Name: assays for the specific growth rate and cell-binding ability of rotavirus
Uploaded: 2019-01-28T13:00:00
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यह काम "स्वच्छता मूल्य श्रृंखला: पारिस्थितिकी के रूप में स्वच्छता प्रणालियों डिजाइनिंग सामुदायिक मूल्य प्रणाली" परियोजना, मानवता और प्रकृति के लिए ResearchInstitute (RIHN, परियोजना No. 14200107) का समर्थन किया गया था ।

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लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

विशिष्ट विकास दर को मापने के लिए हमारे प्रोटोकॉल पिछले वाले से आसान है और अंय वायरस के लिए अनुकूलित किया जा सकता है जब तक उनके सेल संस्कृति प्रणाली अभी तक स्थापित नहीं किया गया है । इस अध्ययन में, हम RRV (G3P [3]) का इस्तेमाल किया क्योंकि इस तनाव सजीले टुकड़े मानव rotaviruses से आसानी से फार्म कर सकते हैं जब MA104 सेल लाइनों का उपयोग कर. कुछ मानव रोटावायरस उपभेदों इस सेल लाइन में पट्टिका फार्म नहीं कर सकते । इसलिए, बजाय पट्टिका परख, यूनिट (FFU) परख15 या माध्य ऊतक संस्कृति संक्रामक खुराक (TCID50) परख के गठन के कई रोटावायरस उपभेदों16के लिए लागू किया जा सकता है । विशिष्ट वृद्धि दर निर्धारित करने के लिए प्रस्तुत प्रोटोकॉल का उपयोग अन्य वायरस प्रकारों के लिए किया जा सकता है लेकिन वायरस के लिए उपयुक्त नहीं है जिसके लिए कोई स्थापित सेल कल्चर सिस्टम स्थापित नहीं है. विशिष्ट विकास दर के लिए प्रयोग शुरू करने से पहले, यह पहले से पता करने के लिए बेहतर है जब वायरस संक्रामक titer को बढ़ाने के लिए शुरू होता है और एक प्रारंभिक परीक्षण में स्थिर चरण में पहुंचता है । यदि बहुत अधिक पट्टिकाएं मौजूद हों, तो वायरस के नमूनों की कमजोर दर को बदलने के बाद पट्टिका परख फिर से आयोजित की जानी चाहिए । घंटे के बाद संक्रमण (hpi) के नमूनों को इकट्ठा करने के लिए भी महत्वपूर्ण है क्योंकि घातीय वृद्धि चरण की ढलान को कम करके आंका जा सकता है अगर उचित समय बिंदु को स्थिर चरण तक पहुंचने के लिए याद किया जाता है । संशोधित Gompertz मॉडल द्वारा सन्निकटन में, दृढ़ संकल्प के एक गुणांक हमेशा की गणना की जानी चाहिए और जाँच की. यदि संशोधित Gompertz मॉडल के लिए फिटनेस कम है, ऐसे संशोधित रसद मॉडल12 के रूप में अंय विकास मॉडल बेहतर हो सकता है ।
हैंडलिंग कोशिकाओं में, जब मध्यम या वायरस इनोक्युलम, धोने या पट्टिका परख के लिए agarose जेल के लिए पंजाबियों तुरंत एक सेल संस्कृति की थाली की एक अच्छी तरह से जोड़ा जाना चाहिए सूखापन से कोशिकाओं को रोकने के लिए । एक ही समय में, आप धीरे से पंजाबियों या agarose कोशिकाओं को कुओं से अलग नहीं डालना चाहिए । यह कदम दोनों परख (चरण ३.९ और ३.११) में सबसे महत्वपूर्ण है । यदि पट्टिका परख भी कई नमूने है, हम agarose जेल (१०० एमएल प्रत्येक अधिकतम सिफारिश की है) कई मध्यम बोतलों में विभाजित करने की सिफारिश और बोतल गर्म रखने के बाद से ही प्रयोग से पहले agarose जेल के बारे में 10 मिनट के भीतर जम जाता है तापमान. चूंकि trypsin उच्च तापमान17की चपेट में है, एक trypsin समाधान पर्याप्त रूप से ठंडा करने के बाद पट्टिका परख के लिए एक मध्यम और agarose को जोड़ा जाना चाहिए ।
सेल में बाध्यकारी परख, कोशिकाओं को बाध्यकारी वायरस के लिए गर्मी 4 डिग्री सेल्सियस पर किया जाना चाहिए कोशिकाओं के आक्रमण को रोकने के लिए । है गिल विधि13के अनुसार, कोशिकाओं को कम तापमान पर सुखाने के लिए प्रवण हैं, तो मिलाते हुए कोमल हर 15 मिनट में आवश्यक है मशीन के दौरान । आरएनए निष्कर्षण यहां का उपयोग किट अंय किट के लिए प्रतिस्थापित किया जा सकता है । RT-qPCR में मानक वक्र की ढलान लगभग ३.३ होना चाहिए, और दृढ़ संकल्प के गुणांक से अधिक ०.९८ होना चाहिए । प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप की तुलना में कोशिकाओं में वायरस के स्थानीयकरण कल्पना करने के लिए, परख और अधिक तेजी से और आसान उपयोग करने के लिए है क्योंकि वायरस के लिए फ्लोरोसेंट पदार्थों के बंधन आवश्यक नहीं है ।
हाल ही में, मानव आंत्र enteroid (हिे), एक समान सेलुलर संरचना और मानव जठरांत्र उपकला के रूप में समारोह का प्रदर्शन, रोटावायरस प्रचार के लिए उपलब्ध हो गया है18. हिे का उपयोग हमें विशिष्ट वृद्धि दर और रोटावायरस के गैर culturable उपभेदों के सेल-बाध्यकारी क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए सक्षम हो सकता है । इसके अलावा, दोनों प्रयोगों यहां वर्णित दोनों phenotypes19पर दवा प्रभाव के मूल्यांकन के लिए लागू किया जा सकता है । यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल इसे मात्रात्मक विभिंन स्थितियों के तहत रोटावायरस उपभेदों के phenotype पैरामीटर मूल्यों में परिवर्तन पर चर्चा करने के लिए संभव बनाते हैं ।

आरएनए वायरस एक आनुवंशिक रूप से विविध जनसंख्या, quasispecies1के रूप में जाना जाता है, क्योंकि उनके उत्परिवर्तन दर,2 जो डीएनए की तुलना में अधिक है आधारित जीवों के रूप में । quasispecies में जनसंख्या संरचना उत्परिवर्तन, चयन दबाव, और आनुवंशिक बहाव सहित जनसंख्या आनुवंशिक कारकों से प्रभावित है । एक आनुवंशिक वंश के भीतर उपभेदों आनुवंशिक विविधता की वजह से अलग phenotypes दिखा सकते हैं । उदाहरण के लिए, Rachmadi एट अल. दिखाया गया है कि मुक्त क्लोरीन संवेदनशीलता murine नोरोवायरस उपभेदों है कि एक पट्टिका-शुद्ध तनाव S7-PP33से उत्पंन के बीच अलग था ।
Rotaviruses (जीनस रोटावायरस reoviridae परिवार में) गैर quasispecies2के गठन डी एस आरएनए वायरस हैं । जनसंख्या आनुवंशिक कारकों के अलावा ऊपर वर्णित है, जीनोम reassortment रोटावायरस की आनुवंशिक विविधता को प्रभावित करता है क्योंकि इस वायरस के 11 खंडों जीनोम4है । Rotaviruses कारण दस्त मुख्य रूप से शिशुओं के बीच, और २०१३ में शिशु की मृत्यु के बारे में अनुमानित थे २५०,०००5. दो टीके कई देशों में उपयोग में हैं और रोटावायरस संक्रमण के बोझ को कम करने में कारगर रहे हैं, लेकिन कुछ शोधकर्ताओं ने अब वैक्सीन की मौजूदगी की चर्चा-एस्केप म्यूटेंट6,7,8, 9. इन म्यूटेंट के लक्षण वर्णन के लिए टीका-भागने तंत्र को समझना जरूरी है.
यहां, हम दो परख के लिए विशिष्ट विकास दर और सेल रोटावायरस के बंधन की क्षमता के मूल्यांकन के लिए वर्तमान प्रोटोकॉल के लिए उपभेदों के बीच phenotypic मतभेदों को समझने के लिए/म्यूटेंट । rotaviruses की वृद्धि वक्र पिछले रिपोर्ट10में प्रस्तुत किया गया है, लेकिन इस तरह के विशिष्ट वृद्धि दर के रूप में वृद्धि मापदंडों आमतौर पर मापा नहीं कर रहे हैं । एक सेल बाध्यकारी परख पहले आयोजित immunofluorescent धुंधला तकनीक11शामिल है । हम यहां पट्टिका परख और आर टी-qPCR, जो हमें मात्रात्मक वायरल phenotypes में अंतर पर चर्चा करने की अनुमति का उपयोग कर के आसान तरीके दिखाओ । इन तरीकों रोटावायरस phenotypes के लक्षण वर्णन के लिए उपयुक्त है और अंततः नए टीके के निर्माण के लिए कई पादी के लिए प्रभावी योगदान कर सकते हैं ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>7500 Real Time PCR System</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar-EPI</td>
			<td>Nakalai Tesque, Inc</td>
			<td>01101-34</td>
			<td>Plaque assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium Hydrogenphosphate</td>
			<td>Wako Pure Chemical Corporation</td>
			<td>194-02875</td>
			<td>Cell binding assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eagle&#39;s MEM &#34;Nissui&#34; <img alt="One" src="/files/ftp_upload/58821/01.jpg" /></td>
			<td>Nissui Pharmaceutical Co., Ltd</td>
			<td>_05900</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eagle&#39;s MEM &#34;Nissui&#34; <img alt="Two" src="/files/ftp_upload/58821/02.jpg" /></td>
			<td>Nissui Pharmaceutical Co., Ltd</td>
			<td>_05901</td>
			<td>Plaque assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasYFlask 75 cm2</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine Serim, qualified, USDA-approved regions</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>Cell culture and Plaque assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forward / Reverse primers</td>
			<td>Eurofins Genomics</td>
			<td></td>
			<td>qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine, 200 mM Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>2530081</td>
			<td>Cell culture and Plaque assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Red</td>
			<td>Wako Pure Chemical Corporation</td>
			<td>140-00932</td>
			<td>Plaque assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (-) &#34;Nissui&#34;</td>
			<td>Nissui Pharmaceutical Co., Ltd</td>
			<td>_05913</td>
			<td>Cell culture and Plaque assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin, Liguid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Cell culture and Plaque assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Wako Pure Chemical Corporation</td>
			<td>163-03545</td>
			<td>Cell binding assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Premix ExTaq (Perfect Real Time)</td>
			<td>TAKARA Bio Inc.</td>
			<td>RR039A</td>
			<td>qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrimeScriptTN RT reagent Kit (Perfect Real Time)</td>
			<td>TAKARA Bio Inc.</td>
			<td>RR037A</td>
			<td>cDNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrimeTime qPCR Probes</td>
			<td>Medical and Biological Laboratories Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp Viral RNA Mini Kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>52904</td>
			<td>RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Wako Pure Chemical Corporation</td>
			<td>199-05985</td>
			<td>Cell culture and Plaque assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Wako Pure Chemical Corporation</td>
			<td>198-01675</td>
			<td>Cell binding assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture plates 24-well plate</td>
			<td>TPP</td>
			<td>92024</td>
			<td>Cell binding assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture plates 6-well plate</td>
			<td>TPP</td>
			<td>92006</td>
			<td>Plaque assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma base</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>T1503</td>
			<td>Cell binding assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin from porcine pancrease</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>T0303-1G</td>
			<td>Activate for rotavirus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.05 %), phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25300054</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical 96-Well Thermal Cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>cDNA synthesis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assays for the specific growth rate and cell-binding ability of rotavirus

रोटावायरस शिशु दस्त के लिए मुख्य etiological कारक है । यह एक डबल-कतरा (डी एस) आरएनए वायरस और एक आनुवंशिक रूप से विविध जनसंख्या रूपों, quasispecies के रूप में जाना जाता है, उनके उच्च उत्परिवर्तन दर के कारण । यहां, हम वर्णन कैसे विशिष्ट विकास दर को मापने के लिए और सेल-रोटावायरस के अपने phenotypes के रूप में बाध्यकारी क्षमता । रोटावायरस trypsin के साथ इलाज के लिए सेल रिसेप्टर पहचान और फिर MA104 सेल संस्कृति में inoculated है । supernatant, जिसमें वायरल जिन्न शामिल हैं, में रहकर एकत्र होता है । पट्टिका परख के लिए वायरस titer (पट्टिका बनाने इकाई: pfu) प्रत्येक एकत्र supernatant की पुष्टि करने के लिए प्रयोग किया जाता है । विशिष्ट विकास दर संशोधित Gompertz मॉडल के लिए pfu/एमएल के समय-पाठ्यक्रम डेटा फिटिंग द्वारा अनुमानित है । सेल की परख में बाध्यकारी, एक 24-अच्छी तरह से थाली में MA104 कोशिकाओं रोटावायरस से संक्रमित है और रोटावायरस सोखना के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर ९० मिनट के लिए सेल रिसेप्टर्स के लिए मशीन । एक कम तापमान मेजबान सेल पर हमला करने से रोटावायरस नियंत्रित । virions को दूर करने के लिए धोने के बाद, आरएनए सीडीएनए संश्लेषण और रिवर्स-प्रतिलेखन मात्रात्मक पीसीआर (आरटी-qPCR) के बाद सेल रिसेप्टर्स से जुड़ी virions से निकाला जाता है. इन प्रोटोकॉल वायरल उपभेदों के बीच phenotypic मतभेदों की जांच के लिए लागू किया जा सकता है ।

विशिष्ट वृद्धि दर और पट्टिका-शुद्धि RRV उपभेदों के सेल बाइंडिंग परख के लिए दो प्रोटोकॉल का अवलोकन चित्र 1a और 2a, क्रमशः में दिखाया गया है ।
विशिष्ट विकास दर के लिए परख में, T75 कुप्पी पर प्रचार करते समय अंतिम वायरस titer 107 pfu/एमएल से अधिक पहुंचता है । 107 pfu/एमएल से अधिकतम एकाग्रता कम है, तो MA104 सेल धाराप्रवाह नहीं हो सकता है या RRV trypsin द्वारा अच्छी तरह से सक्रिय नहीं किया गया था । कुछ वृद्धि मॉडल संक्रामक इकाई डेटा का उपयोग कर विशिष्ट वृद्धि दर का आकलन करने के लिए उपलब्ध हैं । इस प्रोटोकॉल में, संशोधित Gompertz मॉडल12 एक उदाहरण के रूप में कार्यरत है; <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/58821/58821eq1.jpg">
कहां n0 (104 pfu/एमएल इस अध्ययन में) और एनटी (104 से 108 pfu/एमएल) 0 और टी पर वायरस संक्रामक titer (pfu/एमएल) हैं (उदाहरण: 0, 6, 12, 18, 24, ३६) hpi, क्रमशः, एक asymptotic मान है [लाग (N∞/N0 )] (उदाहरण: 3 से 4), µ है विशिष्ट विकास दर [1/h], e है नेपियर स्थिरांक और λ अंतराल अवधि [h] है । मॉडल पैरामीटर्स, विश्लेषण सॉफ़्टवेयर के सॉल्वर फंक्शन द्वारा प्राप्त किए जाते हैं, जो स्वीकार्य और मॉडल किए गए मानों के बीच अंतर के वर्गों का योग कम करता है. चित्र 1bमें उदाहरण में, विशिष्ट वृद्धि दर (µ) ०.१९७ [1/एच] होने का अनुमान है और अंतराल अवधि (λ) एक संशोधित Gompertz मॉडल के लिए कम से वर्ग विधि लागू करने के द्वारा ६.६१ [h] है, और प्रारंभिक titer करने के लिए स्थिर चरण में संबंधित वायरस titer ( लॉग स्केल) (A) is ३.१५ [लॉग (N∞/N0)]. हम कुल में 6 रोटावायरस क्लोनों का परीक्षण किया है, और विशिष्ट विकास दर के अनुमानित मूल्यों ०.१९ से ०.२७ [1/ ये अनुमानित मान विश्वसनीय हैं क्योंकि मॉडल फिटिंग में निर्धारण मानों का गुणांक ०.९८ से अधिक है.
RRV virions सेल के लिए बाध्यकारी सतहों के बारे में थे 103 प्रतियां/एमएल (बंधन क्षमता के आसपास था 1%) जब सेल के लिए एक 24 अच्छी तरह से प्लेट-बाध्यकारी परख (चित्रा 2 बी) का उपयोग कर । परख आमतौर पर हर नमूने के लिए तीन बार आयोजित की जाती है, और यदि प्रतिलिपि संख्या में एक बड़ा विचरण एक नमूना में मनाया जाता है, जैसे अधिक धोने और trypsin द्वारा RRV के अपर्याप्त सक्रियण के रूप में कुछ समस्याओं हो सकती है । qPCR के बारे में ३६.० से अधिक की सीटी मूल्य बेहतर नहीं है और हमारे qPCR हालत में एक का पता लगाने की सीमा के नीचे माना जाता है ।
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>वॉल्यूम/1 प्रतिक्रिया</td>
		</tr>
<tr>
<td>5 x PrimeScript बफ़र</td>
			<td>४.० µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>PrimeScript आरटी एंजाइम मिक्स मैं</td>
			<td>१.० µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>Oligo डीटी प्राइमर</td>
			<td>१.० µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>यादृच्छिक 6 mers</td>
			<td>४.० µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>जुताई आसुत जल</td>
			<td>६.० µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>ssRNA नमुना</td>
			<td>४.० µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>कुल</td>
			<td>२०.० µ l</td>
		</tr>
</tbody></table>तालिका 1: रोटावायरस जीनोम के सीडीएनए संश्लेषण के लिए मास्टर मिक्स संरचना ।
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>तापमान [° c]</td>
			<td>समय</td>
		</tr>
<tr>
<td>३७</td>
			<td>15 मिनट</td>
		</tr>
<tr>
<td>४२</td>
			<td>15 मिनट</td>
		</tr>
<tr>
<td>८५</td>
			<td>5 एस</td>
		</tr>
<tr>
<td>4</td>
			<td>∞</td>
		</tr>
</tbody></table>तालिका 2: रोटावायरस जीनोम के सीडीएनए संश्लेषण के लिए प्रतिक्रिया की स्थिति ।
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>वॉल्यूम/1 प्रतिक्रिया</td>
		</tr>
<tr>
<td>Premix Taq</td>
			<td>१२.५ µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>फॉरवर्ड प्राइमरी (10 µ मीटर)</td>
			<td>०.५ µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>रिवर्स प्राइमर (10 µ एम)</td>
			<td>०.५ µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>जांच (10 µ m)</td>
			<td>०.५ µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>संदर्भ डाई द्वितीय</td>
			<td>०.५ µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>जुताई आसुत जल</td>
			<td>५.५ µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>सीडीएनए नमुना</td>
			<td>५.० µ l</td>
		</tr>
<tr>
<td>कुल</td>
			<td>25 µ l</td>
		</tr>
</tbody></table>तालिका 3: रोटावायरस एक जीनोम की मात्रात्मक पीसीआर के लिए मास्टर मिक्स संरचना ।
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>तापमान [° c]</td>
			<td>समय</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>९५</td>
			<td>5 min</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>९४</td>
			<td>20 एस</td>
			<td rowspan="2">४५ सायकल</td>
		</tr>
<tr>
<td>६०</td>
			<td>1 min</td>
		</tr>
<tr>
<td>७२</td>
			<td>5 min</td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>तालिका 4: रोटावायरस एक जीनोम की मात्रात्मक पीसीआर के लिए प्रतिक्रिया की स्थिति ।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58821/58821fig1.jpg"> चित्रा 1: रोटावायरस विकास और रोटावायरस के विकास वक्र के आकलन के योजनाबद्ध सिंहावलोकन । (क) रोटावायरस की संक्रामक इकाई को पट्टिका परख के साथ मापा जाता है. (ख) वक्र (नीली रेखा) हमारी प्रयोगशाला (वाइट सर्कल) में स्वीकार्य डेटा के आधार पर संशोधित Gompertz मॉडल द्वारा अनुमानित किया गया था । विशिष्ट विकास दर [µ]; ०.१९७ [h-1], अंतराल अवधि (λ); ६.६१ [h], सापेक्षिक वायरस प्रारंभिक titer (लॉग स्केल) (A) में स्थिर चरण पर titer; ३.१५ [लॉग (N∞/N0)] । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58821/58821fig1large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58821/58821fig2.jpg"> चित्रा 2: योजनाबद्ध अवलोकन और सेल के प्रतिनिधि परिणाम-पांच RRV हमारी प्रयोगशाला में सजीले टुकड़े से शुद्ध उपभेदों की बाध्यकारी परख । (क) रोटावायरस के साथ एक कोशिका संस्कृति प्लेट inoculated कोशिकाओं में वायरस के आक्रमण को बाधित करने के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर मशीनी है । गर्मी और कोशिकाओं को असीम वायरल कणों को हटाने के बाद, आरटी-qPCR के साथ सेल की सतह के लिए बाध्य वायरल कणों से उत्पन्न जीनोम की संख्या को बढ़ाता है । (ख) कोशिका बाध्यकारी परख के परिणाम बाध्यकारी दक्षता (%), जो इनोक्युलम में मौजूद उन लोगों के लिए बाध्य वायरल कणों का अनुपात था के रूप में प्रदर्शित किया गया था । बोल्ड बार: माध्य, बक्से के अंत: चतुर्थक विचलन, रेखा के अंत: अधिकतम और ंयूनतम । <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58821/58821fig2large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>

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Assays for the Specific Growth Rate and Cell-binding Ability of Rotavirus

यहां हम दो प्रोटोकॉल, विशिष्ट विकास दर को मापने के लिए एक और कोशिका के लिए अंय रोटावायरस की बाध्यकारी क्षमता पट्टिका परख और RT-qPCR का उपयोग कर प्रस्तुत करते हैं । इन प्रोटोकॉल रोटावायरस उपभेदों के बीच phenotypes में अंतर की पुष्टि के लिए उपलब्ध हैं ।

विशिष्ट विकास दर और रोटावायरस की कोशिका बाध्यकारी क्षमता के लिए परख

Rotavirus is the main etiological factor for infantile diarrhea. It is a double-stranded (ds) RNA virus and forms a genetically diverse population, known ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

सभी इन्फ्लुएंजा के मात्रात्मक विश्लेषण सरल स्लॉट ब्लाट Assays में एक वायरल Hemagglutinins और यूनिवर्सल एंटीबॉडी का उपयोग कर Neuraminidases प्रकार

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

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Bluetongue वायरस के खिलाफ उपन्यास antivirals की पहचान के लिए assays

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ScanLag: High-throughput Quantification of Colony Growth and Lag Time

ScanLag: उच्च throughput कालोनी विकास की मात्रा और समय अंतराल

Growth dynamics are fundamental characteristics of microorganisms. Quantifying growth precisely is an important goal in microbiology. Growth dynamics are ...

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Loop-mediated Isothermal Amplification LAMP Assays for the Species-specific Detection of Eimeria that Infect Chickens

की प्रजाति विशिष्ट पहचान के लिए लूप की मध्यस्थता इज़ोटेर्माल प्रवर्धन (दीपक) Assays<em&gt; Eimeria</em&gt; मुर्गियों को संक्रमित करते हैं

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Pairwise Growth Competition Assay for Determining the Replication Fitness of Human Immunodeficiency Viruses

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प्रारंभिक वायरल एंट्री पहचान के लिए assays और antiviral यौगिकों का मूल्यांकन

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ल्युकोसैट समृद्ध रक्त के नमूनों में Halogenating peroxidase की गतिविधि के फास्ट और विशिष्ट आकलन

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on ...

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Bacteria utilize complement regulators as a means of evading the host immune response. Here, we describe protocols for evaluating the role vitronectin ...