Name: assaying for inorganic polyphosphate in bacteria
Uploaded: 2019-01-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assaying for Inorganic Polyphosphate in Bacteria at JoVE.com

وأيد هذا المشروع جامعة ألاباما في "برمنغهام قسم الأحياء المجهرية" أموال بدء التشغيل والمعاهد الوطنية للصحة منحة R35GM124590 (MJG)، والمعاهد الوطنية للصحة منحة R01AI121364 (مهاجم).

1-تنقية الخميرة اكسوبوليفوسفاتاسي (سكبكس)
<ol><li>تحويل سلالة overexpression بروتين كولاي BL21(DE3)31 مع بلازميد pScPPX26 انهانسر32 أو33من التحول الكيميائي.</li>
	<li>تطعيم 1 لتر مرق ليسوجيني (رطل) التي تحتوي على 100 ميكروغرام مل-1 الأمبيسلّين في قارورة ...

البروتوكول هو موضح هنا يبسط ويسرع الكمي لمستويات سليلة في البكتيريا المتنوعة، مع مجموعة نموذجية من عينات 24 أخذ حوالي 1.5 ح الكامل عملية. هذا يسمح بالفحص السريع للعينات وتحليل لمكتبات متحولة، ويبسط الحركية تجارب قياس تراكم سليلة على مر الزمن. لقد أظهرنا أن البروتوكول يعمل بشكل فعال على ممثل...

وميلامين متعدد الفوسفات غير العضوي (سليلة) هو بيوبوليمير خطية وحدات الفوسفات المرتبطة فوسفوانهيدريدي موجودة في جميع مجالات الحياة1،،من23. في البكتيريا المتنوعة، سليلة ضروري لاستجابة الإجهاد وحركية وتشكيل بيوفيلم، مراقبة دورة الخلية، ومقاومة المضادات الحيوية والفوعه4،5،،من67،8 9، ،،من1011. ولذلك قد دراسات الأيض سليلة في البكتيريا يمكن أن تسفر عن الأفكار الأساسية في قدرة البكتيريا تسبب المرض وتزدهر في بيئات متنوعة. في كثير من الحالات، ومع ذلك، الأساليب المتوفرة لتحديد سليلة في الخلايا البكتيرية عاملاً مقيداً في هذه الدراسات.
وهناك العديد من الطرق المستخدمة حاليا لقياس مستويات سليلة في المواد البيولوجية. عادة ما تشمل هذه الأساليب خطوتين متمايزتين: استخراج سليلة والتحديد الكمي سليلة موجودة في تلك المقتطفات. طريقة معيار الذهب الحالية، وضعت للخميرة Saccharomyces cerevisiae Bru والزملاء في12، سليلة مقتطفات جنبا إلى جنب مع الحمض النووي والجيش الملكي النيبالي باستخدام الفينول وكلوروفورم، تليها الإيثانول هطول الأمطار، المعاملة مع deoxyribonuclease (الدناز) وريبونوكليسي (رناسي)، والهضم من سليلة المنقي الناتج مع S. cerevisiae اللاإنسانية سليلة إنزيم اكسوبوليفوسفاتاسي (سكبكس)13 لإنتاج الفوسفات مجاناً، والتي يتم بعد ذلك كمياً باستخدام الملكيت الأخضر-على أساس مقايسة اللونية. هذا الإجراء الغاية الكمية لكن كثيفة العمالة، مما يحد من عدد العينات التي يمكن معالجتها في تجربة واحدة، وليس الأمثل للعينات البكتيرية. وقد أبلغ آخرون استخراج سليلة من مجموعة متنوعة من الخلايا والأنسجة باستخدام الخرز السليكا ("جلاسميلك") أو السليكا غشاء الأعمدة6،،من1415،16،17، 18. هذه الأساليب لا كفاءة استخراج سلسلة قصيرة سليلة (أقل من 60 وحدة الفوسفات)12،،من1415، على الرغم من أن هذا أقل قلقا للبكتيريا، والتي يعتقد عموما أن توليف أساسا 3من سليلة سلسلة طويلة. الأساليب القديمة لاستخراج سليلة استخدام الأحماض القوية19،20 لم تعد تستخدم على نطاق واسع، منذ سليلة غير مستقرة تحت الظروف الحمضية12.
وهناك أيضا مجموعة متنوعة من أساليب سليلة تحديد المبلغ عنها. ومن بين الأكثر شيوعاً هو 4, 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI)، صبغة فلورسنت أكثر عادة ما تستخدم لوصمة عار الحمض النووي. المجمعات سليلة DAPI لها الأسفار المختلفة ماكسيما الإثارة والانبعاثات من الحمض النووي DAPI مجمعات21،22، لكن هناك تدخل كبير من المكونات الخلوية الأخرى، بما في ذلك الجيش الملكي النيبالي والنيوكليوتيدات الإينوزيتول الفوسفات12،،من1516،23، الحد من خصوصية وحساسية من سليلة القياسات باستخدام هذا الأسلوب. بدلاً من ذلك، يمكن تحويل سليلة و diphosphate الأدينوزين (ADP) إلى أدينوسين ثلاثي الفوسفات (ATP) استخدام المنقي الإشريكيّة القولونية سليلة كيناز (PPK) و ATP الناتجة كمياً باستخدام لوسيفراس14،17 ،18. وهذا يتيح الكشف عن كميات صغيرة جداً من سليلة، ولكن يتطلب خطوتين رد الفعل الأنزيمي ولوسيفرين وشرطة نقية جداً، التي هي الكواشف باهظة الثمن. سكبكس تحول دون التحديد النبذ سليلة إلى فوسفات حرة6،،من1213،24، التي يمكن الكشف عنها باستخدام طرق أبسط، ولكن سكبكس ب الحمض النووي والجيش الملكي النيبالي12، مقتطفات الدناز يستلزم المعاملة رناسي المحتوية على سليلة. PPK سكبكس ليست متاحة تجارياً، وتنقية PPK معقدة نسبيا25،26.
يمكن أيضا تصور سليلة في ليساتيس الخلية أو مقتطفات في الهلام بولياكريلاميدي ب DAPI السلبية تلطيخ27،28،،من2930، أسلوب الذي يسمح بتقييم لطول السلسلة، ولكن هو انخفاض الإنتاجية وضعف الكمية.
ونحن الآن تقرير مقايسة سليلة سريعة وغير مكلفة، الإنتاجية المتوسطة يسمح التحديد الكمي السريع من سليلة المستويات في مختلف أنواع الجراثيم. يبدأ هذا الأسلوب بواسطة ليسينج الخلايا البكتيرية في 95 درجة مئوية في م 4 غوانيدين isothiocyanate (جتك)14 لإلغاء تنشيط phosphatases الخلوية، متبوعاً استخراج عمود غشاء والسليكا الأمثل للمعالجة السريعة لعينات متعددة. ثم يهضم الناتجة عن استخراج المحتوية على سليلة مع فائض كبير في سكبكس، مما يلغي الحاجة إلى معاملة الدناز ورناسي. نحن تشمل بروتوكول للنيكل واضحة انجذاب تطهير كميات مغ من سكبكس. وأخيراً، المستمدة من سليلة فوسفات حرة كمياً ب مقايسة اللونية البسيطة، حساسة، وتستند على حمض الأسكوربيك24 وتطبيع لمجموع البروتين الخلوي. يبسط هذا الأسلوب قياس سليلة في الخلايا البكتيرية، ونظهر استخدامه مع الممثل الأنواع من البكتيريا سلبية الغرام وإيجابية البكتيريا المتفطرة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>E. coli BL21(DE3)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>69450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid pScPPX2</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>112877</td>
			<td>available to academic and other non-profit institutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1427-2</td>
			<td>E. coli growth medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ampicillin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP176025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl &#946;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>I2481C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>H-400-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium hydroxide (KOH)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P250500</td>
			<td>for adjusting the pH of HEPES-buffered solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S27110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>imidazole</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>O3196500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lysozyme</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAJ6070106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnesium chloride (MgCl2)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP214-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce Universal Nuclease</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>PI88700</td>
			<td>Benzonase (Sigma-Aldrich cat. # E1014) is an acceptable substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 120 Sonic Dismembrator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB-120</td>
			<td>other cell lysis methods (e.g. French Press) can also be effective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL HiTrap chelating HP column</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>17040901</td>
			<td>any nickel-affinity chromatography column or resin could be substituted</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nickel(II) sulfate hexahydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AC415611000</td>
			<td>for charging HiTrap column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.8 &#181;m pore size cellulose acetate syringe filters</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-302-168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bradford reagent</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>5000205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris buffer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrum&#160;Spectra/Por 4 RC Dialysis Membrane Tubing 12,000 to 14,000 Dalton MWCO</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-667B</td>
			<td>other dialysis membranes with MWCO &#60; 30,000 Da should also work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hydrochloric acid (HCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A144-212</td>
			<td>for adjusting the pH of Tris-buffered solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P217500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x MOPS medium mixture</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>M2101</td>
			<td>E. coli growth medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glucose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monobasic potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP362-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dibasic potassium phosphate (K2HPO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP363-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dehydrated yeast extract</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>DF0886-17-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tryptone</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1421-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M63-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>manganese sulfate monohydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M113-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guanidine isothiocyanate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP221-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bovine serum albumin (protease-free)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP9703100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>clear flat bottom 96-well plates</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0812-100EA</td>
			<td>any clear 96-well plate will work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan M1000 Infinite plate reader</td>
			<td>Tecan, Inc.</td>
			<td>not applicable</td>
			<td>any plate reader capable of measuring absorbance at 595 and 882 nm will work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-451</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silica membrane spin columns</td>
			<td>Epoch Life Science</td>
			<td>1910-050/250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP120500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microfuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9580154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium acetate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A637-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>antimony potassium tartrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAA1088922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 N sulfuric acid (H2SO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SA818-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium heptamolybdate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAA1376630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ascorbic acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AC401471000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assaying for inorganic polyphosphate in bacteria

وميلامين متعدد الفوسفات غير العضوي (سليلة) بوليمر بيولوجية الموجودة في الخلايا من جميع مجالات الحياة، ومطلوب من أجل الفوعة وإجهاد استجابة في العديد من البكتيريا. وهناك مجموعة متنوعة من أساليب لتحديد سليلة في المواد البيولوجية، والعديد منها كثيفة العمالة أو غير حساسة، يحد من فائدتها. نقدم هنا طريقة مبسطة للقياس الكمي سليلة في البكتيريا، تستخدم استخراج عمود غشاء والسليكا الأمثل للمعالجة السريعة لعينات متعددة والهضم من سليلة مع اكسوبوليفوسفاتاسي الخاصة سليلة سكبكس، والكشف عن فوسفات الحرة الناتجة مع مقايسة اللونية حساسة على أساس حمض الأسكوربيك. هذا الإجراء مباشرة، وغير مكلفة، ويسمح سليلة موثوقية القياس الكمي في مختلف أنواع الجراثيم. نقدم الكمي سليلة الممثل من بكتيريا سلبية الغرام (الإشريكيّة القولونية) وبكتيريا حمض الالكتيك إيجابية (ريوتيري اكتوباكيللوس)، والأنواع المتفطرات (بكتريا سميجماتيس). نحن تشمل أيضا بروتوكول بسيط لتنقية النيكل تقارب كميات مغ من سكبكس، التي ليست متاحة تجارياً حاليا.

الخطوات الرئيسية للبروتوكول هي تخطيطي في شكل مبسط في الشكل 1.
للتدليل على استخدام هذا البروتوكول مع بكتيريا سلبية الغرام، البرية من نوع كولاي MG165539 قد ازدادت إلى سجل منتصف المرحلة المتوسطة الغنية رطل في 37...

Watch this Scientific Journal Video about Assaying for Inorganic Polyphosphate in Bacteria at JoVE.com

Assaying for Inorganic Polyphosphate in Bacteria

يصف لنا طريقة بسيطة للقياس الكمي السريع من وميلامين متعدد الفوسفات غير العضوية في البكتيريا المتنوعة، بما في ذلك الأنواع المتفطرات إيجابية وسلبية الغرام.

المعايرة وميلامين متعدد الفوسفات غير العضوية في البكتيريا

Inorganic polyphosphate (polyP) is a biological polymer found in cells from all domains of life, and is required for virulence and stress response in many ...

تعد مادة الفوسفات غير العضوية عنصراً أساسياً في الاستجابة للإجهاد البكتيري. ولكن الطرق القديمة لاستخراج وقياس ال polyP في البكتيريا معقدة وكثيفة العمالة. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بالتكون الكمي السريع والحساس وغير المكلف لمستويات الـ polyP في مجموعة متنوعة من الأنواع البكتيرية المختلفة.سيتم إثبات الإجراء من قبل آريا بوهرل، طالبة جامعية من مختبري. للبدء، تنمو بكتيريا reuteri الملبابة في المتوسط التعريفي انزيم مالي دون السيستين في 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها دون اهتزاز. أجهزة الطرد المركزي ملليلتر واحد من هذه الثقافة بين عشية وضحاها في أنبوب 1.5 ملليلتر microcentrifuge لحصاد ما يكفي من الخلايا تسفر عن ما مجموعه 50 إلى 100 ميكروغرام من البروتين الخلوي.إزالة supernatant من بيليه الخلية تماما، ومن ثم إضافة 250 ميكرولترس GITC تحلل العازلة وsususpend من قبل دوامة. احتضان في 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق لlyse الخلايا. تخزين lysate في 80 درجة مئوية.أولاً، إعداد معايير BSA التي تحتوي على صفر، 1، 2، و4 ملليغرام لكل ملليلتر من BSA في العازلة تحلل GITC. Aliquot خمسة ميكرولترات من ذوبان، مختلطة جيدا الخلية lysates وخمسة microliters من معايير BSA لفصل الآبار في لوحة 96 بئر واضحة. إضافة 195 microliters من برادفورد الكاشف إلى كل بئر وقياس امتصاص في 595 نانومتر في قارئ لوحة.احسب كمية البروتين في كل بئر بالمقارنة مع منحنى BSA القياسي كما هو موضح في المخطوطة. لتحديد المبلغ الإجمالي للبروتين في كل عينة، اضرب القيمة الناتجة بـ 05. لبدء استخراج البولي فوسفات، إضافة 250 ميكرولترات من 95٪ الإيثانول لكل عينة GITC lysed، ودوامة لخلط.Pipette هذا الخليط إلى عمود تدور غشاء السيليكا وضعت في أنبوب جهاز طرد مركزي 1.5 ملليلتر. جهاز طرد مركزي عند 16، 100 غرام لمدة 30 ثانية. تخلص من التدفق من خلال وإضافة 750 ميكرولتردات من ثلاثيات هيدروكلوريد، كلوريد الصوديوم، EDTA، وخليط الإيثانول.جهاز طرد مركزي في 16، 100 gs لمدة 30 ثانية. تجاهل تدفق من خلال والطرد المركزي في العمود تدور في 16، 100 gs لمدة دقيقتين. ضع العمود في أنبوب مجهري نظيف 1.5 ملليلتر.إضافة 150 ميكرولترات من 50 ملليمولار درجة حًى حر ثمانية ثلاثية هيدروكلوريد، وتحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق. Elute polyP بواسطة الطرد المركزي في 8، 000 غرام لمدة دقيقتين. ابدأ بإعداد معايير تحتوي على صفر أو خمسة أو 50 أو 200 فوسفات بوتاسيوم ميكرومولر في 50 ملليمولار pH ثمانية ثلاثيات هيدروكلوريد.Aliquot 100 ميكرولترات من كل معيار الفوسفات و 100 ميكرولترات من عينات من مادة الوَيَض المُستخرجة إلى آبار منفصلة من 96 بئراً واضحة. إعداد مزيج رئيسي يحتوي، لكل عينة، 30 ميكرولترات من 5X Scppx العازلة التفاعل، 19 ميكرولترتر المياه، وميكر واحد من Scppx المنقى. إضافة 50 ميكرولترات من المزيج الرئيسي إلى كل بئر من 96 لوحة البئر.واحتضان لمدة 15 دقيقة في 37 درجة مئوية. في يوم الكشف، وإعداد مخزون جديد من العمل من محلول الكشف عن طريق خلط في 9.12 ملليلتر من قاعدة حل الكشف مع 88 ملليلتر من حمض الأسكوربيك الضرس الضرس واحد، والسماح لها أن تأتي إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. إضافة 50 ميكرولترات من حل الكشف عن كل عينة والمعايير في لوحة 96 جيدا.للسماح بتطوير الألوان، احتضان لوحة في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقتين تقريبا. استخدام قارئ لوحة لقياس امتصاص في 882 نانومتر وحساب تركيز الفوسفات لكل عينة بالمقارنة مع منحنى الفوسفات البوتاسيوم القياسية. ثم قم بتحويل تركيزات الفوسفات إلى نانوموليات من الفوسفات المشتق من الـ polyP في كل خلية وتطبيع محتوى البوليب الخلوي إلى البروتين الخلوي الكلي، كما هو موضح في المخطوطة.البرية من النوع E.coli، بكتيريا سلبية الغرام، نمت في LB أنتجت أي بوليب. ولكن عندما نمت في MOPS، أنتجت حوالي 192 نانوموليات بوليوم لكل ملليغرام من البروتين الكلي. ولم تنتج متحولة دلتا الإشريكية القولونية، التي تفتقر إلى كيناز ال polyP، أي مادة متعددة الوب في أي من الوسطين.أنتجت متحولة دلتا ppx ، التي تفتقر إلى exopolyphosphatase ، ما يقرب من نفس الكمية من البوليفين مثل النوع البري. والدلتا phoB متحولة ، وهو معيب في نقل الفوسفات ، وتنتج أقل بكثير من بوليب البرية. البرية من النوع L.reuteri، بكتيريا إيجابية الغرام نمت بين عشية وضحاها في وسط MEIC تراكمت حوالي 51 نانومولية بوليوم لكل ملليغرام من البروتين الكلي.A L.reuteri ppk1 متحولة خالية تفتقر إلى كيناز متعدد الوب تحتوي على أقل من نصف هذا المبلغ. هذا وجود من بوليP في ppk1 متحولة فارغة هو على الارجح بسبب L.reuteri تحتوي على كيناز متعدد الوب الثاني. Mycobacterium smegmatis سلالة SMR خمسة، نمت في هارتمانس دي بونت المتوسطة في غياب الإيثانول المتراكمة حوالي 141 نانوموليس بوليوم لكل ملليغرام من البروتين الكلي.في حين أن العلاج الإيثانول أدى إلى زيادة ثلاثة أضعاف. بعد هذا الإجراء، يمكن إجراء جل الأكريلاميد الكهربائي لتقييم الاختلافات في طول سلسلة البوليب. أثناء محاولة هذا الإجراء، تجنب الأخطاء الشائعة.تذكر أن تتجنب الحصول على فقاعات في آبار لوحة microtiter ، وأن تكون حريصًا على نقل العينات إلى الأنبوب المناسب عند التبديل من العمود إلى أنبوب microfuge. لا تنس أن العمل مع GITC والأحماض القوية يمكن أن تكون خطرة، وينبغي دائماً ارتداء معدات الحماية المناسبة أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Multiplex Detection of Bacteria in Complex Clinical and Environmental Samples using Oligonucleotide-coupled Fluorescent Microspheres

كشف متعددة من البكتيريا الموجودة في مجمع العينات السريرية والبيئية باستخدام قليل النوكليوتيد ، بالإضافة نيون المجهرية

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated ...

Detection of Bacteria Using Fluorogenic DNAzymes

الكشف عن البكتيريا عن طريق DNAzymes Fluorogenic

Outbreaks linked to food-borne and hospital-acquired pathogens account for millions of deaths and hospitalizations as well as colossal economic losses ...

Tractable Mammalian Cell Infections with Protozoan-primed Bacteria

لين العريكة التهابات خلايا الثدييات مع طفيل وحيد الخلية، تستعد البكتيريا

Many intracellular bacterial pathogens use freshwater protozoans as a natural reservoir for proliferation in the environment. Legionella pneumophila, the ...

Measuring Growth and Gene Expression Dynamics of Tumor-Targeted S. Typhimurium Bacteria

Measuring Growth and Gene Expression Dynamics of Tumor-Targeted S. Typhimurium Bacteria

قياس النمو وحيوية التعبير الجيني للورم استهداف<em&gt; S. تيفوميوريم</em&gt; البكتيريا

The goal of these experiments is to generate quantitative time-course data on the growth and gene expression dynamics of attenuated S. typhimurium ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

مضان المجهري طرق لتحديد الجدوى من البكتيريا في جمعية مع خلايا الثدييات

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Fluorescence in situ Hybridizations (FISH) for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Fluorescence in situ Hybridizations FISH for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

مضان<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين (FISH) لتوطين الفيروسات والبكتيريا Endosymbiotic في النبات والحشرات مناديل

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a name given to a variety of techniques commonly used for visualizing gene transcripts in eukaryotic cells ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

التالية في الوقت الحقيقي تأثير العوامل الالتهاب الرئوي الحاد الفوعة في نموذج الفأر الالتهاب الرئوي عن طريق البكتيريا للإضاءة الحيوية

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

التعرف السريع على البكتيريا سالبة الجرام من ثقافة الدم في مرق عن طريق MALDI-TOF الطيف الكتلي

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

مرجع مرق الطريقة Microdilution لDalbavancin<em&gt; في المختبر</em&gt; حساسية اختبار من البكتيريا التي تنمو هوائيا

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

Biomimetic Materials to Characterize Bacteria-host Interactions

المواد الجزيئية الحيوية لوصف التفاعلات البكتيريا في استضافة

Bacterial attachment to host cells is one of the earliest events during bacterial colonization of host tissues and thus a key step during infection. The ...