Name: sperm collection of differential quality using density gradient centrifugation
Uploaded: 2018-11-29T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sperm Collection of Differential Quality Using Density Gradient Centrifugation at JoVE.com

Все методы, описанные здесь были одобрены институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) из университета штата Джорджия.
1. Мойка с использованием традиционных центрифугирования
<ol><li>Подготовьте фосфатного буферного раствора (PBS). Добавление 8,0 г NaCl, 0,2 г KCl,...

<ol>
	<li>Spargo, S. C., Hope, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+nomenclature+of+the+zona+pellucida+gene+family.">Evolution and nomenclature of the zona pellucida gene family.</a> Biology Reproduction. 68, 358-362 (2003).</li><li>Okamura, F., Nishiyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+passage+of+spermatozoa+through+the+vitelline+membrane+in+the+domestic+fowl,+Gallus+gallus.">The passage of spermatozoa through the vitelline membrane in the domestic fowl, Gallus gallus.</a> Cell and Tissue Research. 188 (3), 497-508 (1978).</li><li>Henkel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+function+and+assisted+reproduction+technology.">Sperm function and assisted reproduction technology.</a> Reproductive Medicine and Biology. 4, 7-30 (2005).</li><li>Reddy, R. P., Bakst, M. R., Wishart, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+Insemination+of+broilers:+Economic+and+management+implications.">Artificial Insemination of broilers: Economic and management implications.</a> Proceedings of 1st International Symposium on Artificial Insemination of Poultry. Poultry Science Association. , 73-89 (1995).</li><li>Howarth, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Examination+for+Sperm+Capacitation+in+the+Fowl.">An Examination for Sperm Capacitation in the Fowl.</a> Biology of Reproduction. 3, 338-341 (1971).</li><li>Menkveld, R., Holleboom, C. A. G., Rhemrev, J. P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+and+significance+of+sperm+morphology.">Measurement and significance of sperm morphology.</a> Asian Journal of Andrology. 13, 59-68 (2011).</li><li>Kumaresan, A., Johannisson, A., Al-Essawe, E. M., Morrell, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+viability,+reactive+oxygen+species,+and+DNA+fragmentation+index+combined+can+discriminate+between+above-+and+below-average+fertility+bulls.">Sperm viability, reactive oxygen species, and DNA fragmentation index combined can discriminate between above- and below-average fertility bulls.</a> Journal of Dairy Science. 100, 5824-5836 (2017).</li><li>Froman, D. P., McLean, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Objective+measurement+of+sperm+motility+based+upon+sperm+penetration+of+Accudenz.">Objective measurement of sperm motility based upon sperm penetration of Accudenz.</a> Poultry Science. 75, 776-784 (1996).</li><li>Zaneveld, L. J., De Jonge, C. J., Anderson, R. A., Mack, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+sperm+capacitation+and+the+acrosome+reaction.">Human sperm capacitation and the acrosome reaction.</a> Human Reproduction. 6 (9), 1265-1274 (1991).</li><li>Ahammad, M. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrosome+reaction+of+fowl+sperm:+Evidence+for+shedding+of+acrosomal+cap+in+intact+form+to+release+acrosomal+enzyme.">Acrosome reaction of fowl sperm: Evidence for shedding of acrosomal cap in intact form to release acrosomal enzyme.</a> Poultry Science. 92 (3), 798-803 (2013).</li><li>Ahammad, M. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturational+changes+in+motility,+acrosomal+proteolytic+activity,+and+penetrability+of+the+inner+perivitelline+layer+of+fowl+sperm,+during+their+passage+through+the+male+genital+tract.">Maturational changes in motility, acrosomal proteolytic activity, and penetrability of the inner perivitelline layer of fowl sperm, during their passage through the male genital tract.</a> Theriogenology. 76 (6), 1100-1109 (2011).</li><li>Chalah, T., Brillard, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+assessment+of+fowl+sperm+viability+by+eosin-nigrosin+and+dual+fluorescence.">Comparison of assessment of fowl sperm viability by eosin-nigrosin and dual fluorescence.</a> Theriogenology. 50 (3), 487-493 (1998).</li><li>Aitken, R. J., West, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+relationship+between+reactive+oxygen+species+production+and+leukocyte+infiltration+in+fractions+of+human+semen+separated+on+Percoll+gradients.">Analysis of the relationship between reactive oxygen species production and leukocyte infiltration in fractions of human semen separated on Percoll gradients.</a> International Journal of Andrology. 13, 433-451 (1990).</li><li>Mortimer, D., Mortimer, S. T., Carrell, D., Aston, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Density+Gradient+Separation+of+Sperm+for+Artificial+Insemination.">Density Gradient Separation of Sperm for Artificial Insemination.</a> Spermatogenesis. Methods in Molecular Biology (Methods and Protocols. , 927 (2013).</li><li>Qingling, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+of+semen+by+density+gradient+centrifugation+selects+spermatozoa+with+longer+telomeres+for+assisted+reproduction+techniques.">Processing of semen by density gradient centrifugation selects spermatozoa with longer telomeres for assisted reproduction techniques.</a> Reproductive BioMedicine Online. 31, 44-50 (2015).</li><li>Moohan, J. M., Lindsay, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spermatozoa+selected+by+a+discontinuous+Percoll+density+gradient+exhibit+better+motion+characteristics,+more+hyperactivation,+and+longer+survival+than+direct+swim-up.">Spermatozoa selected by a discontinuous Percoll density gradient exhibit better motion characteristics, more hyperactivation, and longer survival than direct swim-up.</a> Fertility and Sterility. 64 (1), 160-165 (1995).</li><li>Paulson, J. D., Polakoski, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+glass+wool+column+procedure+for+removing+extraneous+material+from+human+ejaculate.">A glass wool column procedure for removing extraneous material from human ejaculate.</a> Fertility and Sterility. 28, 178-181 (1977).</li><li>Ahammad, M. U., Chiaki, N., Tatemoto, H., Kawamoto, Y., Nakada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+the+swim-up+migration+sedimentation+technique+to+separate+viable+and+progressively+motile+fowl+spermatozoa.">Utilization of the swim-up migration sedimentation technique to separate viable and progressively motile fowl spermatozoa.</a> World's Poultry Science Association Proceedings. , (2010).</li><li>Lucena, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+motile+sperm+using+the+migration-sedimentation+technique+in+an+in+vitro+fertilization-embryo+transfer+programme.">Recovery of motile sperm using the migration-sedimentation technique in an in vitro fertilization-embryo transfer programme.</a> Human Reproduction. 4 (2), 163-165 (1989).</li><li>Henkel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+Processing+for+IVF.">Sperm Processing for IVF.</a> Clinical Embryology: A Practical Guide. , (2013).</li><li>Sherman, J., Paulson, D., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+glass+wool+filtration+on+ultrastructure+of+human+spermatozoa.">Effect of glass wool filtration on ultrastructure of human spermatozoa.</a> Fertility and Sterility. 36, 643-647 (1981).</li><li>Freund, M., Carol, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+haemocytometer+counts+of+sperm+concentration+in+human+semen.">Factors affecting haemocytometer counts of sperm concentration in human semen.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 8, 149-155 (1964).</li><li>Bakst, M. R., Wishart, G. J., Brillard, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oviducal+sperm+selection,+transport+and+storage+in+poultry.">Oviducal sperm selection, transport and storage in poultry.</a> Poultry Science Review. 5, 117-143 (1994).</li><li>Ahammad, M. U., Okamoto, S., Kawamoto, Y., Nakada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+regular+fluid+secretion+from+the+uterus+of+laying+hens+on+the+longevity+and+fertilization+ability+of+fowl+sperm+in+the+oviduct.">The effects of regular fluid secretion from the uterus of laying hens on the longevity and fertilization ability of fowl sperm in the oviduct.</a> Poultry Science Journal. 1 (1), 13-22 (2013).</li><li>Ahammad, M. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturational+changes+in+the+survivability+and+fertility+of+fowl+sperm+during+their+passage+through+the+male+reproductive+tract.">Maturational changes in the survivability and fertility of fowl sperm during their passage through the male reproductive tract.</a> Animal Reproduction Science. 128 (1-4), 129-136 (2011).</li><li>Choi, K. H., Emery, D. A., Straub, D. E., Lee, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percoll+process+can+improve+semen+quality+and+fertility+in+turkey+breeders.">Percoll process can improve semen quality and fertility in turkey breeders.</a> Asian-Australasian Journal of Animal Sciences. 12 (5), 702-707 (1999).</li><li>Chen, M. J., Bongso, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+evaluation+of+two+density+gradient+preparations+for+sperm+separation+for+medically+assisted+conception.">Comparative evaluation of two density gradient preparations for sperm separation for medically assisted conception.</a> Human Reproduction. 14 (3), 759-764 (1999).</li></ol>

Рождаемость не только определяет рентабельность животноводства, но и действует как средство естественного отбора видов для существования. Конечная функция сперматозоид является оплодотворить яйцеклетку. Маточных труб женщина выбирает только те приспособленных спермы с целью обесп?...

В позвоночных мужские гаметы проходят интенсивный селективного давления; Поэтому репродуктивной мужского пола имеет решающее значение для достижения успешного оплодотворения. Мужчины любого заданного позвоночных видов должны быть в состоянии производить сперматозоиды в больших количествах и достаточно высокого качества для удовлетворения потребностей оплодотворения. Сперматозоиды, имеющие сперматозоида и жгутика, являются наиболее поляризованных клетки в организме. Они также являются весьма разнородными качества спермы (живой и мертвых, морфологически нормальной и ненормальной и неподвижной, низкий мобильных и высокой мобильный), которая раскрывается через широкий разброс в репродуктивной эффективности мужчин. Чем больше доля высокого качества спермы, меньшее количество вязки, необходимые для успешного оплодотворения яйцеклетки. Однако, для достижения плодородия, морфологически нормальных сперматозоидов полагаются на пропульсивной силы, порожденных их жгутики для доступа к сайту оплодотворения, а также проникают вителлинового1 (ZP; в случае млекопитающих) или внутренний наблюдаться слой2 (IPVL; в случае птиц и рептилий) яйцеклетки после природных спаривания или искусственного оплодотворения (МА). Определение спермы качества необходима для использования в вспомогательных репродуктивных технологий3 (искусство) и выбор размножения самцы использоваться в AI программ4. С другой стороны успех искусства исключительно зависит от точной оценки качества спермы. Чтобы определить функциональные характеристики спермы были разработаны ряд лабораторных тестов. Наиболее важными параметрами являются морфологии сперматозоидов, жизнеспособность, мобильность, капацитации (птичий спермы не требуют капацитации5), реакция Акросома (AR; экзоцитоз и выпуска протеолитического фермента от Акросома сперматозоида), спермы проникновение ZP или IPVL и оплодотворение6,,78,9,10,11. Меры плодородия только не обеспечивают точную оценку оплодотворяющей способности спермы населения11. Меры несколько событий, приведших к оплодотворению яйцеклетки позволяют соответствующее представление производительности отдельных сперматоцитах7.
Методология, разработанная для измерения спермы функция главным образом вегетационных. Например в птичий спермы, жизнеспособность, мобильность и проникновения IPVL являются наиболее распространенные параметры, используемые для оценки спермы качества8,,1112. Количество живых сперматозоидов в эякуляте играет решающую роль для выживания спермы, потому что наличие большого числа погибших сперматозоидов в сперме влияет на качество спермы. Это усиливает производство реактивнооксигенных видов в сперме и вызывает оксидативного повреждения живых сперматозоидов13. Спермы мобильности, емкости для flagellar движения птичьего спермы против сопротивления при температуре тела, как известно играть непосредственную роль в обеспечении оплодотворение8. Хорошо известно, что мобильность положительно коррелирует с уровнем рождаемости и, таким образом, основным фактором, определяющим рождаемости8. Однако мобильный спермы также должны иметь возможность пройти AR и проникать IPVL11. IPVL проникновения анализов учитывать каждый спермы, которая участвует в процессе оплодотворения11.
В применении искусства эякулята обычно обрабатывается максимальной концентрации спермы высокого качества и свести к минимуму концентрацию низкого качества спермы. После сбора спермы доля спермы высокого качества можно обогатить через процедуры разделения спермы, широко используется в промышленности и научно-исследовательских методов. Многие из этих процедур были разработаны, все с соответствующие преимущества и недостатки, но все они используют неоднородный характер спермы, чтобы собирать только спермы с высокой оплодотворяющей способности. Эти процедуры включают в себя методы миграции сперматозоидов, присоединение столбца фильтрации и плотности градиентного центрифугирования (ДГК)14,,1516,,1718,19 , 20. среди доступных методов, было установлено быть очень простой, повторяемые, экономически эффективным и эффективным в изоляции максимальное количество спермы высокого качества для использования в искусстве с целью максимизации шансов оплодотворение14 ДГК , 15. Кроме того, ДГК не вредные для спермы клеточной мембраны. Напротив методы миграции спермы собирают только постепенно мобильных спермы18,19, но количество спермы собраны очень низка, что делает его неэффективным в сборе большого количества спермы18, 20. присоединение столбца фильтрации является очень эффективным в фильтрации высокомобильных спермы сперма17; Однако она стремится быть injurious к спермы мембраны20,21.
В технике ДГК наиболее часто используемые субстрат для генерации градиент плотности — Percoll, который состоит из кремнезема коллоидных частиц в polyvinylpryrolidone. Percoll плотность градиентного центрифугирования (PDGC) может быть либо непрерывные или дискретные но Дискретные градиент наиболее часто используется для изоляции высокодоходных высокомобильных спермы13,16,20. В дискретные градиент ниже плотности СМИ плавает выше выше плотность средств массовой информации, создавая градиент, увеличение плотности от верхней до нижней части Конические трубки. Это создает границы на стыке двух СМИ различной плотности. Эффективность PDGC является производным от двух факторов: 1) движителя способность отдельных клеток спермы и 2) тенденцию иметь увеличение плотности клеток спермы с высокой структурной целостности. Сперматозоиды с более высокой мобильностью способны лучше крест из нижней плотности СМИ и проникать в более высокой плотности СМИ. Нижняя подвижность сперматозоидов, скорее всего, попасть в ловушку на границе, созданный интерфейс между СМИ различной плотности. Сперматозоиды с высокой структурной целостности и мобильность, как правило, имеют более высокую плотность, чем мертвым, ненормальное или низкой мобильных клеток спермы. Когда центробежная сила применяется в PDGC, это облегчает движение сперматозоидов с различной плотности в их соответствующие места в градиенте.
В общей практике после PDGC, мягкие лепешки спермы с высокой рождаемостью потенциал в нижней части Конические трубки собирается, и остаток отбрасывается. Однако недостаточно преимуществом этого метода является его способность разделения клетки спермы на несколько групп, основанные на качественных различий. Для исследовательских целей разделение спермы по степени качества, используя метод PDGC позволяет для изучения качества спермы как она относится к физиологической, Метаболомные и протеомных различия. Здесь мы стремимся к деталям, как эта техника может использоваться для разделения спермы по качеству, а также продемонстрировать эти различия в качестве, используя ранее установленных эозина nigrosin жизненно пятная для жизнеспособности, Accudenz assay для мобильности и сперма IPVL assay взаимодействия для проницаемость.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:824px;" width="825">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Accudenz</td>
			<td style="width:323px;">Accurate Chemical and Scientific Corporation, Westbury, NY, USA</td>
			<td style="width:119px;">AN7050</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Percoll&#160;</td>
			<td style="width:323px;">Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA</td>
			<td style="width:119px;">P7828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Schiff&#8217;s reagent</td>
			<td style="width:323px;">Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA</td>
			<td style="width:119px;">3952016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">TES</td>
			<td style="width:323px;">Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA</td>
			<td style="width:119px;">T1375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Eosin Y</td>
			<td style="width:323px;">Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA</td>
			<td style="width:119px;">E4009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nigrosin</td>
			<td style="width:323px;">Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA</td>
			<td align="right" style="width:119px;">198285</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ST 40R Centrifuge&#160;</td>
			<td style="width:323px;">Thermo Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td align="right" style="width:119px;">75004524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">DU 530 Life Sciences UV/Vis Spectrophotometer</td>
			<td style="width:323px;">Beckman Coulter, Brea, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>No catalogue is found</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">Olympus IX 71 Inverted Fluorescence and Phase Contrast Microscope</td>
			<td style="width:323px;">Olympus America Inc., PA, USA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>No catalogue is found</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sperm collection of differential quality using density gradient centrifugation

В половом размножении мужских гамет или сперматозоид предохранители с женские гаметы довести о оплодотворения. Однако большое количество сперматозоидов с подкормки способность обязаны взаимодействовать с женские гаметы обеспечить оплодотворения. Таким образом имеет решающее значение для успешного воспроизводства оплодотворяющая способность отдельных клеток спермы. Плотность градиентного центрифугирования была использована на протяжении нескольких десятилетий как воспроизводимость, быстрый, эффективный, действенный и чрезвычайно гибкой метод собирать только высокого качества спермы, чтобы использоваться в вспомогательных репродуктивных технологий. Протоколы, которые мы описали здесь сосредоточена на использовании разрывных Percoll плотность градиентного центрифугирования (PDGC) метода изолировать три отдельных популяций спермы петуха, их качество. Мы были в состоянии собрать низко-, средне - и высокое качество спермы. Мы также обсудим воспроизводимые протоколы, которые влекут за собой определяющих потенциал фертильности спермы путем оценки их жизнеспособности, мобильность и проницаемость. Коллекция спермы на их качество, с использованием метода PDGC будет полезно точно и тщательно характеризуют спермы с дифференциальной рождаемости потенциал.

PDGC техника привела к собственный разделения трех слоев спермы по степени качества всех параметров. Спермы отделяет в слой высокого качества ниже выше плотность раствора, среднего качества слой между тем выше и ниже плотности раствора и низкого качества слой выше нижн...

Watch this Scientific Journal Video about Sperm Collection of Differential Quality Using Density Gradient Centrifugation at JoVE.com

Sperm Collection of Differential Quality Using Density Gradient Centrifugation

В этой статье мы стремимся описывают производительность метода градиентного центрифугирования плотность и его применение в исследованиях физиологии спермы.

Коллекция спермы дифференциальной качества с использованием градиентного центрифугирования плотность

In sexual reproduction, a male gamete or sperm cell fuses with a female gamete to bring about fertilization. However, a large number of sperm cells with ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области физиологии спермы, такие как химические детерминаты качества спермы. Основным преимуществом этой техники является возможность разделить большое количество выборки по качеству, а также приспособляемости по сравнению с альтернативными методами. Хотя этот метод может обеспечить понимание различий в качестве спермы, он также может быть применен к другим образцам, таким как смешанные типы клеток или субклеточных компонентов с различной плотностью.Для начала сделайте два 3 миллилитровых разбавления Percoll в двух отдельных трубках. В чистой пробирке разбавьте 1 миллилитр образца спермы с 2 миллилитров PBS. Труба его осторожно смешать раствор.Добавьте 3 миллилитров нижней плотности солла в стерильную коническую трубку. Затем тщательно пипетки 3 миллилитров раствора Percoll более высокой плотности под раствором Percoll более низкой плотности. При наклоне конической трубки под углом 45 градусов, пипетка 3 миллилитров разбавленной спермы образца на вершине градиента плотности Percoll.После подготовки пустой трубки, центрифуга обе трубки на 1500 Gs в течение 20 минут. Убедитесь, что три различных слоя спермы образовались в ванне после центрифугации. С помощью пипетки собрать три слоя спермы, начиная с верхнего слоя, а затем средний слой, и заканчивая твердой гранулы в нижней части трубки.Перенесите каждый из слоев в стерильную микро центрифугу. Разбавить каждый из образцов спермы с 1,5 миллилитров PBS и центрифуги образцов на 1500 Gs в течение десяти минут. Наконец, слить супернатант и воссоздать гранулы с подвижности буфера.В этом протоколе метод центрифугации плотности Percoll, или PDGC, был использован для того чтобы отделить образец semen в 3 определенных слоя. Сперма разделяется на высококачественный слой ниже раствора более высокой плотности, слой среднего качества между решениями более высокой и низкой плотности и слой низкого качества выше раствора более низкой плотности. Об этих различиях в качестве спермы свидетельствуют различия в жизнеспособности, подвижности и прояснености.При попытке этой процедуры, важно помнить, что образцы должны быть доведены до комнатной температуры. Успех PDGC зависит от тщательной подготовки градиента, а также тщательного сбора изолированных слоев. После его развития, этот метод проложил путь для наших исследований в области периомии спермы для изучения био маркеров плодородия у птичьих видов.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Analytical Chemistry

Biology

Unit 1

Introduction to Separation Methods

SCIENTISTS IN ACTION

Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

Сбор спермы и искусственного осеменения Мыши

Rodents of the genus Peromyscus (deer mice) are the most prevalent native North American mammals.  Peromyscus species are used in a wide range of research ...

DNA Extraction from 0.22 &mu;M Sterivex Filters and Cesium Chloride Density Gradient Centrifugation

DNA Extraction from 0.22 ÃƒÅ½Ã‚Â¼M Sterivex Filters and Cesium Chloride Density Gradient Centrifugation

Экстракции ДНК из 0,22 мкм Фильтры Sterivex и цезия хлорид центрифугирования в градиенте плотности

This method is used to extract high molecular weight genomic DNA from planktonic biomass concentrated on 0.22 &mu;M Sterivex filters that have been ...

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

В естественных условиях центрифугирования эмбрионов дрозофилы

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in ...

Preparation of Quality Inositol Pyrophosphates

Подготовка Качество Инозитол пирофосфаты

Myo-inositol is present in nature either unmodified or in more complex phosphorylated derivates. Of the latest, the two most abundant in eukaryotic cells ...

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃƒâ€šÃ‚Â·Cryo Kit

Мышь Криоконсервация спермы и восстановление использованием I · Cryo Kit

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies.  Many of these ...

Determination of Protein-ligand Interactions Using Differential Scanning Fluorimetry

Определение белков-лиганд с использованием дифференциальной сканирующей флуориметрии

A wide range of methods are currently available for determining the dissociation constant between a protein and interacting small molecules. However, most ...

Isolation of Intact Mitochondria from Skeletal Muscle by Differential Centrifugation for High-resolution Respirometry Measurements

Выделение неповрежденном Митохондрии из скелетных мышц с помощью дифференциального центрифугирования для измерения респирометрии высокого разрешения

Mitochondria are involved in cellular energy metabolism and use oxygen to produce energy in the form of adenosine triphosphate (ATP). Differential ...

Avian Semen Collection by Cloacal Massage and Isolation of DNA from Sperm

Птичий Семен коллекции клоаки массаж и изоляции ДНК из спермы

Collection of semen may be useful for a wide range of applications including studies involving sperm quality, sperm telomere dynamics, and epigenetics. ...

Fish Sperm Assessment Using Software and Cooling Devices

Рыбы спермы оценки с использованием программного обеспечения и охлаждающих устройств

For gamete quality evaluation, there are innovative, rapid, and quantitative techniques that can provide useful data for aquaculture. Computerized systems ...

Field Identification of Matricaria chamomilla using a Portable qPCR System

Field Identification of Matricaria chamomilla using a Portable qPCR System

Полевая идентификация ромашки Matricaria с помощью портативной системы qPCR

Quality control in botanical products begins with the raw material supply. Traditionally, botanical identification is performed through morphological ...