Name: assaying for inorganic polyphosphate in bacteria
Uploaded: 2019-01-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assaying for Inorganic Polyphosphate in Bacteria at JoVE.com

פרויקט זה נתמך על ידי אוניברסיטת אלבמה-קרנות אתחול המחלקה למיקרוביולוגיה של ברמינגהאם NIH מענק R35GM124590 (MJG) ואת NIH מענק R01AI121364 (FW).

1. טיהור שמרים Exopolyphosphatase (ScPPX)
<ol><li>להפוך את המתח ביטוי חלבון e. coli BL21(DE3)31 עם פלסמיד pScPPX26 על-ידי אלקטרופורציה32 או שינוי כימי33.</li>
	<li>לחסן 1 ליטר מרק lysogeny (LB) המכיל 100 מ ל µg-1 אמפיצילין בבקבוקון unbaffled 2 ל' עם מושבה בודדת של BL21(DE3) המכיל pScP...

הפרוטוקול המתואר כאן מפשט ומאיץ כימות של פוליפ רמות חיידקים מגוונות, עם ערכה טיפוסית של דגימות 24 לוקח בערך 1.5 h לעבד באופן מלא. זה מאפשר מיון מהיר של דגימות וניתוח של ספריות מוטציה, מפשט את הניסויים קינטי מדידה ההצטברות של פוליפ לאורך זמן. הראו כי הפרוטוקול פועלת ביעילות על נציגי שלוש phyla שונ...

הפוליפוספאט אי-אורגנית (פוליפ) הוא ביופולימרים ליניארי של יחידות מקושרים phosphoanhydride פוספט המצויה בכל תחומי החיים-1,-2,-3. בחיידקים מגוונים, פוליפ הוא חיוני תגובת המתח, תנועתיות, ביופילמים, בקרה מחזור התא, עמידות לאנטיביוטיקה של התקפה אלימה4,5,6,7,8 ,9,10,11. מחקרים של פוליפ מטבוליזם של חיידקים לכן יש את הפוטנציאל להניב תובנות יסוד היכולת של החיידקים לגרום למחלות ולשגשג בסביבות מגוונות. עם זאת, במקרים רבים, השיטות הזמינות עבור לכימות פוליפ בתאי חיידקים הם גורם מגביל במחקרים אלה.
ישנן מספר שיטות בשימוש כיום כדי למדוד רמות פוליפ חומרים ביולוגיים. שיטות אלה כוללות בדרך כלל שני שלבים נפרדים: חילוץ פוליפ וכימות הפוליפ נוכח תמציות אלה. השיטה הנוכחית תקן הזהב, שפותחה עבור שמרים האפייה -ברו ועמיתיו12, תמציות פוליפ יחד עם ה-DNA ו- RNA באמצעות פנול, כלורופורם, ואחריו אתנול משקעים, טיפול עם deoxyribonuclease (DNase) ribonuclease (RNase), ואת מערכת העיכול של הפוליפ מטוהרים שנוצר עם cerevisiae ס משפיל-פוליפ אנזים exopolyphosphatase (ScPPX)13 תשואות פוספט חינם, אשר הוא אז לכמת באמצעות מלכיט מבוסס-ירוק ערכי צבע מוחלטים וזמינותו. ההליך זה מאוד כמותית אך עתירי עבודה, הגבלת מספר דוגמאות ניתן יהיה לעבד ניסוי יחיד, והוא אינו ממוטב עבור דגימות בקטריאליות. אחרים דיווחו על חילוץ פוליפ ממגוון רחב של תאים ורקמות חרוזים סיליקה ("glassmilk") או סיליקה ממברנה עמודות6,14,15,16,17, 18. שיטות אלה לא ביעילות לחלץ קצרות שרשרת פוליפ (פחות מ 60 יחידות פוספט)12,14,15, זה אמנם פחות לדאגה עבור חיידקים, אשר נחשבים בדרך כלל לסנתז בעיקר פוליפ ארוכי שרשרת3. שיטות בוגרים של פוליפ חילוץ באמצעות חומצות חזקות19,20 נמצאים בשימוש נרחב יותר, מאז פוליפ יציב תחת תנאים חומציים12.
יש גם מגוון רחב של שיטות דיווח פוליפ לכימות. בין הנפוצה ביותר היא 4 ′, 6-diamidino-2-phenylindole (דאפי), הפלורסנט יותר לרוב נעשה שימוש כדי להכתים את הדנ א. דאפי-פוליפ מתחמי maxima עירור, פליטת קרינה פלואורסצנטית שונה מאשר דאפי-DNA מתחמי21,22, אבל יש הפרעה ניכרת של רכיבים אחרים התאית, כולל ה-RNA, נוקלאוטידים ואינוזיטול פוספטים12,15,16,23, הפחתת רגישות של פוליפ מדידות שנעשו באמצעות שיטה זו של ירידה לפרטים. לחלופין, פוליפ, אדנוזין diphosphate (ADP) יכולים להיות מומרים אדנוזין טריפוספט (ATP) באמצעות מטוהרים Escherichia coli פוליפ קינאז (ממ ק), וכתוצאה מכך מ- ATP לכמת באמצעות לוציפראז14,17 ,18. זה מאפשר הגילוי של כמויות קטנות מאוד של פוליפ, אך דורש שני צעדים התגובה אנזימטיות, luciferin והן ADP טהור, אשר ריאגנטים יקר. ScPPX במיוחד מעכל פוליפ לתוך פוספט חינם6,12,13,24, אשר ניתן לאתרם באמצעות שיטות פשוטות יותר, אבל ScPPX מעוכבת על ידי DNA ו- RNA12, המחייב DNase RNase וטיפול של פוליפ המכילים תמציות. ממ ק וגם ScPPX הם זמינים מסחרית, טיהור ממ ק מורכבות יחסית25,26.
פוליפ תא lysates או תמציות גם להיות visualized על ג'לים לזיהוי מאת דאפי שלילי מכתים27,28,29,30, שיטה לאפשר הערכה של אורך שרשרת, אך תפוקה נמוכה, לקוי כמותית.
כעת מדווחים על assay פוליפ מהיר, זול, תפוקה בינונית המאפשר כימות מהירה של פוליפ רמות מגוונת מיני החיידקים. שיטה זו מתחיל lysing תאים חיידקיים ב 95 ° C 4 מ- guanidine-isothiocyanate (GITC)-14 כדי להשבית phosphatases הסלולר, ואחריו סיליקה ממברנה טור החילוץ אופטימיזציה עבור עיבוד מהיר של דגימות מרובים. התמצית המתקבלת המכילות פוליפ מתעכלת ואז עם עודף גדול של ScPPX, ביטול הצורך DNase וטיפול RNase. אנו כוללים פרוטוקול לטיהור זיקה ניקל פשוטה של כמויות מ ג של ScPPX. לבסוף, פוליפ-derived פוספט חינם לכמתו פשוט, רגיש, המבוסס על חומצה אסקורבית assay ערכי צבע מוחלטים24 , מנורמל לחלבון סלולרי הכולל. שיטה זו מייעלת את המדידה של פוליפ תאים חיידקיים, נדגים את השימוש עם נציג מינים של חיידקים גראם שליליים, חיידקים גראם חיוביים mycobacteria.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>E. coli BL21(DE3)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>69450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid pScPPX2</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>112877</td>
			<td>available to academic and other non-profit institutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1427-2</td>
			<td>E. coli growth medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ampicillin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP176025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl &#946;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>I2481C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>H-400-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium hydroxide (KOH)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P250500</td>
			<td>for adjusting the pH of HEPES-buffered solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S27110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>imidazole</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>O3196500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lysozyme</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAJ6070106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnesium chloride (MgCl2)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP214-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce Universal Nuclease</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>PI88700</td>
			<td>Benzonase (Sigma-Aldrich cat. # E1014) is an acceptable substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Model 120 Sonic Dismembrator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB-120</td>
			<td>other cell lysis methods (e.g. French Press) can also be effective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL HiTrap chelating HP column</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>17040901</td>
			<td>any nickel-affinity chromatography column or resin could be substituted</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nickel(II) sulfate hexahydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AC415611000</td>
			<td>for charging HiTrap column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.8 &#181;m pore size cellulose acetate syringe filters</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-302-168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bradford reagent</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>5000205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris buffer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrum&#160;Spectra/Por 4 RC Dialysis Membrane Tubing 12,000 to 14,000 Dalton MWCO</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-667B</td>
			<td>other dialysis membranes with MWCO &#60; 30,000 Da should also work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hydrochloric acid (HCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A144-212</td>
			<td>for adjusting the pH of Tris-buffered solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P217500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x MOPS medium mixture</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>M2101</td>
			<td>E. coli growth medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glucose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monobasic potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP362-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dibasic potassium phosphate (K2HPO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP363-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dehydrated yeast extract</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>DF0886-17-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tryptone</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1421-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M63-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>manganese sulfate monohydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M113-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guanidine isothiocyanate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP221-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bovine serum albumin (protease-free)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP9703100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>clear flat bottom 96-well plates</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0812-100EA</td>
			<td>any clear 96-well plate will work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan M1000 Infinite plate reader</td>
			<td>Tecan, Inc.</td>
			<td>not applicable</td>
			<td>any plate reader capable of measuring absorbance at 595 and 882 nm will work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-451</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silica membrane spin columns</td>
			<td>Epoch Life Science</td>
			<td>1910-050/250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP120500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microfuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9580154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium acetate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A637-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>antimony potassium tartrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAA1088922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 N sulfuric acid (H2SO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SA818-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium heptamolybdate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAA1376630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ascorbic acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AC401471000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assaying for inorganic polyphosphate in bacteria

הפוליפוספאט אי-אורגנית (פוליפ) הוא פולימר הביולוגי נמצאו תאים בכל תחומי החיים, והוא נדרש עבור התקפה אלימה ותגובת דחק בחיידקים רבים. ישנם מגוון רחב של שיטות לכימות פוליפ בחומרים ביולוגיים, שרבים מהם הם עתירי עבודה או רגישות, הגבלת התועלת שלהם. אנו מציגים כאן שיטה יעילה על פוליפ כימות של חיידקים, באמצעות סיליקה ממברנה טור החילוץ אופטימיזציה עבור עיבוד מהיר של מספר דגימות, העיכול של פוליפ עם exopolyphosphatase ספציפיים פוליפ ScPPX זיהוי של פוספט חינם שנוצר עם רגיש מבוססי חומצה אסקורבית ערכי צבע מוחלטים וזמינותו. הליך זה היא פשוטה, זולה, מאפשרת כימות פוליפ אמין מגוונת מיני החיידקים. אנו מציגים כימות פוליפ מייצג חיידק גראם שליליים (Escherichia coli), חיידק גראם חיוביים חומצה לקטית (לקטובצילוס reuteri), המין mycobacterial (Mycobacterium smegmatis). אנו כוללים גם פרוטוקול פשוט לטיהור זיקה ניקל של כמויות מ ג של ScPPX, אשר אינה כיום זמינים מסחרית.

השלבים המפתח של הפרוטוקול נמצאים בדיאגרמה ובצורה פשוטה באיור1.
כדי להדגים את השימוש בפרוטוקול זה עם חיידקים גראם שליליים, פראי-סוג e. coli MG165539 היה גדל לשלב יומן אמצע LB בינוני עשיר ב 37 ° C עם טלטול (200 סל ד), ואז...

Watch this Scientific Journal Video about Assaying for Inorganic Polyphosphate in Bacteria at JoVE.com

Assaying for Inorganic Polyphosphate in Bacteria

אנו מתארים שיטה פשוטה על כימות מהירה של אי-אורגנית הפוליפוספאט בחיידקים מגוונים, כולל זנים גראם שליליים, גראם חיובי ו- mycobacterial.

Assaying עבור הפוליפוספאט אורגניים של חיידקים

Inorganic polyphosphate (polyP) is a biological polymer found in cells from all domains of life, and is required for virulence and stress response in many ...

פוליפוספט אנאורגני הוא מרכיב מרכזי בתגובת מתח חיידקי. אבל שיטות ישנות יותר לחילוץ ומדידת polyP בחיידקים הן מורכבות ועתירי עבודה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת כימות מהיר, רגיש וזול של רמות ה- polyP במגוון מינים חיידקיים שונים.ההליך יוכח על ידי אריה פוקרל, סטודנטית לתואר ראשון מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, לגדל חיידקי לקטובצילוס reuteri במדיום אינדוקציה אנזימים מאליים ללא ציסטין ב 37 מעלות צלזיוס לילה בלי לרעוד. צנטריפוגה מיליליטר אחד של תרבות לילה זו בצינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מיליליטר כדי לקצור מספיק תאים כדי להניב סך של 50 עד 100 מיקרוגרם של חלבון הסלולר.הסר את supernatant מן גלולת התא לחלוטין, ולאחר מכן להוסיף 250 microliters חיץ תזה GITC ו resuspend על ידי מערבולת. דגירה ב 95 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות כדי ללטף את התאים. אחסן את הליסט ב-80 מעלות צלזיוס.תחילה, הכן תקני BSA המכילים אפס, 1, 2 ו- 4 מיליגרם למיליליטר של BSA במאגר תותבת GITC. Aliquot חמישה microliters של מופשר, lysates תא מעורב היטב וחמישה microliters של תקני BSA להפריד בארות בצלחת ברורה 96 באר. הוסף 195 מיקרוליטרים של ברדפורד reagent לכל באר ולמדוד ספיגה ב 595 ננומטרים קורא לוח.חשב את כמות החלבון בכל באר בהשוואה לעקומה הסטנדרטית של BSA כמתואר בכתב היד. כדי לקבוע את כמות החלבון הכוללת בכל דגימה, הכפל את הערך המתקבל ב- 05. כדי להתחיל מיצוי פוליפוספט, להוסיף 250 microliters של 95%אתנול לכל מדגם lysed GITC, ומערבולת לערבב.פיפטה תערובת זו לעמוד ספין קרום סיליקה ממוקם בצינור צנטריפוגה 1.5 מיליליטר. צנטריפוגה ב 16, 100 גרם במשך 30 שניות. השלך את הזרימה דרך ולהוסיף 750 microliters של טריס הידרוכלוריד, נתרן כלורי, EDTA, ותערובת אתנול.צנטריפוגה ב 16, 100 גרם במשך 30 שניות. השלך את הזרימה דרך צנטריפוגה עמוד ספין ב 16, 100 gs במשך שתי דקות. מניחים את העמוד בצינור מיקרופוג נקי של 1.5 מיליליטר.מוסיפים 150 מיקרוליטרים של 50 מילימולרים pH שמונה טריס-הידרוכלוריד, ודגירה בטמפרטורת החדר במשך חמש דקות. Elute polyP על ידי צנטריפוגה ב 8, 000 גרם במשך שתי דקות. התחל על ידי הכנת סטנדרטים המכילים אפס, חמש, 50, או 200 אשלגן מיקרומולארי פוספט ב 50 מילימולאר pH שמונה טריס הידרוכלוריד.Aliquot 100 microliters של כל תקן פוספט ו 100 microliters של דגימות polyP שחולצו לתוך בארות נפרדות של צלחת ברורה 96 באר. הכינו תערובת אב המכילה, לפי מדגם, 30 מיקרוליטרים של מאגר תגובה 5X ScPPX, 19 מיקרוליטר מים, ומיקרוליטר אחד של ScPPX מטוהר.ותגרה במשך 15 דקות ב-37 מעלות צלזיוס. ביום הגילוי, הכינו מלאי עבודה טרי של פתרון איתור על ידי ערבוב של 9.12 מיליליטר של בסיס פתרון איתור עם 88 מיליליטר של חומצה אסקורבית טוחנת אחת, ואפשרו לה להגיע לטמפרטורת החדר לפני השימוש. הוסף 50 מיקרוליטרים של פתרון זיהוי לכל מדגם ותקנים בצלחת 96 באר.כדי לאפשר התפתחות צבע, הדגירה את הצלחת בטמפרטורת החדר במשך כשתי דקות. השתמש בקורא לוחות כדי למדוד ספיגה ב 882 ננומטר ולחשב את ריכוז הפוספט של כל מדגם בהשוואה לעקומה הסטנדרטית אשלגן פוספט. לאחר מכן להמיר את ריכוזי הפוספט ננומולים של פוליפ נגזר פוספט בכל מתא lysate ולנרמל תוכן polyP הסלולר לחלבון הסלולר הכולל, כמתואר בכתב היד.E.coli מסוג פראי, חיידק גרם שלילי, גדל LB מיוצר ללא פוליפ. אבל כאשר גדל ב- MOPS, מיוצר על 192 ננומולים polyP לכל מיליגרם של חלבון הכולל. מוטציה דלתא ppk E.coli, אשר חסר polyP קינאז, לא הפיק פוליפ באף אחד מהמדיום.מוטציית דלתא ppx, אשר חסר exopolyphosphatase, הפיק בערך את אותה כמות של polyP כמו סוג הבר. והמוטנט דלתא phoB, שהוא פגום בהובלת פוספט, הפיק באופן משמעותי פחות פוליפ מאשר סוג הבר. L.reuteri מסוג פראי, חיידק גרם חיובי גדל בן לילה במדיום MEIC צבר כ 51 ננומולים polyP למיליגרם של חלבון הכולל.מוטציה L.reuteri ppk1 null חסר קינאז polyP הכיל פחות ממחצית הסכום הזה. נוכחות זו של polyP במוטנט ppk1 null היא כנראה בשל L.reuteri המכיל קינאז polyP השני. Mycobacterium smegmatis זן SMR חמש, גדל במדיום Hartmans-de Bont בהיעדר אתנול צבר כ 141 ננומולים polyP למיליגרם של חלבון הכולל.בעוד טיפול אתנול הביא לעלייה משולשת. בעקבות הליך זה, אלקטרופורזה ג'ל אקרילאמיד יכול להתבצע כדי להעריך את ההבדלים באורך שרשרת polyP. בעת ניסיון הליך זה, הימנע מטעויות נפוצות.זכור להימנע מקבל בועות בארות צלחת microtiter, ולהיזהר להעביר את הדגימות שלך לצינור המתאים בעת מעבר מהעמודה לצינור microfuge. אל תשכח כי עבודה עם GITC וחומצות חזקות יכול להיות מסוכן, וציוד מגן הנכון תמיד צריך להיות משוחק בעת ביצוע הליך זה.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Multiplex Detection of Bacteria in Complex Clinical and Environmental Samples using Oligonucleotide-coupled Fluorescent Microspheres

Multiplex זיהוי של חיידקים דוגמאות מורכבות קלינית הסביבה באמצעות oligonucleotide מצמידים פלורסנט microspheres

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated ...

Detection of Bacteria Using Fluorogenic DNAzymes

זיהוי של חיידקים באמצעות DNAzymes Fluorogenic

Outbreaks linked to food-borne and hospital-acquired pathogens account for millions of deaths and hospitalizations as well as colossal economic losses ...

Tractable Mammalian Cell Infections with Protozoan-primed Bacteria

זיהומים של תאי יונקים צייתנים עם חיידקי protozoan דרוך-

Many intracellular bacterial pathogens use freshwater protozoans as a natural reservoir for proliferation in the environment. Legionella pneumophila, the ...

Measuring Growth and Gene Expression Dynamics of Tumor-Targeted S. Typhimurium Bacteria

Measuring Growth and Gene Expression Dynamics of Tumor-Targeted S. Typhimurium Bacteria

צמיחת מדידה וDynamics ביטוי גנים של גידול ממוקד<em&gt; ס Typhimurium</em&gt; חיידקים

The goal of these experiments is to generate quantitative time-course data on the growth and gene expression dynamics of attenuated S. typhimurium ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

שיטות מיקרוסקופית הקרינה לקביעת הכדאיות של חיידקים באיגוד עם תאי יונקים

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Fluorescence in situ Hybridizations (FISH) for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

Fluorescence in situ Hybridizations FISH for the Localization of Viruses and Endosymbiotic Bacteria in Plant and Insect Tissues

פלואורסצנציה<em&gt; באתר</em&gt; הכלאות (דגים) ללוקליזציה של וירוסים וחיידקים Endosymbiotic בצמח ורקמות חרקים

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a name given to a variety of techniques commonly used for visualizing gene transcripts in eukaryotic cells ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

בעקבות בזמן אמת השפעת גורמי דלקת ריאות ארסיים בעכבר דלקת ריאות דגם אקוטי באמצעות חיידקי Bioluminescent

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

זיהוי מהיר של חיידקים גראם שליליים מהדם תרבות מרק שימוש MALDI-TOF המוני ספקטרומטריית

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Microdilution שיטת ההפניה מרק לDalbavancin<em&gt; במבחנה</em&gt; בדיקה של רגישות חיידקים שגדלות אירובי

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

Biomimetic Materials to Characterize Bacteria-host Interactions

חומרי Biomimetic לאפיין אינטראקציות חיידקים-מארח

Bacterial attachment to host cells is one of the earliest events during bacterial colonization of host tissues and thus a key step during infection. The ...