Name: mesenchymal stem cell isolation from pulp tissue and co-culture with cancer cells to study their interactions
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
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Este estudio fue apoyado por la Universidad de Yeditepe. Todos los datos y figuras utilizadas en este artículo fueron previamente publicados34.

Se obtuvo consentimiento informado de los pacientes después de la aprobación del Comité de ética institucional.
1. cultivo y aislamiento de CEDIP
<ol><li>Transferencia de dientes de la sabiduría de los adultos jóvenes de edades comprendidos entre 17 y 20 a 15 mL tubos que contengan completa de Dulbecco modificado Eagle Medium (DMEM) [bajo medios glucosa DMEM suplementados con 10% suero bovino fetal (FBS) y 1% de penicilina/estreptomicina / solución de anfotericina (PSA)], dentro de la...

<ol>
	<li>Camberlain, G., Fox, J., Ashton, B., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells:+their+phenotype,+differentiation+capacity,+immunological+features,+and+potential+for+homing.">Mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing.</a> Stem Cells. 25 (11), 2739-2749 (2007).</li><li>Demirci, S., Do&#287;an, A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Dental Stem Cells. , 109-124 (2016).</li><li>Fox, J. M., Chamberlain, G., Ashton, B. A., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+into+the+understanding+of+mesenchymal+stem+cell+trafficking.">Recent advances into the understanding of mesenchymal stem cell trafficking.</a> British journal of haematology. 137 (6), 491-502 (2007).</li><li>Chang, A. I., Schwertschkow, A. H., Nolta, J. A., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+mesenchymal+stem+cells+in+cancer+progression+and+metastases.">Involvement of mesenchymal stem cells in cancer progression and metastases.</a> Current cancer drug targets. 15 (2), 88-98 (2015).</li><li>Dvorak, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumors:+wounds+that+do+not+heal.">Tumors: wounds that do not heal.</a> New England Journal of Medicine. 315 (26), 1650-1659 (1986).</li><li>Lu, Y. -. r., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+growth+inhibitory+effect+of+mesenchymal+stem+cells+on+tumor+cells+in+vitro+and+in+vivo.">The growth inhibitory effect of mesenchymal stem cells on tumor cells in vitro and in vivo.</a> Cancer biology &amp; therapy. 7 (2), 245-251 (2008).</li><li>Secchiero, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+display+anti-cancer+activity+in+SCID+mice+bearing+disseminated+non-Hodgkin's+lymphoma+xenografts.">Human bone marrow mesenchymal stem cells display anti-cancer activity in SCID mice bearing disseminated non-Hodgkin's lymphoma xenografts.</a> PloS one. 5 (6), e11140 (2010).</li><li>Hong, I. -. S., Lee, H. -. Y., Kang, K. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+and+cancer:+friends+or+enemies?.">Mesenchymal stem cells and cancer: friends or enemies?.</a> Mutation Research/Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. 768, 98-106 (2014).</li><li>Brennen, W. N., Chen, S., Denmeade, S. R., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Mesenchymal+Stem+Cells+(MSCs)+at+sites+of+human+prostate+cancer.">Quantification of Mesenchymal Stem Cells (MSCs) at sites of human prostate cancer.</a> Oncotarget. 4 (1), 106 (2013).</li><li>Klopp, A. H., Gupta, A., Spaeth, E., Andreeff, M., Marini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+dissecting+a+discrepancy+in+the+literature:+do+mesenchymal+stem+cells+support+or+suppress+tumor+growth.">Concise review: dissecting a discrepancy in the literature: do mesenchymal stem cells support or suppress tumor growth.</a> Stem cells. 29 (1), 11-19 (2011).</li><li>Albini, A., Sporn, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tumour+microenvironment+as+a+target+for+chemoprevention.">The tumour microenvironment as a target for chemoprevention.</a> Nature Reviews Cancer. 7 (2), 139 (2007).</li><li>Quante, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+myofibroblasts+contribute+to+the+mesenchymal+stem+cell+niche+and+promote+tumor+growth.">Bone marrow-derived myofibroblasts contribute to the mesenchymal stem cell niche and promote tumor growth.</a> Cancer cell. 19 (2), 257-272 (2011).</li><li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+in+vitro+and+in+vivo.">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li><li>Mori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells:+osteogenic+differentiation+and+gene+expression.">Dental pulp stem cells: osteogenic differentiation and gene expression.</a> Annals of the new York Academy of Sciences. 1237 (1), 47-52 (2011).</li><li>Mori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+properties+of+human+dental+pulp+stem+cells.">Osteogenic properties of human dental pulp stem cells.</a> Journal of biological regulators and homeostatic agents. 24 (2), 167-175 (2010).</li><li>Kerkis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+population+of+immature+dental+pulp+stem+cells+expressing+OCT-4+and+other+embryonic+stem+cell+markers.">Isolation and characterization of a population of immature dental pulp stem cells expressing OCT-4 and other embryonic stem cell markers.</a> Cells Tissues Organs. 184 (3-4), 105-116 (2006).</li><li>Potdar, P. D., Jethmalani, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dental+pulp+stem+cells:+applications+in+future+regenerative+medicine.">Human dental pulp stem cells: applications in future regenerative medicine.</a> World journal of stem cells. 7 (5), 839 (2015).</li><li>Ahmed, N. E. -. M. B., Murakami, M., Hirose, Y., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+dental+pulp+stem+cell+secretome+for+Alzheimer's+disease+treatment:+an+in+vitro+study.">Therapeutic potential of dental pulp stem cell secretome for Alzheimer's disease treatment: an in vitro study.</a> Stem cells international. 2016, (2016).</li><li>Gorin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Priming+dental+pulp+stem+cells+with+fibroblast+growth+factor-2+increases+angiogenesis+of+implanted+tissue-engineered+constructs+through+hepatocyte+growth+factor+and+vascular+endothelial+growth+factor+secretion.">Priming dental pulp stem cells with fibroblast growth factor-2 increases angiogenesis of implanted tissue-engineered constructs through hepatocyte growth factor and vascular endothelial growth factor secretion.</a> Stem cells translational medicine. 5 (3), 392-404 (2016).</li><li>Wakayama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+secreted+from+dental+pulp+stem+cells+show+multifaceted+benefits+for+treating+acute+lung+injury+in+mice.">Factors secreted from dental pulp stem cells show multifaceted benefits for treating acute lung injury in mice.</a> Cytotherapy. 17 (8), 1119-1129 (2015).</li><li>Do&#287;an, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+stem+cells+is+promoted+by+amphiphilic+pluronic+block+copolymers.">Differentiation of human stem cells is promoted by amphiphilic pluronic block copolymers.</a> International Journal of Nanomedicine. 7, 4849 (2012).</li><li>Ta&#351;l&#305;, P. N., Do&#287;an, A., Demirci, S., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boron+enhances+odontogenic+and+osteogenic+differentiation+of+human+tooth+germ+stem+cells+(hTGSCs)+in+vitro.">Boron enhances odontogenic and osteogenic differentiation of human tooth germ stem cells (hTGSCs) in vitro.</a> Biological trace element research. 153 (1-3), 419-427 (2013).</li><li>Yalvac, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+stem+cells+derived+from+human+third+molar+tooth+germs+of+young+adults:+implications+in+neo-vascularization,+osteo-,+adipo-and+neurogenesis.">Isolation and characterization of stem cells derived from human third molar tooth germs of young adults: implications in neo-vascularization, osteo-, adipo-and neurogenesis.</a> The pharmacogenomics journal. 10 (2), 105 (2010).</li><li>Do&#287;an, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+pentaborate+pentahydrate+and+pluronic+containing+hydrogel+increases+cutaneous+wound+healing+in+vitro+and+in+vivo.">Sodium pentaborate pentahydrate and pluronic containing hydrogel increases cutaneous wound healing in vitro and in vivo.</a> Biological trace element research. 162 (1-3), 72-79 (2014).</li><li>Do&#287;an, A., Yalva&#231;, M. E., Y&#305;lmaz, A., Rizvanov, A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+F68+on+cryopreservation+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+human+tooth+germ.">Effect of F68 on cryopreservation of mesenchymal stem cells derived from human tooth germ.</a> Applied biochemistry and biotechnology. 171 (7), 1819-1831 (2013).</li><li>Rizvanov, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+and+self-organization+of+human+mesenchymal+stem+cells+and+neuro-blastoma+SH-SY5Y+cells+under+co-culture+conditions:+A+novel+system+for+modeling+cancer+cell+micro-environment.">Interaction and self-organization of human mesenchymal stem cells and neuro-blastoma SH-SY5Y cells under co-culture conditions: A novel system for modeling cancer cell micro-environment.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 76 (2), 253-259 (2010).</li><li>Troiano, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiparametric+analysis+of+cells+with+different+mitochondrial+membrane+potential+during+apoptosis+by+polychromatic+flow+cytometry.">Multiparametric analysis of cells with different mitochondrial membrane potential during apoptosis by polychromatic flow cytometry.</a> Nature protocols. 2 (11), 2719 (2007).</li><li>Melzer, C., von der Ohe, J., Lehnert, H., Ungefroren, H., Hass, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cell+niche+models+and+contribution+by+mesenchymal+stroma/stem+cells.">Cancer stem cell niche models and contribution by mesenchymal stroma/stem cells.</a> Molecular cancer. 16 (1), 28 (2017).</li><li>Aguirre, A., Planell, J., Engel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cell/mesenchymal+stem+cell+interaction+in+co-culture+and+its+implications+in+angiogenesis.">Dynamics of bone marrow-derived endothelial progenitor cell/mesenchymal stem cell interaction in co-culture and its implications in angiogenesis.</a> Biochemical and biophysical research communications. 400 (2), 284-291 (2010).</li><li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biomimetics and Stem Cells. , 29-36 (2013).</li><li>Plotnikov, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-to-cell+cross-talk+between+mesenchymal+stem+cells+and+cardiomyocytes+in+co-culture.">Cell-to-cell cross-talk between mesenchymal stem cells and cardiomyocytes in co-culture.</a> Journal of cellular and molecular. 12 (5a), 1622-1631 (2008).</li><li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+cell-cell+communication+in+co-culture.">Studying cell-cell communication in co-culture.</a> Biotechnology journal. 8 (4), 395-396 (2013).</li><li>Brunetti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+expression+of+TRAIL+by+osteoblastic+differentiated+dental+pulp+stem+cells+affects+myeloma+cell+viability.">High expression of TRAIL by osteoblastic differentiated dental pulp stem cells affects myeloma cell viability.</a> Oncology reports. 39 (4), 2031-2039 (2018).</li><li>Do&#287;an, A., Demirci, S., Apdik, H., Apdik, E. A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+increase+prostate+cancer+cell+proliferation+and+migration+under+in+vitro+conditions.">Dental pulp stem cells (DPSCs) increase prostate cancer cell proliferation and migration under in vitro conditions.</a> Tissue and Cell. 49 (6), 711-718 (2017).</li></ol>

Contribución de MSCs al entorno del tumor está regulada por varias interacciones incluyendo híbrido celular generación vía celular fusiones, actividades entosis o citoquinas y quimioquinas entre células madre y células de cáncer28. Organización estructural, las interacciones célula-célula y secretadas factores determinan el comportamiento de la célula de cáncer en términos de promoción del tumor, la progresión y la metástasis al tejido circundante. Adecuada ex vivo</e...

Las células madre mesenquimales (MSCs), con la capacidad de diferenciación y contribución a la regeneración de los tejidos mesenquimales como hueso, cartílago, músculo, ligamento, tendón y adiposo, se han aislado de casi todos los tejidos en el cuerpo adulto1 , 2. aparte proveer homeostasis del tejido produciendo células residentes en caso de inflamación crónica o una lesión, que producen vital citoquinas y factores de crecimiento para orquestar la angiogénesis, sistema inmune y tejido remodelación3. La interacción de MSCs con tejido de cáncer no es bien entendida, pero acumulando evidencias de que MSCs pueden promover la iniciación, progresión y metástasis de tumor4.
La capacidad de recalada de MSCs a la zona lesionada o crónicamente inflamada hace un candidato valioso para terapias basadas en células madre. Sin embargo, los tejidos de cáncer, "nunca curar heridas", también liberación de citoquinas inflamatorias, moléculas de pro-angiogénica y vitales factores de crecimiento, que atraen MSCs cancerígenas zona5. Aunque hay limitada informes que demuestran los efectos inhibitorios de MSCs en cáncer crecimiento6,7la progresión del cáncer y sus metástasis promover efectos han sido ampliamente registrados8. MSCs directa o indirectamente afectan la carcinogénesis de diversas maneras, incluyendo la supresión de las células inmunes, secretando factores de crecimiento/citoquinas que apoyan la proliferación de células de cáncer y la migración, mejorar la actividad angiogénica y regulación transición epitelial-mesenquimal (EMT)9,10. Entorno del tumor consiste en varios tipos celulares, incluyendo fibroblastos asociada al cáncer (CAFs) y miofibroblastos, células endoteliales, adipocitos y células inmunes11. De los cafés son el tipo celular más abundante en la zona de tumor que secretan diferentes quimiocinas promover el crecimiento y metástasis de cáncer8. Se ha demostrado que MSCs de médula ósea pueden diferenciarse en CAF en el estroma tumoral del12.
Células madre de pulpa dental (DPSCs), caracterizadas como el primer MSCs de derivados de tejido dentales por Gronthos et al. 13 en el año 2000 y luego ampliamente investigado por otros14,15, expresar marcadores de pluripotencia tales como Oct4, Sox2y Nanog16 y puede diferenciarse en varios linajes de célula17. Análisis de expresión génica y proteínas demostró que DPSCs producen niveles comparables de factores de crecimiento/citoquinas con otros MSCs como factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), angiogenina, factor de crecimiento fibroblástico 2 (FGF2), interleucina-4 (IL-4), IL-6, IL-10, y factor de células madre (SCF), así como ligando de fms-like tyrosine kinase-3 (Flt - 3L) que puede promover la angiogénesis, modulan las células inmunes y apoyo cáncer célula proliferación y migración de18,19,20 . Mientras que las interacciones de MSCs con entorno de cáncer han sido bien documentadas en la literatura, la relación entre DPSCs y las células de cáncer no ha sido evaluada todavía. En el presente estudio, hemos establecido estrategias de tratamiento medio co-cultivo y condición para una línea celular de cáncer de próstata altamente metastático, PC-3 y DPSCs proponer acción potencial del mecanismo de MSCs dentales en la progresión del cáncer y la metástasis.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11885084</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16000044</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSA</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-745E</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25200056</td>
			<td>For cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10010023</td>
			<td>For washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td>Component of differentiation media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9422</td>
			<td>Component of osteogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4544</td>
			<td>Component of osteo- and chondro-genic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Transferrin-Selenium (ITS &#8722;G)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>41400045</td>
			<td>Component of chondrogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGF-&#946;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SRP3171</td>
			<td>Component of chondrogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I6634</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I7018</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I7378</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G3582</td>
			<td>Cell viability analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TUNEL Assay</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>11684795910</td>
			<td>Apoptotic analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate inserts</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3396</td>
			<td>For trans-well migration assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKH67</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PKH67GL</td>
			<td>For co-culture cell staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKH26</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PKH26GL</td>
			<td>For co-culture cell staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td>For cell fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>von Kossa Kit</td>
			<td>BioOptica</td>
			<td>04-170801.A</td>
			<td>For cell staining (differentiation)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2899</td>
			<td>For cell staining (differentiation)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mesenchymal stem cell isolation from pulp tissue and co-culture with cancer cells to study their interactions

Cáncer como un proceso de varios pasos y enfermedad complicada no sólo reglamentado por el crecimiento y proliferación de células individuales sino también controlado por las interacciones de medio ambiente y la célula de tumor. Identificación del cáncer y de las interacciones de la célula de vástago, incluyendo cambios en el ambiente extracelular, interacciones físicas y factores secretados, podría permitir el descubrimiento de nuevas opciones de tratamiento. Combinamos técnicas de cocultivo conocido para crear un sistema modelo para el cáncer de las células madre mesenquimales (MSCs) y las interacciones de la célula. En el estudio actual, las células madre de pulpa dental (DPSCs) y las interacciones de la célula de cáncer de próstata PC-3 fueron examinadas por técnicas de cocultivo directos e indirectos. Medio (CM) de la condición de DPSCs y 0,4 μm tamaño de poro bien trans membranas fueron utilizadas para estudiar la actividad paracrina. Co-cultivo de diversos tipos celulares juntos fue realizado para estudio de la interacción directa de la célula. Los resultados revelaron que CM aumenta la proliferación celular y disminuye la apoptosis en cultivos de células de cáncer de próstata. CM y sistema de trans-así mayor capacidad de migración de la célula de células PC-3. Células teñidas con tintes de membrana diferentes fueron sembradas en los mismos recipientes de cultivo, y DPSCs participó en una estructura autoorganizada con células PC-3 bajo esta condición de la cultura de cooperación directa. En general, los resultados indicaron que técnicas de cocultivo podrían ser útiles para el cáncer y las interacciones de MSC como sistema modelo.

La figura 1 muestra las características generales de la maestría de DPSCs bajo condiciones de cultivo. DPSCs ejercer morfología de fibroblasto-como de la célula después de la galjanoplastia (figura 1B). Antígenos de superficie de MSC (CD29, CD73, CD90, CD105 y CD166) se expresan altamente mientras que los marcadores hematopoyéticos (CD34, CD45 y CD14) son negativos (figura 1). Cambios a nivel ...

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Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Ofrecemos protocolos para la evaluación de las células madre mesenquimales aisladas de la pulpa dental e interacciones de la célula de cáncer de próstata basadas en métodos directos e indirectos de la cultura Co. Condición media y trans-bien membranas son adecuadas analizar actividad paracrina indirecta. Siembra diferencialmente teñidas células juntos es un modelo apropiado para la interacción directa de la célula.

Aislamiento de células madre mesenquimales del tejido de la pulpa y cocultivo con células de cáncer para estudiar sus interacciones

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de las células madre sobre el papel de las células madre adultas en la regulación del comportamiento de las células cancerosas. La principal ventaja de esta técnica es que permite la evaluación de las interacciones de células cancerosas y células madre in vitro sin el uso de organismos vivos. Esta técnica tiene potencial para la metástasis del cáncer, ya que modela el papel promotor de las células madre adultas en la metástasis del cáncer a los tejidos duros como el hueso.La demostración del procedimiento será llevada a cabo por Huseyin Apdik, un postdoctoral en mi laboratorio. Comience por usar fórceps de extracción estériles para extraer el tejido pulpar del centro de las muelas del juicio obtenidas de adultos jóvenes de 17 a 20 años de edad. Coloque el tejido en DMEM completo en frío en platos de cultivo de tejido de 10 centímetros y use un bisturí para picar las muestras en fragmentos de dos a tres milímetros.Transfiera las piezas de cada plato a pozos individuales de un cultivo de tejidos tratados con placa de seis pozos y cubra los tejidos en cada pozo con 200 microlitros de DMEM completo. Permita que los tejidos se adhieran a los fondos de los pozos con una incubación de al menos dos horas en una incubadora de cultivo celular humidificado de 37 grados Celsius y 5%CO2. Al final de la incubación, alimentar los tejidos con dos a 2,5 mililitros de medio fresco completo y cultivar las células durante ocho a nueve días adicionales.Cuando el cultivo haya alcanzado el 80% de confluencia, lave cada pozo con dos mililitros de PBS seguidos de desprendimiento de las células con dos mililitros de trippsina a 37 grados centígrados. Después de dos minutos, detenga la reacción con dos mililitros de DMEM completo por pozo y recoja las células por centrifugación. Luego, resuspender los pellets en 15 mililitros de medio fresco completo por dos pozos de células y pasar las células a los matraces T75 para su cultivo posterior.Después de al menos ocho pasajes, visualice las células por microscopía de luz. Las células madre de pulpa dental deben haberse unido a los platos de cultivo y deben mostrar una morfología celular similar a un husillo. Para el análisis de marcadores de superficie, después de demostrar la tripsinación, fije las células con 4%paraformaldehído durante 20 minutos a temperatura ambiente en tubos de 1,5 mililitros seguidos de tres lavados en 500 microlitros de PBS por lavado.Después del último lavado, etiquete las células con los anticuerpos de interés adecuados en 100 microlitros de PBS por tubo durante una hora a cuatro grados centígrados. Al final de la incubación, lave las células tres veces en PBS como se ha demostrado y etiquete las células con los anticuerpos secundarios apropiados en 100 microlitros de PBS por tubo durante 30 minutos a cuatro grados centígrados. A continuación, lave las muestras tres veces en PBS y analice las células por citometría de flujo de acuerdo con los protocolos estándar.Para la diferenciación de las células madre de la pulpa dental, se siembra una vez 10 a las cuatro células en pozos individuales de placas de 24 pocillos en 500 microlitros de DMEM completo para una incubación de 24 horas en la incubadora de cultivo celular. Al día siguiente, reemplace el medio en cada pozo con el medio de diferenciación adecuado y devuelva las células a la incubadora, refrescando el medio dos veces por semana durante dos semanas. La diferenciación puede ser confirmada por la tinción azul de von Kossa y Alcian de acuerdo con los protocolos estándar.Después de dos a cuatro pasajes, recoger los sobrenadantes medios acondicionados de las células madre de pulpa dental cultivadas cuando los cultivos alcanzan el 80% de confluencia. Luego, centrifuga el medio recolectado para eliminar cualquier material de tejido de desecho y desechos celulares y almacenar el medio en 20 grados Celsius negativos hasta su uso. Para el tratamiento de células cancerosas, se siembra una vez 10 a las cinco células tumorales en pozos individuales de una placa de 12 pocillos para la incubación durante la noche a 37 grados celsius y 5%CO2.A la mañana siguiente, utilice una punta estéril de 200 microlitros para hacer una lesión por arañazos en cada pozo y reemplace inmediatamente el sobrenadante en cada pozo con un medio fresco que contenga varias concentraciones de medio acondicionado. A continuación, observe inmediatamente los arañazos bajo un microscopio invertido y obtenga imágenes de los cultivos lesionados a intervalos de tiempo regulares. Al final del análisis, mida el cierre de arañazos con el tiempo en ImageJ.Para evaluar la migración de células madre de pulpa dental, primero se siembra tres veces 10 a las cuatro células madre de pulpa dental en insertos individuales de placas de 24 pozos con poros de 0,4 micras en 250 microlitros de DMEM e incubar las plaquitas durante la noche a 37 grados centígrados. A continuación, sembra cinco veces 10 las cuatro células tumorales en pozos individuales de una placa de 24 pocillos en 500 microlitros de DMEM para la incubación durante la noche a 37 grados centígrados. A la mañana siguiente, rasca las células tumorales como se demuestra.Sustituya los sobrenadantes por 500 microlitros de DMEM fresco y coloque un inserto de semilla de células madre de pulpa dental en cada bien alimentado con medio fresco. Luego observe inmediatamente las células en un microscopio invertido e imagine las células a intervalos regulares para evaluar la migración de células madre de pulpa dental. Para evaluar las interacciones directas de las células madre de pulpa dental con células cancerosas, pruebe cada cultivo etiquetado para obtener suspensiones de una sola célula y recoger las células disociadas por centrifugación.Resuspender los pellets en diferentes soluciones de tinte del vinculador celular preparadas en tampón C diluyente, suministradas de acuerdo con las instrucciones del fabricante, e incubar las células son temperatura ambiente durante 10 minutos. Terminar la reacción de tinción con 100 microlitros de suero bovino fetal y recoger las células por centrifugación. A continuación, centrifugar las células con medio de crecimiento completo antes de encollar cinco veces 10 a las cuatro células madre de pulpa dental y células tumorales por pozo en una placa de seis pozos en una proporción de uno a uno en dos mililitros de medio completo.Recoger las células después de 24 o 48 horas de incubación por centrifugación seguida de un lavado en PBS. Luego, resuspendir las células en 300 microlitros de búfer de clasificación de células activado por fluorescencia en tubos de citometría de flujo redondo de cinco mililitros y vórtice para dispersar cualquier agregado celular antes de analizar las células de acuerdo con los protocolos de análisis citométrico de flujo estándar. Las células madre de pulpa dental exhiben una morfología celular similar a un fibroblastos después del enchapado y expresan antígenos de superficie de células madre mesenquimales, pero no marcadores de células hematopoyéticas.También se observan cambios a nivel morfológico y molecular relacionados con la diferenciación osteo, condro y adipogénica en los cultivos de células madre de pulpa dental después de la aplicación adecuada del cóctel de diferenciación. El tratamiento de cultivos celulares tumorales lesionados con 10 y 20% de concentraciones de medio condicionado aumenta significativamente el cierre de arañazos en comparación con los cultivos celulares tumorales de control medio. Las moléculas secretadas de células madre de pulpa dental insertan co-cultivos también aumentaron el cierre de arañazos en las células tumorales lesionadas en comparación con los co-cultivos celulares de control.El análisis del microscopio de fluorescencia de las interacciones del tallo de la pulpa dental y las células tumorales dentro de un cultivo celular in vitro revela la creación de una estructura bien organizada dentro de la cual las células tumorales proliferan rápidamente después de 48 horas. Al intentar este procedimiento, es importante recordar mantener dos muestras de tejido en medio frío y transportar inmediatamente muestras al laboratorio para minimizar la muerte celular. Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para los investigadores en los campos de células madre en la exploración de interacciones de cáncer de células madre adultas en seres humanos.Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como el rastreo de células inmunitarias para células etiquetadas diferenciales de varios tipos de células madre y cáncer para responder preguntas adicionales sobre cómo las células madre adultas interactúan con las células cancerosas y controlan la metástasis del cáncer. No olvide que trabajar con las muestras humanas puede ser peligroso y que las precauciones tales como analizar muestras de pacientes para enfermedades infecciosas y obtener el consentimiento escrito del paciente siempre deben implementarse al realizar este procedimiento.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

Protocolo de aislamiento de células dendríticas derivadas de monocitos de ratón y su activación posterior In Vitro con complejos inmunes Tumor

Dendritic cells (DC) are heterogeneous cell populations that differ in their cell membrane markers, migration patterns and distribution, and in their ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

Generation and Isolation of Cell Cycle-arrested Cells with Complex Karyotypes

Generación y el aislamiento de células de ciclo celular detenido con los Karyotypes complejos

Chromosome mis-segregation leads to aneuploidy, a condition in which cells harbor an imbalanced chromosome number. Several lines of evidence strongly ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Análisis de imágenes de células vivas para estudio Glioblastoma cerebral Tumor células madre migración y la invasión

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Obtención de esferas de células madre de cáncer de cáncer de tumores ginecológicos y de cáncer de mama

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

Aislamiento de células similares a tallos de cultivos esferoides tridimensionales

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

A Biomimetic Model for Liver Cancer to Study Tumor-Stroma Interactions in a 3D Environment with Tunable Bio-Physical Properties

Un modelo biomimético para el cáncer de hígado para estudiar las interacciones tumorales-estroma en un entorno 3D con propiedades biofísicos ajustables

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a primary liver tumor developing in the wake of chronic liver disease. Chronic liver disease and inflammation leads to a ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Aislamiento y evaluación funcional de células madre de cáncer de mama humano a partir de muestras de células y tejidos

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

Studying TGF-&#946; Signaling and TGF-&#946;-induced Epithelial-to-mesenchymal Transition in Breast Cancer and Normal Cells

Estudio de la señalización β TGF y la transición epitelial a mesenquimal inducida por TGF-β en cáncer de mama y células normales

Transforming growth factor-&#946; (TGF-&#946;) is a secreted multifunctional factor that plays a key role in intercellular communication. Perturbations of ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

Co-cultivo De Glioblastoma Células Madre-como En Las Neuronas Modeladas Para Estudiar La Migración Y Las Interacciones Celulares

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...

Co-culture of Glutamatergic Neurons and Pediatric High-Grade Glioma Cells Into Microfluidic Devices to Assess Electrical Interactions

Cocultivo de neuronas glutamatérgicas y células pediátricas de glioma de alto grado en dispositivos microfluídicos para evaluar las interacciones eléctricas