Name: mesenchymal stem cell isolation from pulp tissue and co-culture with cancer cells to study their interactions
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
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이 연구는 Yeditepe 대학에 의해 지원 되었다. 모든 데이터 및이 문서에서 사용 되는 그림34이전에 게시 했다.

환자 서 면된 동의 기관 윤리 위원회에서 승인 후 얻은 것입니다.
1. DPSC 격리와 문화
<ol><li>17 ~ 20 15 mL 튜브 포함 하는 완전 한 Dulbecco의 수정이 글 중간 (DMEM) 세 젊은 성인에서 얻은 사랑니 전송 [낮은 포도 당 DMEM 미디어, 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 1% 페니실린/스 보충 / 암포 (PSA) 솔루션], 절제 후 8 시간 이내. 잠재적인 세포 죽음을 방지 하는 전송 하는 동안 조직 자료 감기 ...

<ol>
	<li>Camberlain, G., Fox, J., Ashton, B., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells:+their+phenotype,+differentiation+capacity,+immunological+features,+and+potential+for+homing.">Mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing.</a> Stem Cells. 25 (11), 2739-2749 (2007).</li><li>Demirci, S., Do&#287;an, A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Dental Stem Cells. , 109-124 (2016).</li><li>Fox, J. M., Chamberlain, G., Ashton, B. A., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+into+the+understanding+of+mesenchymal+stem+cell+trafficking.">Recent advances into the understanding of mesenchymal stem cell trafficking.</a> British journal of haematology. 137 (6), 491-502 (2007).</li><li>Chang, A. I., Schwertschkow, A. H., Nolta, J. A., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+mesenchymal+stem+cells+in+cancer+progression+and+metastases.">Involvement of mesenchymal stem cells in cancer progression and metastases.</a> Current cancer drug targets. 15 (2), 88-98 (2015).</li><li>Dvorak, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumors:+wounds+that+do+not+heal.">Tumors: wounds that do not heal.</a> New England Journal of Medicine. 315 (26), 1650-1659 (1986).</li><li>Lu, Y. -. r., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+growth+inhibitory+effect+of+mesenchymal+stem+cells+on+tumor+cells+in+vitro+and+in+vivo.">The growth inhibitory effect of mesenchymal stem cells on tumor cells in vitro and in vivo.</a> Cancer biology &amp; therapy. 7 (2), 245-251 (2008).</li><li>Secchiero, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+display+anti-cancer+activity+in+SCID+mice+bearing+disseminated+non-Hodgkin's+lymphoma+xenografts.">Human bone marrow mesenchymal stem cells display anti-cancer activity in SCID mice bearing disseminated non-Hodgkin's lymphoma xenografts.</a> PloS one. 5 (6), e11140 (2010).</li><li>Hong, I. -. 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H., Gupta, A., Spaeth, E., Andreeff, M., Marini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+dissecting+a+discrepancy+in+the+literature:+do+mesenchymal+stem+cells+support+or+suppress+tumor+growth.">Concise review: dissecting a discrepancy in the literature: do mesenchymal stem cells support or suppress tumor growth.</a> Stem cells. 29 (1), 11-19 (2011).</li><li>Albini, A., Sporn, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tumour+microenvironment+as+a+target+for+chemoprevention.">The tumour microenvironment as a target for chemoprevention.</a> Nature Reviews Cancer. 7 (2), 139 (2007).</li><li>Quante, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+myofibroblasts+contribute+to+the+mesenchymal+stem+cell+niche+and+promote+tumor+growth.">Bone marrow-derived myofibroblasts contribute to the mesenchymal stem cell niche and promote tumor growth.</a> Cancer cell. 19 (2), 257-272 (2011).</li><li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+in+vitro+and+in+vivo.">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li><li>Mori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells:+osteogenic+differentiation+and+gene+expression.">Dental pulp stem cells: osteogenic differentiation and gene expression.</a> Annals of the new York Academy of Sciences. 1237 (1), 47-52 (2011).</li><li>Mori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+properties+of+human+dental+pulp+stem+cells.">Osteogenic properties of human dental pulp stem cells.</a> Journal of biological regulators and homeostatic agents. 24 (2), 167-175 (2010).</li><li>Kerkis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+population+of+immature+dental+pulp+stem+cells+expressing+OCT-4+and+other+embryonic+stem+cell+markers.">Isolation and characterization of a population of immature dental pulp stem cells expressing OCT-4 and other embryonic stem cell markers.</a> Cells Tissues Organs. 184 (3-4), 105-116 (2006).</li><li>Potdar, P. D., Jethmalani, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dental+pulp+stem+cells:+applications+in+future+regenerative+medicine.">Human dental pulp stem cells: applications in future regenerative medicine.</a> World journal of stem cells. 7 (5), 839 (2015).</li><li>Ahmed, N. E. -. M. B., Murakami, M., Hirose, Y., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+dental+pulp+stem+cell+secretome+for+Alzheimer's+disease+treatment:+an+in+vitro+study.">Therapeutic potential of dental pulp stem cell secretome for Alzheimer's disease treatment: an in vitro study.</a> Stem cells international. 2016, (2016).</li><li>Gorin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Priming+dental+pulp+stem+cells+with+fibroblast+growth+factor-2+increases+angiogenesis+of+implanted+tissue-engineered+constructs+through+hepatocyte+growth+factor+and+vascular+endothelial+growth+factor+secretion.">Priming dental pulp stem cells with fibroblast growth factor-2 increases angiogenesis of implanted tissue-engineered constructs through hepatocyte growth factor and vascular endothelial growth factor secretion.</a> Stem cells translational medicine. 5 (3), 392-404 (2016).</li><li>Wakayama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+secreted+from+dental+pulp+stem+cells+show+multifaceted+benefits+for+treating+acute+lung+injury+in+mice.">Factors secreted from dental pulp stem cells show multifaceted benefits for treating acute lung injury in mice.</a> Cytotherapy. 17 (8), 1119-1129 (2015).</li><li>Do&#287;an, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+stem+cells+is+promoted+by+amphiphilic+pluronic+block+copolymers.">Differentiation of human stem cells is promoted by amphiphilic pluronic block copolymers.</a> International Journal of Nanomedicine. 7, 4849 (2012).</li><li>Ta&#351;l&#305;, P. N., Do&#287;an, A., Demirci, S., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boron+enhances+odontogenic+and+osteogenic+differentiation+of+human+tooth+germ+stem+cells+(hTGSCs)+in+vitro.">Boron enhances odontogenic and osteogenic differentiation of human tooth germ stem cells (hTGSCs) in vitro.</a> Biological trace element research. 153 (1-3), 419-427 (2013).</li><li>Yalvac, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+stem+cells+derived+from+human+third+molar+tooth+germs+of+young+adults:+implications+in+neo-vascularization,+osteo-,+adipo-and+neurogenesis.">Isolation and characterization of stem cells derived from human third molar tooth germs of young adults: implications in neo-vascularization, osteo-, adipo-and neurogenesis.</a> The pharmacogenomics journal. 10 (2), 105 (2010).</li><li>Do&#287;an, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+pentaborate+pentahydrate+and+pluronic+containing+hydrogel+increases+cutaneous+wound+healing+in+vitro+and+in+vivo.">Sodium pentaborate pentahydrate and pluronic containing hydrogel increases cutaneous wound healing in vitro and in vivo.</a> Biological trace element research. 162 (1-3), 72-79 (2014).</li><li>Do&#287;an, A., Yalva&#231;, M. E., Y&#305;lmaz, A., Rizvanov, A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+F68+on+cryopreservation+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+human+tooth+germ.">Effect of F68 on cryopreservation of mesenchymal stem cells derived from human tooth germ.</a> Applied biochemistry and biotechnology. 171 (7), 1819-1831 (2013).</li><li>Rizvanov, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+and+self-organization+of+human+mesenchymal+stem+cells+and+neuro-blastoma+SH-SY5Y+cells+under+co-culture+conditions:+A+novel+system+for+modeling+cancer+cell+micro-environment.">Interaction and self-organization of human mesenchymal stem cells and neuro-blastoma SH-SY5Y cells under co-culture conditions: A novel system for modeling cancer cell micro-environment.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 76 (2), 253-259 (2010).</li><li>Troiano, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiparametric+analysis+of+cells+with+different+mitochondrial+membrane+potential+during+apoptosis+by+polychromatic+flow+cytometry.">Multiparametric analysis of cells with different mitochondrial membrane potential during apoptosis by polychromatic flow cytometry.</a> Nature protocols. 2 (11), 2719 (2007).</li><li>Melzer, C., von der Ohe, J., Lehnert, H., Ungefroren, H., Hass, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cell+niche+models+and+contribution+by+mesenchymal+stroma/stem+cells.">Cancer stem cell niche models and contribution by mesenchymal stroma/stem cells.</a> Molecular cancer. 16 (1), 28 (2017).</li><li>Aguirre, A., Planell, J., Engel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cell/mesenchymal+stem+cell+interaction+in+co-culture+and+its+implications+in+angiogenesis.">Dynamics of bone marrow-derived endothelial progenitor cell/mesenchymal stem cell interaction in co-culture and its implications in angiogenesis.</a> Biochemical and biophysical research communications. 400 (2), 284-291 (2010).</li><li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biomimetics and Stem Cells. , 29-36 (2013).</li><li>Plotnikov, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-to-cell+cross-talk+between+mesenchymal+stem+cells+and+cardiomyocytes+in+co-culture.">Cell-to-cell cross-talk between mesenchymal stem cells and cardiomyocytes in co-culture.</a> Journal of cellular and molecular. 12 (5a), 1622-1631 (2008).</li><li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+cell-cell+communication+in+co-culture.">Studying cell-cell communication in co-culture.</a> Biotechnology journal. 8 (4), 395-396 (2013).</li><li>Brunetti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+expression+of+TRAIL+by+osteoblastic+differentiated+dental+pulp+stem+cells+affects+myeloma+cell+viability.">High expression of TRAIL by osteoblastic differentiated dental pulp stem cells affects myeloma cell viability.</a> Oncology reports. 39 (4), 2031-2039 (2018).</li><li>Do&#287;an, A., Demirci, S., Apdik, H., Apdik, E. A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+increase+prostate+cancer+cell+proliferation+and+migration+under+in+vitro+conditions.">Dental pulp stem cells (DPSCs) increase prostate cancer cell proliferation and migration under in vitro conditions.</a> Tissue and Cell. 49 (6), 711-718 (2017).</li></ol>

종양 환경 MSCs의 기여는 하이브리드 세포 생성을 통해 세포 융해, 줄기 세포와 암 세포28사이 entosis 또는 cytokine 및 chemokine 활동을 포함 한 여러 가지 상호 작용에 의해 통제 된다. 구조 조직, 세포 세포 상호 작용 및 분 비 종양 승진, 진행, 및 주위 조직 전이 암 셀 동작을 결정 합니다. 적절 한 비보 전 모델 시스템 상주 세포 인구의 상호 작용의 뒤에 기계 장치를 조사...

차별화와 같은 뼈, 연골, 근육, 인 대, 힘 줄, 그리고 지방, 간 엽 조직의 재생에 기여의 능력을 가진 중간 엽 줄기 세포 (MSCs),1 성인 신체에서 거의 모든 조직에서 분리 되어 , 2. 조직의 항상성 만성 염증 또는 상해 거주 셀을 생산 하 여 제공 하는, 다른 그들은 중요 한 cytokines 및 통합 하는 신생, 면역 체계, 그리고 조직3개장을 성장 요인 생산. 암 조직으로 MSCs의 상호 작용은 잘 이해 하지만 축적 증거 나왔다 MSCs가 종양 개시, 진행, 전이4를 홍보 수 있습니다.
부상 또는 만성 염증이 지역 MSCs의 귀환 능력은 그들이 줄기 세포 기반 요법에 대 한 귀중 한 후보. 그러나, 암 조직, "상처를 치유 하지", 또한 염증 성 cytokines, 프로-신생 분자, 그리고 cancerogenous 지역5MSCs를 유치 하는 중요 한 성장 요인 풀어. 그러나 거기에 제한7, 그들의 암 진행과 전이 홍보 효과 광범위 하 게 되어 암 성장6,에 MSCs의 억제 효과 보여주는 보고서 보고8. MSCs 직접 또는 간접적으로 영향을 미칠 발암 억제 면역 세포, 암 세포 증식 및 마이그레이션, 신생 활동을 강화 하 고 규제를 지 원하는 성장 인자/cytokines를 은닉 하는 등 다른 방법으로 상피 엽 전환 (응급)9,10. 암 관련 된 섬유 아 세포 (CAFs) 또는 myofibroblasts, 내 피 세포, adipocytes, 그리고 면역 세포11을 포함 한 여러 세포 유형 종양 환경에 의하여 이루어져 있다. 그 중, CAFs는 암 성장과 전이8을 홍보 하는 다양 한 발산을 분 비 하는 종양 영역에서 가장 풍부한 셀 유형입니다. 그것은 종양 기질12골 파생 MSCs CAFs로 분화 할 수 표시 되었습니다.
치과 펄프의 줄기 세포는 (DPSCs), Gronthos 그 외 여러분 에 의해 첫 번째 치과 조직 파생 MSCs로 특징 2000 년에 13 널리14,15다른 사람에 의해 조사, Oct4, Sox2및 Nanog16 등 pluripotency 마커를 표현 하 고 다양 한 셀 linages17으로 분화 할 수 있다. 유전자와 단백질 표정 분석 입증 DPSCs 성장 인자/cytokines 혈관 내 피 성장 인자 (VEGF), angiogenin, 섬유 아 세포 성장 인자 2 (FGF2), 인터 루 킨-4 (IL-4), 다른 MSCs와 대 등 한 수준의 생산 일리노이-6, 일리노이-10, 그리고 줄기 세포 요소 (SCF), 뿐만 아니라 신생을 촉진, 면역 세포를 조절 하 고 암 세포 확산 및 마이그레이션18,19,20 지원 수 fms 같은 티로신 키 니 아 제 3 ligand (Flt-3 L) . 동안 암 환경 상호작용 MSCs의 문학에서 문서화, DPSCs와 암 세포 사이 관계 아직 평가 하지는. 현재 연구에서 우리는 높은 전이성 전립선 암 세포 선, PC-3, 및 암 진행과 전이에 치과 MSCs의 메커니즘의 잠재적인 행동을 제안 하는 DPSCs에 대 한 공동 문화 및 상태 중간 치료 전략을 설립.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11885084</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16000044</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSA</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-745E</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25200056</td>
			<td>For cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10010023</td>
			<td>For washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td>Component of differentiation media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9422</td>
			<td>Component of osteogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4544</td>
			<td>Component of osteo- and chondro-genic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Transferrin-Selenium (ITS &#8722;G)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>41400045</td>
			<td>Component of chondrogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGF-&#946;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SRP3171</td>
			<td>Component of chondrogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I6634</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I7018</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I7378</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G3582</td>
			<td>Cell viability analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TUNEL Assay</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>11684795910</td>
			<td>Apoptotic analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate inserts</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3396</td>
			<td>For trans-well migration assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKH67</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PKH67GL</td>
			<td>For co-culture cell staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKH26</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PKH26GL</td>
			<td>For co-culture cell staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td>For cell fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>von Kossa Kit</td>
			<td>BioOptica</td>
			<td>04-170801.A</td>
			<td>For cell staining (differentiation)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2899</td>
			<td>For cell staining (differentiation)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mesenchymal stem cell isolation from pulp tissue and co-culture with cancer cells to study their interactions

다단계 프로세스와 복잡 한 질병으로 암은 개별 세포 증식 및 성장 뿐만 아니라 또한 종양 환경과 세포 세포 상호 작용에 의해 제어. 암 및 줄기 세포 상호 작용, 세포 외 환경, 물리적 상호 작용 및 분 비 요소에 변화를 포함 하 여 새로운 치료 옵션의 발견을 사용 수 있습니다. 우리는 시스템을 만들 모델 중간 엽 줄기 세포 (MSCs)와 암 세포 상호 작용 알려진된 공동 문화 기술을 결합 한다. 현재 연구에서 치과 펄프의 줄기 세포 (DPSCs) 및 PC 3 전립선 암 세포 상호 작용은 직접 및 간접 공동 문화 기술에 의해 시험 되었다. 조건 매체 (CM) DPSCs에서 얻은 고 0.4 µ m 기 공 크기의 트랜스-잘 막 paracrine 활동을 연구 하는 데 사용 했다. 다른 세포 유형의 공동 문화 함께 직접 셀 상호 작용을 연구 수행 되었다. 결과 공개 CM 세포 증식을 증가 하 고 전립선 암 세포 배양에 있는 apoptosis를 감소. CM 및 트랜스-잘 시스템 PC-3 셀의 셀 마이그레이션 용량을 증가 했다. 다른 막 염료와 스테인드 셀 같은 문화 혈관으로 시드 했다 고 DPSCs PC-3 셀이 직접 공동 문화 조건 자체 조직된 구조에 참가 했다. 전반적으로, 결과 표시 공동 문화 기술 모델 시스템으로 암 및 MSC 상호 작용에 대 한 도움이 될 수 있습니다.

그림 1 문화 조건 하에서 DPSCs의 일반적인 MSC 특성 묘사. DPSCs (그림 1B) 도금 후 구와 같은 세포 형태학을 발휘 한다. MSC 표면 항 원 (CD29, CD73, CD90, CD105, 및 CD166)은 매우 조 혈 마커 (CD34, CD45, 및 CD14) 동안 표시는 부정적인 (그림 1C). 형태학 및 분자 수준에서 변경 내용을 관련 osteo-chondro-, 그리고 adipo genic 차별?...

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Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

우리 치과 펄프에서 격리 된 중간 엽 줄기 세포와 공동 문화를 직접 및 간접 방법에 따라 전립선 암 세포 상호 작용의 평가 대 한 프로토콜을 제공 합니다. 조건 매체 및 트랜스-잘 막 간접 paracrine 활동 분석에 적당 하다. 차동 시드 직접 셀 상호 작용에 대 한 적절 한 모델입니다 함께 셀 스테인드.

펄프 조직 문화와 공동 암 세포와 그들의 상호 작용을 공부 하에서 중간 엽 줄기 세포 분리

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

이 방법은 암세포 행동의 조절에 있는 성인 줄기 세포의 역할에 관하여 줄기 세포 필드에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 살아있는 유기체를 사용하지 않고 체외에서 암세포 및 줄기 세포 상호 작용의 평가를 허용한다는 것입니다. 이 기술은 뼈와 같은 단단한 조직에 암 전이에 있는 성인 줄기 세포의 승진 역할을 모델로 암 전이에 대한 잠재력을 가지고 있습니다.절차의 데모는 Huseyin Apdik에 의해 수행될 것입니다, 내 실험실에서 박사 후. 멸균 추출 포셉을 사용하여 17세에서 20세 사이의 젊은 성인에게서 얻은 사랑니의 중심에서 펄프 조직을 제거합니다. 10센티미터 조직 배양 접시에 차가운 완전 DMEM에 조직을 놓고 메스를 사용하여 샘플을 2~3mm 조각으로 다진다.각 접시의 조각을 6웰 플레이트를 치료한 조직 배양의 개별 우물로 옮기고 200마이크로리터의 완전한 DMEM을 통해 각 우물의 조직을 덮습니다. 조직이 가습, 섭씨 37도 및 5% CO2 세포 배양 배양기에서 적어도 2 시간 배양으로 우물 바닥에 부착할 수 있도록 합니다. 인큐베이션의 끝에서, 2 -2.5 밀리리터의 신선한 완전한 배지와 추가 8 ~ 9 일 동안 세포를 배양하는 조직을 공급한다.문화가 80 %의 합류에 도달하면 PBS의 2 밀리리터로 각각 잘 씻고 섭씨 37도에서 트립신 2 밀리리터로 세포를 분리하십시오. 2 분 후, 잘 당 완전한 DMEM의 두 밀리리터와 반응을 중지하고 원심 분리에 의해 세포를 수집합니다. 그런 다음, 세포의 두 우물 당 신선한 완전한 매체의 15 밀리리터에서 펠릿을 다시 중단하고 그들의 후속 배양을 위해 T75 플라스크로 세포를 통과.적어도 8개의 구절 후에, 가벼운 현미경 검사법에 의해 세포를 시각화합니다. 치과 펄프 줄기 세포는 배양 접시에 부착해야하며 스핀들 같은 세포 형태를 표시해야합니다. 표면 마커 분석을 위해 트립시니화가 입증된 후, 1.5밀리리터 튜브에서 실온에서 20분 동안 4%파라포름데히드로 세포를 수정한 다음 세척당 PBS 500 마이크로리터에서 3개의 세척을 한다.마지막 세척 후, 4섭씨에서 1시간 동안 튜브당 PBS의 100 마이크로리터에 적합한 항체로 세포를 라벨로 지정합니다. 인큐베이션의 끝에서, 입증된 바와 같이 PBS에서 세포를 세 번 세척하고 4°C에서 30분 동안 튜브당 PBS의 100 마이크로리터에서 적절한 이차 항체로 세포를 라벨로 부착한다. 그런 다음 PBS에서 샘플을 세 번 세척하고 표준 프로토콜에 따라 세포 측정을 유동하여 세포를 분석합니다.치과 펄프 줄기 세포의 분화를 위해, 세포 배양 인큐베이터에서 24시간 배양하기 위해 완전한 DMEM 500 마이크로리터에서 24웰 플레이트의 개별 우물로 10회 10회 종자. 다음 날, 각각의 배지를 적절한 분화 배지로 교체하고 세포를 인큐베이터로 돌려보내 2주 동안 일주일에 두 번 배지를 상쾌하게 한다. 표준 프로토콜에 따라 폰 코사 및 알시안 블루 염색에 의해 차별화를 확인할 수 있습니다.2~4개의 구절 후에, 배양된 치과 펄프 줄기 세포로부터 조건된 중형 초월제를 수집하면 배양이 80%에 도달하면. 이어서, 수집된 배지를 원심분리하여 폐기물 조직 물질및 세포 이물질을 제거하고 사용전까지 음수 20도에 배지를 저장한다. 암세포 치료를 위해, 5개의 종양 세포를 10번 종자 10번 으로 12웰 플레이트의 개별 우물로 12웰 플레이트의 개별 된 우물로 17섭씨 37도 및 5%CO2에서 배양한다.다음 날 아침, 멸균 200 마이크로리터 팁을 사용하여 각 우물에서 스크래치 부상을 입고 각 우물의 상체를 다양한 농도의 조건부 배지를 포함하는 신선한 배지로 즉시 교체합니다. 그런 다음, 즉시 반전 현미경의 밑에 상처를 관찰하고 정규 시간 간격으로 부상당한 배양의 심상을 얻습니다. 분석이 끝나면 ImageJ에서 시간이 지남에 따라 스크래치 닫기를 측정합니다.치과 펄프 줄기 세포 이동을 평가하기 위해, DMEM의 250 마이크로 리터에서 0.4 미칸 모공을 가진 개별 24 웰 플레이트 삽입에 4 개의 치과 펄프 줄기 세포에 첫 번째 종자 3 번 10 및 37 섭씨에서 하룻밤 삽입을 배양. 다음으로, 4개의 종양 세포를 37°C에서 하룻밤 동안 DMEM 500 마이크로리터에서 24웰 플레이트의 개별 우물로 5회 10번 시드한다. 다음날 아침, 입증된 대로 종양 세포를 긁습니다.수퍼나티를 500마이크로리터의 신선한 DMEM으로 대체하고 치과 펄프 줄기 세포 시드 인서트 1개를 신선한 배지로 공급합니다. 그런 다음 즉시 반전 된 현미경에 세포를 관찰하고 치과 펄프 줄기 세포 이동을 평가하기 위해 정기적으로 세포를 이미지. 치과 펄프 줄기 세포의 암세포와의 직접적인 상호 작용을 평가하기 위해, 각 표지된 배양물을 시험하여 단일 세포 현탁액을 얻고 원심분리에 의해 해리된 세포를 수집합니다.제조업체의 지시에 따라 공급되는 희석C 버퍼로 제조된 고유한 셀 링커 염료 솔루션에서 펠릿을 다시 중단하고 세포를 10분 동안 배양한다. 태아 소 혈청의 100 마이크로 리터로 염색 반응을 종료하고 원심 분리에 의해 세포를 수집합니다. 그런 다음 완전한 성장 배지를 가진 세포를 완전한 성장 배지로 원심분리한 다음, 완전한 배지의 2밀리리터에서 6웰 플레이트에서 잘 6웰 플레이트에 4개의 치과 펄프 줄기 세포 및 종양 세포를 5배 10회 도금하기 전에 세포를 원심분리한다.원심분리에 의해 24 또는 48 시간의 배양 후 세포를 수집하고 PBS에서 세척합니다. 이어서, 표준 유량 세포 분석 프로토콜에 따라 세포를 분석하기 전에 모든 세포 응집체를 분산시키기 위해 5밀리리터 라운드-바닥 유동 세포 측정 관 및 소용돌이에서 형광 활성화 세포 선별 완충제300 마이크로리터에서 세포를 재중단한다. 치과 펄프 줄기 세포는 도금 후 섬유 아세포와 같은 세포 형태를 나타내고 중간 엽 줄기 세포 표면 항원이지만 조혈 세포 마커는 발포성 세포 마커를 발현하지 않습니다.골, 콘드로 및 아디포겐성 분화와 관련된 형태학적 및 분자 수준에서의 변화는 또한 적절한 분화 칵테일 적용에 따라 치과 펄프 줄기 세포 배양에서 관찰된다. 10 및 20%의 조건부 배지 농도를 가진 스크래치-부상 종양 세포 배양의 치료는 대조군 중처리 종양 세포 배양에 비해 스크래치 폐쇄를 크게 증가시킨다. 치과 펄프 줄기 세포 삽입 공동 배양에서 분비 된 분자는 또한 대조 세포 공동 배양에 비해 부상당한 종양 세포에서 스크래치 폐쇄를 증가시켰다.체외 세포 배양 내의 치과 펄프 줄기 및 종양 세포의 상호 작용에 대한 형광 현미경 분석은 종양 세포가 48 시간 후에 급속하게 증식하는 잘 조직 된 구조의 생성을 밝혀냅니다. 이 절차를 시도하는 동안, 감기 매체에 있는 2개의 조직 견본을 유지하고 세포 죽음을 극소화하기 위하여 실험실로 즉시 전송하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 개발 후, 이 기술은 인간에 있는 성인 줄기 세포 암 상호 작용을 탐구에 있는 줄기 세포 필드에 있는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다.이 절차에 따라, 다양한 줄기 세포 및 암 유형의 차동 표지 된 세포에 대한 면역 세포 추적과 같은 다른 방법은 성인 줄기 세포가 암세포와 상호 작용하고 암 전이를 제어하는 방법에 대한 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수 있습니다. 인간 샘플로 작업하는 것은 위험할 수 있으며 전염병에 대한 환자 샘플을 분석하고 서면 환자 동의를 얻는 것과 같은 예방 조치는 이 절차를 수행 할 때 항상 구현되어야한다는 것을 잊지 마십시오.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

마우스 Monocyte 파생 된 모 수석 세포 및 종양 면역 단지와 활성화 후속 생체 외에서 그들의 격리 프로토콜

Dendritic cells (DC) are heterogeneous cell populations that differ in their cell membrane markers, migration patterns and distribution, and in their ...

연구

암 연구학

Generation and Isolation of Cell Cycle-arrested Cells with Complex Karyotypes

생성 및 복잡 한 Karyotypes 셀 세포 주기 검거의 절연

Chromosome mis-segregation leads to aneuploidy, a condition in which cells harbor an imbalanced chromosome number. Several lines of evidence strongly ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

라이브 셀 이미징 분석 실험 연구 세포종 뇌 종양 줄기 세포 이동과 내 습을

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

부인과 및 유방암 종양에서 암 줄기 세포 구체 획득

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

3차원 스페로이드 배양에서 줄기와 같은 세포의 분리

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

A Biomimetic Model for Liver Cancer to Study Tumor-Stroma Interactions in a 3D Environment with Tunable Bio-Physical Properties

튜닝 가능한 바이오 물속성과 3D 환경에서 종양-스트로마 상호 작용을 연구하는 간암을 위한 생체 모방 모형

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a primary liver tumor developing in the wake of chronic liver disease. Chronic liver disease and inflammation leads to a ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

세포 및 조직 샘플에서 인간 유방암 줄기 세포의 분리 및 기능 평가

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

Studying TGF-&#946; Signaling and TGF-&#946;-induced Epithelial-to-mesenchymal Transition in Breast Cancer and Normal Cells

Studying TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â² Signaling and TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-induced Epithelial-to-mesenchymal Transition in Breast Cancer and Normal Cells

유방암과 정상 세포에서 TGF β 신호 및 TGF β 유도 된 상피 - 중간 엽 전환 연구

Transforming growth factor-&#946; (TGF-&#946;) is a secreted multifunctional factor that plays a key role in intercellular communication. Perturbations of ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

이동 및 세포 상호 작용을 연구하기 위해 패턴 뉴런에 교모 세포 종 줄기 와 같은 세포의 공동 배양

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...