Name: in vitro scratch assay to demonstrate effects of arsenic on skin cell migration
Uploaded: 2019-02-23T13:00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration at JoVE.com

מחקר דיווח בפרסום זה נתמך על ידי המכון הלאומי על מיעוט בריאות פערים בשרותי בריאות של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר U54MD012388. התוכן הוא אך ורק באחריות המחברים, ואינם מייצגים בהכרח את הנופים הרשמי של מכוני הבריאות הלאומיים.

<ol>
	<li>Diegelmann, R., Evans, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing:+an+overview+of+acute,+fibrotic+and+delayed+healing.">Wound healing: an overview of acute, fibrotic and delayed healing.</a> Frontiers in BioScience. 9, 283-289 (2004).</li><li>Braiman-Wiksman, L., Solomonik, I., Spira, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+insights+into+wound+healing+sequence+of+events.">Novel insights into wound healing sequence of events.</a> Toxicologic Pathology. 35, 767-779 (2007).</li><li>Michelson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Platelets. , (2013).</li><li>Aikawa, M., Schoenbechler, M. J., Barbaro, J. F., Sadun, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+rabbit+platelets+and+leukocytes+in+the+release+of+histamine.+Electron+microscopic+observations.">Interaction of rabbit platelets and leukocytes in the release of histamine. Electron microscopic observations.</a> American Journal of Pathology. 63 (1), 85-98 (1971).</li><li>Liang, C., Park, A., Guan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+scratch+assay:+A+convenient+and+inexpensive+method+for+analysis+of+cell+migration+in+vitro.">In vitro scratch assay: A convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro.</a> Nature Protocols. , 329-333 (2007).</li><li>Pinto, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bench-top+in+vitro+wound+assay+to+evaluate+wound+closure.+Applied.">A bench-top in vitro wound assay to evaluate wound closure. Applied.</a> In Vitro Toxicology. 2 (3), 151-156 (2016).</li><li>Pinto, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+mitigates+the+negative+effects+of+arsenic+contamination+in+an+in+vitro+wound+model.">Estrogen mitigates the negative effects of arsenic contamination in an in vitro wound model.</a> Applied In Vitro Toxicology. 4 (1), 24-29 (2018).</li><li>Roubelakis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+plasma+(PRP)+promotes+fetal+mesenchymal+stem/stromal+cell+migration+and+wound+healing+process.">Platelet-rich plasma (PRP) promotes fetal mesenchymal stem/stromal cell migration and wound healing process.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 10 (3), 417-428 (2014).</li><li>Shibata, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiponectin+regulates+cutaneous+wound+healing+by+promoting+keratinocyte+proliferation+and+migration+via+the+ERK+signaling+pathway.">Adiponectin regulates cutaneous wound healing by promoting keratinocyte proliferation and migration via the ERK signaling pathway.</a> Journal of Immunology. 189 (6), 3231-3241 (2012).</li><li>Mendonca, R. J., Coutinho-Netto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+aspects+of+wound+healing.">Cellular aspects of wound healing.</a> Anais Brasileiros de Dermatologia. 84 (3), 257-262 (2009).</li><li>Beem, E., Segal, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+stability+and+sensitivity+of+cell+fluorescent+labels+when+used+for+cell+migration.">Evaluation of stability and sensitivity of cell fluorescent labels when used for cell migration.</a> Journal of Fluorescence. 23 (5), 975-987 (2013).</li><li>Gentry, P. R., Clewell, H. J., Greene, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+recent+advances+in+research+on+arsenic+cancer+risk+assessment.">The impact of recent advances in research on arsenic cancer risk assessment.</a> Regulatory Toxicology and Pharmacology. 69, 91-104 (2014).</li><li>Beamer, P. I., Klimecki, W. T., Loh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+children's+urinary+CC16+levels+with+arsenic+concentrations+in+multiple+environmental+media.">Association of children's urinary CC16 levels with arsenic concentrations in multiple environmental media.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health.pii: E521.2016:13. , (2016).</li><li>Robertson, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arsenic+in+ground-water+under+oxidizing+conditions,+southwest+United+States.">Arsenic in ground-water under oxidizing conditions, southwest United States.</a> Environmental Geochemistry and Health. 11, 3-4 (1989).</li><li>Foust, R. D., Mohapatra, P., Compton-O'Brian, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Groundwater+arsenic+in+the+Verde+Valley+in+central+Arizona,+USA.">Groundwater arsenic in the Verde Valley in central Arizona, USA.</a> Applied Geochemistry. 19, 251-255 (2004).</li><li>Uhlman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Arsenic in Arizona Ground Water: Source and Transport Characteristics. , (2008).</li><li>Agusa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+exposure+to+arsenic+from+drinking+water+in+Vietnam.">Human exposure to arsenic from drinking water in Vietnam.</a> Science of the Total Environment. , (2014).</li><li>Ayotte, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+temporal+variability+of+arsenic+in+groundwater+used+for+drinking+water+supply+in+the+United+States.">Factors affecting temporal variability of arsenic in groundwater used for drinking water supply in the United States.</a> Science of the Total Environment. , (2014).</li><li>Dummer, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geostatistical+modeling+of+arsenic+in+drinking+water+wells+and+related+toenail+arsenic+concentrations+across+Nova+Scotia,+Canada.">Geostatistical modeling of arsenic in drinking water wells and related toenail arsenic concentrations across Nova Scotia, Canada.</a> Science of the Total Environment. , (2014).</li><li>Sorg, T. J., Chen, A. S., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arsenic+species+in+drinking+water+wells+in+the+USA+with+high+arsenic+concentrations.">Arsenic species in drinking water wells in the USA with high arsenic concentrations.</a> Water Research. 48, 156-169 (2014).</li><li>Beamer, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+Children's+Urinary+CC16+Levels+with+Arsenic+Concentrations+in+Multiple+Environmental+Media.">Association of Children's Urinary CC16 Levels with Arsenic Concentrations in Multiple Environmental Media.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 13, (2016).</li><li>Pomari, E., Dalla Valle, L., Pertile, P., Colombo, L., Thornton, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracrine+sex+steroid+synthesis+and+signaling+in+human+epidermal+keratinocytes+and+dermal+fibroblasts.">Intracrine sex steroid synthesis and signaling in human epidermal keratinocytes and dermal fibroblasts.</a> The FASEB Journal. 29 (2), 508-524 (2015).</li><li>Gotsulyak, Y., Kosach, R., Cherednyk, V., Tykhonkova, O., Khoruzhenka, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+cell+motility+evaluation+in+scratch+assay.">Optimization of cell motility evaluation in scratch assay.</a> Biopolymers and Cell. 30, 223-228 (2014).</li><li>Goetsch, K. P., Niesler, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+scratch+assay+for+in+vitro+skeletal+muscle+wound+healing+analysis.">Optimization of the scratch assay for in vitro skeletal muscle wound healing analysis.</a> Analytical Biochemistry. 411, 158-160 (2011).</li><li>Harishkumar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revealing+the+mechanism+of+in+vitro+wound+healing+properties+of+citrus+tamurana+extract.">Revealing the mechanism of in vitro wound healing properties of citrus tamurana extract.</a> BioMed Research International. 13, (2013).</li><li>Johnston, S. T., Simpson, M. J., McElwain, D. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+much+information+can+be+obtained+from+tracking+the+position+of+the+leading+edge+in+a+scratch+assay?.">How much information can be obtained from tracking the position of the leading edge in a scratch assay?.</a> Journal of the Royal Society Interface. 11, 1-9 (2014).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

היישום של זה וזמינותו מספק הערכה תפוקה גבוהה ומתוזמן של הגירה הסלולר, ייתכן לתרגם ישירות למערכות פיזיולוגיות מורכבות5,6,7. מסיבה זו, המודל המוצע ספסל-העליון היה מכוון, מתורגלת כדי להעריך את ההשפעות של סוכני טיפולית רעלנים סביבתיים שונים על6ריפוי הפצע. הריכוזים של ארסן משמש במחקר הנוכחי שנמצאו רלוונטיים לסביבה באמצעות חיפוש ספרות נרחבת של רמות חשיפה מוכרות, ובסיסים של סקירה רטרוספקטיבית של נתונים שונים14,15, 16,17,18,19,20,21. שימוש זה במבחנה מאפס assay הדגימו כי החשיפה ריכוז ארסן בתוך הגבוהה, אבל טווח הרלוונטיות. לסביבה, נדחתה סגירת הפצע (העברה הסלולר).
ספסל זה הטופ מודל הועסק גם לבודד וללמוד קו תא בודד (פיברובלסט) להבין יותר איך פיברובלסט ההעברה תורמת פצע תוצאות הריפוי. יתר על כן, קשה ללמוד את הפונקציות של קו תא בודד במערכות מורכבות ויוו עם רבים אחרים תאים ורקמות הנוכחי יכול להפריע הניתוח. בנוסף, וזמינותו מספק אמצעי להשגת נתונים סגירת הפצע אחוז הכמותיים למחצה יכול לשמש למטרה ספציפית המנגנונים התאיים שדרכו תרכובות עשויים להשפיע ריפוי הפצע. לדוגמה, תאים המשמשים וזמינותו גירוד יכול להיות, המאוחסן ריאגנט הרצוי ונשתמש בהם בביטוי הגנים (אות ה-mRNA) או ביטוי חלבון מבחני22. מידע זה יכול להיות שימושי לחוקר אם הם מבקשים להבין מה אותות או חלבונים עשוי ברובו תורמים לשינויים ההעברה הסלולר בנוכחות טיפולים (קרי, ארסן) משתנות22.
האדם fibroblasts עורי neonatal נבחרו לעבודה זו על בסיס תפקידם בולטים בריפוי הפצע. עם זאת, פרוטוקול assay גירוד זה יושם באמצעות סוגי תאים שונים עבור מגוון של מטרות המחקר. לדוגמה, אומץ וזמינותו מאפס לתוך השדה לאונקולוגיה ללמוד עיכוב העברה של תרופות כימותרפיה23; נדידת תאים שרירי השלד, התפשטות של דיפוזיה24; כדי לחקור את ההשפעה של תמציות צמחים על ההעברה הסלולר25; כדי להבין כיצד תקין ההגירה והתפשטות לתרום פצע ריפוי9. בנוסף, עיתון הקודם על-ידי. פינטו ואח להעריך את ההשפעות של אורניום (U), טסיות דם עשיר פלזמה (PRP) על העברה hDFn שימוש assay מאפס6. מטרת עבודה זו היתה כדי להבין את היקף אשר assay הזה יכול לבחון את ההשפעה של סוכן חשבתי כדי להאט את הסלולר ההעברה (U), כמו גם סוכן חשבתי כדי להאיץ את הסלולר ההעברה (PRP). וכפי שניתן לראות את העבודה הנ ל, מחקר על ידי חוקרים אחרים, היישום של גירוד וזמינותו יש פוטנציאל גבוה לשימוש ניסיוני מודלים שונים26. למרות הפרטים שרשמת את השיטות השונות אמור להיות צפוי בין חוקרים ניסויים. לדוגמה, תעריפי הסלולר ההעברה סביר משתנים בהתבסס על הקו תא בשימוש, בנוסף יסודות קורט הנדרשים לצורך סוגי תאים ייחודיים. רבים מן התצפיות חשוב כדי לסייע תא התשואה הכדאיות מפורטים כהערות לאורך כל פרוטוקול זה. עם זאת, מומלץ מאוד כי החוקרים ההמלצות של היצרן תנאי הגידול האופטימלית, וכדי להשתמש בשיטה זו כמו הוראה משלים עבור תא כללי תרבות עבודה.
אמנם וזמינותו מאפס רב-תכליתי במיוחד עבור חקר פעילות תאית; הטיות בלתי צפויים שעלולים להתעורר במדידת טכניקות. לדוגמה, בעת שימוש ImageJ לעקיבה ידנית תא העברה חזיתות, וריאציה יכולים להתקיים בין משתמשים, אשר יכול להגביל איסוף נתונים נציג ודיוק. יש גם לציין כי ההעברה חזיתות יש לקרוא עיוורים לטיפול כדי למזער את המשתמש הטיה. יתר על כן, זיהוי ידני העברה חזיתות עלול לגרום טעות בחישוב של המרחק הממוצע בשל היווצרות pseudopod על ידי התאים ואת היכולת שלהם להגיע adhesions מוקד טופס, אשר יכול להיות חזותי מטעה. באופן דומה, השימוש של פלורסנט "תא גשש" צבענים במשטח תא או חלבונים גרעיניים כדי לזהות ההעברה עשוי שלא במתכוון לתקן תאי וכתוצאה מכך אי דיוקים כאשר מודדים את ההעברה הסלולר לאורך זמן. מומלץ הפקדים המתאימים חיובי או שלילי להיות רשום בתוך הניסוי ועד ישבנים לגמרי ההשפעה של הטיפול על הקווים התא. המנהג הזה assay יש להשלים כהוקרה על מגבלותיו. Assay הזה אינו מבטיח תוצאות ההעברה הסלולר המתקבל חוץ גופית בתוך ניסויים יהיה לתרגם ישירות לתוצאות ויוו . פצע ריפוי וסלולריות ההעברה במערכת החיים מורכבים מערבת מספר רב של סוגי תאים, אותות מולקולריים; שלכל אחד מהם יש פוטנציאל להשפיע על תגובות ריפוי.
לסיכום, וזמינותו מאפס נמצאה לספק תפוקה גבוהה ההקרנה של הגירה הסלולר בתגובה שינוי סביבות6,25. אנו במיוחד מנוצל פרוטוקול זה בהצלחה לזהות שינויים בהעברה הסלולר בעקבות חשיפה ארסן במינונים שונים הרלוונטיים לסביבה. נתונים אלה סיפקו הצדקה לשימוש וזמינותו מאפס כדי לקדם מחקר והערכה של המסלולים מכניסטית של הגירה הסלולר assay הזה, איך המסלולים הללו שונו על ידי חשיפה ארסן.

ריפוי הפצע כוללת סדרה מורכבת של חופפים צעדים המערבות שונים סוגי תאים מולקולות איתות, מטריצה חוץ-תאית רכיבים1. יחד, רכיבים אלה לעבוד ביחד כדי להשיג רזולוציה הפצע או תיקון, מה שמוביל בסופו של דבר היווצרות צלקת שהותירה מגן תלוי בדרגת טראומה1. כדי ללכוד את התהליכים הנפרדים והפונקציות של הפצע ריפוי בניסוי אחד קשה; צעדים בודדים בתוך תהליך ריפוי הפצע שצריך להיות מזוהה, נבדק בנפרד. בין הצעדים רבים של ריפוי הפצע, התהליך של העברה הסלולר נחשב קריטית בעת הערכת שיעורי הריפוי2. ההעברה הסלולר יכול להיות שנצפו בכל השלבים של ריפוי הפצע, ולכן מחייבת עוד יותר הבנה של מה שינויים ל נדידת תאים שיכולים להשפיע סגירת הפצע. לדוגמה, הגירה הסלולר הוא ראה שני בדלקת בשלב מוקדם ומאוחר, עם צבירת קרישת הדם, טסיות דם באתר הפצע3. אירועים אלה למנוע איבוד דם מוגברת על ידי יצירת סתימה זמנית למלא אזורים פצוע ללא רקמה3. טסיות הדם במחזור לסנתז, מפרישים מגשרים vasoactive יחד עם גורמים chemotactic, איזה אות יחד להעברת ליקוציט דלקתיות (כדוריות דם לבנות) אל הרקמה הפצועים עבור תיקון4. Epithelialization מחדש מתרחשת בתוך שעות של פגיעה ברקמות, והיא כוללת כיסוי הפצע האתר באמצעות פעילות של הגירה של אפיתל keratinocytes כדי למנוע זיהום או פלישה של חלקיקים זרים כדי לאתר הפצע2. דוגמאות אלה ללכוד רק מספר נדידת תאים רבים פונקציות המשויכות ריפוי פצעים.
גירוד וזמינותו תיאר ומשמשת להבין טוב יותר את נדידת תאים ותפקידים רבים שלה ב-5,6ריפוי הפצע. Assay הזה נחשב פשטני, מספק תפוקה גבוהה ומאפשר החוקר לאסוף נתוני הגירה תא נציג. העברת מבחני בהצלחה הראו כי תרכובות מסוימות עשוי להאיץ או להאט את הקצב של ההעברה הסלולר6. יתר על כן, תוצאות אלו וזמינותו מספקים מידע הפיזיולוגיות translational יכול לשמש על מנת לגבש יעד טיפולי, מינון ריכוזים, ואת הגנים של עניין לפני ניסויים ויוו . וזמינותו מחייבת טכניקות התרבות התא הבסיסי, אספקה, קו תא לפי בחירתך, ולבחור טכנולוגיית הדמיה כדי ללכוד תנועה לאורך זמן או תנועה בתגובה לטיפולים.
הבדיקה ניתן בקלות מניפולציות או ייחודיות הנתפרות בהתאם לצרכים של החוקר. עם זאת, ישנם ארבע שאלות בסיסיות שיש לקחת בחשבון לפני הניסויים. מה ות כלליות או ספציפיות הוא/הם investigator(s) מנסה לענות? זה דבר נכון גם לגבי רוב ההשערות מונע מחקר; עם זאת, חיוני assay הזה כי זה יקבע רבות של הפרמטרים הדרושים כדי במדויק וענה לחלוטין ות. מה תא קו או תא קווים (אם מרובים) יש להשתמש כדי לייצג את מערכת הפיזיולוגיות נחקר? לדוגמה, בעורית פצע לימוד ריפוי, עורי פיברובלסט5,6,7, תאי הגזע8, או תקין עוריות9 עשוי להיחשב לייצג את אוכלוסיית תאים הנמצאים בדרך כלל שפע רקמת העור10. לחלופין, נויטרופילים, מקרופאגים או תאים דלקתיים אחרים יוכל להעריך במערכת זו לייצג את נדידת תאים של רכיבים אחרים של ריפוי הפצע בתוך רקמת העור10. בנוסף, זיהוי קו תא ספציפי חישובו תסייע לזהות נוגדנים אילו הם אופטימליים כדי לקדם פעילות חילוף החומרים של התא. איך נדידת תאים יהיה במעקב/עם תמונה? ישנן מספר טכניקות המשמשות להתבונן נדידת תאים בתוך צלחת או את הבקבוק. לדוגמה, או fluorescently תיוג תאים וצביעת באמצעות קרינה פלואורסצנטית או הדמיה קונאפוקלית כדי לעקוב אחר תאים מספקת קונטרסט חזק, המאפשר את החוקר להגדיר בבירור הסלולר לעומת הלא-סלולר מיקומים של התנועה הסלולרית11 . טכניקה נפוצה אחרת, המתוארים במחקר זה, הוא השימוש של מיקרוסקופ אור הפוך עם שלב ניגודיות6,7. חלופה זו ועד תא צבעי זריחה מאפשר למשתמש לחיות עקוב אחר תאים מבלי לתקן סופני תאים לפני הדמיה ומאפשר גם עבור לכידת תמונות של אותו בארות בודדים המכיל monolayers הפצועים של תאים על-פני זמן נקודות. מה התוצאה מודדת ישמש לניתוח? באמצעות הדימויים התאספו במהלך המחקר, נתונים יכול להיווצר בו ניתן להבין שינויים תעריפי הסלולר ההעברה. במעבדה שלנו, מיקרוסקופיים התמונות שנתפסו על מיקרוסקופ אור הפוך מועלות לתוכנה ניתוח התמונה, סגירת הפצע אחוז של שטח מסוכם. מתחת העקומה (AUC) מחושבים.
אנחנו ידגיש את השימוש הזה assay התירי שינויים פיברובלסט עורי ההעברה בנוכחות מזהם סביבתי ידוע, ארסן ספציפי. ארסן הוא מתכות למחצה המתרחשים באופן טבעי נמצא בתוך קרום כדור הארץ. במקומות שונים נמצאו עם רמות גבוהות של ארסן, אשר מהווה סיכון לאנשים המתגוררים בסמוך מיקומים אלה. כתוצאה מכך, מקורות מזון ומים הוכחו יש רמות גבוהות של ארסן זיהום, אשר יגבירו את הסיכויים לאנשים להיות חשופים ארסן. חשיפה סביבתית ארסן הוכח להיות השלכות לטווח ארוך בריאות באוכלוסיות אנושיות מעל או אפילו מתחת את הנוכחי ארצות הברית סביבתי הגנת סוכנות (USEPA) מקס מזהם רמת (MCL) של 10 ppb (10 µg/L)12, 13. למרות USEPA הגדר MCL הזה, כאילו זה בטוח לשתייה גבולות, ריכוזים ארסן זה לחרוג ממגבלה זו אינן נדירות במקורות מים ברחבי העולם. במערב ארצות הברית, תהום, במי ו מעיינות רבים תועדו להכיל בנוגע ארסן14רמות. לדוגמה, בעמק ורדה, AZ, מונטזומה טוב מכיל 210 µg/L של ארסן15. מי תהום סביב נהר ורדה, AZ מכיל 16 µg/L ארסן בממוצע, עם השיא לערכים להגיע 1.3 mg/L15,16. ראוי לציין, ארסן ריכוזים ב בארות רבות במחסן ורדה נהר מים לחרוג µg/L 5015,16. עם הידע הזה, לסביבה הרלוונטיים ריכוזים ארסן היו נבחרים הטווח מתחת MCL-0.1 מיקרומטר (7.5 ppb), ללמוד מעל MCL-10 מיקרומטר (750 ppb) הנוכחית14,15,16 , 17 , 18 , 19 , 20 .
המידע שנאסף ניסויים אלה ישמש בתור מדד מוקדם של שינויים פוטנציאל ההעברה הסלולר המחירים ויוו פצע מזוהם עם ארסן. לאחר מכן, מערכת אזעקה ניתן לבחור מולקולות בהתבסס על תפקידו בקידום ריפוי הפצע והעברה הסלולר ולאחר פולימראז כמותיים בעתיד תגובת שרשרת (qPCR) המבוסס על גנים ביטוי ניסויים ייתכן מוגדר עם סיומו של הזרם מחקרים. אם ההעברה בבתי assay הזה לשנות בנוכחות ארסן, מטרות גנים ספציפיים המעורבים בהעברה הסלולר עשוי להיות היעד עבור השפעות מזיקות של ארסן, ובכך עשוי להיות המנגנון של הפרעה.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Class II A/B3 Biological Safety Cabinet</td>
			<td>Forma Scientific</td>
			<td>15201-816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile Gloves</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>55082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Bath</td>
			<td>Precision</td>
			<td>Model 182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Q080318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CPR Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>349702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical Scale</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>I093 1125062111P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighting paper</td>
			<td>VWR</td>
			<td>H351125781212A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biohazard bags</td>
			<td>Fisherbran</td>
			<td>01-830A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Jacketed CO2 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>309739-31053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks Balanced Salt Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175-095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10566-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Pipettor</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>140685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p200 Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p20 Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denominator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D59707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 tissue flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430725U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Conical Tube</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>05-539-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-678-11D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-678-11E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Marker</td>
			<td>Securline</td>
			<td>92167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wipes</td>
			<td>Kintech</td>
			<td>34155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>63-67-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Filter Pipet Tips</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>16160210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach</td>
			<td>Great Value</td>
			<td>220-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovial Rack</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>5030-0505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemacytometer</td>
			<td>Gizmo Supply</td>
			<td>B00SCOGY56</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tube Rack</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Waste Beaker</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-678-11B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Edge Ruler</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human neonatal dermal fibroblasts (hDFn)</td>
			<td>lot: 1734, 2902</td>
			<td>106-05n</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rstudio Statistical Software</td>
			<td></td>
			<td>ver: 3.5.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td>ver: 1.8.0_112</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro scratch assay to demonstrate effects of arsenic on skin cell migration

הבנת המנגנונים הפיזיולוגיות של ריפוי הפצע היה המוקד של מחקר שוטף במשך שנים רבות. מחקר זה מיתרגם ישירות על שינויים קליניים סטנדרטים משמשת לטיפול פצעי הפחתת התחלואה והתמותה בחולים. ריפוי הפצע הוא תהליך מורכב שדורש אינטראקציה אסטרטגית תאים ורקמות, הפונקציה. אחת מהפונקציות חשובה ביותר רבים של ריפוי הפצע היא העברה הסלולר אישיים וקיבוציים. על פגיעה, תאים שונים מהדם, סביב רקמות חיבור ואפיתל במהירות העברת האתר הפצע באמצעות גירויים כימיים ו/או גופניים. תגובה זו ההעברה יכולה להכתיב במידה רבה את התוצאות ואת ההצלחה של פצע ריפוי. להבנת תפקוד התאים הספציפי הזה חשוב translational רפואה זה יכול להוביל ריפוי תוצאות משופרות הפצע. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול המשמש כדי להבין טוב יותר את ההעברה הסלולר כפי שהוא נוגע ריפוי הפצע, איך שינויים בסביבת הסלולר יכול לשנות באופן משמעותי את התהליך הזה. במחקר זה דוגמה, עורי fibroblasts גדלו בתקשורת עם סרום שור עוברית (FBS) כמו טפט תרבויות מבחנות תרביות רקמה. התאים היו גילוח ורחיצה כירורגית הועבר תרביות רקמה יחס טוב 12 לוחות, גדל הנהרות 100%. כשמגיעים הנהרות, התאים טפט היו שרוט אנכית באמצעות טיפ pipet p200. ארסן מדולל בתקשורת תרבות בתוספת FBS נוספה בארות בודדים-לסביבה מינונים רלוונטי החל מ 0.1-10 תמונות נלכדו כל 4 שעות (ח) במשך 24 שעות ביממה באמצעות מיקרוסקופ אור הפוך להתבונן ההעברה הסלולר (פצע סגירת מעגל). תמונות בנפרד נותחו באמצעות תוכנת ניתוח התמונה, אחוז פצע הסגר חושבה. תוצאות מדגימים כי זרניך מאט ריפוי הפצע. טכניקה זו מספקת מסך הראשון מהיר וזול עבור הערכת ההשפעות של מזהמים על ריפוי הפצע.

גודל מדגם (n) עבור כל קבוצות טיפול היה n = 28. היו תאים בתרבית בהצלחה טכניקות aseptic הבאים ופרוטוקולים מעבדה (איור 1). שריטות אחיד נצפו על פני כל קבוצות טיפול עם הרוחב הממוצע מאפס מדידה 0.8 מ מ 0.4 מ מ (איור 2). קבוצות הבקרה היה שטח מסוכם הממוצע תחת הערך העקומה של 1,355.83; מיקרומטר 0.01 כקבוצות הטיפול היה ממוצע מסוכם תחת הערך העקומה של 1,366.21; מיקרומטר 0.1 כקבוצות טיפול ממוצע היה מסוכם תחת הערך העקומה של 1,326.24, מיקרומטר 1.0 כקבוצת טיפול היה ממוצע מסוכם תחת הערך העקומה של 1,295.10; סוף סוף 10 מיקרומטר קבוצת הטיפול היה שטח מסוכם הממוצע תחת הערך העקומה של 535.12, אשר היה נמוך מבחינה סטטיסטית לעומת כל קבוצות אחרות (p < 0.05) (איור 3). R-תוכנית לניתוח סטטיסטי שימש כדי להפעיל חד-כיווני אנובה עם התאמה פוסט הוק Tukey כדי לקבוע סטטיסטי הבדלים בין קבוצות הטיפול (p < 0.05).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58838/58838fig2.jpg"> איור 2: שריטה נציג assay תמונות על פני תקופה 20 h. תמונות A-D מייצגים הסלולר נדידה של תאים שליטה; תמונות E-H מייצג את ההעברה הסלולר של תאים מזוהם עם מיקרומטר 1.0 כמו; תמונות-L מייצגים הסלולר נדידה של תאים מזוהם עם 10 מיקרומטר בתור. מתמונות אלה, ברור כי ההעברה הסלולר מואטת בנוכחות ארסן. הדימויים שליטה מציגים לחלוטין "נרפא" שריטה לאחר 20 h, בעוד שתי הקבוצות כמו טיפול אחרים לא "נרפא". 10 מיקרומטר כטיפול עכבות סגר מוחלט לגמרי לאחר ה 24 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58838/58838fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58838/58838fig3.jpg"> איור 3: זרניך מאט את ההעברה הסלולר ב וזמינותו מאפס. תמונות נלכדו במשך 24 שעות ביממה לבחון שינויים תעריפי הסלולר ההעברה בנוכחות ריכוזים שונים של ארסן. תמונות raw נותחו באמצעות תוכנה אוטומטיות (למשל, ב- MATLAB), איזה רוחב הפצע נמדד בתחילה, ואז מחושב אחוז הסגר, ולבסוף השטח מתחת לעקומה (AUC). קווי שגיאה מייצגים שגיאת התקן של הממוצע. 10 מיקרומטר כקבוצת טיפול סטטיסטית האטה ההגירה הסלולר של האדם עורי fibroblasts neonatal (hDFn), המוצגת על-ידי ערך חאן אל נמוך סטטיסטית, בהשוואה כל קבוצות טיפול אחרות באמצעות חד-כיווני אנובה Tukey פוסט הוק התאמה (p < 0.05). הבדלים סטטיסטיים מיוצגים על ידי האותיות "A" ו- "B", אשר התקבלו באמצעות שימוש בשיטת להציג מכתב קומפקטי זמינות בתוכנית-R. טיפולים שאינם שותפים מכתב משותף הם משמעותיים מבחינה סטטיסטית אחד מהשני (p < 0.05). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58838/58838fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration at JoVE.com

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

במבחנה לגרד Assay כדי להדגים את השפעת הרעל על נדידת תאים בעור

מחקר זה מתמקד מודל במבחנה של הפצע הריפוי (גירוד assay) בתור מנגנון לקביעת מזהמים סביבתיים איך כגון ארסן השפעה הסלולר ההעברה. התוצאות מדגימים כי assay חוץ גופית בתוך זה מספק אינדיקציות מהיר ולא מוקדם של שינויים ההעברה הסלולר לפני ניסויים ויוו .

Understanding the physiologic mechanisms of wound healing has been the focus of ongoing research for many years. This research directly translates into ...

הגירה תאית היא תהליך ריפוי פצעים קריטי שיכול לשנות באופן דרסטי את התוצאה של פצע ריפוי. פרוטוקול זה מאפשר לחוקרים להבין טוב יותר את ההשפעה של תרכובות שונות על הגירה תאית במהלך ריפוי פצעים. אשר לעתים קרובות יכול להוביל אסטרטגיות טיפול ממוקדות לרפואה קלינית.בדיקת השריטה היא גישה חסכונית ותפוקה גבוהה ליצירת נתוני ריפוי פצעים משמעותיים לפני בדיקות vivo יקרות ועתימות זמן. תווי השריטה כשיטה רלוונטיים במיוחד יישומים לריפוי פצעים. באופן ספציפי ביותר, העור.עם זאת, ההתלהמות היא באמת מזרע הגירה, ויתן להחילה על כל סוג תא שבו העברת תאים מעניינת למדידה או ללכידה. בדומה לתרבות תאים ורקמות קלאסית, נהלי הפעלה סטנדרטיים, הכשרה, טכניקה ותרגול, תרגול, תרגול. אלה הם המפתח להצלחה עם הראיה שריטה.הדגמת ההליך תהיה נתן קרוז, סטודנט לתואר שני, ואוסקר לוג'אן, חוקר לתואר ראשון. כדי להתחיל בהליך זה, להכין את ארון biosafety II באמצעות פתרון מים isopropyl 70% לבצע מגבון תברואה, החל הקירות האחוריים בצד, ועובד עד הבסיס. כמו כן, יש לנגב את כל החומרים שישמשו בהטלת הראיה לפני הצבתם בקבינט.לאחר מכן, להשיג בקבוקונים המכילים את קו התאים הרצוי cryopreserved, ולמקם אחד באמבט מים בעומק סנטימטר אחד ב 37 מעלות צלזיוס להפשיר. הוסף 10 מיליליטר של בינוני בתוספת 10%FBS לתוך בקבוק תרבות רקמת T75. פתח את הבקבוקון המכיל את מלאי התא, ושוכך בזהירות את הפתרון.ואז להעביר את התאים לתוך בקבוק T75. הסר מיליליטר אחד של מדיה מן הבקבוק, ולהעביר אותו בחזרה לתוך הבקבוקון, ולאחר מכן להעביר אותו בחזרה לתוך הבקבוקון כדי למקסם את תפוקת התא מן הבקבוקון. הדקו את מכסה הבקבוק וטלטלו אותו בעדינות כדי לפזר באופן אחיד את התאים בהשעיה על פני השטח כולו.לאחר מכן, סמן את הבקבוק עם המידע המוצג כאן, והצב אותו באינקובטור לח ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני במשך 72 שעות. ראשית, לאחזר את בקבוקון תרבות הרקמה מהאינקובטור, ולצפות בתאים דבק כמתואר בפרוטוקול הטקסט. שאפו את כל נפח המדיה מהבקבוק והעברתו למיכל פסולת.מוסיפים חמישה מיליליטר של תווי מלח מאוזנים לבקבוק, ומטלטלים אותו בעדינות כדי לשטוף כל מדיה עודפת, תאים מתים או פסולת. לאחר מכן להסיר את כל נפח של תסכולת מלח מן הבקבוק להשליך אותו לתוך מיכל פסולת. לאחר מכן, מוסיפים שני מיליליטר של טריפסין לבקבוקון, ומטלטלים אותו בעדינות כדי לפזר את האנזים על התאים הדבוקים.ודא כי המשטח חסיד הוא רווי לחלוטין, ולה מניחים את בקבוק הרקמה באינקובטור במשך שתיים עד שלוש דקות. לאחר מכן, הקישו בעדינות על צד הבקבוק שלוש עד חמש פעמים כדי להקל על ניתוק התאים. נגב את הבקבוק עם 70% אלכוהול, והצב אותו בארון biosafety.הוסף חמישה מיליליטר של מדיה מלאי לבקבוק הרקמה כדי לעצור את תגובת מצע האנזים. שאפו את כל נפח הנוזל מהבקבוק, והעבירו אותו לצינור חרוט סטרילי של 15 מיליליטר. צנטריפוגה ב 200 פעמים g וב 25 מעלות צלזיוס במשך חמש דקות.לאחר מכן השתמשו ב-70% אלכוהול כדי לנגב את הצינור המכיל את התאים המו גלולות, והצבו אותו בתוך הארון הביו-בטיחותי. פיפטה מחוץ לתקשורת, משאיר מאחור כ 250 microliters של נוזל עם גלולת התא. הפעל את החלק התחתון של הצינור חרוט על פני חריצי הבקבוקון של מתלה צינור microcentrifuge כדי ליצור רטט מהיר להפריע ולתלות מחדש את גלולת התא.כאשר הושלמה כראוי, פתרון התא החדש יופיע כתערובת מעוננת ללא גלולה שנותרה. הוסף שני מיליליטר של מדיה לזולת התא. פיפטה התאים בעדינות למעלה ולמטה בצד הצינור 20 פעמים כדי לשבור את כל הגושים.ולתקליט את נפח המתלים הכולל של התא. לאחר מכן, השתמש פיפטה סטרילית להוסיף 20 microliters של מלאי כחול trypan ל הבאר ריקה של צלחת 96 היטב. באמצעות קצה פיפטה סטרילי, להעביר 20 microliters של מלאי התא מן הצינור 15 מיליליטר ל הבאר המכילה את הפתרון הכחול trypan.פיפטה בעדינות לערבב את התוכן ולהעביר 10 microliters של התערובת בין להחליק את הכיסוי ואת תא הספירה על hemocytometer. ספור רק את התאים במרכז וארבעה ריבועים פינתיים, בנפרד, וספירת התאים הכוללת וספירת התאים הלא-בת קיימא עבור חמשת הריבועים שזוהו. לאחר חישוב ספירת התאים בת קיימא, סמן קו אופקי לאורך החלק התחתון של לוח 12 בארות שישמש כסימן ייחוס במהלך ההדמיה.לדלל את מלאי התא עם מדיה לצפיפות של 19,000 תאים למיליליטר. ואז לזרוע כל באר של צלחת 12 באר עם מיליליטר אחד של מלאי התא מדולל, ערבוב מלאי התא מעת לעת כדי להבטיח אפילו זריעת תאים על פני כל 12 בארות. סמן כל לוחית בתווית עם המידע המוצג כאן.ומ מניחים אותו באינקובטור ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני עד שהתאים גדלים ל-100%. לאחזר צלחת 12 באר עם תאים מהאינקובטור. באמצעות מיקרוסקופ עם מטרה 10x, להתבונן בתאים ולקבוע את הקונפדרציה בתוך כל באר.לאחר מכן, שאף והשליך את תקשורת הצמיחה מכל באר. להרכיב צינור P200 עם קצה סטרילי 1-200 מיקרוליטר. בכל באר, להחליק את קצה פיפטה על פני השטח של התא ממיקום 12: 00 למיקום 6: 00 כדי לייצר פצע ללעוג שריטה.יש לשטוף כל באר במיליליטר אחד של תווי מלח מאוזנים כדי לנקות פסולת עודפת וגושי תאים. רוק הצלחת מצד לצד כדי להקל על הכביסה. לאחר מכן להסיר ולהיפטר תווי מלח מאוזנים מכל באר.באמצעות צינור P1000 עם קצה 1,000 מיקרוליטר, להוסיף 1,000 microliters מן המניות ארסן מוכן לתוך בארות שהוקצו באופן אקראי עם קבוצת טיפול. השתמש טיפ פיפטה חדש עבור כל באר, ולתזמן את הזמן שבו הטיפולים מתווספים. הדגירה את הצלחות ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני.כדי לדמיין את הלוחות, לכוד תמונות של כל באר בהגדלה אובייקטיבית של פי 10 כל ארבע שעות במשך 24 שעות. הפני לקו שצויר בעבר בתחתית הלוח כדי לדמיין את אותו מיקום לאורך השריטה בתוך כל באר בכל נקודת זמן. במחקר זה, בדיקה שריטה in vivo משמש כדי לבחון את ההשפעות של ארסן על הגירת תאים.שריטות אחידות נצפו בכל קבוצות הטיפול, עם רוחב שריטה ממוצע של כ 0.8 מילימטרים. תאי הבקרה מראים שריטה שהחלימה לחלוטין לאחר 20 שעות. שתי קבוצות הארסן אינן מראות רמה זו של ריפוי.עם טיפול 10 מיקרומולרים מעכב סגירה לגמרי במשך 24 שעות. תוצאות אלה מראות כי נוכחותו של ארסן מאטה את ההגירה התאית. התמונות הגולמיות שנלכדו במהלך ההתנסויות מנותחות באמצעות תוכנה אוטומטית למדידת רוחב הפצע, לאחר מכן לחשב את סגירת האחוזים ולבסוף לחשב את האזור מתחת לעקומה.קבוצת הטיפול 10 מיקרומולרי מראה הגירה תאית מואטת סטטיסטית של פיברובלסטים עוריים יילודים אנושיים בהשוואה לכל קבוצות הטיפול האחרות. חשוב לתרגל ביסודיות טכניקה זו כדי להגביר את העקביות בעת גירוד התאים. שונות לא מכוונת בין מבחנה עלולה להטות נתונים ולשנות מסקנות.טכניקות מולקולריות נוספות כגון תגובת שרשרת פולימראז כמותית ובדיקות אימונוסורבנט הקשורות לאנזימים ניתן להשתמש בבדיקה שלאחר השריטה כדי לזהות אותות וחלבונים שליח שעשויים להיות היעד לשינויים בנדידת תאים שנצפו בבדיקה. חקירה זו תרמה להבנת החוקרים של גרורות סרטן, טיפולים חדשים בסרטן המתעוררים, תאי גזע ורפואה רגנרטיבית, ואבני דרך מדעיות רבות אחרות.

Research

JoVE Journal

Environment

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

Exploring the Effects of Atmospheric Forcings on Evaporation: Experimental Integration of the Atmospheric Boundary Layer and Shallow Subsurface

היכרות האפקטים של האטמוספרה Forcings באידוי: שילוב ניסיוני של שכבת האטמוספרה הגבול ומתחת לפני קרקע רדודה

Evaporation is directly influenced by the interactions between the atmosphere, land surface and soil subsurface. This work aims to experimentally study ...

A CO2 Concentration Gradient Facility for Testing CO2 Enrichment and Soil Effects on Grassland Ecosystem Function

A CO2 Concentration Gradient Facility for Testing CO2 Enrichment and Soil Effects on Grassland Ecosystem Function

CO<sub&gt; 2</sub&gt; מתקן מפל ריכוזים לבדיקה CO<sub&gt; 2</sub&gt; העשרה וקרקע השפעות על תפקוד המערכת האקולוגית גראסלאנד

Continuing increases in atmospheric carbon dioxide concentrations (CA) mandate techniques for examining impacts on terrestrial ecosystems. Most ...

A Flow-through Exposure System for Evaluating Suspended Sediments Effects on Aquatic Life

מערכת חשיפת זרימה דרך להערכת מושעה משקעים השפעות על חיים ימיים

This paper describes the Fish Larvae and Egg Exposure System (FLEES). The flow-through exposure system is used to investigate the effects of suspended ...

Determination of Inorganic Arsenic in a Wide Range of Food Matrices using Hydride Generation - Atomic Absorption Spectrometry.

קביעת אי-אורגנית ארסן ב רחב טווח של מזון מטריצות באמצעות הידריד דור - ספקטרומטר בליעה אטומית.

The European Food Safety Authority (EFSA) underlined in its Scientific Opinion on Arsenic in Food that in order to support a sound exposure assessment to ...

Protocol for Assessing the Relative Effects of Environment and Genetics on Antler and Body Growth for a Long-lived Cervid

פרוטוקול להערכת ההשפעות היחסי של גנטיקה וסביבה על הצבי וצמיחה הגוף עבור Cervid חיים ארוכים

Cervid phenotype can be placed into one of two categories: efficiency, which promotes survival over extravagant morphometric growth, and luxury, which ...

Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

הכנת DMMTAV ו- DMDTAV באמצעות DMAV עבור ישומים סביבתיים: סינתזה, טיהור ואישור

Dimethylated thioarsenicals such as dimethylmonothioarsinic acid (DMMTAV) and dimethyldithioarsinic acid (DMDTAV), which are produced by the metabolic ...

Collection and Extraction of Occupational Air Samples for Analysis of Fungal DNA

אוסף והפקת האוויר תעסוקתית דוגמאות לניתוח של DNA פטרייתי

Traditional methods of identifying fungal exposures in occupational environments, such as culture and microscopy-based approaches, have several ...

An Experimental Protocol for Studying Mineral Effects on Organic Hydrothermal Transformations

טיפול נסיוני לומד השפעות המינרלים על העתקות הידרותרמי אורגני

Organic-mineral interactions are widely occurring in hydrothermal environments, such as hot springs, geysers on land, and the hydrothermal vents in the ...

Composition and Distribution Analysis of Bioaerosols Under Different Environmental Conditions

הלחנה וניתוח הפצה Bioaerosols בתנאים סביבתיים שונים

Variable microorganisms in particulate matter (PM) under different environmental conditions may have significant impacts on human health. In this study, ...

Removal of Arsenic Using a Cationic Polymer Gel Impregnated with Iron Hydroxide

הסרת ארסן באמצעות ג'ל פולימרי הספוג עם הידרוקסיד ברזל

In this work, we prepared an adsorbent composed of a cationic polymer gel containing iron hydroxide in its structure designed to adsorb arsenic from ...