Name: preparation of rhythmically-active in vitro neonatal rodent brainstem-spinal cord and thin slice
Uploaded: 2019-03-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Rhythmically-active In Vitro Neonatal Rodent Brainstem-spinal Cord and Thin Slice at JoVE.com

S.B.P هو أحد المستلمين من "زمالة البحوث الجامعية الصيفية جامعة لوما ليندا".

تم قبول البروتوكول التالي ووافق على "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) من جامعة لوما ليندا. يتم اتباع المبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة للمعاملة الأخلاقية للحيوانات في جميع التجارب على الحيوانات في المختبر. وقد أيدت جميع المعايير الأخلاقية الأفراد الذين يؤدون هذا ال...

<ol>
	<li>Hilaire, G., Duron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+the+Mammalian+Respiratory+System.">Maturation of the Mammalian Respiratory System.</a> Physiological Reviews. 79, 325-360 (1999).</li><li>Pinkerton, K. E., Joad, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mammalian+Respiratory+System+and+Critical+Windows+of+Exposure+for+Children's+Health.">The Mammalian Respiratory System and Critical Windows of Exposure for Children's Health.</a> Environmental Health Perspectives. 108, 6 (2000).</li><li>Smith, J. C., Ellenberger, H. H., Ballanyi, K., Richter, D. W., Feldman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-B&#246;tzinger+complex:+a+brainstem+region+that+may+generate+respiratory+rhythm+in+mammals.">Pre-B&#246;tzinger complex: a brainstem region that may generate respiratory rhythm in mammals.</a> Science. 254, 726-729 (1991).</li><li>Smith, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+rhythm+generation+in+neonatal+and+adult+mammals:+the+hybrid+pacemaker-network+model.">Respiratory rhythm generation in neonatal and adult mammals: the hybrid pacemaker-network model.</a> Respiration Physiology. 122, 131-147 (2000).</li><li>Ramirez, J. M., Schwarzacher, S. W., Pierrefiche, O., Olivera, B. M., Richter, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+lesioning+of+the+cat+pre-B&#246;tzinger+complex+in+vivo+eliminates+breathing+but+not+gasping.">Selective lesioning of the cat pre-B&#246;tzinger complex in vivo eliminates breathing but not gasping.</a> The Journal of Physiology. 507, 895-907 (2004).</li><li>Butera, R. J., Rinzel, J., Smith, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+Respiratory+Rhythm+Generation+in+the+pre-B&#246;tzinger+Complex:+II.+Populations+of+Coupled+Pacemaker+Neurons.">Models of Respiratory Rhythm Generation in the pre-B&#246;tzinger Complex: II. Populations of Coupled Pacemaker Neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 82, 398-415 (1999).</li><li>Suzue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+rhythm+generation+in+the+in+vitro+brain+stem-spinal+cord+preparation+of+the+neonatal+rat.">Respiratory rhythm generation in the in vitro brain stem-spinal cord preparation of the neonatal rat.</a> Journal of Physiology (London). 354, 173-183 (1984).</li><li>Feldman, J. L., Del Negro, C. A., Gray, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+rhythm+of+breathing:+so+near,+yet+so+far.">Understanding the rhythm of breathing: so near, yet so far.</a> Annual Review of Physiology. 75, 423-452 (2013).</li><li>Rekling, J. C., Shao, X. M., Feldman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+Coupling+and+Excitatory+Synaptic+Transmission+between+Rhythmogenic+Respiratory+Neurons+in+the+PreB&#246;tzinger+Complex.">Electrical Coupling and Excitatory Synaptic Transmission between Rhythmogenic Respiratory Neurons in the PreB&#246;tzinger Complex.</a> Journal of Neuroscience. 20, 113 (2000).</li><li>Rousseau, J. -. P., Caravagna, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiology+on+Isolated+Brainstem-spinal+Cord+Preparations+from+Newborn+Rodents+Allows+Neural+Respiratory+Network+Output+Recording.">Electrophysiology on Isolated Brainstem-spinal Cord Preparations from Newborn Rodents Allows Neural Respiratory Network Output Recording.</a> Journal of Visualized Experiments. , e53071 (2015).</li><li>Segev, A., Garcia-Oscos, F., Kourrich, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-cell+Patch-clamp+Recordings+in+Brain+Slices.">Whole-cell Patch-clamp Recordings in Brain Slices.</a> Journal of Visualized Experiments. (112), e54024 (2016).</li><li>Koizumi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Imaging,+Spatial+Reconstruction,+and+Biophysical+Analysis+of+a+Respiratory+Motor+Circuit+Isolated+In+Vitro.">Functional Imaging, Spatial Reconstruction, and Biophysical Analysis of a Respiratory Motor Circuit Isolated In Vitro.</a> Journal of Neuroscience. 28, 2353-2365 (2008).</li><li>Danneman, P., Mandrell, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+five+agents/methods+for+anesthesia+of+neonatal+rats.">Evaluation of five agents/methods for anesthesia of neonatal rats.</a> Laboratory Animal Science. 47, 386-395 (1997).</li><li>Umezawa, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orexin-B+antagonized+respiratory+depression+induced+by+sevoflurane,+propofol,+and+remifentanil+in+isolated+brainstem-spinal+cords+of+neonatal+rats.">Orexin-B antagonized respiratory depression induced by sevoflurane, propofol, and remifentanil in isolated brainstem-spinal cords of neonatal rats.</a> Respiratory Physiology &amp; Neurobiology. 205, 61-65 (2015).</li><li>Bierman, A. M., Tankersley, C. G., Wilson, C. G., Chavez-Valdez, R., Gauda, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+hyperoxic+exposure+reconfigures+the+central+respiratory+network+contributing+to+intolerance+to+anoxia+in+newborn+rat+pups.">Perinatal hyperoxic exposure reconfigures the central respiratory network contributing to intolerance to anoxia in newborn rat pups.</a> Journal of Applied Physiology. 116, 47-53 (2014).</li><li>Formenti, A., Zocchi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Error+signals+as+powerful+stimuli+for+the+operant+conditioning-like+process+of+the+fictive+respiratory+output+in+a+brainstem-spinal+cord+preparation+from+rats.">Error signals as powerful stimuli for the operant conditioning-like process of the fictive respiratory output in a brainstem-spinal cord preparation from rats.</a> Behavioural Brain Research. 272, 8-15 (2014).</li><li>Negro, C. A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+and+Calcium+Current-Mediated+Pacemaker+Neurons+and+Respiratory+Rhythm+Generation.">Sodium and Calcium Current-Mediated Pacemaker Neurons and Respiratory Rhythm Generation.</a> Journal of Neuroscience. 25, 446-453 (2005).</li><li>Johnson, S. M., Koshiya, N., Smith, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+the+Kernel+for+Respiratory+Rhythm+Generation+in+a+Novel+Preparation:+The+Pre-B&#246;tzinger+Complex+"Island".">Isolation of the Kernel for Respiratory Rhythm Generation in a Novel Preparation: The Pre-B&#246;tzinger Complex "Island".</a> Journal of Neurophysiology. 85, 1772-1776 (2001).</li><li>Funk, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+respiratory+rhythm+generating+networks+in+neonatal+mice+lacking+NMDAR1+gene.">Functional respiratory rhythm generating networks in neonatal mice lacking NMDAR1 gene.</a> Journal of Neurophysiology. 78, 1414-1420 (1997).</li><li>Campos, M., Bravo, E., Eugen&#237;n, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+dysfunctions+induced+by+prenatal+nicotine+exposure.">Respiratory dysfunctions induced by prenatal nicotine exposure.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 36, 1205-1217 (2009).</li><li>Ballanyi, K., Volker, A., Richter, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoxia+induced+functional+inactivation+of+neonatal+respiratory+neurones+in+vitro.">Anoxia induced functional inactivation of neonatal respiratory neurones in vitro.</a> NeuroReport. 6, 165-168 (1994).</li><li>Ruangkittisakul, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Sensitivity+to+Neuromodulator-Activated+Signaling+Pathways+at+Physiological+[K+]+of+Confocally+Imaged+Respiratory+Center+Neurons+in+On-Line-Calibrated+Newborn+Rat+Brainstem+Slices.">High Sensitivity to Neuromodulator-Activated Signaling Pathways at Physiological [K+] of Confocally Imaged Respiratory Center Neurons in On-Line-Calibrated Newborn Rat Brainstem Slices.</a> Journal of Neuroscience. 26, 11870-11880 (2006).</li><li>Rybak, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+the+ponto-medullary+respiratory+network.">Modeling the ponto-medullary respiratory network.</a> Respiratory Physiology &amp; Neurobiology. 143, 307-319 (2004).</li><li>Ruangkittisakul, A., Kottick, A., Picardo, M. C. D., Ballanyi, K., Del Negro, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+pre-B&#246;tzinger+complex+inspiratory+center+in+calibrated+'sandwich'+slices+from+newborn+mice+with+fluorescent+Dbx1+interneurons.">Identification of the pre-B&#246;tzinger complex inspiratory center in calibrated 'sandwich' slices from newborn mice with fluorescent Dbx1 interneurons.</a> Physiological Reports. 2, (2014).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).</li><li>Franklin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2008).</li></ol>

تكييف البروتوكول المقدمة هنا إلى كتلة en أو شريحة سير العمل مفيد للمختبرات والدراسات التي تود أن تستخدم أما جذع الدماغ الشوكي كتلة و/أو رقيقة شريحة الأعمال التحضيرية للتسجيلات الكهربية. طريقة التشريح وشريحة عرض، جنبا إلى جنب مع الأساليب التي ذكرت سابقا قبل الآخرين17،?...

وتوفر الشبكة العصبية الجهاز التنفسي من جذع الدماغ مجال خصبة لفهم الخصائص العامة للشبكات العصبية الإيقاعي. على وجه الخصوص، المصلحة في تطوير القوارض الولدان في التنفس، وفهم كيفية تطور إيقاع التنفس. وهذا قد يكون تم استخدام نهج متعدد المستويات، بما في ذلك فيفو بليثيسموجرافي الحيوان كله، في المختبر كتلة تسجيلات العصبية، وفي المختبر شريحة التسجيلات التي تحتوي على مولد إيقاع التنفس. الاختزالية في المختبر أون الكتلة وشريحة التسجيلات طريقة مفيدة للاستخدام عند استجواب الآليات وراء رهيثموجينيسيس الجهاز التنفسي والدوائر العصبية في منطقة الحبل الشوكي الدماغ النامية القوارض. ويشمل تطوير الجهاز التنفسي تقريبا أنواع الخلايا 40، تتميز بإطلاق النار النمط، بما في ذلك الجهاز التنفسي المركزي1،2. وتشمل الشبكة الجهاز التنفسي وسط مجموعة من الخلايا العصبية نشطة إيقاعي يقع في لب فينترولاتيرال روسترال،من13. يتم إنشاء رهيثموجينيسيس الرئوي الثدييات من أوتورهيثميك إينتيرنيورون الشبكة التي يطلق عليها اسم preBötzinger معقدة (pBC)، التي كانت مترجمة تجريبيا عن طريق التحضير الكتلة شريحة واون من الثدييات حديثي الولادة جذع الدماغ-الشوكي الحبال3،4،،من56،،من78. يؤدي وظيفة مماثلة للعقدة sinoatrial (SA) في القلب هذه المنطقة ويقوم بإنشاء نظام توقيت الشهيقيه للتنفس بالسيارة. ويتم إيقاع الشهيقيه من لجنة البرنامج والميزانية، إلى مناطق أخرى في جذع الدماغ (بما في ذلك نواة موتور hypoglossal) وتجمعات السيارات العمود الفقري (مثل فرنك الخلايا العصبية الحركية التي تدفع الحجاب الحاجز)9.
النشاط الإيقاعي يمكن الحصول عليها باستخدام جذع الدماغ الحبل الشوكي أون الكتلة الاستعدادات أو شرائح من مجموعة متنوعة من السكان الخلية، بما في ذلك C3 C5 العصب rootlets، rootlets العصب الثاني عشر، نواة موتور hypoglossal (بالمليون الثاني عشر)، والخلايا العصبية premotor hypoglossal (ثاني عشر المجنحة)، و لجنة البرنامج والميزانية3،10،،من1112. بينما نجحت هذه أساليب جمع البيانات عبر عدد قليل من المختبرات، العديد من البروتوكولات لا تعرض بطريقة يتم استنساخه بالكامل للباحثين الجديد دخول الميدان. يتطلب الحصول على قابلة للاستمرار وايقاعي نشطة في التحضيرات الكتلة وشريحة اهتمام حاد بالتفصيل من خلال جميع الخطوات للتشريح وبروتوكول قطع شريحة. البروتوكولات السابقة على نطاق واسع تصف مختلف إجراءات التسجيل والكهربية، ولكن تفتقر إلى التفاصيل في الجزء الأكثر أهمية للحصول على إعداد أنسجة قابلة للتطبيق: تنفيذ إجراء تشريح وشريحة الحبل الشوكي جذع الدماغ.
يتطلب كفاءة الحصول على تحضير الكتلة أو شريحة إيقاعي نشطة وقابلة للتطبيق في الحبل الشوكي الدماغ الكهربية تسجيلات إجراء جميع الخطوات بشكل صحيح، بعناية وسرعة (عادة، الإجراء برمته ذات الصلة يمكن أن تكون هنا إجراء حوالي 30 دقيقة). وتشمل النقاط الحرجة البروتوكول الكهربية الحبل الشوكي الدماغ التي قد لا مسبقاً كذلك وصفت تشريح العصب rootlets وإجراء تشريح على فيبرتوم. هذا البروتوكول الأول من التدرجي مرئي تشريح النخاع الشوكي الدماغ جديد من الباحثين والخبراء في هذا المجال. ويوضح هذا البروتوكول أيضا دقة التقنيات الجراحية، والمعالم، وغيرها من الإجراءات لمساعدة الباحثين مستقبلا في توحيد شرائح و كتلة الأعمال التحضيرية لاحتواء الدوائر الدقيقة المطلوبة في كل تجربة. يمكن استخدام الإجراءات المعروضة هنا في الجراء الولدان الجرذ والفأر.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1159px;" width="1158">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">NaCl</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:320px;">S271-500</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5405-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaHCO3</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP328-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaH2PO4 &#8226;H2O</td>
			<td>Sigma Aldrch</td>
			<td>S9638-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2&#8226;2H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7902-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7774-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G8270-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cold-Light source Halogen lamp 150W</td>
			<td>AmScope</td>
			<td>H2L50-AY</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissection Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vibratome 1000 Plus</td>
			<td>Vibratome</td>
			<td>W3 69-0353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnetic Base</td>
			<td>Kanetic</td>
			<td>MB-B-DG6C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane, USP</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>NDC 14043-704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sword Classic Double Edge Blades</td>
			<td>Wilkinson</td>
			<td>97573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Histoclear</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H2779</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont #5 Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont #5/45 Forcep</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel Blades #10</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10010-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel Handel #3</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spring Scissors Straight&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15024-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Narrow Pattern Forcep Serrated/straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Castroviejo Micro Dissecting Spring Scissors; Straight</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vannas Scissors 3&#34; Curved</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5621</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 0</td>
			<td>Fine Science Tools/8840604</td>
			<td>26000-35&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 0, SS</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26001-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 00</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26000-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 00, SS</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26001-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 000</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26000-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins, 000, SS</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26001-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minutien pins, 0.10 mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minutien pins, 0.15 mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minutien pins, 0.2 mm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fisher Tissue prep Parafin&#160;</td>
			<td>fisher</td>
			<td>T56-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Graphite&#160;</td>
			<td>fisher&#160;</td>
			<td>G67-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Delrin Plastic&#160;</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>3HMT2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">18 Gauge Hypodermic Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305195</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of rhythmically-active in vitro neonatal rodent brainstem-spinal cord and thin slice

يتم إنشاء إيقاع الشهيقيه الثدييات من شبكة الخلايا العصبية في منطقة لب يسمى preBötzinger في مجمع (pBC)، التي تنتج إشارة القيادة الإيقاعي انكماش العضلات الشهيقيه. النشاط العصبي الإيقاعية المتولدة في لجنة البرنامج والميزانية وإلى تجمعات الخلايا العصبية الأخرى لمحرك الأقراص قد درس عضلات التنفس باستخدام مختلف النهج، بما في ذلك كتلة من الأعصاب التسجيلات والتسجيلات شريحة عرضية. ومع ذلك، أساليب سبق نشرها لا على نطاق واسع وصف عملية تشريح النخاع الشوكي الدماغ بطريقة شفافة واستنساخه للدراسات المستقبلية. هنا، يقدم نظرة شاملة لأسلوب يستخدم لتكاثر قطع شرائح الدماغ النشطة إيقاعي يحتوي على الدوائر العصبية ضرورية وكافية لتوليد ونقل محرك الأقراص الشهيقيه. يستند هذا العمل إلى الحبل الشوكي الدماغ الكهربية البروتوكولات السابقة تعزيز احتمال موثوق بها الحصول على شرائح قابلة للاستمرار وايقاعي نشطة لتسجيل إخراج الخلايا العصبية من لجنة البرنامج والميزانية، الخلايا العصبية premotor hypoglossal (المجنحة الثاني عشر)، و هيبوجلوسال الخلايا العصبية الحركية (بالمليون الثاني عشر). ويتوسع العمل قدم الطرق المنشورة السابقة بتقديم توضيحات مفصلة، خطوة بخطوة للتشريح، من الفئران كله ألجرو، إلى شريحة في المختبر الذي يحتوي على rootlets الثاني عشر.

الطريقة المعروضة هنا يسمح باحث المهتمة في الحصول على شرائح إيقاعي النشطة من جذع الدماغ تكاثر وموثوق بها قص شريحة قابلة للحياة وقوية تتيح تسجيل الإخراج موتور وهمية لعدة ساعات. ويمكن التقاط جميع عناصر الدارة العصبية الحد الأدنى اللازم لتوليد ويحيل بها إيقاع الشهيقيه في ش?...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Rhythmically-active In Vitro Neonatal Rodent Brainstem-spinal Cord and Thin Slice at JoVE.com

Preparation of Rhythmically-active In Vitro Neonatal Rodent Brainstem-spinal Cord and Thin Slice

هذا البروتوكول على حد سواء بصريا يتصل إعداد الحبل الشوكي الدماغ وتوضح إعداد شرائح عرضية جذع الدماغ بطريقة تدريجية شاملة. أنه صمم لزيادة إمكانية تكرار نتائج وتعزز احتمال الحصول على شرائح قابلة للاستمرار، وطويلة الأمد، إيقاعي نشطة لتسجيل الإخراج العصبية من مناطق الدماغ الجهاز التنفسي.

إعداد نشط إيقاعي في الحبل الشوكي الدماغ القوارض الولدان المختبر وشريحة رقيقة

Mammalian inspiratory rhythm is generated from a neuronal network in a region of the medulla called the preB&#246;tzinger complex (pBC), which produces a ...

هذه الطريقة تسهل تشريح و تشريح الدماغ القوارض من أجل التحليل الملتقط لشبكة ميران Medullary التنفسية. هذه التقنية توفر مرونة تجريبية كبيرة، مما يجعل من الممكن إعداد إما في المختبر الافراج عن أو إعداد شريحة للتسجيل. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتجارب الفيزيولوجيا الكهربائية لاستكشاف دائرة التحكم العصبي التي تولد إيقاعات التنفس وفهم علم الأمراض وخلع تنظيم التنفس في القوارض المعدلة وراثيا.بعد تشريح نيوراكسيس، بسرعة نقل الجذع المعزول للحيوان إلى غرفة تشريح التهوية تحت مجهر تشريح ووضع الأنسجة الظهرية الجانب، مع نهاية الرسترالية التي تواجه الجزء الأمامي من الغرفة. دبوس الأنسجة في الكتفين ونهاية معظم السد من الحبل الشوكي وجعل شق منتصف الجمجمة من خلال الجمجمة بعد خياطة الجدارية لتجنب إتلاف القشرة و الدماغ الكامنة في الجمجمة. بدءا من خياطة القوس والعمل على نحو جانبي، قص خياطة القذالي من الجمجمة لخلق اللوحات من العظام التي قد تنعكس ومثبتة لترسيخ وتثبيت الجزء الرسترالي من الجمجمة.بعد أن تعكس كلا اللوحات الجمجمة، استئصال ما تبقى من قشرة الدماغ، وترك الجزءdal من المخيخ سليمة نسبيا لإجراء استئصال لامينكومي الظهرية. استخدام مقص الربيع الصغير والملقط لإزالة العضلات المحيطة الجمجمة وعمود الفقرات. إزالة الأنسجة على طول الجانب الظهري من القفص الصدري، وترك الأضلاع سليمة وقص بعناية بعيدا العمليات الجانبية من الصفيحة الفقرية.بعد قطع أي نسيج الإفراط في اللبونات والنخاع، والفيرميس، المخيخ، البون وبداية الحبل الشوكي، وسوف تكون مرئية بوضوح. لإجراء استئصال لامينكومي البطني، ضع الأنسجة الظهرية الجانب إلى أسفل ودبوس في القفص الصدري والنهاية الأكثر كادال من العمود الفقري. استخدم رفرف الجمجمة لتثبيت الجانب التاجي من الأنسجة وإزالة النصف البطني من القفص الصدري، بما في ذلك القص وجميع أعضاء البطن.تشريح بعيدا الأنسجة الرخوة تعلق على القفص الصدري لفضح الأضلاع والحبل الشوكي وإزالة اللسان والمريء والقصبة الهوائية والحنجرة وجميع الأنسجة الرخوة الأخرى والعضلات الإفراط في قاعدة الجمجمة والعمود الفقري. من أجل تحديد البليت الثابت، تشريح الأنسجة فوق هذا لوحة مستطيلة من العظام في قاعدة الجمجمة، والتي تشمل المسافة البادئة على شكل V. ثم قطع على طول خط الوسط من البليت، ورفع بعناية الأنسجة صعودا وتنفيذ قطع عرضية لإزالته.لبدء استئصال لامينتك في البطن ، وإزالة lamina ، وتعريض السطح البطني للدم المدبر والحبل الشوكي من الفقرة العنقية الأولى إلى ما يقرب من الفقرة الصدرية سبعة وقصة من خمسة إلى 10 ملليمترات على طول جانبي العمود الفقري في لامينا. عندما تم الكشف عن الحبل الشوكي، قص rootlets ما يقرب من 20 إلى 25 ملليمتر ثنائيا، على طول العمود الفقري إلى T7 تقريبا ورفع بعناية الحافة الرسترالية من C1، C2 وC3 مع ملقط مدمن مخدرات أو عازمة للسماح القطع تحت العظام لإزالة الفقرات الثلاث. عندما تم عزل الطول المطلوب من الحبل الشوكي من العمود الفقري، وجعل قطع عرضية لإزالة أنسجة الحبل الشوكي.بعد إزالة الجافا ، ضع جذع الدماغ في وسط منصة البارافين على كتلة القطع البلاستيكية واستخدم دبابيس الحشرات الدقيقة ، قلصت إلى ما لا يزيد عن سنتيمتر واحد في الطول لتثبيت نهاية النخاع من خلال الحبل الشوكي القعر. ثم محاذاة paraffin تغطية كتلة القطع مع جذع الدماغ المثبتة في حامل كتلة هزاز، بحيث شفرة سوف تقطع عمودي على الوجه الرسترالي من جذع الدماغ. المقبل، وجعل شريحة أولية لإزالة 200 إلى 300 ميكرومتر من الأنسجة الدخيلة غير المستوية على نهاية معظم الرسترالية من الأنسجة، وإجراء تعديلات صغيرة حسب الضرورة لضمان الخطية PARP والتخفيضات الصغيرة لإزالة أي أنسجة غير مستوية.سوف تصبح الجذور البلعومة مرئية على الحافة الجانبيّة لعقل الدماغ، وتقطع شريحة 300 إلى 500 ميكرومتر من جذع الدماغ من هذه العلامات العصبية العصبية الرسترالية لالتقاط مجمع ما قبل البوتزينغر ودوائر الإرسال المرتبطة به. جميع خطوات إجراءات تشريح حاسمة لخلق قابلة للاستنساخ, شريحة قابلة للحياة, مع كل من الدوائر العصبية اللازمة في الاتجاه الصحيح لإنتاج إيقاع قوي. يمكن التقاط جميع عناصر الدائرة العصبية الضرورية للغاية لتوليد وإيقاع ملهم ونقله في شريحة رقيقة باستخدام هذه الطريقة.بما في ذلك مجمع ما قبل بوتزينغر، الخلايا العصبية قبل الحركية إسقاط إلى الخلايا العصبية الحركية hypoglossal والجذرات العصبية hypoglossal. يمكن بعد ذلك استخدام مجمع ما قبل البوتزينغر، والجذيرات العصبية القحفية أو الـ 12ث والجذورات العصبية C4 للتسجيل الملهم. الجانب الرئيسي لهذا الإجراء هو العزل الدقيق للجذور والتأكيد على أن جذع الدماغ لا يتلف قبل قطع الشريحة النهائية.بعد هذا الإجراء، يمكن إجراء تسجيلات الفيزيولوجيا الكهربائية باستخدام أساليب المشبك التصحيح، التسجيلات الخلوية الإضافية أو أقطاب الشفط لتسجيل النشاط الكهربائي الذي تنتجه الشبكة. لم تقدم البروتوكولات المنشورة سابقًا سوى القليل من التفاصيل خطوة بخطوة ، مما يجعل من الصعب على الباحثين الجدد استخدام هذه الطريقة دون السفر إلى مختبر آخر وقضاء بعض الوقت مع محقق محنك.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation

تسجيلات المشبك التصحيح من الخلايا العصبية في الشبكية ماوس إعداد غامق تكييفها شريحة

Our visual experience is initiated when the visual pigment in our retinal photoreceptors absorbs photons of light energy and initiates a cascade of ...

Whole Cell Recording from an Organotypic Slice Preparation of Neocortex

تسجيل خلية كاملة من إعداد عضوي النمط شريحة من القشرة المخية الحديثة

We have been studying the expression and functional roles of voltage-gated potassium channels in pyramidal neurons from rat neocortex.  Because of the ...

Imaging Pheromone Sensing in a Mouse Vomeronasal Acute Tissue Slice Preparation

التصوير فرمون الاستشعار في الميكعي ماوس الحادة الأنسجة إعداد شريحة

Peter Karlson and Martin L&uuml;scher used the term pheromone for the first time in 19591 to describe chemicals used for intra-species communication. ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

الدجاج الأجنة شريحة الحبل الشوكي الثقافة البروتوكول

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Nucleofection of Rodent Neuroblasts to Study Neuroblast Migration In vitro

Nucleofection of Rodent Neuroblasts to Study Neuroblast Migration In vitro

Nucleofection من القوارض Neuroblasts لدراسة الهجرة أرومة عصبية<em&gt; في المختبر</em

The subventricular zone (SVZ) located in the lateral wall of the lateral ventricles plays a fundamental role in adult neurogenesis. In this restricted ...

Electrophysiology on Isolated Brainstem-spinal Cord Preparations from Newborn Rodents Allows Neural Respiratory Network Output Recording

الكهربية المعزولة على الاستعدادات الحبل الشوكي-جذع الدماغ من القوارض الوليد يسمح الشبكات العصبية التنفسية تسجيل الإخراج

While it is well known that the central respiratory drive is located in the brainstem, several aspects of its basic function, development, and response to ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

الحبل الشوكي العصبونات العزلة والثقافة من الفئران حديثي الولادة

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Preparation and Immunostaining of Myelinating Organotypic Cerebellar Slice Cultures

إعداد و Immunostaining أورجانوتيبيك ميليناتينج شريحة الدماغ الثقافات

In the nervous system, myelin is a complex membrane structure generated by myelinating glial cells, which ensheathes axons and facilitates fast electrical ...

In Vitro Wedge Slice Preparation for Mimicking In Vivo Neuronal Circuit Connectivity

في في المختبر إسفين شريحة التحضير لتقليد في اتصال الدائرة العصبية فيفو

In vitro slice electrophysiology techniques measure single-cell activity with precise electrical and temporal resolution. Brain slices must be relatively ...