Name: establishment of viral infection and analysis of host-virus interaction in drosophila melanogaster
Uploaded: 2019-03-14T13:30:00
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Wir möchten die gesamte Pan-Labor in IPS zu danken. CAS. Wir danken Dr. Lanfeng Wang (IPS, CAS) für Dr. Seng Zhu (IPS, Paris), Dr. Jessica VARGAS (IPS, Paris) und Dr. Gonalo Cordova Steger (Springer Natur) und experimentelle Unterstützung für Kommentare. Diese Arbeit wurde unterstützt durch Zuschüsse aus dem strategischen Priorität Forschungsprogramm der chinesischen Akademie der Wissenschaften, L.P. (XDA13010500) und H.T (XDB29030300), der National Natural Science Foundation of China L.P. (31870887 und 31570897) und J.Y (31670909). L.P. ist Mitglied des CAS Youth Innovation Promotion Association (2012083).

Hinweis: Vor dem Experiment starten, müssen die Zell-Linien und Fliege Aktien verwendet nicht durch andere Krankheitserreger, vor allem für Viren wie DCV, FHV, Drosophila X (DVX), und Nephritis Vogelgrippe-Virus (ANV) kontaminiert sein. Im Idealfall werden RNA Sequenzierung oder ein einfacher PCR-basierte Identifikation verwendet, um die Verschmutzung10,45zu erkennen. Wenn Kontamination stattgefunden, die Zell-Linien und Fliege Aktien sollte nicht verwendet wer...

In diesem Artikel präsentieren wir eine detaillierte Anleitung, wie eine virale Infektionskrankheiten System in Erwachsenen Drosophila Melanogaster mit Nano-Injektion. Die Protokolle sind die Vorbereitung der entsprechenden Fliegenschnüre und Virus bestand, Infektion Techniken, die Bewertung der infektiöse Indikatoren und die Messung der antiviralen Reaktion. Obwohl DCV als Beispiel für eine virale Erreger verwendet wird, wurden Dutzende von verschiedenen Arten von Viren erfolgreich für das Studium in Droso...

Emerging virale Infektionen, vor allem von Arboviren, wie z. B. das Chikungunya-Virus1, das Dengue-Virus, Gelbfieber-Virus2 und ZikaVirus3, wurden eine große Bedrohung für die öffentliche Gesundheit durch Pandemien verursacht 4. dadurch ein besseres Verständnis der Virus-Wirt Interaktionen für Seuchenbekämpfung und Behandlung von viralen Erkrankungen beim Menschen immer wichtiger geworden. Für dieses Ziel müssen angemessene und effiziente Modelle hergestellt werden, um die Mechanismen, die Virus-Infektion zu untersuchen.
Die Fruchtfliege, Drosophilamelanogaster (D. Melanogaster), bietet ein leistungsfähiges System zur Untersuchung von Virus-Wirt Interaktionen5,6 und hat sich als eines der effizientesten Modelle menschlichen Viruserkrankungen7 zu studieren , 8 , 9. hoch konservierte antivirale Signalisierung Wege und unvergleichliche genetische Werkzeuge machen fliegt ein großes Modell, um signifikante Ergebnisse mit realen Auswirkungen auf antivirale Humanstudien zu produzieren. Darüber hinaus fliegen sind einfach und preiswert im Unterhalt im Labor und eignen sich für große Screening von Roman regulatorische Faktoren6,10 in das Virus und die Gastgeber während der Infektion.
Vier große hoch konservierte antivirale Wege (zB., die RNA-Interferenz (RNAi) Weg11, der JAK-STAT Signalweg12, die NF-κB-Signalweg und der Autophagie Weg13) sind gut bei Drosophila in den letzten Jahren untersucht Jahren6. Der RNAi-Weg ist eine breite antivirale Mechanismus, der meisten Arten von Virus-Infektion6,14unterdrücken kann. Störung der dieser Weg durch Mutation in den Genen wie Dicer-2 (Dcr-2) oder Argonaut 2 (AGO2) führen zu erhöhten Virus-Titer und Host Sterblichkeit15,16,17. Der JAK-STAT-Signalweg Verbindung Kontrolle der Infektion durch ein Virus aus der Familie Dicistroviridae und der Familie Flaviviridae bei Insekten, z.B.gebracht., Drosophila-C-Virus (DCV) fliegen16 und West Nil Virus (WNV) und Dengue-Virus in Mücke18,19. Die Drosophila Maut (homolog zu den menschlichen NF-κB-Signalweg) und Immunschwäche (IMD) Wege (ähnlich der menschlichen NF-κB und TNF Weg) sind beide in der Verteidigung Virus Invasion20,21, 22. Autophagie ist ein weiterer konservierten Mechanismus beteiligt an der Regulation des viralen Infektion, die sich gut in Drosophila23,24auszeichnet. So, Identifizierung von Roman regulatorische Faktoren dieser Wege und sezierenden Übersprechen zwischen diesen antivirale Signal- und anderen biologische Bahnen, wie Stoffwechsel, Altern, neuronale Reaktion und So weiter, können leicht in Drosophila einrichten System.
Obwohl die etabliertesten virale Infektionskrankheiten Modelle in Drosophila durch RNA-Viren, Infektionen durch die Wirbellosen Irisierende Virus 6I induziert werden (IV-6) und Kallithea Viren haben gezeigt, das Potential für die Untersuchung von DNA-Viren fliegen25, 26. Darüber hinaus kann das Virus auch geändert werden, um die Infektion von Drosophila, z. B. das Influenza-Virus9ermöglichen. Dies hat die Anwendung der Drosophila -Screening-Plattform erheblich erweitert. In diesem Verfahren verwenden wir DCV als Beispiel beschreiben, wie eine virale Infektionskrankheiten System in Drosophilazu entwickeln. DCV ist einen positiven Sinn einzelne gestrandeten RNA-Virus aus ca. 9300 Nukleotiden, Codierung 9 Proteine27. Als eine natürliche Erreger von D. MelanogasterDCV als geeignete Virus gilt als Host physiologische, Verhaltens- und basale Immunantwort bei Host-Virus Interaktion und Ko-Evolution28zu studieren. Darüber hinaus macht seine schnelle Sterblichkeit nach Infektion in Wildtyp fliegen DCV nützlich zum Bildschirm für resistent oder anfällig für Gene in der Host-29.
Allerdings gibt es mehrere Aspekte von Belang, wenn virale Infektionen in Drosophilastudieren. Beispielsweise haben symbiotische Bakterien Wolbachia die Fähigkeit, eine breite Spektren der RNA-Virus-Verbreitung in Drosophila und Mücke30,31,32hemmen. Den letzten Beweis zeigt einen möglichen Mechanismus welcher Wolbachia Blöcke Sindbis Virus (SINV) Infektion durch die Hochregulierung der Methyltransferase Mt2 Ausdruck in der Host-33. Darüber hinaus ist der genetische Hintergrund der Insekten auch für virale Infektion von entscheidender Bedeutung. Zum Beispiel die natürliche Polymorphismus im gen, Pastrel (pst), bestimmt die Infektanfälligkeit DCV in Drosophila34,35, während die Loci der Ubc-E2H und CG8492 Cricket-Paralyse-Virus (CrPV) und Flock Haus (FHV) Virusinfektion, bzw.36beteiligt sind.
Die besonderen Möglichkeiten, um die Virus-Wirt-Interaktion im fliegen, zu etablieren müssen laut Forschungszwecke wie eine Hochdurchsatz-Screen für Host Zellbestandteile in Drosophila Zelle Linien37,38, mündliche ausgewählt werden Infektion, Darm-spezifische antivirale Antwort22,39,40, Nadel stechen41,42 oder Nano-Injektion durch Übergabe epitheliale Barrieren um systemische Immunsystem stimulieren zu studieren Antworten. Nano-Injektion kann genau die virale Dosis um eine kontrollierte antiviralen Reaktion und eine physiologische Läsion43, induzieren steuern gewährleistet eine hohe Reproduzierbarkeit der experimentellen44. In dieser Studie beschreiben wir eine Nano-Injektion-Methode, um Virus-Wirt Interaktionen in Drosophila, unterstrichen die fliegen Hintergrundeffekte zu studieren.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22um filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 ml Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Brand</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 ml RNase free Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cm cell culture dish</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS430167</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 Replacement tubes</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>3-000-203-G/X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABI 7500 qPCR system</td>
			<td>ABI</td>
			<td>7500</td>
			<td>qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Incubator</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td>MIR-553</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centriguge</td>
			<td>Eppendof</td>
			<td>5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centriguge</td>
			<td>Eppendof</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>151858</td>
			<td>RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DEPC water</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>95284-100ML</td>
			<td>RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila Incubator</td>
			<td>Percival</td>
			<td>I-41NL</td>
			<td>Rearing Drosophila</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12657-029</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flat bottom 96-well-plate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS3922</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>DP73</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl alcohol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I9516</td>
			<td>RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysis buffer (RNA extraction)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>15596026</td>
			<td>TRIzol Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysis buffer (liquid sample RNA extraction)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10296028</td>
			<td>TRIzol LS Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject II Auto-Nanoliter Injector</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>3-000-204</td>
			<td>Nanoject II Variable Volume (2.3 to 69 nL) Automatic Injector with Glass Capillaries (110V)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Adhesive Film</td>
			<td>ABI</td>
			<td>4360954</td>
			<td>qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin, Liquid</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>qPCR plate</td>
			<td>ABI</td>
			<td>A32811</td>
			<td>qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schneider&#8217;s Insect Medium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9895</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>statistical software</td>
			<td>GraphPad Prism 7</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TransScript Fly First-Strand cDNA Synthesis SuperMix</td>
			<td>TransScript</td>
			<td>AT301</td>
			<td>RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>IKA</td>
			<td>VORTEX 3</td>
			<td>RNA extraction</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of viral infection and analysis of host-virus interaction in drosophila melanogaster

Virus verbreitet ist eine der Hauptursachen von epidemischen Krankheiten. So ist es sehr wichtig, unser Wissen der Prävention und Behandlung von viralen Infektionen verlängern, Verständnis der Interaktion zwischen dem Virus und dem Host. Die Fruchtfliege Drosophila MelanOgaster erweist sich eine effiziente und produktive Modellorganismen für antivirale Faktoren und Virus-Wirt Interaktionen aufgrund genetischer Werkzeuge und hoch konservierte angeborene Immune untersuchen Signalwege. Die hier beschriebene Vorgehensweise zeigt eine Nano-Injektion-Methode, um virale Infektion zu etablieren und systemische antivirale Reaktionen in Erwachsenen fliegen zu induzieren. Die präzise Steuerung der viralen Injektion Dosis in dieser Methode ermöglicht hohen experimentelle Reproduzierbarkeit. In dieser Studie beschriebenen Protokolle sind die Vorbereitung von fliegen und das Virus, das Injektionsverfahren, überleben Rate Analyse, die Virus-Last-Messung sowie eine antivirale Weg-Bewertung. Der Einfluss Auswirkungen einer Virusinfektion durch die fliegen Hintergrund wurden hier erwähnt. Diese Infektion-Methode ist einfach durchzuführen und quantitativ wiederholbar; Es kann für Host/virale Faktoren bei der Virus-Wirt Interaktionen auf den Bildschirm und das Übersprechen zwischen angeborenen Immunsystems Signalisierung und anderer biologischer Signalwege in Reaktion auf eine virale Infektion zu sezieren angewendet werden.

Die Ergebnisse dieses Abschnitts sind nach der DCV Infektion von D. Melanogaster. Abbildung 1 zeigt das Flussdiagramm der viralen Infektion in Drosophila. Fliegen sind Intra thoracically injiziert, und dann sind die Proben für die Messung von viralen TCID50 und der Genom-RNA-Ebene (Abbildung 1). Virus-Infektion kann Zelle Lysis auslösen und CPE wird auf 3 Tage Post-Infektion (Abbildung 2A) beobachtet. Die Viruslast durch die CPE-Assay gemes...

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Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Dieses Protokoll beschreibt die Virusinfektion in Vivo in Drosophila Melanogaster mit dem Nano-Injektionsverfahren und Grundtechniken zu Virus-Wirt Interaktionen analysieren zu etablieren.

Gründung der Virusinfektion und Analyse von Host-Virus-Wechselwirkung in Drosophila Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Virus-Host-Interaktionsfeld zu beantworten, wie man effektiv eine Virusinfektion bei Drosophila melanogaster etablieren kann. Diese Nanoinjektionsmethode ermöglicht eine präzise Kontrolle der Infektionsdosis des Virus und kann leicht auf Infektionen mit anderen mikrobiellen Krankheitserregern angewendet werden. Beginnen Sie damit, ein mal 10 bis siebentlebensfähige S2-Sternzellen pro Milliliter als lose, halbhafte Monoschicht in einer 10-Zentimeter-Zellkulturschale mit 10 Millilitern komplettem Schneider-Drosophila-Medium ohne zusätzliches Kohlendioxid bei 25 Grad Celsius für eine Stunde zu wachsen.Während der Inkubation, resuspend frisch aufgetaut Drosophila C Virus oder DCV zu einer Vielzahl von Infektionen von 0,01 in einem Milliliter des gesamten Mediums und fügen Sie Viruslösung zu den Zellkultur-Gerichte. Dann kehren Sie die Platte für drei bis fünf Tage zum 25 Grad Celsius Brutkasten zurück. Das Virus ist bereit für die Sammlung, wenn die Zellmorphologie verschwommen aussieht und das Kulturmedium voll von schwarzen Partikeln ist, die auf Zellablagerungen hinweisen.Mischen Sie den Überstand, indem Sie ein paar Mal Pipettieren, bevor Sie die gesamte Zellkultur auf eine 15 Milliliter-Röhre für Lyse der Wirtszellen bei minus 80 Grad Celsius übertragen. Um Arbeitskonzentrationen von Virus zu erzeugen, tauen Sie die Zellsuspension in einem 25 Grad Celsius Wasserbad mit ständigem Schütteln auf, bevor Sie die Zellreste durch Zentrifugation granulieren. Dann übertragen Sie den Überstand in eine neue sterile 15-Milliliter-Röhre zum Wirbeln und aliquotieren bis zu 200 Mikroliter Viruslösung pro Tube.Um die durchschnittliche Virusgewebekultur-Infektionsdosis zu bestimmen, zuerst 10 mal 10 bis die fünf S2-Sternzellen in 100 Mikroliter n. Medium in acht Brunnen pro Spalte in 12 Reihen einer 96-Well-Platte auszusäen. Dann kehren Sie die Platte auf den 25 Grad Celsius Brutkasten zurück. Wählen Sie zufällig fünf Röhren Virus aus minus 80 Grad Celsius Lagerung.Während sich die Zellen absetzen, füllen Sie 10 sterile 1,5 Milliliter Mikrozentrifugenröhrchen mit 450 Mikroliter sterilem Gesamtmedium und fügen Sie 50 Mikroliter Virusbestand in die erste 1,5 Milliliter-Röhre mit 450 Mikroliter sterilen kompletten Medium verdünnen die Suspensionen 10-fach pro Schritt zum 12. Brunnen. Am Ende der Inkubation 50 Mikroliter jeder Verdünnung in jede Spalte für diese Virusröhre in den entsprechenden Brunnen geben und 50 Mikroliter Kulturmedium ohne Virus zu einem Brunnen pro Spalte als Negativkontrollgut hinzufügen. Legen Sie die Platte dann drei Tage lang im 25 Grad Celsius Inkubator und bewerten Sie die zytopathische Wirkung jedes Virusbestands unter einem Brightfield-Mikroskop bei einer 20-fachen Vergrößerung täglich.Klassifizieren Sie einen Brunnen, in dem die Zellen verschwommen aussehen und das Medium voll von Fragmenten als positiver Brunnen und ein Brunnen, in dem die Zellmorphologie als negativer Brunnen normal ist. Vor der Zucht 400 Mikroliter 50 Mikroliter pro Milliliter Tetracyclin mit vier Gramm frischem Maismehl-Fliegenfutter gründlich vermischen und das Essen über Nacht auf vier Grad Celsius legen, um das Ethanol zu verdampfen. Am nächsten Morgen, wärmen Sie das Essen auf Raumtemperatur und legen Sie das Essen und 20 weibliche und 10 männliche neu geschlossene Erwachsene fliegt in eine Zuchtfläschchen für eine drei- bis viertägige Brutzeit bei 25 Grad Celsius und 60% Luftfeuchtigkeit unter einem normalen Hell-Dunkel-Zyklus.Wenn genügend Eier gelegt wurden, sammeln Sie die neu geschlossenen erwachsenen Fliegen unter einem leichten Fluss von Kohlendioxid und züchten Sie die Drosophila noch zwei Mal, wie gerade gezeigt. Nach drei Generationen von Tetracyclin-Behandlung, sammeln fünf Fliegen unter einem leichten Fluss von Kohlendioxid und homogenisieren die Fliegen mit 250 Mikroliter doppeldestilliertem Wasser und ein paar 0,5 Millimeter sterile Keramikperlen. Nach einer Minute 250 Mikroliter 2X Puffer A zur Probe geben, bevor die Proben bei minus 80 Grad Celsius eingefroren werden.Als nächstes tauen Sie proben von minus 80 Grad Celsius in einem 25 Grad Celsius Wasserbad schnell auf, gefolgt von einer 30-minütigen Inkubation in einem 70 Grad Celsius Wasserbad, bevor die genomische DNA extrahiert und die DNA durch Polymerase-Kettenreaktion nach Standardprotokollen verstärkt wird. Bestätigen Sie das Fehlen von Wolbachia 16 kleiner RNA und wsp in jeder Fliege homogenat durch Gelelektrophorese nach Standardprotokollen. Dann den Wolbachia-freien Fliegenvorrat auf Standard-Maismehl-Fly-Food aufziehen, wie gezeigt.Für eine Virusinfektion verwenden Sie zunächst ein Stereomikroskop und dünne Zangen, um die Spitze einer Glaskapillarnadel auf den entsprechenden Durchmesser für die Nanoinjektion zu brechen. Um den Injektor zu montieren, legen Sie den Decken-O-Ring und einen weißen Abstandskolben auf den Metallkolben des Injektors mit dem großen Dimple nach außen. Verwenden Sie eine Spritze, die mit einer 30-Spur-Nadel ausgestattet ist, um die Glasnadel mit Mineralöl zu füllen und die Nadel durch den Kragen zu legen.Legen Sie den größeren O-Ring um die Basis des Kragens etwa einen Millimeter vom stumpfen Ende der Nadel und befestigen Sie die Nadel auf den Kolben des Injektors. Befestigen Sie die Nadel auf dem Kolben und drücken Sie die leere Taste, um den Kolben des Mikroinjektors zu verlängern, bis ein akustisches Signal zu hören ist. Drücken Sie nun die Füllung, um den Kolben fünf Millimeter zurückzuziehen und die Nadel in eine virale Suspension der 100 Plaque bildenden Einheit zu tauchen.Schütteln Sie eine oder mindestens drei Fläschchen von 20 Wolbachia-freien männlichen Drosophila vorsichtig auf die Injektionsschale. Männliche gestiftete Fliegen werden während der Paarung bevorzugt und die Fortpflanzung kann Weibchen beeinflussen. Dann injizieren Sie den Thorax jeder Fliege mit 50,6 Nanoliter Viruslösung in den etwas helleren farbigen Bereich zwischen der Mesopleura und der Pteropleura und messen Sie die DCV-Last durch zytopathischen Effekt-Assay und quantitative RT PCR von Bodenfliegen, wie gerade gezeigt.Nach der Injektion die Fliegen vorsichtig in eine frische Durchstechflasche übertragen und die Durchstechflasche in eine horizontale Position bringen, um zu verhindern, dass die Fliegen während der Erholung von der Anästhesie am Medium kleben. Die Injektion ist zeitaufwändig, aber die DCV-Replikation ist sehr schnell, daher ist es sehr wichtig, die genaue Zeit auf dem Rohr aufzuschreiben, sobald alle Fliegen von jeder Durchstechflasche injiziert wurden. Virusinfektionen können Zelllyse induzieren und zytopathische Effekte werden an drei Tagen nach der Infektion beobachtet.Wolbachia 16s rRNA und wsp Primer können verwendet werden, um das Vorhandensein von Wolbachia und Drosophila zu erkennen, wie gezeigt. Wolbachia-freie Fliegen weisen eine signifikant verminderte Überlebensrate nach einer DCV-Infektion und auf dosisabhängige Weise auf. DCV aktiviert antivirale Signalwege im Wirt, die für eine antivirale Infektion in Drosophila entscheidend sind, wie die verringerte Überlebensrate und erhöhte Viruslast bei Dicer-2-Mutantenfliegen belegen.Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, dass eine Kontamination mit dem Wolbachia-Genotyp die Anfälligkeit der Drosophila-Melanogaster-Fliegen zur DCV-Infektion beeinflussen kann. Nach diesem Verfahren können andere Methoden wie ein größerer genetischer Bildschirm durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen über unter definierte Wirtsgene zu beantworten, die für eine Virusinfektion oder antivirale Reaktionen erforderlich sind. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der menschlichen Viruserkrankung, um die Mechanismen zu erforschen, die Ausbrüchen endemischer menschlicher Virusinfektionen im Drosophila-Melanogaster-Modell zugrunde liegen.Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Viren extrem gefährlich sein kann und dass Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen der entsprechenden Schutzausrüstung immer während der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden sollten.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Isolation of Fidelity Variants of RNA Viruses and Characterization of Virus Mutation Frequency

Isolierung von Fidelity Varianten von RNA-Viren und Charakterisierung von Virus-Mutation Frequency

RNA viruses use RNA dependent RNA polymerases to replicate their genomes. The intrinsically high error rate of these enzymes is a large contributor to the ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

Sezieren Host-Virus-Interaktion in Lytic Replikation von einem Modell Herpesvirus

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster

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Systemische bakterielle Infektion und Immunabwehr Phänotypen in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the premier model organisms for studying the function and evolution of immune defense. Many aspects of ...

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

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Die Entwicklung der Lyophilisierte Loop-mediated Isothermal Amplification Reagenzien zum Nachweis von<em&gt; Coxiella burnetii</em

Coxiella burnetii, the agent causing Q fever, is an obligate intracellular bacterium. PCR based diagnostic assays have been developed for detecting C. ...

Swab Sampling Method for the Detection of Human Norovirus on Surfaces

Swab Sampling Verfahren zum Nachweis von humanem Norovirus auf Oberflächen

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the ...

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Extraktion von Hemocytes aus Drosophila Melanogaster Larven für mikrobielle Infektionen und Analyse

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the ...

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Detection of Low Copy Number Integrated Viral DNA Formed by In Vitro Hepatitis B Infection

Erkennung von niedrigen Kopie Nummer integrierte virale DNA gebildet durch In-vitro- Hepatitis B-Infektion

Hepatitis B Virus (HBV) is a common blood-borne pathogen causing liver cancer and liver cirrhosis resulting from chronic infection. The virus generally ...

Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

Bildgebung Zelle Interaktion in Trachealen Schleimhaut während der Influenza-Virus-Infektion mit Intravitalen zwei-Photonen-Mikroskopie

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...

Establishment and Analysis of Tumor Slice Explants As a Prerequisite for Diagnostic Testing

Einrichtung und Analyse der Tumor Slice Explants als Voraussetzung für diagnostische Tests

Organotypic primary tissue explant cultures, which include precision-cut slices, represent the three-dimensional (3-D) tissue architecture as well as the ...

Toxicity Study of Zinc Oxide Nanoparticles in Cell Culture and in Drosophila melanogaster

Toxicity Study of Zinc Oxide Nanoparticles in Cell Culture and in Drosophila melanogaster

Toxizitätsstudie von Zinkoxid-Nanopartikeln in der Zellkultur und bei Drosophila melanogaster

Zinc oxide nanoparticles (ZnO NPs) have a wide range of applications, but the number of reports on ZnO NP-associated toxicity has grown rapidly in recent ...