Name: mesenchymal stem cell isolation from pulp tissue and co-culture with cancer cells to study their interactions
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions at JoVE.com

Bu çalışmada Yeditepe Üniversitesi tarafından desteklenmiştir. Tüm veri ve bu makalede kullanılan rakamlar daha önce yayımlanmış34idi.

Yazılı onam hastaların onayı alındıktan sonra kurumsal etik komiteden elde edildi.
1. DPSC yalıtım ve kültür
<ol><li>Yirmi yaş dişleri tam Dulbecco'nın modifiye kartal Orta (DMEM) içeren 20-15 mL tüpler arasında 17 yaşındaki genç yetişkinler elde edilen aktarım [düşük glikoz DMEM medya, % 10 fetal Sığır serum (FBS) ve % 1 penisilin/streptomisin ile desteklenmiş / amfoterisin (PSA) çözüm], içinde 8 h rezeksiyonundan sonra. Doku malzeme soğuk (4 ° C) aktarım?...

<ol>
	<li>Camberlain, G., Fox, J., Ashton, B., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells:+their+phenotype,+differentiation+capacity,+immunological+features,+and+potential+for+homing.">Mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing.</a> Stem Cells. 25 (11), 2739-2749 (2007).</li><li>Demirci, S., Do&#287;an, A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Dental Stem Cells. , 109-124 (2016).</li><li>Fox, J. M., Chamberlain, G., Ashton, B. A., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+into+the+understanding+of+mesenchymal+stem+cell+trafficking.">Recent advances into the understanding of mesenchymal stem cell trafficking.</a> British journal of haematology. 137 (6), 491-502 (2007).</li><li>Chang, A. I., Schwertschkow, A. H., Nolta, J. A., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+mesenchymal+stem+cells+in+cancer+progression+and+metastases.">Involvement of mesenchymal stem cells in cancer progression and metastases.</a> Current cancer drug targets. 15 (2), 88-98 (2015).</li><li>Dvorak, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumors:+wounds+that+do+not+heal.">Tumors: wounds that do not heal.</a> New England Journal of Medicine. 315 (26), 1650-1659 (1986).</li><li>Lu, Y. -. r., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+growth+inhibitory+effect+of+mesenchymal+stem+cells+on+tumor+cells+in+vitro+and+in+vivo.">The growth inhibitory effect of mesenchymal stem cells on tumor cells in vitro and in vivo.</a> Cancer biology &amp; therapy. 7 (2), 245-251 (2008).</li><li>Secchiero, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+display+anti-cancer+activity+in+SCID+mice+bearing+disseminated+non-Hodgkin's+lymphoma+xenografts.">Human bone marrow mesenchymal stem cells display anti-cancer activity in SCID mice bearing disseminated non-Hodgkin's lymphoma xenografts.</a> PloS one. 5 (6), e11140 (2010).</li><li>Hong, I. -. S., Lee, H. -. Y., Kang, K. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+and+cancer:+friends+or+enemies?.">Mesenchymal stem cells and cancer: friends or enemies?.</a> Mutation Research/Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. 768, 98-106 (2014).</li><li>Brennen, W. N., Chen, S., Denmeade, S. R., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Mesenchymal+Stem+Cells+(MSCs)+at+sites+of+human+prostate+cancer.">Quantification of Mesenchymal Stem Cells (MSCs) at sites of human prostate cancer.</a> Oncotarget. 4 (1), 106 (2013).</li><li>Klopp, A. H., Gupta, A., Spaeth, E., Andreeff, M., Marini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+dissecting+a+discrepancy+in+the+literature:+do+mesenchymal+stem+cells+support+or+suppress+tumor+growth.">Concise review: dissecting a discrepancy in the literature: do mesenchymal stem cells support or suppress tumor growth.</a> Stem cells. 29 (1), 11-19 (2011).</li><li>Albini, A., Sporn, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tumour+microenvironment+as+a+target+for+chemoprevention.">The tumour microenvironment as a target for chemoprevention.</a> Nature Reviews Cancer. 7 (2), 139 (2007).</li><li>Quante, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+myofibroblasts+contribute+to+the+mesenchymal+stem+cell+niche+and+promote+tumor+growth.">Bone marrow-derived myofibroblasts contribute to the mesenchymal stem cell niche and promote tumor growth.</a> Cancer cell. 19 (2), 257-272 (2011).</li><li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+in+vitro+and+in+vivo.">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li><li>Mori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells:+osteogenic+differentiation+and+gene+expression.">Dental pulp stem cells: osteogenic differentiation and gene expression.</a> Annals of the new York Academy of Sciences. 1237 (1), 47-52 (2011).</li><li>Mori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+properties+of+human+dental+pulp+stem+cells.">Osteogenic properties of human dental pulp stem cells.</a> Journal of biological regulators and homeostatic agents. 24 (2), 167-175 (2010).</li><li>Kerkis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+population+of+immature+dental+pulp+stem+cells+expressing+OCT-4+and+other+embryonic+stem+cell+markers.">Isolation and characterization of a population of immature dental pulp stem cells expressing OCT-4 and other embryonic stem cell markers.</a> Cells Tissues Organs. 184 (3-4), 105-116 (2006).</li><li>Potdar, P. D., Jethmalani, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+dental+pulp+stem+cells:+applications+in+future+regenerative+medicine.">Human dental pulp stem cells: applications in future regenerative medicine.</a> World journal of stem cells. 7 (5), 839 (2015).</li><li>Ahmed, N. E. -. M. B., Murakami, M., Hirose, Y., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+dental+pulp+stem+cell+secretome+for+Alzheimer's+disease+treatment:+an+in+vitro+study.">Therapeutic potential of dental pulp stem cell secretome for Alzheimer's disease treatment: an in vitro study.</a> Stem cells international. 2016, (2016).</li><li>Gorin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Priming+dental+pulp+stem+cells+with+fibroblast+growth+factor-2+increases+angiogenesis+of+implanted+tissue-engineered+constructs+through+hepatocyte+growth+factor+and+vascular+endothelial+growth+factor+secretion.">Priming dental pulp stem cells with fibroblast growth factor-2 increases angiogenesis of implanted tissue-engineered constructs through hepatocyte growth factor and vascular endothelial growth factor secretion.</a> Stem cells translational medicine. 5 (3), 392-404 (2016).</li><li>Wakayama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+secreted+from+dental+pulp+stem+cells+show+multifaceted+benefits+for+treating+acute+lung+injury+in+mice.">Factors secreted from dental pulp stem cells show multifaceted benefits for treating acute lung injury in mice.</a> Cytotherapy. 17 (8), 1119-1129 (2015).</li><li>Do&#287;an, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+stem+cells+is+promoted+by+amphiphilic+pluronic+block+copolymers.">Differentiation of human stem cells is promoted by amphiphilic pluronic block copolymers.</a> International Journal of Nanomedicine. 7, 4849 (2012).</li><li>Ta&#351;l&#305;, P. N., Do&#287;an, A., Demirci, S., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boron+enhances+odontogenic+and+osteogenic+differentiation+of+human+tooth+germ+stem+cells+(hTGSCs)+in+vitro.">Boron enhances odontogenic and osteogenic differentiation of human tooth germ stem cells (hTGSCs) in vitro.</a> Biological trace element research. 153 (1-3), 419-427 (2013).</li><li>Yalvac, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+stem+cells+derived+from+human+third+molar+tooth+germs+of+young+adults:+implications+in+neo-vascularization,+osteo-,+adipo-and+neurogenesis.">Isolation and characterization of stem cells derived from human third molar tooth germs of young adults: implications in neo-vascularization, osteo-, adipo-and neurogenesis.</a> The pharmacogenomics journal. 10 (2), 105 (2010).</li><li>Do&#287;an, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+pentaborate+pentahydrate+and+pluronic+containing+hydrogel+increases+cutaneous+wound+healing+in+vitro+and+in+vivo.">Sodium pentaborate pentahydrate and pluronic containing hydrogel increases cutaneous wound healing in vitro and in vivo.</a> Biological trace element research. 162 (1-3), 72-79 (2014).</li><li>Do&#287;an, A., Yalva&#231;, M. E., Y&#305;lmaz, A., Rizvanov, A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+F68+on+cryopreservation+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+human+tooth+germ.">Effect of F68 on cryopreservation of mesenchymal stem cells derived from human tooth germ.</a> Applied biochemistry and biotechnology. 171 (7), 1819-1831 (2013).</li><li>Rizvanov, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+and+self-organization+of+human+mesenchymal+stem+cells+and+neuro-blastoma+SH-SY5Y+cells+under+co-culture+conditions:+A+novel+system+for+modeling+cancer+cell+micro-environment.">Interaction and self-organization of human mesenchymal stem cells and neuro-blastoma SH-SY5Y cells under co-culture conditions: A novel system for modeling cancer cell micro-environment.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 76 (2), 253-259 (2010).</li><li>Troiano, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiparametric+analysis+of+cells+with+different+mitochondrial+membrane+potential+during+apoptosis+by+polychromatic+flow+cytometry.">Multiparametric analysis of cells with different mitochondrial membrane potential during apoptosis by polychromatic flow cytometry.</a> Nature protocols. 2 (11), 2719 (2007).</li><li>Melzer, C., von der Ohe, J., Lehnert, H., Ungefroren, H., Hass, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cell+niche+models+and+contribution+by+mesenchymal+stroma/stem+cells.">Cancer stem cell niche models and contribution by mesenchymal stroma/stem cells.</a> Molecular cancer. 16 (1), 28 (2017).</li><li>Aguirre, A., Planell, J., Engel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cell/mesenchymal+stem+cell+interaction+in+co-culture+and+its+implications+in+angiogenesis.">Dynamics of bone marrow-derived endothelial progenitor cell/mesenchymal stem cell interaction in co-culture and its implications in angiogenesis.</a> Biochemical and biophysical research communications. 400 (2), 284-291 (2010).</li><li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biomimetics and Stem Cells. , 29-36 (2013).</li><li>Plotnikov, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-to-cell+cross-talk+between+mesenchymal+stem+cells+and+cardiomyocytes+in+co-culture.">Cell-to-cell cross-talk between mesenchymal stem cells and cardiomyocytes in co-culture.</a> Journal of cellular and molecular. 12 (5a), 1622-1631 (2008).</li><li>Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+cell-cell+communication+in+co-culture.">Studying cell-cell communication in co-culture.</a> Biotechnology journal. 8 (4), 395-396 (2013).</li><li>Brunetti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+expression+of+TRAIL+by+osteoblastic+differentiated+dental+pulp+stem+cells+affects+myeloma+cell+viability.">High expression of TRAIL by osteoblastic differentiated dental pulp stem cells affects myeloma cell viability.</a> Oncology reports. 39 (4), 2031-2039 (2018).</li><li>Do&#287;an, A., Demirci, S., Apdik, H., Apdik, E. A., &#350;ahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+stem+cells+(DPSCs)+increase+prostate+cancer+cell+proliferation+and+migration+under+in+vitro+conditions.">Dental pulp stem cells (DPSCs) increase prostate cancer cell proliferation and migration under in vitro conditions.</a> Tissue and Cell. 49 (6), 711-718 (2017).</li></ol>

MSCs, tümör çevre katkı hücre füzyon yoluyla melez hücre üretimi, kök hücre ve kanser hücreleri28arasında entosis veya sitokin ve kemokin faaliyetleri de dahil olmak üzere çeşitli etkileşimler tarafından düzenlenmiştir. Yapısal organizasyon, hücre-hücre etkileşimleri ve salgılanan faktörleri kanser hücre davranışı açısından tümör promosyon, ilerleme ve çevresindeki doku metastaz belirlenir. Yerleşik hücre popülasyonlarının etkileşimlerin arkasında...

Mezenkimal kök hücre (MKH), farklılaşma ve rejenerasyon ve yağ, kemik, kıkırdak, kas, ligament, tendon gibi mezenkimal dokuların katkısı yeteneklerini ile yetişkin vücut1 hemen hemen tüm dokularda yalıtılmış olmuştur , 2. kronik inflamasyon veya bir yaralanma durumunda ikamet hücreler üreterek doku homeostazı sağlamanın dışında onlar çok önemli sitokinler ve büyüme faktörleri anjiogenezi, bağışıklık sistemi ve3remodeling doku alacak üretmek. MSCs etkileşim kanser dokusu iyi anlaşılmış değil ama MSCs tümör başlatma, ilerleme ve metastaz4teşvik biriken kanıtlar gösteriyor.
MSCs homing yeteneği yaralı veya kronik iltihaplı alanına onları kök hücre tabanlı terapiler için değerli bir aday yapar. Ancak, kanser dokular, "asla yaralar şifa", ayrıca sürümü inflamatuar sitokinlerin, pro-anjiogenik molekülleri ve MSCs cancerogenous alan5' e çekmek önemli büyüme faktörleri. Sınırlı iken MSCs inhibitör etkileri kanser büyüme6üzerinde,7, kanser ilerlemesi ve etkileri teşvik metastaz kapsamlı olmuştur gösteren raporlar8bildirdi. MSCs doğrudan veya dolaylı olarak karsinojenezis bağışıklık hücreleri salgılayan destek kanser hücre çoğalması ve anjiogenik etkinliğini arttırmak ve düzenleyen göç, büyüme faktörleri/sitokinler, gizleme de dahil olmak üzere farklı şekillerde etkiler mezenkimal epitel geçiş (EMT)9,10. Tümör ortam kanser ilişkili fibroblastlar (restorantlar) ve/veya myofibroblasts, endotel hücreleri, adipositler ve bağışıklık hücreleri11de dahil olmak üzere çeşitli hücre türleri oluşur. O, restorantlar en bol hücre kanser büyüme ve metastaz8teşvik çeşitli kemokinler salgılar tümör alanında türüdür. Bu kemik iliği türevi MSCs tümör stroma12' restorantlar ayırabilirsiniz gösterilmiştir.
Diş pulp kök hücreler (DPSCs), ilk diş doku kaynaklı MSCs karakterize tarafından Gronthos vd. 13 2000 yılında yaygın olarak başkaları tarafından14,15araştırdık, hızlı pluripotency işaretleri Oct4, Sox2ve MicroRNAs16 gibi ve çeşitli hücre linages17ayırabilirsiniz. Gen ve protein ifade analizi ispat DPSCs büyüme faktörleri/sitokinler vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), angiogenin, fibroblast büyüme faktörü 2 (FGF2), interlökin-4 (IL-4), gibi diğer MSCs ile karşılaştırılabilir düzeyde üretmek Il-6, IL-10, ve kök hücre faktörü (SCF) yanı sıra angiogenez teşvik, bağışıklık hücreleri modüle ve kanser hücre çoğalması ve geçiş18,19,20 destek fms benzeri Tirozin kinaz-3 ligand (Flt - 3 L) . Ise MSCs etkileşimleri kanser çevre ile literatürde iyi belgelenmiş olabilirdi, DPSCs ve kanser hücrelerinin ilişkisi henüz değerlendirilmemiştir. Bu da çalışmanın, ortak kültür ve durumu orta tedavi stratejileri çok metastatik prostat kanseri hücre kültürünü, PC-3 ve olası eylem mekanizması kanser ilerlemesi ve metastaz diş MSCs evlenme DPSCs kurduk.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11885084</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16000044</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSA</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-745E</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25200056</td>
			<td>For cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10010023</td>
			<td>For washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td>Component of differentiation media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9422</td>
			<td>Component of osteogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4544</td>
			<td>Component of osteo- and chondro-genic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Transferrin-Selenium (ITS &#8722;G)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>41400045</td>
			<td>Component of chondrogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TGF-&#946;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SRP3171</td>
			<td>Component of chondrogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I6634</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I7018</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I7378</td>
			<td>Component of adipogenic differentiation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTS Reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G3582</td>
			<td>Cell viability analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TUNEL Assay</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>11684795910</td>
			<td>Apoptotic analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate inserts</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3396</td>
			<td>For trans-well migration assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKH67</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PKH67GL</td>
			<td>For co-culture cell staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKH26</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PKH26GL</td>
			<td>For co-culture cell staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td>For cell fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>von Kossa Kit</td>
			<td>BioOptica</td>
			<td>04-170801.A</td>
			<td>For cell staining (differentiation)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2899</td>
			<td>For cell staining (differentiation)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mesenchymal stem cell isolation from pulp tissue and co-culture with cancer cells to study their interactions

Kanser bir multistep süreç ve karmaşık hastalık olarak sadece tek tek hücre çoğalması ve büyüme tarafından yetkilendirilmekte ama aynı zamanda tümör çevre ve hücre-hücre etkileşimler tarafından kontrol. Kanser ve kök hücre etkileşimleri, hücre dışı ortam, fiziksel etkileşimleri ve salgılanan faktörler, değişiklikler de dahil olmak üzere yeni terapi seçenekleri bulmayı etkinleştirmek. Biz bilinen ortak kültürü teknikleri mezenkimal kök hücre (MSCs) ve kanser için bir model sistemi hücre etkileşimler oluşturmak için birleştirmek. Mevcut çalışmada, diş pulp kök hücreler (DPSCs) ve PC-3 prostat kanseri hücre etkileşimi doğrudan ve dolaylı ortak kültürü teknikleri tarafından incelenmiş. Koşul Orta (CM) DPSCs elde edilen ve 0.4 µm boyutlu gözenek trans-şey membranlar parakrin etkinlik eğitim için kullanılmıştır. Farklı hücre tiplerinin ortak kültür birlikte doğrudan hücre-hücre etkileşim çalışma gerçekleştirildi. Sonuçları CM hücre çoğalması arttı ve prostat kanseri hücre kültürlerinde apoptosis azalma saptandı. CM ve trans-şey sistem PC-3 hücre hücre göç kapasitesini arttırdı. Farklı membran boyalar ile lekeli hücreleri aynı kültür damarlarının tohumlari ve bu doğrudan ortak kültür koşul altında PC-3 hücreleri ile kendi kendine organize bir yapıda DPSCs katıldı. Genel olarak, sonuçlar ortak kültürü teknikleri bir modeli sistem olarak kanser ve MSC etkileşimleri için yararlı olabilir göstermiştir.

Şekil 1 DPSCs genel MSC özelliklerini kültür koşullar altında gösterilmektedir. DPSCs (Şekil 1B) kaplama sonra fibroblast benzeri hücre morfolojisi uygulamayın. MSC yüzey antijenleri (CD29, CD73, CD90, CD105 ve CD166) son derece hematopoetik işaretleri (CD34, CD45 ve CD14) sırasında ifade vardır negatif (Şekil 1 c). Değişiklikleri morfolojik ve moleküler düzeyde osteo-için ilgili...

Watch this Scientific Journal Video about Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions at JoVE.com

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mezenkimal kök hücre diş hamurundan izole ve prostat kanseri hücre etkileşimi doğrudan ve dolaylı ortak kültür yöntemleri üzerinde temel değerlendirilmesi için iletişim kuralları sağlar. Koşul orta ve trans-şey membranlar dolaylı parakrin etkinliğini çözümlemeye uygundur. Differentially Tohum hücreleri birlikte lekeli doğrudan hücre-hücre etkileşim için uygun bir model olduğunu.

Mezenkimal kök hücre izolasyon hamuru doku ve kanser hücreleri ile ortak kültür ilişkileri incelemek için

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Bu yöntem, kök hücre davranışının düzenlenmesinde yetişkin kök hücrelerinrolü hakkında kök hücre alanında anahtar soruların cevap yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, canlı organizmalar kullanılmadan kanser hücresi ve kök hücre etkileşimlerinin in vitro olarak değerlendirilmesine olanak sağlamasıdır. Bu teknik, kemik gibi sert dokulara kanser metastazında yetişkin kök hücrelerinin teşvik edici rolünü modelleyen kanser metastazı potansiyeline sahiptir.Prosedürün gösterimi, laboratuvarımda doktora sonrası hüseyin Apdik tarafından yapılacaktır. 17-20 yaş arası genç yetişkinlerden elde edilen yirmilik dişlerin merkezinden posa dokusunu çıkarmak için steril ekstraksiyon forsepsleri kullanarak başlayın. 10 santimetrelik doku kültürü yemekleri soğuk tam DMEM doku yerleştirin ve iki ila üç milimetrelik parçalar halinde örnekleri kıyma için bir neşter kullanın.Her çanak tan parçaları bir doku kültürü altı iyi plaka tedavi bireysel kuyulara aktarın ve tam DMEM 200 mikrolitre ile her kuyuda dokuları kapsayacak. Dokuların nemli, 37 derece santigrat ve %5 CO2 hücre kültürü kuluçka makinesinde en az iki saatlik kuluçka ile kuyu diplerine bağlanmasına izin verin. Kuluçka sonunda, taze tam orta ve kültür iki ila 2,5 mililitre ile dokuları beslemek ek bir sekiz ila dokuz gün hücreleri.Kültür %80 birleştiğinde, her kuyuyu iki mililitre PBS ile yıkayın ve ardından 37 santigrat derecede iki mililitre tripsin ile hücrelerin ayrılması nı takip edin. İki dakika sonra, kuyu başına tam DMEM iki mililitre ile reaksiyonu durdurmak ve santrifüj ile hücreleri toplamak. Daha sonra, hücrelerin iki kuyu başına taze tam orta 15 mililitre pelet resuspend ve sonraki kültür için T75 şişeleri içine hücreleri geçiş.En az sekiz pasajdan sonra, ışık mikroskobu ile hücreleri görselleştirin. Diş hamuru kök hücreleri kültür yemekleri bağlı olmalı ve bir mil benzeri hücre morfolojisi gösterilmelidir. Yüzey marker analizi için, tripsinizasyon yapıldıktan sonra, 1.5 mililitrelik tüplerde oda sıcaklığında 20 dakika boyunca %4 paraformaldehit ile hücreleri düzeltin ve ardından yıkama başına 500 mikrolitre PBS'de üç yıkama yapın.Son yıkamadan sonra, dört santigrat derece bir saat boyunca tüp başına PBS 100 mikrolitre ilgi uygun antikorlar ile hücreleri etiket. Kuluçka sonunda, hücreleri pbs'de gösterildiği gibi üç kez yıkayın ve hücreleri tüp başına 100 mikrolitre PBS'de uygun ikincil antikorlarla etiketleyin. Daha sonra pbs üç kez örnekleri yıkayın ve standart protokollere göre akış sitometri ile hücreleri analiz.Diş posası kök hücrelerinin farklılaşması için, hücre kültürü kuluçka makinesinde 24 saatlik kuluçka için 500 mikrolitre tam DMEM'de 24 kuyulu plakaların tek tek kuyularına dört hücreye 10 kez tohum at. Ertesi gün, her kuyudaki ortayı uygun farklılaştırma ortamıyla değiştirin ve hücreleri iki hafta boyunca haftada iki kez yenilenerek kuvöze geri dönün. Farklılaşma, standart protokollere göre von Kossa ve Alcian mavi boyama ile doğrulanabilir.İki ila dört pasajdan sonra, kültürler %80 biraraya geldiğinde, kültürdeki diş hamuru kök hücrelerinden koşullanmış orta süpernatantları toplayın. Daha sonra, herhangi bir atık doku malzeme ve hücre enkaz kaldırmak ve kullanıma kadar negatif 20 santigrat derece orta saklamak için toplanan orta santrifüj. Kanser hücresi tedavisi için, tohum bir kez 10 beş tümör hücrelerine bir gecede kuluçka için 12-iyi plaka bireysel kuyular içine 37 santigrat derece ve% 5 CO2.Ertesi sabah, steril bir 200 mikrolitre ucu her kuyuda bir çizik yaralanması yapmak ve hemen klimalı orta çeşitli konsantrasyonlarda içeren taze orta ile her kuyuda supernatant değiştirin. Daha sonra, ters bir mikroskop altında çizikler gözlemlemek ve düzenli zaman aralıklarında yaralı kültürlerin görüntüleri elde. Analizin sonunda, ImageJ'de çizilme kapatmayı zaman içinde ölçün.Diş hamuru kök hücre göçünü değerlendirmek için, ilk tohum üç kez 10 dört diş hamuru kök hücreleri üzerine bireysel 24-well plaka ekler üzerine 0.4 mikron gözenekler ile 250 mikrolitre DMEM ve 37 santigrat derece bir gecede ekler kuluçka. Sonra, tohum beş kez 10 37 santigrat derece gecede kuluçka için DMEM 500 mikrolitre 24-iyi plaka bireysel kuyulara dört tümör hücreleri. Ertesi sabah, tümör hücrelerini olduğu gibi kaşıyın.Supernatants taze DMEM 500 mikrolitre ile değiştirin ve her iyi taze orta ile beslenen içine bir diş hamuru kök hücre tohumlu yerleştirin. Sonra hemen ters mikroskop hücreleri gözlemlemek ve düzenli aralıklarla diş hamuru kök hücre göçünü değerlendirmek için hücreleri görüntü. Diş posası kök hücrelerinin kanser hücreleriyle doğrudan etkileşimini değerlendirmek için, tek hücreli süspansiyonlar elde etmek ve ayrıştırılan hücreleri santrifüj ile toplamak için etiketli her kültürü deneyin.Dilüent C tamponu içinde hazırlanan, üreticinin talimatlarına göre verilen farklı hücre bağlayıcı boya çözeltilerinde peletleri yeniden askıya alın ve hücreleri 10 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya yatırın. Fetal sığır serum100 mikrolitre ile boyama reaksiyonu sonve santrifüj ile hücreleri toplamak. Sonra tam orta iki mililitre bir oran altı iyi plaka başına dört diş hamuru kök hücre ve tümör hücreleri beş kez 10 kaplama önce tam büyüme ortamı ile hücreleri santrifüj.Santrifüj ile 24 veya 48 saatlik kuluçkadan sonra hücreleri toplayın ve ardından PBS'de yıkanır. Daha sonra, standart akış sitometrik analiz protokollerine göre hücreleri analiz etmeden önce herhangi bir hücre agregasını dağıtmak için beş mililitrelik yuvarlak dip akış sitometri tüpleri ve girdap floresan aktive hücre sıralama tampon 300 mikrolitre hücreleri yeniden askıya. Diş posası kök hücreleri, hematopoetik hücre belirteçlerini kaplamave ekspres mezenkimal kök hücre yüzey istemlerinden sonra fibroblast benzeri hücre morfolojisi sergilerler.Uygun farklılaşma kokteyli uygulamasını takiben diş posası kök hücre kültürlerinde osteo, kondro ve adipojenik farklılaşmaile ilgili morfolojik ve moleküler düzeyde değişiklikler de gözlenmektedir. Sıfırdan yaralanan tümör hücre kültürlerinin %10 ve %20 konsantrasyonları ile koşullu ortam ların tedavisi, kontrol orta-tedavi edilen tümör hücre kültürlerine göre çizilme kapanmasını önemli ölçüde artırır. Diş posası kök hücre insert co-kültürlerden salgılanan moleküller de kontrol hücre co-kültürleri ile karşılaştırıldığında yaralı tümör hücrelerinde çizik kapatma arttı.İn vitro hücre kültürü içinde diş posası sapı ve tümör hücresi etkileşimlerinin floresan mikroskop analizi, tümör hücrelerinin 48 saat sonra hızla çoğaldığı iyi organize edilmiş bir yapının yaratılmasını ortaya koymaktadır. Bu prosedürü denerken, iki doku örneğini soğuk ortamda tutmayı ve hücre ölümünü en aza indirmek için numuneleri hemen laboratuvara taşımayı unutmamak önemlidir. Bu teknik, gelişiminden sonra, insanlarda yetişkin kök hücre kanseri etkileşimlerini keşfetmek kök hücre alanlarında araştırmacılar için yol açtı.Bu prosedürü takiben, çeşitli kök hücre ve kanser türlerinin diferansiyel etiketli hücreler için bağışıklık hücresi izleme gibi diğer yöntemler yetişkin kök hücrelerin kanser hücreleri ile etkileşim ve kontrol kanser metastazı hakkında ek soruya cevap için yapılabilir. İnsan örnekleri ile çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bulaşıcı hastalıklar için hasta örneklerinin analiz edilmesi ve yazılı hasta onayı alınması gibi önlemlerin her zaman bu işlemi gerçekleştirirken uygulanması gerektiğini unutmayın.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

Isolation Protocol of Mouse Monocyte-derived Dendritic Cells and Their Subsequent In Vitro Activation with Tumor Immune Complexes

Yalıtım Protokolü fare monosit kaynaklı dendritik hücreler ve onların sonraki Vitro harekete geçirmek ile tümör bağışıklık kompleksleri

Dendritic cells (DC) are heterogeneous cell populations that differ in their cell membrane markers, migration patterns and distribution, and in their ...

Generation and Isolation of Cell Cycle-arrested Cells with Complex Karyotypes

Üretimi ve yalıtım karmaşık Karyotypes içeren hücrelerin hücre döngüsü tutuklandı

Chromosome mis-segregation leads to aneuploidy, a condition in which cells harbor an imbalanced chromosome number. Several lines of evidence strongly ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Canlı hücre görüntüleme deneyleri için çalışma Glioblastoma Beyin tümör kök hücre göç ve işgali

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Jinekolojik ve Meme Kanseri Tümörlerinden Kanser Kök Hücre Kürelerinin Alınması

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

3 Boyutlu Spheroid Kültürlerden Kök Benzeri Hücrelerin İzolasyon

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

A Biomimetic Model for Liver Cancer to Study Tumor-Stroma Interactions in a 3D Environment with Tunable Bio-Physical Properties

Ayarlanabilir Biyo-Fiziksel Özelliklere Sahip 3D Ortamda Tümör-Stroma Etkileşimlerini İncelemek İçin Karaciğer Kanseri için Biyomimetik Model

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a primary liver tumor developing in the wake of chronic liver disease. Chronic liver disease and inflammation leads to a ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

İnsan Meme Kanseri Kök Hücrelerinin Hücre ve Doku Örneklerinden İzolasyonu ve Fonksiyonel Değerlendirmesi

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

Studying TGF-&#946; Signaling and TGF-&#946;-induced Epithelial-to-mesenchymal Transition in Breast Cancer and Normal Cells

Studying TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â² Signaling and TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-induced Epithelial-to-mesenchymal Transition in Breast Cancer and Normal Cells

Meme Kanseri ve Normal Hücrelerde TGF-β Sinyalizasyon ve TGF-β kaynaklı Epitel-mezenkimal Geçişin Incelenmesi

Transforming growth factor-&#946; (TGF-&#946;) is a secreted multifunctional factor that plays a key role in intercellular communication. Perturbations of ...

Co-culture of Glioblastoma Stem-like Cells on Patterned Neurons to Study Migration and Cellular Interactions

Göç ve Hücresel Etkileşimleri İncelemek İçin Desenli Nöronlarda Glioblastoma Kök Benzeri Hücrelerin Ortak Kültürü

Glioblastomas (GBMs), grade IV malignant gliomas, are one of the deadliest types of human cancer because of their aggressive characteristics. Despite ...

Co-culture of Glutamatergic Neurons and Pediatric High-Grade Glioma Cells Into Microfluidic Devices to Assess Electrical Interactions

Glutamaterjik Nöronların ve Pediatrik Yüksek Dereceli Glioma Hücrelerinin Mikroakışkan Cihazlara Ortak Kültürü Elektriksel Etkileşimleri Değerlendirmek İçin