök till inskränka tidsperiod som krävs för framgång resultera i experimental misslyckande. Men denna metod är gjort in vitro- och utnyttjar betydligt mer kostnadseffektiv instrumentering och utrustning än Invivo högupplösta magnetresonans (MR) imaging45,46 eller konventionella Doppler sonography / velocimetric tekniker47,48,49 som också är anställd för fartyget studier.
Dessa fynd att mild bTBI skada är associerade med försämrad cerebral förhalande Svaren till reducerat intravaskulär tryck kan potentiellt vara en funktion av vasospasm6,7 och VSMC hyperconstriction50 tidigare rapporterade efter blast exponering som i slutändan leder till förekomster såsom minskad relativ cerebral perfusion. Dessutom kunde blast-inducerad skada hindrar normala förhalande reaktioner av de cerebrala vaskulatur möjligen främja ytterligare sänkningar av cerebral perfusion i kombination med arteriell hypotension, en frekvent förekomst under stridsoperationer.
Dessa resultat indikerar att bTBI resulterar i en förändring till de mekanismer som underlättar arteriell vaskulär kontroll. Även om akut-fas cerebral vaskulär försämring av arteriell myogenic svar på minskningar av intravaskulär trycket för minst en timme efter skada observerades, fortfarande finns luckor i informationen kring den akuta fasen efter bTBI. Vikten av att identifiera vilka fysiska och biokemiska brister skador att den cerebrala vaskulatur och hjärnan exponering för bTBI orsaker kunde stöd i fastställandet av terapeutiska och rehabiliterande framgång ganska omedelbart efter skada.

Liknande som följer av inverkan (dvs., icke-blast) TBI, blast-inducerad traumatisk hjärnskada (bTBI) har varit associerade med cerebral vaskulär skada1 och nedsatt cerebral vaskulär kompenserande Svaren till händelser som förändringar i partialtrycket av koldioxid (PaCO2)2,3,4 och syre (PaO2)5. Dessutom har blast exponering orsakade cerebral arteriell vasospasm i djur6 och bTBI patienter7,8. Medan kliniska TBI9 och vätska-slagverk skada (FPI)10,11,12 är associerade med försämrad cerebral vaskulär svar på förändringar i arteriellt blodtryck (dvs., Tryck självregleringen)9,10,11,12, osäkerhet kvarstår när det gäller effekterna av bTBI på cerebral kärltryck självregleringen kapacitet.
Den cerebral cirkulationen reagerar på variationer i systemiska arteriella trycket med avsikt att upprätthålla en kontinuerlig syre och näringstillförsel som levereras till den metaboliskt aktiva hjärnan13,14,15, 16. En unik typ av homeostas, självregleringen17,18,19 uppstår när ”ett organ upprätthåller en konstant blodflöde trots förändringar i blodtryck (perfusion) eller andra fysiologiska eller patologiska stimuli” 20. cerebrala artärer tygla eller vidgas svar på variationer i blodtryck, kväveoxid (NO), blodets viskositet, PaCO2 och PaO2etc.4,11,16, 21. arteriell myogenic svar avser sådana sammandragningar eller utspädningar. Den myogenic vaskulär respons, som först beskrevs av Bayliss22 och en viktig mekanism som bidrar till självregleringen av CBF, kännetecknas av vasokonstriktion om perfusionstrycket ökar och vasodilatation om perfusionstrycket minskar 14 , 17. detta vaskulär respons är kontraktila vävnader (t ex vaskulära glatta muskelceller, VSMC'S) inneboende förmåga att svara att sträcka och/eller förändringar i lumen eller vägg spänningen23,24, 25,26,27,28,29. När artärerna är sträckta (t.ex., under intravaskulär trycket ökar), VSMCS tygla24,25,26,28.
Studier som undersöker motstånd fartyg ex vivo har allmänt används en av två metoder för att testa den farmakologiska och fysiologiska egenskaper för isolerade motstånd fartyg: metoden ring-monterad och den kanylerade, trycksatt metod. Ring-monterad fartyget förberedelse metoden innebär att två trådar som gått intraluminally genom segmentet fartyg, som håller segmentet på plats. Mäta mängden kraft som anbringas på isometrically ihållande trådarna mätare stimulering av VSMC. Men denna teknik bär med sig vissa reservationer, framför allt, den oundvikliga skada som lidits av endothelial lagret av lumen när kablarna är passerade genom det30 och varierande grad av stretching av segmentet isolerade vilket i sin tur leder till fartyget vägg buk, som i slutändan påverkar fartygets känslighet för farmakologiska medel31. Den kanylerade, trycksatta fartyget förberedelse metoden använder tredjeparts en arteriograph som består av två separata kammare som varje hus placeringen av en mellersta cerebral arteriell (MCA) skördas från ett enskilt djur. En mikropipett infogas i varje ände av segmentet, den proximala änden av segmentet är fäst till mikropipett med suturer och lumen är mjukt perfusion med en fysiologisk saltlösning (PSS) för att eliminera blod och andra ämnen. Den distala änden fästs sedan med suturer. Transmural eller luminala tryckbärande ställs genom att höja de två reservoarer som bifogas varje pipett till lämplig höjd ovanför varje segment men på olika höjder med avseende på de andra32,33,34,35 ,36. Tryckgivare placerad längs reservoarer och Mikropipetter ge perfusion tryckmätningarna medan fartyg förstoras genom en inverterade Mikroskop har en monitor, video kamera och scaler som möjliggör mätning av externa MCA diametrar. Även om båda metoderna är värdefull, den kanylerade, trycksatta fartyget förberedelse metoden bättre härmar och tillstånd kärlen undersökas för att komma närmare deras in vivo villkor32,37.
Effekterna av olika typer av påverkan (dvs., icke-blast) TBI på cerebral vaskulär Svaren har tidigare studerats i cerebral arteriell segment21,35,36,38. Tidigare studier med liknande ex vivo MCA protokoll för fartyget insamling, montering och perfusion som beskrivs i den aktuella studien, och erhålls framgång med deras respektive utredningar av de associera mekanismerna av cerebral vaskulatur dysfunktion efter TBI. Golding et al.34 undersökta endothelial-medierad utspädningars vuxen, manlig lång-Evans råtta MCA efter svår TBI genom kontrollerad kortikal påverkan (CCI) skada. I en andra studie, Golding et al.36 undersökt cerebrovaskulär reaktivitet till hypotoni eller CO2 efter skörd MCAS från råttor som lidit en mild CCI. Yu et al.38 analyseras huruvida peroxynitrit asätare förbättrad förhalande svar på minskad intravaskulär trycket i vuxen, manlig Sprague-Dawley råtta MCA segment utsätts för FPI medan Mathew et al.21 studerade myogenic Svaren till hypotension hos MCA är skördas efter måttlig, centrala FPI.
För att bättre undersöka hypotesen att bTBI, som icke-blast TBI, resulterar i försämrad cerebral vaskulär reaktivitet, vi testade en mekanism som bidrar till komprometterad självregleringen genom att mäta myogenic förhalande Svaren till reducerat intravaskulär tryck ex vivo i isolerade, trycksatt gnagare MCA segment (figur 1) som samlats in från råttor som utsätts för mild bTBI använder en avancerad Blast Simulator (ABS) shock tube modell (figur 2 och figur 3) (se Rodriguez et al.39 Tabell 1) som använder tryckluft som levereras direkt till en drivrutin kammare att generera Freidlander-liknande40 över - och under - pressure vågor (se Rodriguez et al.39figur 1A).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58792/58792fig1.jpg"> Figur 1 : Platsen för mellersta cerebrala artärer (MCA). Ventral vy över råtthjärna markera platsen för MCAS i förhållande till den bakre cerebrala artärer (PCA), interna halspulsåder (ICA), yttre halspulsåder (ECA), basilaris artär (BA) och gemensamma halspulsåder (CCA). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58792/58792fig1large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58792/58792fig2.jpg"> Figur 2 : Avancerad Blast Simulator (ABS) shock tube enhet. ABS används för att producera primära blast skada i alla studie djur. 1 = föraren kammare; 2 = expansionskammare;  3 = prov kammare; 4 = reflekterade våg suppressor; gula stjärnor = preparatet fack. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58792/58792fig2large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:848px;" width="848">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Advanced Blast Simulator (ABS)</td>
			<td style="width:247px;">Dyn-FX Consulting, Ltd. and ORA, Inc.</td>
			<td style="width:219px;">N/A</td>
			<td style="width:167px;">Blast-simulating shock tube used to induce primary blast injuries&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Adult, male, Sprague-Dawley rats&#160;</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Experimental animals</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Arteriograph</td>
			<td>Living Systems Instrumentation, Inc.</td>
			<td>Arteriograph</td>
			<td>Mounting of harvested arteries and measurement of lumen diameter&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bone rongeurs, large</td>
			<td>FST Fine Science Tools</td>
			<td>Friedman Rongeur</td>
			<td>Brain extraction from skull</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bone rongeurs, small</td>
			<td>FST Fine Science Tools</td>
			<td>Boynton Rongeur</td>
			<td>Brain extraction from skull</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">CaCl2&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>Preparation of rodent middle cerebral arterial physiological salt solution (PSS)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Ear plugs</td>
			<td>3M</td>
			<td>Foam Ear Plugs 1100 Class AL&#160;</td>
			<td>Prevent injury of ear tympanic membrane when in the blast machine&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D-[+]-Glucose</td>
			<td>Preparation of rodent middle cerebral arterial physiological salt solution (PSS)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane&#160;</td>
			<td>Piramal Enterprises Limited&#160;</td>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Preparation of rodent middle cerebral arterial physiological salt solution (PSS)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MgSO4&#8226;7H2O&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Magnesium sulfate</td>
			<td>Preparation of rodent middle cerebral arterial physiological salt solution (PSS)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microforceps</td>
			<td>Buxton Biomedical Inc.</td>
			<td>Micro Tying Fcps, 180mm</td>
			<td>Brain extraction from skull</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mylar sheets</td>
			<td>Texas Art Supply</td>
			<td>Mylar</td>
			<td>Membrane used for compressed air build-up during blasting</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Preparation of rodent middle cerebral arterial physiological salt solution (PSS)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Preparation of rodent middle cerebral arterial physiological salt solution (PSS)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>10-0 Ethilon nylon suture black monofilament 5&#34; (13 cm)</td>
			<td>Mounting of harvested arteries and measurement of lumen diameter&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Scalpel blade #10</td>
			<td>Bard-Parker</td>
			<td>10 Stainless Steel Surgical Blade</td>
			<td>Brain extraction from skull</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Surgical spatula</td>
			<td>Delmaks Surgico</td>
			<td>Cement Spatula&#160;</td>
			<td>Brain extraction from skull</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Thermometer&#160;</td>
			<td>Physitemp Instruments, Inc.,&#160;</td>
			<td>Thermalert Monitoring Thermometer</td>
			<td>Monitoring of experimental animal&#39;s core body temperature&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Volume ventilator&#160;</td>
			<td>Harvard Apparatus, Inc.</td>
			<td>Small Animal Ventilator</td>
			<td>Constant and steading breathing of the intubated experimental animal</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;">Water blanket</td>
			<td>Gaymar Industries, Inc.&#160;</td>
			<td>Mul-T-Pad Temperature Therapy Pad</td>
			<td>Maintenance of experimental animal&#39;s body temperature&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

effects of blast-induced neurotrauma on pressurized rodent middle cerebral arteries

Även om det har gjorts studier på histopatologisk och beteendemässiga effekter av blast exponering, har färre tillägnats blast's cerebrala vaskulära effekter. Inverkan (dvs., icke-blast) traumatisk hjärnskada (TBI) är kända för att sänka trycket självregleringen i den cerebrala kärl hos både människor och försöksdjur. Hypotesen att blast-inducerad traumatisk hjärnskada (bTBI), som påverkar TBI, resulterar i försämrad cerebral vaskulär reaktivitet testades genom att mäta myogenic förhalande Svaren till reducerat intravaskulär tryck i gnagare mellersta cerebral arteriell (MCA) segment från råttor som utsätts för mild bTBI med hjälp av en avancerad Blast Simulator (ABS) chock röret. Vuxen, manlig Sprague-Dawley-råttor var sövda, intuberade, ventilerat och förberett för Sham bTBI (identiska manipulation och anestesi utom blast skada) eller mild bTBI. Råttor har randomiserats till Sham bTBI eller mild bTBI följt av offer 30 eller 60 min efter skada. Omedelbart efter bTBI, rätande reflex (RR) dämpning gånger bedömdes, dödshjälp på den tid punkter efter skadan slutfördes, hjärnan skördades och de enskilda MCA-segmenten samlades, monterad och trycksatt. Som intraluminal trycket perfusion via arteriell segment minskades i 20 mmHg steg från 100 till 20 mmHg, var MCA diametrar mäts och registreras. Med minskande intraluminal tryck, MCA diametrar stadigt ökat markant över baslinjen i Sham bTBI grupper medan MCA dilatator Svaren var signifikant (p < 0,05) i båda bTBI grupperna vilket framgår av den nedsatt, mindre MCA diametrar registreras för bTBI grupper. Dessutom RR dämpning i bTBI grupperna var signifikant (p < 0,05) högre än i Sham bTBI grupper. MCA är samlat från de Sham bTBI grupper utställda typiska vasodilaterande egenskaper för minskar i intraluminal trycket medan MCAS samlas in efter bTBI uppvisade signifikant nedsatt myogenic vasodilaterande Svaren till minskade trycket som kvarstod i minst 60 min efter bTBI.

Genomsnittlig bTBI övertryck för alla studie djur var 20,9 psi ±1.14 (138 kPa ±7.9). Genomsnittlig löptid rätande reflex (RR) dämpning för råttor som utsätts för ABS bTBI shockwave exponering (5.37 min ±2.1) var inte signifikant längre (p = 0,36, bTBI vs. sham) än i gruppen sham (5.10 min ±1.6).
I både 30 och 60 min sham grupper ökat MCA diametrar över baslinjen liksom intraluminal trycket sänktes från 100 till 20 mmHg. MCA förhalande svar på kontinuerlig jämfört med deras motsvarande sham-grupper, och införde minskning av intravaskulär trycket i den observerade 30 min (p = 0,01, bTBI vs. sham) och 60 min (p = 0,02, bTBI vs. sham) ABS bTBI grupperna var betydligt efter blast exponering (figur 5). För en mer detaljerad diskussion av dessa resultat, se Rodriguez et al.39.
Dessa studier visade att mild bTBI betydligt nedsatt cerebral kompenserande dilatator Svaren till reducerat intravaskulär tryck i MCA segment 30 och 60 min efter mild bTBI medan de milda chockvåg nivåer som används i dessa studier resulterade i löptider dämpning av RR (< 30 s) liknar dem hos sham-skadade råttor.
Statistiska analyser utfördes med programvara. Myogenic svar på förändringar i tryck för intravaskulär bedömdes genom att beräkna procentuell förändring från baslinjen (100 mmHg) för varje nivå av intraluminal tryck (80, 60, 40 och 20 mmHg). Oparade Student's t-test användes för att utvärdera skillnaderna mellan bTBI och sham gruppen baslinjer. Skillnader i MCA dilatator Svaren mellan bTBI och sham grupper utvärderades med en upprepad envägs variansanalys (ANOVA) Dunnetts flera jämförelser test och en Bartlett's test för lika varians.
På grund av minskade statistiska kraft som resulterar från upprepade tester, jämförelser på varje specifik tryckpunkt i MCA experiment (t.ex., mellan 100-80 mmHg eller mellan 60 och 40 mmHg, etc.) har inte utförts. Betydelse blev antagen vid det p ≤ 0,05 nivå. Alla data i text, refererade tabellen och figur uttrycks som betyder ± standardfel medel (SEM).
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58792/58792fig5.jpg"> Figur 5 : Effekter av bTBI på mellersta cerebral arteriell (MCA) Svaren till reducerat intravaskulär tryck. Dilatator Svaren till progressiva minskningar av intravaskulär trycket uppvisade nedsatt vasodilaterande svaren och betydligt i 30 min (p = 0,01, bTBI vs. sham) och 60 min (p = 0,02, bTBI vs. sham) bTBI grupper (n = 6/grupp) efter blast exponering jämfört med både Sham grupper (n = 12). I både 30 och 60 min sham grupper ökat MCA diametrar över baslinjen liksom intraluminal trycket sänktes från 100 till 20 mmHg. Värden är ritade som betyder ± SEM. *p < 0,05 vs. sham. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58792/58792fig5large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries at JoVE.com

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Här presenterar vi ett protokoll för att beskriva metoder för ex vivo vaskulär reaktivitet bestämning efter en primär blast traumatisk hjärnskada (bTBI) med hjälp av isolerade, trycksatt och gnagare mellersta cerebral arteriell (MCA) segment. bTBI induktion sker med hjälp av en shock tube, även känd som en avancerad Blast Simulator (ABS)-enhet.

Effekter av Blast-inducerad Neurotrauma på trycksatt gnagare mellersta cerebrala artärer

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Denna metod hjälper till att svara på om blast traumatisk hjärnskada resulterar i cerebral vaskulär skada och om omfattningen av effekterna sträcker sig till en nedsatt myogenic Vaskulär svar. Den isolerade trycksatta artärpreparatet gör det möjligt för oss att separera de direkta effekterna av sprängexponering på cerebrala artärer från de indirekta effekter som orsakas av sprängexponering för hjärnan. Isolerade och trycksatta arteriella preparat kan användas för att studera vaskulär funktion i en mängd olika sjukdomar eller tillstånd, inklusive stroke, hypertoni, och sedan diabetes.Målet med våra studier är att identifiera de terapier som upprätthåller förmågan hos hjärncirkulationen att skydda hjärnan från de skadliga effekterna av blödning. Demonstrerar procedurerna idag blir Maggie Parsley, biträdande chef för vårt laboratorium och Yaping Zeng, vår chef forskningstekniker. För att förbereda den avancerade blast simulator, eller ABS, använd en 2,54 centimeter bit maskeringstejp till tejp längs den övre kanten av fyra staplade färdigklippta Mylar ark.Med hjälp av en andra bit tejp, säkra den övre kanten av Mylar membranet till toppen av expansionskammaren över mitten av öppningen mellan föraren och expansionskammare. Byt ut de två all-gängstängerna längst upp i kammaren och hand-dra åt alla locket muttrar som omger kammaren för att säkra föraren kammaren mot Mylar membranet. Dra åt hydraulhandpumpens knopp och observera en konstant trycktröskel på hydraulmätaren för att bekräfta att förarkammaren förblir trycksatt utan läckor.Öppna sedan den utlösande förvärvsfilen som registrerar ABS blast enhet tryck spår på ABS blast enheten dator. För att förbereda den sövda råttan för skadan, använd lång pick-up pincett för att placera tungan åt sidan och torka längs insidan av halsen med en lidokain-indränkt bomullspinne spets innan försiktigt sätta in en stylette som innehåller en endotracheal röret i luftstrupen. När den är intuberad, för in ventilatorslangens ände i den utvändiga änden av endotrakealröret och observera och bekräfta att råttan andas stadigt och utan svårighet.Därefter tar du bort ABS-preparatbrickan från preparatkammaren och värm brickan under en värmelampa. Medan facket är uppvärmningen, raka toppen av hårbotten från ovanför ögonen till mellan öronen och använda sax för att skära en standard-storlek skum öronpropp från basen till den rundade spetsen i identiska vertikala halvor. Sätt sedan in en halverad bit i varje öronspets, först längs hörselgången, tills kontakt görs med det tympaniska membranet.Ta bort ventilatorslangen från endotrakealröret, snabbt men försiktigt skjut råttan i den övre änden av preparatbrickan, försiktigt styra huvudet genom huvudhållarens öppning och gummikrage. När råttan sitter på plats sätter du tillbaka ventilatorslangen i endotrakealröret igen och verifierar att gummikragen är fastsittande, men inte tätt runt halsen, och att råttan lägger i ett benäget läge i ett lateralt. Lås sedan och säkra ABS-preparatbrickan som innehåller den sövda råttan i ABS-preparatkammaren och nyp försiktigt ihop baktasstängerna med lång pincett var tredje sekund tills ett tillbakadragande reflex svar framkallas.Klicka på Starta på den öppnade förvärvssidan på ABS-blastenhetens dator och tryck ned ABS-blastenhetens utlösare i förvärvsfönstret tills explosionen släcks, vilket spricker i Mylarmembranet och administrerar ABS-blastskadan. Direkt efter sprängningen detonerar, starta en andra timer för att hålla reda på hur mycket tid som förflyter i minuter och sekunder tills råtta rättigheter själv, efter skada, och placera råttan i ryggläge på den blå pad och uppvärmningen för bedömning av betyget reflex dämpning. För att extrahera den mellersta cerebral artär, använd ett nummer 10 skalpell blad för att göra en central en och en halv tum vertikal ben-djupt snitt från toppen av rakade hårbotten till occipital condyle och använda små ben rongeurs att öppna och separera hårbotten huden från skallbenet.Med hjälp av stora ben rongeurs, klippa och extrahera occipital, interparietal, och nedre halvan av frontalben innesluter hjärnan och använda en kirurgisk spatel för att noggrant gräva hjärnan från skallen när den har befriats från det omgivande benet. Deponera den skördade hjärnan i ett litet glas Petriskål som innehåller kyld fysiologisk saltlösning, eller PSS, på en fast isblock under en dissekera mikroskop, och försiktigt bort både vänster och höger mellersta cerebral artärer, eller MCAs, börjar vid cirkeln av Willis och fortsätter i stort sett och dorsally för cirka fyra till fem millimeter. Använd mikrotens tupp för att försiktigt rengöra de insamlade MCA-segmenten och montera artärerna på en arteriograf.Kannakulera den proximala änden av varje segment med ett glas, 70 mikrometerdiameter mikropipette och säkra pipetterna med 10-O nylon suturer. Kraftigt genomsyra lumina med PSS för att avlägsna eventuellt kvarvarande blod och kantulera den distala änden av varje segment med en andra mikropipette utan att sträcka på arteriell vävnad. Säkra mikropipettes med en andra uppsättning 10-O nylon suturer och placera arteriograph på scenen av en inverterad mikroskop utrustad med en kamera och bildskärm.Höj reservoarflaskorna som är anslutna till mikropipetterna till en lämplig höjd över segmenten för att balansera MCA-segmenten med ett tryck på 50 millimeter kvicksilver i 60 minuter. I slutet av jämviktsperioden, ställ flaskorna på olika höjd till varandra för att undersöka kärlens förhalande svar, sänka reservoarflaskorna för att minska det intravaskulära trycket till 80 millimeter kvicksilver och låta segmenten ekvilka i 10 minuter. Sedan minska det intravaskulära trycket till 60, 40 och 20 millimeter kvicksilver, vilket gör att segmenten kan ekvilojämna efter varje tryckförändring.I denna representativa graf avbildas den arteriella diametern på Y-axeln som procentuell förändring av diametern vid ett baslinjetryck på 100 millimeter kvicksilver. På X-axeln visas de olika intravaskulära tryck vid vilka de kranskärlens förhalande svar testades. För gruppen med skenskada ökade MCA-diametrar över baslinjen och fortsatte att normalt vidgas eftersom det intraluminala trycket minskades från 100 till 20 millimeter kvicksilver.Däremot var MCA förhalande svar på den kontinuerligt påtvingade minskning av intravaskulära trycket i den observerade 30 och 60 minuters blast-inducerad traumatiska hjärnan skada grupper avsevärt i deras förmåga att vidga efter blast exponering, vilket tyder på en betydande försämring av cerebral vasodtory svar på minskat tryck. Kärlet utvinning, återvinning, montering, och profusion tekniker är oerhört invecklad, och alla ansträngningar för exakt försiktighet bör vidtas när de utför dessa förfaranden.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Cerebral Blood Oxygenation Measurement Based on Oxygen-dependent Quenching of Phosphorescence

Cerebral blodets syresättning Mätning baseras på syre-beroende härdning av Fosforescens

Monitoring of the spatiotemporal characteristics of cerebral blood and tissue oxygenation is crucial for better understanding of the 
...

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Fokal cerebral ischemi modellen genom endovaskulär suture Ocklusion av Mellanöstern Cerebral artär i Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

DiOLISTIC Labeling of Neurons from Rodent and Non-human Primate Brain Slices

DiOLISTIC Märkning av nervceller från gnagare och icke-mänskliga primater Slices Brain

DiOLISTIC staining uses the gene gun to introduce fluorescent dyes, such as DiI, into neurons of brain slices (Gan et al., 2009; O'Brien and Lummis, 2007; ...

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Vibrodissociation av nervceller från Slices Gnagare Brain att studera synaptisk transmission och bild Presynaptiska Terminaler

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants

Isolering av cerebrospinalvätska från Gnagare Embryon för användning med Dissekerade cerebrala kortikala Explantat

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF ...

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Lateral Kronisk Kraniell fönster Framställning Aktiverar<em&gt; In Vivo</em&gt; Observation Efter Distal Middle Cerebral artärocklusion hos möss

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

Isolation of Cerebral Capillaries from Fresh Human Brain Tissue

Isolering av Cerebral kapillärerna från färska mänsklig hjärnvävnad

Understanding blood-brain barrier function under physiological and pathophysiological conditions is critical for the development of new therapeutic ...

Quantitative Autoradiographic Method for Determination of Regional Rates of Cerebral Protein Synthesis In Vivo

Kvantitativ autoradiografisk metod för bestämning av regionala frekvenser av cerebral protein syntes in vivo

Protein synthesis is required for development and maintenance of neuronal function and is involved in adaptive changes in the nervous system. Moreover, it ...

Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery

Modellering stroke hos möss: Transient Middle Cerebral Artery Ocklusion via den yttre halsartären

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options ...

A Model for Encephalomyosynangiosis Treatment after Middle Cerebral Artery Occlusion-Induced Stroke in Mice

En modell för encefalomyosynangios behandling efter mellersta cerebral artär ocklusion-inducerad stroke hos möss

There is no effective treatment available for most patients suffering with ischemic stroke, making development of novel therapeutics imperative. The ...