Name: assaying for inorganic polyphosphate in bacteria
Uploaded: 2019-01-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assaying for Inorganic Polyphosphate in Bacteria at JoVE.com

Dit project werd ondersteund door de Universiteit van Alabama in Birmingham departement microbiologie opstarten middelen en NIH grant R35GM124590 (naar MJG) en NIH subsidie R01AI121364 (FW).

1. het zuiveren van gist Exopolyphosphatase (ScPPX)
<ol><li>Transformeer de E. coli eiwit overexpressie stam BL21(DE3)31 met plasmide pScPPX26 door electroporation32 of33van de chemisch te worden verwerkt.</li>
	<li>Inoculeer 1 L lysogenie Bouillon (LB) met 100 µg mL-1 ampicilline in een unbaffled kolf van 2 L met een één kolonie van BL21(DE3) met pScPPX2 en incubeer 's nachts bij 37 ° C zonder schudd...

Het protocol hier beschreven vereenvoudigt en versnelt de kwantificering van de poliep niveaus in diverse bacteriën, met een typische set 24 monsters nemen ongeveer 1,5 h volledig verwerken. Dit maakt snelle screening van monsters en analyse van de mutant Bibliotheken, en vereenvoudigt de kinetische experimenten voor het meten van de accumulatie van poliep na verloop van tijd. We hebben aangetoond dat het protocol effectief op vertegenwoordigers van drie verschillende stammen werkt: proteobacteria, firmicutes, en Straal...

Anorganische polyfosfaat (poliep) is een lineaire biopolymeer van phosphoanhydride-linked fosfaat eenheden die wordt gevonden in alle domeinen van het leven1,2,3. In diverse bacteriën is poliep essentieel voor de stressrespons, beweeglijkheid, vorming van biofilms, celcyclus controle, antibioticaresistentie en virulentie4,5,6,7,8 ,9,10,11. Studies van de poliep metabolisme in bacteriën dus het potentieel hebben om opbrengst fundamentele inzichten in het vermogen van bacteriën om te leiden tot ziekte en gedijen in uiteenlopende omgevingen. In veel gevallen zijn de methoden die beschikbaar zijn voor de kwantificering van de poliep in bacteriële cellen echter een beperkende factor in deze studies.
Er zijn verschillende methoden die momenteel gebruikt voor het meten van de poliep in biologische materialen. Deze methoden zijn gewoonlijk twee afzonderlijke stappen: uitpakken van de poliep en kwantificeren van de poliep presenteren in deze extracten. De huidige methode van de goudstandaard, ontwikkeld voor de gist Saccharomyces cerevisiae door Bru en collega's12, extracten poliep samen met DNA en RNA met behulp van fenol en chloroform, gevolgd door ethanol neerslag, behandeling met deoxyribonuclease (DNase) en ribonuclease (RNase), en de spijsvertering van de resulterende gezuiverde poliep met de S. cerevisiae poliep-vernederende enzym exopolyphosphatase (ScPPX)13 opbrengst gratis fosfaat, dat vervolgens wordt gekwantificeerd met behulp van een Malachiet groen-gebaseerd colorimetrische bepaling. Deze procedure is zeer kwantitatieve maar arbeidsintensief, beperking van het aantal monsters dat kan worden verwerkt in een één experiment, en is niet geoptimaliseerd voor bacteriële monsters. Anderen hebben gemeld poliep extraheren uit een verscheidenheid van cellen en weefsels met behulp van silica kralen ("glassmilk") of silica membraan kolommen6,14,15,16,17, 18. Deze methoden doen niet efficiënt uitgepakt korte keten poliep (minder dan 60 fosfaat eenheden)12,14,15, hoewel dit van minder belang voor bacteriën, die over het algemeen gedacht zijn te synthetiseren voornamelijk lange-keten poliep3. Oudere methoden van poliep extractie met behulp van sterke zuren19,20 zijn niet langer gebruikte, omdat de poliep is onstabiel onder zure omstandigheden12.
Er zijn ook een aantal gerapporteerde manieren om quantifying poliep. Onder de meest voorkomende is 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI), een fluorescente kleurstof meer meestal gebruikt om de vlekken van DNA. DAPI-polyP complexen hebben verschillende fluorescentie excitatie en emissie-maxima dan DAPI-DNA complexen21,22, maar er is aanzienlijke inmenging van andere cellulaire componenten, met inbegrip van RNA, nucleotiden en inositol fosfaten12,15,16,23, vermindering van de specificiteit en de gevoeligheid van de poliep metingen die worden uitgevoerd met behulp van deze methode. U kunt ook poliep en adenosinedifosfaat (ADP) kunnen worden omgezet in adenosine trifosfaat (ATP) met behulp van gezuiverde Escherichia coli poliep kinase (PPK) en de resulterende ATP gekwantificeerd aan de hand van luciferase14,17 ,18. Dit maakt de de ontdekking van zeer kleine hoeveelheden van de poliep, maar vereist twee stappen van de enzymatische reactie en zowel luciferine en zeer zuiver ADP, die dure reagentia. ScPPX specifiek verteert poliep in gratis fosfaat6,12,13,24, die kan worden opgespoord met behulp van de eenvoudiger methoden, maar ScPPX wordt geremd door DNA en RNA12, noodzakelijk DNase en RNase behandelingvan poliep-bevattende extracten. Noch PPK en ScPPX niet commercieel beschikbaar, en PPK zuivering is relatief complexe25,26.
Poliep in cel lysates of uittreksels kan ook worden gevisualiseerd op polyacrylamide gels door DAPI negatieve kleuring27,28,29,30, een methode die beoordeling van ketenlengte wel toegestaan, maar is lage-doorvoer en slecht kwantitatieve.
Nu melden we een snelle, goedkope en middellange-doorvoer poliep assay waarmee snelle kwantificering van de poliep niveaus in verschillende bacteriesoorten. Deze methode begint met het lysing van bacteriële cellen bij 95 ° C in 4 M guanidine isothiocyanaat (GITC)14 om de inactivering van cellulaire fosfatasen genaamd, gevolgd door een silica membraan kolom extractie geoptimaliseerd voor snelle verwerking van meerdere monsters. Het resulterende poliep-bevattende extract wordt dan met een grote overmaat van ScPPX, eliminerend de behoefte aan DNase en RNase behandeling verteerd. We nemen een protocol voor eenvoudige nikkel affiniteit zuivering van mg hoeveelheden ScPPX. Ten slotte is de poliep afkomstige gratis fosfaat gekwantificeerd met een eenvoudige, gevoelige, ascorbinezuur-based colorimetrische bepaling24 en genormaliseerd naar totale cellulaire eiwit. Deze methode stroomlijnt de meting van de poliep in bacteriële cellen, en wij tonen het gebruik ervan met de representatieve soorten van gram-negatieve bacteriën, gram-positieve bacteriën en mycobacteriën.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>E. coli BL21(DE3)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>69450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid pScPPX2</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>112877</td>
			<td>available to academic and other non-profit institutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1427-2</td>
			<td>E. coli growth medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ampicillin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP176025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl &#946;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>I2481C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>H-400-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium hydroxide (KOH)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P250500</td>
			<td>for adjusting the pH of HEPES-buffered solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S27110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>imidazole</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>O3196500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lysozyme</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAJ6070106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnesium chloride (MgCl2)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP214-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce Universal Nuclease</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>PI88700</td>
			<td>Benzonase (Sigma-Aldrich cat. # E1014) is an acceptable substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 120 Sonic Dismembrator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB-120</td>
			<td>other cell lysis methods (e.g. French Press) can also be effective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL HiTrap chelating HP column</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>17040901</td>
			<td>any nickel-affinity chromatography column or resin could be substituted</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nickel(II) sulfate hexahydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AC415611000</td>
			<td>for charging HiTrap column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.8 &#181;m pore size cellulose acetate syringe filters</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-302-168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bradford reagent</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>5000205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris buffer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrum&#160;Spectra/Por 4 RC Dialysis Membrane Tubing 12,000 to 14,000 Dalton MWCO</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-667B</td>
			<td>other dialysis membranes with MWCO &#60; 30,000 Da should also work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hydrochloric acid (HCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A144-212</td>
			<td>for adjusting the pH of Tris-buffered solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P217500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x MOPS medium mixture</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>M2101</td>
			<td>E. coli growth medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glucose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monobasic potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP362-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dibasic potassium phosphate (K2HPO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP363-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dehydrated yeast extract</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>DF0886-17-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tryptone</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1421-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M63-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>manganese sulfate monohydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M113-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guanidine isothiocyanate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP221-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bovine serum albumin (protease-free)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP9703100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>clear flat bottom 96-well plates</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0812-100EA</td>
			<td>any clear 96-well plate will work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan M1000 Infinite plate reader</td>
			<td>Tecan, Inc.</td>
			<td>not applicable</td>
			<td>any plate reader capable of measuring absorbance at 595 and 882 nm will work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-451</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silica membrane spin columns</td>
			<td>Epoch Life Science</td>
			<td>1910-050/250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP120500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microfuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9580154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium acetate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A637-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>antimony potassium tartrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAA1088922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 N sulfuric acid (H2SO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SA818-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium heptamolybdate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAA1376630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ascorbic acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AC401471000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assaying for inorganic polyphosphate in bacteria

Anorganische polyfosfaat (poliep) is een biologische polymeer gevonden in de cellen in alle domeinen van het leven, en is vereist voor de virulentie en stressrespons bij vele bacteriën. Er zijn een aantal manieren om quantifying poliep in biologische materialen, waarvan vele zijn arbeidsintensief of ongevoelig, beperken hun nut. Wij presenteren hier een gestroomlijnde methode voor de kwantificering van de poliep in bacteriën, met behulp van een silica membraan kolom extractie geoptimaliseerd voor snelle verwerking van meerdere monsters, vertering van poliep met de poliep-specifieke exopolyphosphatase ScPPX, en detectie van de resulterende gratis fosfaat met een gevoelige ascorbinezuur gebaseerde colorimetrische test. Deze procedure is eenvoudig, goedkoop en betrouwbaar poliep kwantificering kan in verschillende bacteriesoorten. Wij presenteren representatieve poliep kwantificering van de gram-negatieve bacterie (Escherichia coli), de gram-positieve melkzuur-bacterie (Lactobacillus reuteri), en mycobacteriële soorten (Mycobacterium smegmatis). We voegen ook een eenvoudig protocol voor nikkel affiniteit zuivering van mg hoeveelheden van ScPPX, die nog niet commercieel beschikbaar.

De belangrijkste stappen van het protocol zijn routerplan in vereenvoudigde vorm in Figuur 1.
Om aan te tonen het gebruik van dit protocol met gram-negatieve bacteriën, wild-type E. coli was MG165539 uitgegroeid tot halverwege log fase in de rijke medium LB bij 37 ° C met schudden (200 rpm), vervolgens gespoeld en een extra 2 h in ge¨ uncubeerd morpholinopropanesu...

Watch this Scientific Journal Video about Assaying for Inorganic Polyphosphate in Bacteria at JoVE.com

Assaying for Inorganic Polyphosphate in Bacteria

Beschrijven we een eenvoudige methode voor snelle kwantificering van anorganische polyfosfaat in verschillende bacteriën, waaronder mycobacteriële, gram-negatieve en gram-positieve soorten.

Keuring voor anorganische polyfosfaat in bacteriën

Inorganic polyphosphate (polyP) is a biological polymer found in cells from all domains of life, and is required for virulence and stress response in many ...

Anorganisch polyfosfaat is een belangrijk element in bacteriële stressrespons. Maar oudere methoden voor het extraheren en meten van poliep in bacteriën zijn complex en arbeidsintensief. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het snelle, gevoelige en goedkope kwantificering van polyP-niveaus in een verscheidenheid van verschillende bacteriële soorten mogelijk maakt.De procedure zal worden aangetoond door Arya Pokhrel, een student van mijn laboratorium. Om te beginnen, groeien lactobacillus reuteri bacteriën in malic enzym inductie medium zonder cystine op 37 graden Celsius 's nachts zonder te schudden. Centrifuge een milliliter van deze nachtelijke cultuur in een 1,5 milliliter microcentrifuge buis om genoeg cellen te oogsten om een totaal van 50 tot 100 microgram cellulair eiwit opleveren.Verwijder de supernatant volledig uit de celpellet en voeg vervolgens 250 microliters GITC lyse buffer toe en opnieuw te besteden door vortexing. Incubeer bij 95 graden celsius gedurende 10 minuten om de cellen te lyse. Bewaar het lysaat op 80 graden Celsius.Bereid eerst BSA-normen voor die nul, 1, 2 en 4 milligram bsa-buffer bevatten. Aliquot vijf microliters van ontdooide, goed gemengde cel lysates en vijf microliter van BSA normen om putten te scheiden in een duidelijke 96 put plaat. Voeg 195 microliters van Bradford reagens toe aan elke put en meet absorptie op 595 nanometer in een plaatlezer.Bereken de hoeveelheid eiwit in elke put in vergelijking met de BSA-standaardcurve zoals beschreven in het manuscript. Vermenigvuldig de resulterende waarde met 05 om de totale hoeveelheid eiwit in elk monster te bepalen. Om te beginnen met polyfosfaat extractie, voeg 250 microliter van 95% ethanol aan elk GITC lysed monster, en vortex te mengen.Pipette dit mengsel om een silica membraan spin kolom geplaatst in een 1,5 milliliter centrifuge buis. Centrifuge op 16, 100 g gedurende 30 seconden. Gooi de stroom door en voeg 750 microliter van het tris-hydrochloride, natriumchloride, EDTA en ethanolmengsel toe.Centrifuge op 16, 100 gs gedurende 30 seconden. Gooi de stroom door en centrifugeren de spin kolom op 16, 100 gs gedurende twee minuten. Plaats de kolom in een schone 1,5 milliliter microfuge buis.Voeg 150 microliter van 50 millimolar pH acht tris-hydrochloride toe en broed vijf minuten op kamertemperatuur. Elute polyP door twee minuten op 8.000 g te centrifugeren. Begin met het opstellen van normen die nul, vijf, 50 of 200 micromolar kaliumfosfaat bevatten in 50 millimolar pH acht tris-hydrochloride.Aliquot 100 microliter van elke fosfaatnorm en 100 microliter van geëxtraheerde polyP monsters in afzonderlijke putten van een duidelijke 96 putplaat. Bereid een master mix met, per monster, 30 microliters van 5X ScPPX reactiebuffer, 19 microliters water, en een microliter van gezuiverde ScPPX. Voeg 50 microliter van de master mix aan elke put van de 96 put plaat.En incubeer gedurende 15 minuten bij 37 graden Celsius. Op de dag van detectie, bereid een verse werkvoorraad van detectie-oplossing door het mengen op 9,12 milliliter detectie oplossing basis met 88 milliliter van een molaire ascorbine zuur, en laat het op kamertemperatuur komen voor gebruik. Voeg 50 microliter detectieoplossing toe aan elk monster en standaarden in de 96 putplaat.Om kleurontwikkeling mogelijk te maken, ontcunooit de plaat bij kamertemperatuur gedurende ongeveer twee minuten. Gebruik een plaatlezer om de absorptie op 882 nanometer te meten en de fosfaatconcentratie van elk monster te berekenen in vergelijking met de kaliumfosfaatnormcurve. Zet vervolgens de fosfaatconcentraties om in nanomol van polyP-afgeleid fosfaat in elk cellysaat en normaliseer cellulaire polyP-gehalte naar het totale cellulaire eiwit, zoals beschreven in het manuscript.Wild-type E.coli, een gram-negatieve bacterie, geteeld in LB geproduceerd geen polyP. Maar wanneer geteeld in MOPS, geproduceerd ongeveer 192 nanomolen polyP per milligram van het totale eiwit. Een E.coli delta ppk mutant, die polyP kinase mist, produceerde geen polyP in beide medium.Een delta ppx mutant, die exopolyfotase mist, produceerde ongeveer dezelfde hoeveelheid polyP als het wilde type. En de delta phoB mutant, die defect is in fosfaattransport, produceerde aanzienlijk minder polyP dan het wilde type. Wild-type L.reuteri, een gram-positieve bacterie die 's nachts in meic medium wordt gekweekt, verzamelde ongeveer 51 nanomol per milligram totaal eiwit.Een L.reuteri ppk1 null mutant met polyP kinase bevatte minder dan de helft van dit bedrag. Deze aanwezigheid van polyP in de ppk1 null mutant is waarschijnlijk te wijten aan L.reuteri met een tweede polyP kinase. Mycobacterium smegmatis stam SMR vijf, geteeld in Hartmans-de Bont medium bij afwezigheid van ethanol verzameld ongeveer 141 nanomolen polyP per milligram totaal eiwit.Terwijl ethanol behandeling resulteerde in een drievoudige toename. Na deze procedure kan acrylamide gel elektroforese worden uitgevoerd om verschillen in polyP-ketenlengte te beoordelen. Tijdens het proberen van deze procedure, vermijd gemeenschappelijke fouten.Vergeet niet om te voorkomen dat het krijgen van bellen in microtiter plaat putten, en wees voorzichtig om uw monsters over te dragen aan de juiste buis bij het overschakelen van de kolom naar de microfuge buis. Vergeet niet dat het werken met GITC en sterke zuren gevaarlijk kan zijn, en de juiste beschermingsmiddelen moeten altijd worden gedragen tijdens het uitvoeren van deze procedure.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Multiplex Detection of Bacteria in Complex Clinical and Environmental Samples using Oligonucleotide-coupled Fluorescent Microspheres

Multiplex detectie van bacteriën in complexe klinische en Milieu monsters met behulp van oligonucleotide-coupled Fluorescent Microsferen

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated ...

Detection of Bacteria Using Fluorogenic DNAzymes

Detectie van bacteriën met behulp van fluorogene DNAzymes

Outbreaks linked to food-borne and hospital-acquired pathogens account for millions of deaths and hospitalizations as well as colossal economic losses ...

Tractable Mammalian Cell Infections with Protozoan-primed Bacteria

Handelbaar Mammalian Cell Infecties met Protozoan-geprimed Bacteriën

Many intracellular bacterial pathogens use freshwater protozoans as a natural reservoir for proliferation in the environment. Legionella pneumophila, the ...

Measuring Growth and Gene Expression Dynamics of Tumor-Targeted S. Typhimurium Bacteria

Measuring Growth and Gene Expression Dynamics of Tumor-Targeted S. Typhimurium Bacteria

Het meten van groei en genexpressie Dynamiek van Tumor-Gerichte<em&gt; S. Typhimurium</em&gt; Bacteriën

The goal of these experiments is to generate quantitative time-course data on the growth and gene expression dynamics of attenuated S. typhimurium ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

Fluorescentiemicroscopiemethodes voor het bepalen van de levensvatbaarheid van bacteriën in Associatie met zoogdiercellen

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Fluorescence in situ Hybridizations (FISH) for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Fluorescence in situ Hybridizations FISH for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Fluorescentie<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisaties (FISH) voor de lokalisatie van Virussen en Endosymbiotic Bacteriën in Plant en Insect Tissues

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a name given to a variety of techniques commonly used for visualizing gene transcripts in eukaryotic cells ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Na in Real Time de impact van Pneumokokken virulentiefactoren in een acute longontsteking Muis Model Met behulp van Bioluminescent Bacteriën

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

Snelle identificatie van Gram-negatieve bacteriën van Blood Culture Bouillon Met behulp van MALDI-TOF massaspectrometrie

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Referentie Bouillon microverdunningsplaten Methode voor dalbavancin<em&gt; In Vitro</em&gt; Gevoeligheid testen van Bacteriën die aNBAO Grow

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

Biomimetic Materials to Characterize Bacteria-host Interactions

Biomimetische materialen Bacteria-gastheer interacties karakteriseren

Bacterial attachment to host cells is one of the earliest events during bacterial colonization of host tissues and thus a key step during infection. The ...