Name: mesenchymal stem cell isolation from pulp tissue and co-culture with cancer cells to study their interactions
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions at JoVE.com

وأيد هذه الدراسة جامعة يديتيب. وكانت جميع البيانات والأرقام المستخدمة في هذه المقالة المنشورة سابقا34.

تم الحصول على الموافقة الخطية للمرضى بعد الموافقة من "لجنة الأخلاقيات المؤسسية".
1-دبسك العزلة والثقافة
<ol><li>نقل الحكمة الأسنان التي تم الحصول عليها من الشباب الذين تتراوح أعمارهم بين 17 و 20 إلى 15 مل الأنابيب التي تحتوي على تعديل النسر المتوسطة (دميم كامل دولبيكو) [انخفاض الج?...

<ol>
	<li>Camberlain, G., Fox, J., Ashton, B., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells:+their+phenotype,+differentiation+capacity,+immunological+features,+and+potential+for+homing.">Mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing.</a> Stem Cells. 25 (11), 2739-2749 (2007).</li><li>Demirci, S., Do&#287;an, A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Dental Stem Cells. , 109-124 (2016).</li><li>Fox, J. M., Chamberlain, G., Ashton, B. A., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+into+the+understanding+of+mesenchymal+stem+cell+trafficking.">Recent advances into the understanding of mesenchymal stem cell trafficking.</a> British journal of haematology. 137 (6), 491-502 (2007).</li><li>Chang, A. I., Schwertschkow, A. H., Nolta, J. A., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+mesenchymal+stem+cells+in+cancer+progression+and+metastases.">Involvement of mesenchymal stem cells in cancer progression and metastases.</a> Current cancer drug targets. 15 (2), 88-98 (2015).</li><li>Dvorak, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumors:+wounds+that+do+not+heal.">Tumors: wounds that do not heal.</a> New England Journal of Medicine. 315 (26), 1650-1659 (1986).</li><li>Lu, Y. -. r., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+growth+inhibitory+effect+of+mesenchymal+stem+cells+on+tumor+cells+in+vitro+and+in+vivo.">The growth inhibitory effect of mesenchymal stem cells on tumor cells in vitro and in vivo.</a> Cancer biology &amp; therapy. 7 (2), 245-251 (2008).</li><li>Secchiero, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+display+anti-cancer+activity+in+SCID+mice+bearing+disseminated+non-Hodgkin's+lymphoma+xenografts.">Human bone marrow mesenchymal stem cells display anti-cancer activity in SCID mice bearing disseminated non-Hodgkin's lymphoma xenografts.</a> PloS one. 5 (6), e11140 (2010).</li><li>Hong, I. -. S., Lee, H. -. Y., Kang, K. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+and+cancer:+friends+or+enemies?.">Mesenchymal stem cells and cancer: friends or enemies?.</a> Mutation Research/Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. 768, 98-106 (2014).</li><li>Brennen, W. N., Chen, S., Denmeade, S. R., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Mesenchymal+Stem+Cells+(MSCs)+at+sites+of+human+prostate+cancer.">Quantification of Mesenchymal Stem Cells (MSCs) at sites of human prostate cancer.</a> Oncotarget. 4 (1), 106 (2013).</li><li>Klopp, A. H., Gupta, A., Spaeth, E., Andreeff, M., Marini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+dissecting+a+discrepancy+in+the+literature:+do+mesenchymal+stem+cells+support+or+suppress+tumor+growth.">Concise review: dissecting a discrepancy in the literature: do mesenchymal stem cells support or suppress tumor growth.</a> Stem cells. 29 (1), 11-19 (2011).</li><li>Albini, A., Sporn, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tumour+microenvironment+as+a+target+for+chemoprevention.">The tumour microenvironment as a target for chemoprevention.</a> Nature Reviews Cancer. 7 (2), 139 (2007).</li><li>Quante, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+myofibroblasts+contribute+to+the+mesenchymal+stem+cell+niche+and+promote+tumor+growth.">Bone marrow-derived myofibroblasts contribute to the mesenchymal stem cell niche and promote tumor growth.</a> Cancer cell. 19 (2), 257-272 (2011).</li><li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+in+vitro+and+in+vivo.">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li><li>Mori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells:+osteogenic+differentiation+and+gene+expression.">Dental pulp stem cells: osteogenic differentiation and gene expression.</a> Annals of the new York Academy of Sciences. 1237 (1), 47-52 (2011).</li><li>Mori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+properties+of+human+dental+pulp+stem+cells.">Osteogenic properties of human dental pulp stem cells.</a> Journal of biological regulators and homeostatic agents. 24 (2), 167-175 (2010).</li><li>Kerkis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+population+of+immature+dental+pulp+stem+cells+expressing+OCT-4+and+other+embryonic+stem+cell+markers.">Isolation and characterization of a population of immature dental pulp stem cells expressing OCT-4 and other embryonic stem cell markers.</a> Cells Tissues Organs. 184 (3-4), 105-116 (2006).</li><li>Potdar, P. D., Jethmalani, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dental+pulp+stem+cells:+applications+in+future+regenerative+medicine.">Human dental pulp stem cells: applications in future regenerative medicine.</a> World journal of stem cells. 7 (5), 839 (2015).</li><li>Ahmed, N. E. -. M. B., Murakami, M., Hirose, Y., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+dental+pulp+stem+cell+secretome+for+Alzheimer's+disease+treatment:+an+in+vitro+study.">Therapeutic potential of dental pulp stem cell secretome for Alzheimer's disease treatment: an in vitro study.</a> Stem cells international. 2016, (2016).</li><li>Gorin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Priming+dental+pulp+stem+cells+with+fibroblast+growth+factor-2+increases+angiogenesis+of+implanted+tissue-engineered+constructs+through+hepatocyte+growth+factor+and+vascular+endothelial+growth+factor+secretion.">Priming dental pulp stem cells with fibroblast growth factor-2 increases angiogenesis of implanted tissue-engineered constructs through hepatocyte growth factor and vascular endothelial growth factor secretion.</a> Stem cells translational medicine. 5 (3), 392-404 (2016).</li><li>Wakayama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+secreted+from+dental+pulp+stem+cells+show+multifaceted+benefits+for+treating+acute+lung+injury+in+mice.">Factors secreted from dental pulp stem cells show multifaceted benefits for treating acute lung injury in mice.</a> Cytotherapy. 17 (8), 1119-1129 (2015).</li><li>Do&#287;an, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+stem+cells+is+promoted+by+amphiphilic+pluronic+block+copolymers.">Differentiation of human stem cells is promoted by amphiphilic pluronic block copolymers.</a> International Journal of Nanomedicine. 7, 4849 (2012).</li><li>Ta&#351;l&#305;, P. N., Do&#287;an, A., Demirci, S., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boron+enhances+odontogenic+and+osteogenic+differentiation+of+human+tooth+germ+stem+cells+(hTGSCs)+in+vitro.">Boron enhances odontogenic and osteogenic differentiation of human tooth germ stem cells (hTGSCs) in vitro.</a> Biological trace element research. 153 (1-3), 419-427 (2013).</li><li>Yalvac, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+stem+cells+derived+from+human+third+molar+tooth+germs+of+young+adults:+implications+in+neo-vascularization,+osteo-,+adipo-and+neurogenesis.">Isolation and characterization of stem cells derived from human third molar tooth germs of young adults: implications in neo-vascularization, osteo-, adipo-and neurogenesis.</a> The pharmacogenomics journal. 10 (2), 105 (2010).</li><li>Do&#287;an, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+pentaborate+pentahydrate+and+pluronic+containing+hydrogel+increases+cutaneous+wound+healing+in+vitro+and+in+vivo.">Sodium pentaborate pentahydrate and pluronic containing hydrogel increases cutaneous wound healing in vitro and in vivo.</a> Biological trace element research. 162 (1-3), 72-79 (2014).</li><li>Do&#287;an, A., Yalva&#231;, M. E., Y&#305;lmaz, A., Rizvanov, A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+F68+on+cryopreservation+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+human+tooth+germ.">Effect of F68 on cryopreservation of mesenchymal stem cells derived from human tooth germ.</a> Applied biochemistry and biotechnology. 171 (7), 1819-1831 (2013).</li><li>Rizvanov, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+and+self-organization+of+human+mesenchymal+stem+cells+and+neuro-blastoma+SH-SY5Y+cells+under+co-culture+conditions:+A+novel+system+for+modeling+cancer+cell+micro-environment.">Interaction and self-organization of human mesenchymal stem cells and neuro-blastoma SH-SY5Y cells under co-culture conditions: A novel system for modeling cancer cell micro-environment.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 76 (2), 253-259 (2010).</li><li>Troiano, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiparametric+analysis+of+cells+with+different+mitochondrial+membrane+potential+during+apoptosis+by+polychromatic+flow+cytometry.">Multiparametric analysis of cells with different mitochondrial membrane potential during apoptosis by polychromatic flow cytometry.</a> Nature protocols. 2 (11), 2719 (2007).</li><li>Melzer, C., von der Ohe, J., Lehnert, H., Ungefroren, H., Hass, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cell+niche+models+and+contribution+by+mesenchymal+stroma/stem+cells.">Cancer stem cell niche models and contribution by mesenchymal stroma/stem cells.</a> Molecular cancer. 16 (1), 28 (2017).</li><li>Aguirre, A., Planell, J., Engel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cell/mesenchymal+stem+cell+interaction+in+co-culture+and+its+implications+in+angiogenesis.">Dynamics of bone marrow-derived endothelial progenitor cell/mesenchymal stem cell interaction in co-culture and its implications in angiogenesis.</a> Biochemical and biophysical research communications. 400 (2), 284-291 (2010).</li><li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biomimetics and Stem Cells. , 29-36 (2013).</li><li>Plotnikov, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-to-cell+cross-talk+between+mesenchymal+stem+cells+and+cardiomyocytes+in+co-culture.">Cell-to-cell cross-talk between mesenchymal stem cells and cardiomyocytes in co-culture.</a> Journal of cellular and molecular. 12 (5a), 1622-1631 (2008).</li><li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+cell-cell+communication+in+co-culture.">Studying cell-cell communication in co-culture.</a> Biotechnology journal. 8 (4), 395-396 (2013).</li><li>Brunetti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+expression+of+TRAIL+by+osteoblastic+differentiated+dental+pulp+stem+cells+affects+myeloma+cell+viability.">High expression of TRAIL by osteoblastic differentiated dental pulp stem cells affects myeloma cell viability.</a> Oncology reports. 39 (4), 2031-2039 (2018).</li><li>Do&#287;an, A., Demirci, S., Apdik, H., Apdik, E. A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+increase+prostate+cancer+cell+proliferation+and+migration+under+in+vitro+conditions.">Dental pulp stem cells (DPSCs) increase prostate cancer cell proliferation and migration under in vitro conditions.</a> Tissue and Cell. 49 (6), 711-718 (2017).</li></ol>

مساهمة MSCs للبيئة الورم ينظم التفاعلات عدة بما في ذلك الجيل الهجين خلية عن طريق اندماج الخلية، وأنشطة انتوسيس أو سيتوكين وتشيموكيني بين الخلايا الجذعية و خلايا السرطان28. الهيكل التنظيمي والتفاعلات خلية خلية ويفرز عوامل تحديد سلوك خلايا السرطان من حيث تعزيز الورم والتدر?...

الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs)، مع قدرة التمايز والمساهمة في تجديد الأنسجة الوسيطة مثل العظام والغضاريف والعضلات، والرباط، ووتر والدهنية، وقد تم عزل من تقريبا جميع الأنسجة في الجسم الكبار1 , 2-غير توفير التوازن الأنسجة بإنتاج خلايا المقيم في حالة التهاب مزمن أو إصابة، أنها تنتج السيتوكينات الحيوية وعوامل النمو تنسق الأوعية والجهاز المناعي وأنسجة يعيد البناء3. تفاعل MSCs مع أنسجة السرطان ليست مفهومة جيدا، ولكن الأدلة المتراكمة أن MSCs قد تشجع على بدء وتطور، وورم خبيث الورم4.
قدرة صاروخ موجه من MSCs إلى منطقة إصابة أو التهاب مزمن يجعل منها مرشح قيماً للعلاجات القائمة على الخلايا الجذعية. ومع ذلك، أنسجة السرطان، "ابدأ شفاء الجروح"، أيضا الإفراج عن السيتوكينات الالتهابية وجزيئات برو-الأوعية، وعوامل النمو الحيوي، الذي جذب MSCs إلى منطقة كانسيروجينوس5. بينما هناك قلة ذكرت التقارير التي تبين الآثار المثبطة ل MSCs على نمو السرطان6،7، تطور السرطان وورم خبيث تعزيز الآثار قد تم على نطاق واسع8. MSCs مباشرة أو غير مباشرة تؤثر التسرطن بطرق مختلفة بما في ذلك قمع الخلايا المناعية، إفراز عوامل النمو/السيتوكينات التي تدعم انتشار خلايا السرطان، والهجرة، وتعزيز نشاط الأوعية، وتنظم 9،الانتقالية الظهارية الوسيطة (EMT)10. ورم البيئة يتألف من عدة أنواع الخلايا المرتبطة بالسرطان الخلايا الليفية (اجواءه) و/أو ميوفيبروبلاستس وخلايا بطانية، adipocytes والخلايا المناعية11. من هؤلاء، هي اجواءه نوع الخلية الأكثر وفرة في مجال الأورام التي تفرز مختلف المستقطبات تعزيز النمو وورم خبيث سرطان8. فقد ثبت أن MSCs المشتقة من نخاع العظم يمكن أن تفرق في اجواءه في ستروما ورم12.
الخلايا الجذعية البالغة لب الأسنان (دبسكس)، تميزت ك MSCs المستمدة من أنسجة الأسنان الأولى جرونثوس et al. 13 في عام 2000 ثم على نطاق واسع التحقيق قبل الآخرين14،15، التعبير عن علامات بلوريبوتينسي مثل Oct4، Sox2، و نانج16 ويمكن التفريق في خلية مختلفة ليناجيس17. تحليل تعبير الجينات والبروتين أثبت أن دبسكس تنتج مستويات مماثلة من عوامل النمو/السيتوكينات مع MSCs الأخرى مثل عامل نمو الأوعية الدموية غشائي (VEGF)، أنجيوجينين، وعامل النمو تنتجها الخلايا الليفية 2 (FGF2)، 4-انترلوكين (إيل-4)، إيل-6، وايل-10، والخلايا الجذعية عامل (SCF)، فضلا عن fms مثل تيروزين كيناز-3 يجند (أنطوني-3 لتر) التي قد تعزز الأوعية وتعدل الخلايا المناعية، ودعم سرطان الخلية الانتشار والهجرة18،19،20 . في حين كانت تفاعلات MSCs مع البيئة سرطان موثقة توثيقاً جيدا في الأدب، لم يجر تقييم العلاقة بين دبسكس والخلايا السرطانية بعد. في هذه الدراسة، قمنا بإنشاء استراتيجيات علاجية متوسطة الثقافة المشتركة وشرط لخط خلية سرطان البروستاتا المنتشر جداً والكمبيوتر-3 دبسكس أن يقترح الإجراء المحتمل لآلية MSCs طب الأسنان في تطور السرطان وورم خبيث.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11885084</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16000044</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSA</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-745E</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25200056</td>
			<td>For cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10010023</td>
			<td>For washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td>Component of differentiation media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9422</td>
			<td>Component of osteogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4544</td>
			<td>Component of osteo- and chondro-genic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Transferrin-Selenium (ITS &#8722;G)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>41400045</td>
			<td>Component of chondrogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGF-&#946;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SRP3171</td>
			<td>Component of chondrogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I6634</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I7018</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I7378</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G3582</td>
			<td>Cell viability analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TUNEL Assay</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>11684795910</td>
			<td>Apoptotic analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate inserts</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3396</td>
			<td>For trans-well migration assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKH67</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PKH67GL</td>
			<td>For co-culture cell staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKH26</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PKH26GL</td>
			<td>For co-culture cell staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td>For cell fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>von Kossa Kit</td>
			<td>BioOptica</td>
			<td>04-170801.A</td>
			<td>For cell staining (differentiation)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2899</td>
			<td>For cell staining (differentiation)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mesenchymal stem cell isolation from pulp tissue and co-culture with cancer cells to study their interactions

السرطان كعملية متعددة الخطوات ومرض معقد هو لا ينظم تكاثر الخلايا الفردية والنمو بل أيضا يسيطر عليها التفاعلات بين البيئة وخلية خلية الورم. قد يتيح التعرف على السرطان والتفاعلات بين الخلايا الجذعية، بما في ذلك التغيرات في البيئة خارج الخلية والتفاعلات المادية، والعوامل يفرزها، اكتشاف خيارات العلاج الجديدة. ونحن الجمع بين تقنيات الثقافة المشتركة المعروفة لإنشاء نظام نموذجي للخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) وسرطان الخلية التفاعلات. في الدراسة الحالية، وتم فحص الخلايا الجذعية لب الأسنان (دبسكس) والتفاعلات خلية سرطان البروستاتا PC-3 بتقنيات ثقافة المشاركة المباشرة وغير المباشرة. حالة متوسطة (سم) التي تم الحصول عليها من دبسكس واستخدمت 0.4 ميكرومتر المسامية الحجم جيدا عبر الأغشية لدراسة النشاط باراكريني. وأجرى ثقافة المشارك من أنواع مختلفة من الخلايا معا لدراسة التفاعل المباشر خلية خلية. كشفت النتائج أن سم زاد انتشار الخلايا والمبرمج في الثقافات خلايا سرطان البروستاتا. سم وكذلك عبر نظام زيادة قدرة الهجرة خلية من خلايا PC-3. كانت تبذر ملطخة بالأصباغ المختلفة غشاء الخلايا في الأوعية الثقافة نفسها، وشارك دبسكس في هيكل منظمة ذاتيا مع خلايا PC-3 تحت هذا الشرط ثقافة المشاركة المباشرة. وعموما، أشارت النتائج إلى أن تقنيات الثقافة المشتركة يمكن أن تفيد للسرطان والتفاعلات ماجستير كنظام نموذجي.

ويصور الشكل 1 ماجستير الخصائص العامة دبسكس تحت ظروف الثقافة. دبسكس بذل مورفولوجيا تنتجها الخلايا الليفية مثل الخلية بعد الطلاء (الشكل 1B). ماجستير المستضدات السطحية (CD29، CD73، CD90، CD105، و CD166) شديدة يعبر عنها بينما علامات المكونة للدم (CD34 و CD45 و C...

Watch this Scientific Journal Video about Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions at JoVE.com

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

نحن توفير بروتوكولات لتقييم الخلايا الجذعية الوسيطة المعزولة من لب الأسنان وتفاعلات خلايا سرطان البروستاتا استناداً إلى أساليب ثقافة المشاركة المباشرة وغير المباشرة. المتوسطة شرط وكذلك عبر الأغشية مناسبة لتحليل النشاط paracrine غير المباشرة. بذر الأثران الملون الخلايا معا نموذج مناسب للتفاعل المباشر خلية خلية.

عزل الخلايا الجذعية الوسيطة من أنسجة اللب والثقافة المشتركة مع الخلايا السرطانية لدراسة التفاعلات الخاصة بها

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الخلايا الجذعية حول دور الخلايا الجذعية البالغة في تنظيم سلوك الخلايا السرطانية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بتقييم الخلايا السرطانية وتفاعلات الخلايا الجذعية في المختبر دون استخدام الكائنات الحية. هذه التقنية لديها إمكانية الانبثاث السرطان لأنها نماذج دور تعزيز الخلايا الجذعية البالغة في الانبثاث السرطانية إلى الأنسجة الصلبة مثل العظام.سيتم إجراء عرض العملية من قبل حسين أبديك، وهو طبيب ما بعد الدكتوراه في مختبري. ابدأ باستخدام ملقط استخراج معقمة لإزالة أنسجة اللب من مركز أسنان العقل التي تم الحصول عليها من الشباب الذين تتراوح أعمارهم بين 17 إلى 20 سنة. ضع الأنسجة في DMEM كاملة باردة في أطباق زراعة الأنسجة 10 سنتيمترات واستخدام مشرط لتم mince العينات إلى شظايا 2-3 ملليمتر.نقل القطع من كل طبق في آبار فردية من ثقافة الأنسجة تعامل ستة بئر لوحة وتغطية الأنسجة في كل بئر مع 200 ميكرولترات من DMEM كاملة. السماح للأنسجة إلى إرفاق قيعان البئر مع حضانة ما لا يقل عن ساعتين في مرطب، 37 درجة مئوية و5٪ ثاني أكسيد الكربون حاضنة ثقافة الخلية. في نهاية الحضانة، تغذية الأنسجة مع 2-2.5 ملليلتر من المتوسطة الكاملة الطازجة والثقافة الخلايا لمدة ثمانية إلى تسعة أيام إضافية.عندما وصلت الثقافة إلى 80٪ التقاء، وغسل كل جيدا مع مليلترين من برنامج تلفزيوني تليها مفرزة من الخلايا مع مليلترين من التربسين في 37 درجة مئوية. بعد دقيقتين، وقف التفاعل مع مليلتر اثنين من DMEM كاملة في بئر وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي. ثم، إعادة تعليق الكريات في 15 ملليلتر من المتوسط الكامل الطازج لكل بئرين من الخلايا ومرور الخلايا في قوارير T75 لزراعتها اللاحقة.بعد ما لا يقل عن ثمانية ممرات، تصور الخلايا عن طريق المجهر الخفيفة. الخلايا الجذعية لب الأسنان ينبغي أن تعلق على أطباق الثقافة وينبغي أن عرض مورفولوجيا الخلية مثل المغزل. لتحليل علامة السطح، بعد أن يتم إثبات التربسيني، إصلاح الخلايا مع 4٪ شبهformaldehyde لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في أنابيب 1.5 ملليلتر تليها ثلاثة يغسل في 500 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني لكل غسل.بعد الغسيل الأخير، تسمية الخلايا مع الأجسام المضادة المناسبة من الفائدة في 100 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني لكل أنبوب لمدة ساعة واحدة في أربع درجات مئوية. في نهاية الحضانة، وغسل الخلايا ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني كما هو موضح وتسمية الخلايا مع الأجسام المضادة الثانوية المناسبة في 100 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني لكل أنبوب لمدة 30 دقيقة في أربع درجات مئوية. ثم غسل العينات ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني وتحليل الخلايا عن طريق تدفق الخلايا وفقا للبروتوكولات القياسية.للتمايز من الخلايا الجذعية لب الأسنان، بذور مرة واحدة 10 إلى الخلايا الأربع في آبار فردية من 24-آبار في 500 ميكرولترات من DMEM كاملة لاحتضان 24 ساعة في حاضنة ثقافة الخلية. في اليوم التالي، استبدل الوسط في كل بئر بوسيلة التمايز المناسبة وإعادة الخلايا إلى الحاضنة، منعشة الوسط مرتين في الأسبوع لمدة أسبوعين. ويمكن تأكيد التمايز من قبل فون كوسا والأزرق Alcian تلطيخ وفقا للبروتوكولات القياسية.بعد اثنين إلى أربعة مقاطع، وجمع عظمى المتوسطة مكيفة من الخلايا الجذعية لب الأسنان المستزرعة عندما تصل الثقافات 80٪ التقاء. ثم، الطرد المركزي وسيطة التي تم جمعها لإزالة أي مواد الأنسجة النفايات وحطام الخلية وتخزين المتوسطة في درجة مئوية سلبية 20 حتى الاستخدام. لعلاج الخلايا السرطانية، بذور مرة واحدة 10 إلى الخلايا السرطانية الخمسة في آبار فردية من لوحة 12-جيدا للاحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية و 5٪ CO2.في صباح اليوم التالي، استخدمي طرفًا معمّمًا بـ 200 ميكرولتر لصنع إصابة خدش في كل بئر واستبدال المابير في كل بئر بوسط جديد يحتوي على تركيزات مختلفة من الوسط المُشروط. ثم، مراقبة الخدوش فورا تحت مجهر مقلوب والحصول على صور من الثقافات المصابة في فترات زمنية منتظمة. في نهاية التحليل، قم بقياس إغلاق الخدش بمرور الوقت في ImageJ.لتقييم هجرة الخلايا الجذعية لب الأسنان، البذور الأولى ثلاث مرات 10 إلى الخلايا الجذعية لب الأسنان الأربعة على إدراج لوحة فردية 24 جيدا مع 0.4 ميكرون المسام في 250 ميكرولترات من DMEM واحتضان إدراج بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، بذور خمس مرات 10 الخلايا السرطانية الأربعة في آبار فردية من لوحة 24-well في 500 ميكرولترات من DMEM للاحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. في صباح اليوم التالي، خدش الخلايا السرطانية كما هو موضح.استبدال supernatants مع 500 ميكرولترات من DMEM الطازجة ووضع واحد بذر الخلايا الجذعية لب الأسنان إدراج في كل بئر تغذيها المتوسطة الطازجة. ثم مراقبة الخلايا على الفور على المجهر المقلوب وصورة الخلايا على فترات منتظمة لتقييم هجرة الخلايا الجذعية لب الأسنان. لتقييم التفاعلات المباشرة للخلايا الجذعية لب الأسنان مع الخلايا السرطانية، تبسينز كل ثقافة المسمى للحصول على تعليق خلية واحدة وجمع الخلايا المنفصلة عن طريق الطرد المركزي.Resuspend الكريات في حلول صبغة الرابط الخلية متميزة أعدت في العازلة C diluent، الموردة وفقا لتعليمات الشركة المصنعة، واحتضان الخلايا هي درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة. إنهاء رد فعل تلطيخ مع 100 ميكرولترات من مصل الأبقار الجنين وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي. ثم الطرد المركزي الخلايا مع متوسط النمو الكامل قبل الطلاء خمس مرات 10 إلى الخلايا الجذعية اللب الأسنان الأربعة والخلايا السرطانية في بئر في لوحة ستة جيدا في نسبة واحد إلى واحد في مليلترين من المتوسط الكامل.جمع الخلايا بعد 24 أو 48 ساعة من الحضانة عن طريق الطرد المركزي تليها غسل في برنامج تلفزيوني. ثم، resuspend الخلايا في 300 ميكرولترات من الخلايا المنشطة الفلوريسين تخزين مؤقت في خمسة ملليلتر تدفق أنابيب تدفق دائري القاع ودوامة لتفريق أي مجاميع الخلايا قبل تحليل الخلايا وفقا لبروتوكولات التحليل الخلوي تدفق القياسية. تظهر الخلايا الجذعية لب الأسنان مورفولوجيا الخلايا الشبيهة بالروبرة الليفية بعد الطلاء والتعبير عن مستضدات سطح الخلايا الجذعية ال ميسنشيمال ولكن ليس علامات الخلايا الدموية.كما لوحظت التغيرات على المستوى المورفولوجي والجزيئي المتعلقة بـ osteo وchondro والتمايز الاديبويني في ثقافات الخلايا الجذعية لب الأسنان بعد تطبيق الكوكتيل المتمايز المناسب. علاج الخدوش المصابة الثقافات الخلايا السرطانية مع تركيزات 10 و 20٪ من المتوسط مشروطة يزيد من إغلاق الخدش بشكل كبير مقارنة بزرع الخلايا السرطانية المعالجة المتوسطة التحكم. الجزيئات المفرزة من الخلايا الجذعية لب الأسنان إدراج الثقافات المشتركة أيضا زيادة إغلاق الخدش في الخلايا السرطانية المصابة مقارنة مع السيطرة على الخلايا المشتركة الثقافات.تحليل المجهر Fluorescence تفاعلات الجذعية والخلايا الورمية لب الأسنان داخل خلية في المختبر تكشف عن إنشاء هيكل منظم تنظيما جيدا في داخل الخلايا السرطانية التي تتكاثر بسرعة بعد 48 ساعة. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر الاحتفاظ بعينتين من الأنسجة في الوسط البارد ونقل عينات على الفور إلى المختبر لتقليل موت الخلايا. بعد تطورها، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجالات الخلايا الجذعية في استكشاف تفاعلات سرطان الخلايا الجذعية للبالغين في البشر.بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل تتبع الخلايا المناعية للخلايا ذات العلامات التفاضلية من مختلف أنواع الخلايا الجذعية والسرطان للإجابة على سؤال إضافي حول كيفية تفاعل الخلايا الجذعية البالغة مع الخلايا السرطانية والتحكم في الانبثاث السرطاني. لا تنس أن العمل مع العينات البشرية يمكن أن يكون خطيراً وأن الاحتياطات مثل تحليل عينات المرضى للأمراض المعدية والحصول على موافقة المريض المكتوبة يجب أن تنفذ دائماً عند إجراء هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

بروتوكول عزل الخلايا الجذعية المشتقة من الوحيدات الماوس ومن تفعيل اللاحقة في المختبر مع مجمعات محصنة ضد الورم

Dendritic cells (DC) are heterogeneous cell populations that differ in their cell membrane markers, migration patterns and distribution, and in their ...

Generation and Isolation of Cell Cycle-arrested Cells with Complex Karyotypes

جيل وعزل الخلايا القبض على دورة الخلية مع كاريوتيبيس المعقدة

Chromosome mis-segregation leads to aneuploidy, a condition in which cells harbor an imbalanced chromosome number. Several lines of evidence strongly ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

فحوصات التصوير خلية يعيش بدراسة الدماغ جليوبلاستوما ورم الخلايا الجذعية الهجرة والغزو

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

الحصول على خلايا السرطان الجذعية من أورام أمراض النساء وسرطان الثدي

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

عزل خلايا شبيهه بالجذعية من ثقافات كروي ثلاثية الابعاد

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

A Biomimetic Model for Liver Cancer to Study Tumor-Stroma Interactions in a 3D Environment with Tunable Bio-Physical Properties

نموذج حيوي لسرطان الكبد لدراسة التفاعلات الورم ستروما في بيئة 3D مع خصائص بيو فيزيائية قابلة للتوابل

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a primary liver tumor developing in the wake of chronic liver disease. Chronic liver disease and inflammation leads to a ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

العزل والتقييم الوظيفي للخلايا الجذعية لسرطان الثدي البشري من عينات الخلايا والأنسجة

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

Studying TGF-&#946; Signaling and TGF-&#946;-induced Epithelial-to-mesenchymal Transition in Breast Cancer and Normal Cells

Studying TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â² Signaling and TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-induced Epithelial-to-mesenchymal Transition in Breast Cancer and Normal Cells

دراسة TGF-β الإشارة و TGF-β الناجمة عن الظهارية إلى mesenchymal التحول في سرطان الثدي والخلايا الطبيعية

Transforming growth factor-&#946; (TGF-&#946;) is a secreted multifunctional factor that plays a key role in intercellular communication. Perturbations of ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

الثقافة المشتركة للخلايا الشبيهة بالورم الأرومي الدبقي على الخلايا العصبية المنقوشة لدراسة الهجرة والتفاعلات الخلوية

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...