Name: induction of intestinal graft-versus-host disease and its mini-endoscopic assessment in live mice
Uploaded: 2019-02-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice at JoVE.com

دعمت هذه الدراسة التعاونية أبحاث المراكز (CRC) 221 (CRC/TR221-DFG، #324392634؛ المشروع B03) (إلى ك. أ.) و 1181 لجنة حقوق الطفل (CRC-DFG، مشروع B05) (إلى ك. أ.)، وكلاهما يمولها الأوقيانوغرافية الألمانية (DFG، مؤسسة البحوث الألمانية).

الأساليب التجريبية الموصوفة هنا أقرتها حكومة ميتيلفرانكين، بافاريا، ألمانيا.
1-GvHD التعريفي
<ol><li>اليوم 0: تشعيع الجسم الكلي للفئران المستفيدة
	<ol>
<li>استخدام الإناث CD45.2+ H2kd+ بالب/ج الفئران التي على الأقل 10 أسابيع من العمر كمتلقين.</li>
		<li>زن وسجل وزن الفئران...

<ol>
	<li>Ferrara, J. L., Levine, J. E., Reddy, P., Holler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft-versus-host+disease.">Graft-versus-host disease.</a> The Lancet. 373, 1550-1561 (2009).</li><li>Magenau, J., Runaas, L., Reddy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+understanding+the+pathogenesis+of+graft-versus-host+disease.">Advances in understanding the pathogenesis of graft-versus-host disease.</a> British Journal of Haematology. 173, 190-205 (2016).</li><li>Ball, L. M., Egeler, R. M., Party, E. P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+GvHD:+pathogenesis+and+classification.">Acute GvHD: pathogenesis and classification.</a> Bone Marrow Transplantation. 41, 58-64 (2008).</li><li>Naymagon, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+graft-versus-host+disease+of+the+gut:+considerations+for+the+gastroenterologist.">Acute graft-versus-host disease of the gut: considerations for the gastroenterologist.</a> Nature Reviews. Gastroenterology &amp; Hepatology. 14, 711-726 (2017).</li><li>Zeiser, R., Blazar, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+of+acute+and+chronic+graft-versus-host+disease:+how+predictive+are+they+for+a+successful+clinical+translation.">Preclinical models of acute and chronic graft-versus-host disease: how predictive are they for a successful clinical translation.</a> Blood. 127, 3117-3126 (2016).</li><li>Cooke, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+of+idiopathic+pneumonia+syndrome+after+bone+marrow+transplantation:+I.+The+roles+of+minor+H+antigens+and+endotoxin.">An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: I. The roles of minor H antigens and endotoxin.</a> Blood. 88, 3230-3239 (1996).</li><li>Anthony, B. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+graft-versus-host+disease+and+in+vivo+T+cell+monitoring+using+an+MHC-matched+murine+model.">Induction of graft-versus-host disease and in vivo T cell monitoring using an MHC-matched murine model.</a> Journal of Visualized Experiments. (66), e3697 (2012).</li><li>Beilhack, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+acute+graft-versus-host+disease+by+blocking+T-cell+entry+to+secondary+lymphoid+organs.">Prevention of acute graft-versus-host disease by blocking T-cell entry to secondary lymphoid organs.</a> Blood. 111, 2919-2928 (2008).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+colonoscopy+in+live+mice.">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nature Protocols. 1, 2900-2904 (2006).</li><li>Buchele, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+Inflammatory+T+Helper+Cells+via+Retinoic+Acid-Related+Orphan+Receptor+Gamma+t+Is+Ineffective+to+Prevent+Allo-Response-Driven+Colitis.">Targeting Inflammatory T Helper Cells via Retinoic Acid-Related Orphan Receptor Gamma t Is Ineffective to Prevent Allo-Response-Driven Colitis.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1138 (2018).</li><li>Ullrich, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BATF-dependent+IL-7RhiGM-CSF++T+cells+control+intestinal+graft-versus-host+disease.">BATF-dependent IL-7RhiGM-CSF+ T cells control intestinal graft-versus-host disease.</a> The Journal of Clinical Investigation. 128 (3), 916-930 (2018).</li><li>Kaplan, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+antigens+determine+graft-versus-host+disease+phenotype.">Target antigens determine graft-versus-host disease phenotype.</a> Journal of Immunology. 173, 5467-5475 (2004).</li></ol>

وصف البروتوكول منهجية الاستقراء والتقييم ميني المنظار من النمط الظاهري colonic لاحظ أثناء جفهد المعوية. أنه يخدم الغرض الأوسع نطاقا لتمكين العلماء لدراسة جفهد المعوية طوليا ونونينفاسيفيلي على مدى كامل من المرض (أي من بداية مظاهر colonic والتقدم حتى نشاط المرض القصوى).
ومع ذلك، هن...

المكونة للدم الأورام الخبيثة الناشئة مباشرة عن حجرة الخلايا الجذعية المكونة للدم وغير المنضبط، تتقدم بسرعة، واضطرابات جهاز المناعة بوساطة شديدة غالباً مؤشرات أداء كليات الو1،2. ولكن على الرغم من أن المحاسبة لحدوث استجابة الابتزاز مقابل الورم تشخيصية مفيدة، لمفاوية المانحين كثيرا ما حفز وتعزيز هجوم المناعي بوساطة غير المرغوب فيها من مكونات الأنسجة السليمة داخل المتلقي الو-كليات ، عملية التي تسمى الاختلاس – مقابل – المضيف المرض3. مظاهرة في القناة الهضمية، جفهد المعوية ما يسمى، تمثل المضاعفات الأكثر اللعين من الحادة GvHD، الأشكال الخطيرة التي ترتبط بصورة روتينية مع ارتفاع معدل وفيات1،،من24.
عموما، موريني ونماذج لالو-HCT ظهرت كأدوات لا تقدر بثمن لتحديد ودراسة الآليات المناعية بوساطة الكامنة وراء أمراض ال جفهد5. بيد الحركية من، على سبيل المثال، الآثار المفيدة للتدخلات العلاجية رواية على مر الزمن في الفئران الحية بشكل روتيني يعتمد التقييم على تحديد GvHD السريرية عشرات6. بينما هذه النقاط مناسبة لكي تعكس، على سبيل المثال، عموما عبء المرض (أي، GvHD النظامية)، السريرية عشرات عدم حساسية موثوق بها تعكس المظاهر الخاصة بالجهاز (مثل، في القناة الهضمية). ومن ثم، الاستنتاجات، على سبيل المثال فيما يتعلق بآثار واقية من القناة الهضمية لتدخل علاجي معين، التي تستند إلى هذه التهديف النظم عادة ما تقع قصيرة.
وعلى الرغم من إحراز تقدم كبير من خلال اختراع رواية كامل الجسم التصوير طرائق في تركيبة مع الاستخدام أما الماوس الوراثية طرحه أو الفلورسنت نماذج7،8، منهجيات لمباشرة، وعلى وجه التحديد تقييم الأمعاء تنعدم مظاهر جفهد في الفئران الحية. ومن ثم فالأساس المنطقي وراء بروتوكول التقييم بالمنظار للنمط الظاهري GvHD المعوية الموصوفة في المقطع التالي للتغلب على هذه العقبة. وعلاوة على ذلك، أن الدافع أيضا خفض إعداد الفئران التجريبية منذ ذلك الحين، وحتى الآن، إجراء تقييم مفصل للخصائص الخلوية والجزيئية المورفولوجية (مثل، بالتشريح المرضى أو البيولوجيا الجزيئية) من GvHD المعوية في نهاية المطاف استلزم مظاهر التضحية بالماوس التجريبية.
قد سبق أن أبلغ مؤسستنا على منهجية التقييم بالمنظار ميني لمظاهر colonic أثناء التهاب القولون سينجينيك نماذج9. في البروتوكول المعروضة هنا، لدينا المكرر وتكييفها كولونوسكوبيك التهديف مصفوفة ليحركها اللوريسبونسي التهاب القولون في الفئران حية مع GvHD المعوية عند زرع اللوريكتيفي لمفاوية كليات التقنية العليا والجهات المانحة في فئة MHC تماما متطابقة الإعداد . وقد حددنا أربعة المعلمات المناسبة تعكس آفات colonic المعوية المتصلة GvHD. وعلاوة على ذلك، أنشأنا نظاما يتيح درجات صقل لأي واحد محدد، أسفر عن نقاط جديدة بسهولة إطلاع القارئ شدة GvHD المعوية الموجودة في ماوس معينة في نقطة زمنية معينة. وأكدت تحاليل نسيجية أن درجة المنظار عتبة معينة هو موثوق التنبؤ بدرجة معتدلة إلى عالية التهاب الأنسجة. ومن ثم، يظهر التقييم بالمنظار ميني لتمثيل بديل عامل للأنسجة معيار الذهب الذي يتطلب التضحية بالفئران التجريبية بشكل روتيني. الأهم من ذلك، هذا البروتوكول يمكن تطبيقها في أي نقطة زمنية معينة، ويمكن استخدامها مرارا وتكرارا خلال ال10،المرض11. وعلاوة على ذلك، على النقيض من استخدام نهج تعتمد على الإضاءة الحيوية، أية تدابير العمل المكثف وتستغرق وقتاً طويلاً مثل إينتيركروسينج وراثيا تعديل الفئران مطلوبة و، ومن ثم يمكن تطبيق المنهجية على أي خط الماوس الفائدة.
أخذت معا، نظراً لمنظور السريرية تضر مرضى الو-HCT GvHD المعوية الحادة، التقدم العلمي السريع ومزيد من التبصر في الآليات الجزيئية الكامنة وراء أمراض المناعة هناك حاجة ماسة. وبالمثل، تتطلب الاعتبارات الأخلاقية الهامة، وأن كسب المعرفة ينبغي أن يتحقق مع استخدام أقل عدد ممكن من الفئران التجريبية. ومن ثم على حد سواء الاعتراف بالمطالبات في أوساط البحث استكشاف GvHD المعوية يمكن أن يخدمها تنفيذ المسلسل التقييمات ميني المنظار في القولون في سلسلة العمل التجريبي لرصد والصف GvHD المعوية في الماوس التجريبية الحية النماذج، كوصف والمصادق عليها في البروتوكول المعروضة هنا.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1249px;" width="1249">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">BIOBEAM 2000 Gamma Irradiator</td>
			<td style="width:216px;">Gamma-Service Meical GmbH</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:479px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Phosphate-buffered saline (PBS )</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>D8662-6x500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Semken Forceps (lenght: 13 cm; serrated, curved tips)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11009-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hardened Fine Scissors (lenght: 8,5 cm; straight tips; cutting edge: 24 mm)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI-1640 Medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>R8758-500ML&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Hypodermic needle (26G)</td>
			<td style="width:216px;">B. Braun Melsungen AG</td>
			<td align="right" style="width:152px;">4657683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">1 mL syring</td>
			<td style="width:216px;">B. Braun Melsungen AG</td>
			<td style="width:152px;">9166017V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">50 mL tube</td>
			<td style="width:216px;">Sarstedt Ag &#38; Co.KG</td>
			<td align="right" style="width:152px;">62,547,254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Cell strainer with a 40 &#181;m mesh screen</td>
			<td style="width:216px;">BD Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ammonium chloride (NH4Cl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td style="width:152px;">11209</td>
			<td>ingredient of ACK lysing buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate (Na2EDTA)</td>
			<td>Carl Roth GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td style="width:152px;">8043.2</td>
			<td>ingredient of ACK lysing buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Potassium bicarbonate (KHCO3)</td>
			<td>Merck KGaA</td>
			<td style="width:152px;">1,048,540,500</td>
			<td>ingredient of ACK lysing buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD90.2 MicroBeads, mouse</td>
			<td>Miltenyi Biotec GmbH</td>
			<td>130-049-101</td>
			<td>magnet cell separation to isolate T cell-depleted bone marrow cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pan T Cell Isolation Kit II, mouse</td>
			<td>Miltenyi Biotec GmbH</td>
			<td>130-095-130</td>
			<td>magnet cell separation to isolate splenic T cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 700 anti-mouse CD45.2 Antibody (clone: 104; lot: B252126; RRID: AB_493731)</td>
			<td style="width:216px;">Biolegend</td>
			<td>109822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pacific Blue anti-mouse CD3 Antibody (clone: 17A2; lot: B227246; RRID: AB_493645)</td>
			<td style="width:216px;">Biolegend</td>
			<td>100214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FITC anti-mouse CD4 Antibody (clone: GK1.5; lot: B225057; RRID: AB_312691)</td>
			<td style="width:216px;">Biolegend</td>
			<td>100406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PE/Cy7 anti-mouse CD45.1 Antibody (clone: A20; lot: B217246; RRID: AB_1134168)</td>
			<td style="width:216px;">Biolegend</td>
			<td>110730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APC/Cy7 anti-mouse CD8a Antibody (clone: 53-6.7, lot: B247008; RRID: AB_312753)</td>
			<td style="width:216px;">Biolegend</td>
			<td>100714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Filtrated bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:216px;">Pan Biotec</td>
			<td>P40-47500</td>
			<td>ingredient of FACS buffer&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96-well polystyrene V-bottom plates</td>
			<td style="width:216px;">Greiner Bio-One</td>
			<td align="right">651201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Polystyrene Round-Bottom Tube (5 mL)</td>
			<td style="width:216px;">Falcon</td>
			<td align="right" style="width:152px;">352052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BD LSRFortessa II flow cytometer</td>
			<td>BD Bioscience Co.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Insulin syringe with sterile interior (30G)</td>
			<td style="width:216px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:152px;">324826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Oxy Vet Oxymat 3</td>
			<td style="width:216px;">Eickemeyer</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td>oxygen concentrator&#160; for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">NarkoVet&#160;</td>
			<td style="width:216px;">Eickemeyer</td>
			<td align="right">213062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Plexiglass chamber&#160;</td>
			<td style="width:216px;">Eickemeyer</td>
			<td align="right">214620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Straight Forward Telescope</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td>64301 AA</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protection and Examination Sheath</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td>61029 C</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Examination Sheath with working channel</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td>61029 D</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Biopsy Forceps</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td style="width:152px;">61071 ZJ&#160;</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;175 Watt SCB XenonLight Source</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td align="right">20132120</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fiber Optic Light Cable</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td style="width:152px;">495 NL</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image 1 S3 Camera Head</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td align="right">22220030</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image 1 SCB Camera Control Unit</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td align="right">22200020</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">LCD monitor</td>
			<td style="width:216px;">Olympus</td>
			<td>OEV181H</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Forane / Isofluran</td>
			<td>AbbVie Inc.&#160;</td>
			<td>B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formaldehyde solution 37 %</td>
			<td>Carl Roth GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td style="width:152px;">7398.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5,0 mL Dispenser tip&#160;</td>
			<td style="width:216px;">Eppendorf AG</td>
			<td align="right">30089456</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of intestinal graft-versus-host disease and its mini-endoscopic assessment in live mice

الاختلاس – مقابل – المضيف الأمراض الحادة (GvHD) تمثل مضاعفات أشد أن المرضى الذين يتلقون سابقا متمكنة من الخلايا الجذعية المكونة للدم (الو-HCT) زرع الوجه، وكثيراً ما يرتبط مع التوصل إلى نتائج سريرية فقراء. بعض الوقت، على سبيل المثال، عادة ما تستجيب للعلاجات المناعية القمعية أنشئت GvHD مظاهر الجلد و، ومن ثم عدم اتخاذ مسار فادح، والوجود وكثافة جفهد المعوية، خصوصا من منتصف إلى انخفاض أجزاء من القناة الهضمية، تؤثر بقوة على النتائج وعموما البقاء على قيد الحياة للمرضى الذين يعانون من الخيارات الحادة GvHD. العلاجية تقتصر أساسا على وكلاء المناعي القمعية الكلاسيكية الغلة معتدلة فقط آثار التخفيف من حدة المرض. ومن ثم معرفة مفصلة حول تتالي المقيم في الأنسجة المناعية، والتغيرات في الحجمية المعوية، والاستجابة stromal السابقة، عليها، وبعد ظهور جفهد المعوية هناك حاجة ماسة لفهم الأحداث والآليات التي تقوم عليها، المرضية ووضع الخيارات العلاجية المبتكرة. نماذج مورين من GvHD غالباً ما يلجأ إلى تحديد وتقييم وظيفيا الجزيئات ومسارات قيادة مزعومة GvHD المعوية. ومع ذلك، يعني على وجه الخصوص رصد وتقييم التهاب الأمعاء على مر الزمن تنعدم أساسا منذ عشرات المتبعة لتقييم والصف GvHD الحادة بشكل روتيني تتألف من مختلف المعايير التي تعكس GvHD النظامية بدلاً من ذلك مظاهرة. التقييم التفصيلي ل GvHD المعوية قد قيدت للدراسات باستخدام الفئران euthanized، وبالتالي أساسا باستثناء طولية (أي الحركية) تحليلات لحجرة colonic تحت شرط تجريبي معين (مثلاً، جسم بوساطة الحصار الذي تفرضه سيتوكين proinflammatory) في الفئران حية (أي، في فيفو). التقييم في الموقع ميني المنظار القولون القاصي الو-كليات التقنية العليا-يعامل الفئران الموصوفة هنا يسمح أ) تقييما مفصلاً عيانية لجوانب مختلفة من التهاب الأمعاء وب) الخيار لجمع عينات الأنسجة لتحليلات المصب في نقاط زمنية مختلفة على مدى فترة الملاحظة. إجمالاً، يوفر نهج ميني المنظار تقدما كبيرا في رصد موسع السريري وتقييم جفهد المعوية.

أنشئ البروتوكول الحالي، وصف التقييم بالمنظار ميني الآفات المرتبطة GvHD المعوية القولون القاصي، والتحقق من صحتها في الفئران تعرض سابقا للاستقراء المنهجي من طراز GvHD الحادة الشديدة. في هذه الدراسة، ونحن استخدام فئة MHC أنا متطابقة تماما النظام النموذجي في أي بالب/ج الفئران ك?...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice at JoVE.com

Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice

التعريفي للابتزاز الأمعاء – مقابل – المضيف المرض وتقييمها بالمنظار ميني في الفئران حية

نقدم هنا، هو بروتوكول وصف زرع الخلايا الجذعية المكونة للدم متمكنة ويسمح المتكررة التقييمات ميني المنظار في القولون القاصي في الموقع للوجود والخصائص، وشدة التهاب colonic داخل الحي الفئران التي تعاني من الابتزاز الأمعاء – مقابل – المضيف المرض.

Acute graft-versus-host disease (GvHD) represents the most severe complication that patients previously undergoing allogeneic hematopoietic stem cell ...

20- يوفر التقييم بالمنظار المصغر للكولون في الفئران الحية الدعم التجريبي الرئيسي للتحقيق في المظاهر المعوية للمرض الحاد في الرسم البياني مقابل المستضيف، GvHD، عند زرع الخلايا الجذعية المسببة للحساسية، والخلايا الجذعية المسببة للدم. التقييم غير الغازية من التهاب القولون الحاد ذات الصلة GVHD يمكن أن تعمل كبديل للعمل من علم الأنسجة القياسية الذهب، وبالتالي جعل التضحيات المتكررة الحيوانية للحصول على عينات الأنسجة غير ضرورية. إثبات الإجراء سيكون (فيرا بوشيلي) ، طبيبة ما بعد الدكتوراه من مختبريبعد يوم واحد من التشعيع الكلي للجسم من الفئران BALB / c المتلقي ، ضع ماوس متبرع CD-45.1 الحي 5B6 SJL في الموقف المعرض على اغلد عمل نظيف ، واستخدم طرفًا واحدًا منحنيًا و مسننة من ملقط simkin لرفع الفراء في كعب أخيل واحد. باستخدام مقص ناعم 8.5 سم متصلب مع نصائح مستقيمة ، قم بثني الجلد بين ملقط وكعب واحد ، ممدود الشق بجريه لتسهيل إزالة الجلد والفراء من الأطراف الخلفية. عندما يتم إزالة الجلد من الأطراف الخلفية، وقطع من خلال كل مفصل الورك والكاحل والركبة.تخزين الفخذ والساق من كل طرف خلفي في طبق بيتري واحد 92 ملم مليئة PVS على الجليد وإزالة بعناية أكبر قدر ممكن من العضلات من كل عظمة، ونقل كل عظم الفخذ وتنظيفها والساق في أنبوب 50 مل من 1640 1640 معقم 1640 1640 المتوسطة على الجليد الرطب. لعزل نخاع العظم، نقل عظمة واحدة في وقت واحد إلى طبق بيتري جديد 92 مل مملوءة بـ RPMI 1640 المتوسطة الطازجة، واستخدم مشرطًا لقطع أطراف كل عظمة. بعد ذلك، استخدم حقنة 1 مل مجهزة بإبرة قياس 26 لطرد العظام مع 1 مل من المتوسطة الطازجة في وقت ما في أنبوب جمع 50 مل تحتوي على 5 مل من المتوسط.عندما تم مسح جميع العظام، ماصة بلطف قطع نخاع العظام متفتت صعودا وهبوطا عدة مرات لتوليد تعليق خلية واحدة قبل تصفية الخلايا من خلال مصفاة خلية شبكة الشاشة 40 ميكرومتر في أنبوب جمع جديد 50 مل. بيليه الخلايا عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق الخلايا في 5 مل من كلوريد الأمونيوم تحلل البوتاسيوم العازلة لمدة ثلاث دقائق حضانة في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة، ووقف رد فعل مع 10 مل من PVS، والطرد المركزي الخلايا مرة أخرى.إعادة تعليق بيليه في 2 مل من PVS جديدة للعد، وتوضع جانبا ست مرات 10 إلى aliquot الخلية السادسة لتحليل تدفق مجرى النهر. بعد ذلك، استخدم مجموعة تنقية الخلايا المتاحة تجارياً لنضوب خلايا T إيجابية CD90.2 من نظام التعليق أحادي الخلية نخاع العظم، وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة، وتوضع جانباً مرة واحدة 10 إلى الخلية السادسة من eluate الخلايا T-المنضب للتحليل الخلوي تدفق المصب من نقاء الخلية وتكوينها قبل وبعد الانفصال. ثم، استخدام حقنة 1 مل مجهزة بإبرة 30 قياس لحقن خمس مرات 10 إلى الخلايا الخامسة T-الخلايا المنضب خلايا نخاع العظام في 100 ميكرولترات من PVS عن طريق الوريد في الفضاء الرجعية من الجيوب الأنفية الوريدية من كل المتلقي المشع.في اليوم التالي، ضع طحالًا تم حصاده من متبرع على مصفاة شبكية 40 ميكرومتر في أنبوب جمع 50 مل، واستخدم المكبس المحاقن للضغط على أنسجة الطحال من خلال المصفاة في الأنبوب. غسل المصفاة والمغطس مع PVS لجمع كل الطحال، بيليه الخلايا عن طريق الطرد المركزي. بعد أن ثبت تحلل خلايا الدم الحمراء، وإعادة تعليق خلايا الدم البيضاء للعد، وتوضع جانبا ست مرات 10 إلى aliquot الخلية السادسة لتحليل تدفق مجرى النهر.للحصول على مجموع CD3 إيجابية T-الخلية العزل من مجموع الطحال، واستخدام مجموعة تنقية الخلايا المتاحة تجاريا وفقا لتعليمات الشركة المصنعة، وتوضع جانبا مرة واحدة 10 إلى سادس CD3 إيجابية T-الخلية aliquot من الخلية الإيجابية كسر لتحليل تدفق تدفق أسفل النهر من نقاء الخلية وتكوينها قبل وبعد الانفصال. ثم، حقن سبع مرات 10 إلى الخامس alloreactive CD3 إيجابية الخلايا التائية في 100 ميكرولترات من PVS عن طريق الوريد في الفضاء الرجعية من كل فأر المتلقي للحث على GvHD. لتسجيل الآفات ذات الصلة GvHD عن طريق التنظير مصغرة من المنطقة القولونية، ورفع ذيل المتلقي فقط فوق جذر الذيل بيد واحدة، واستخدام اليد الأخرى لإدراج بعناية المنظار في المستقيم عبر فتحة الشرج.في حين أن تيار الهواء يضخم تجويف القولون والمستقيم، ببطء وبعناية تحريك المنظار إلى الأمام في اتجاه البورال. لتجنب إصابات القولون، والحفاظ على المنظار في المنطقة الوسطى من التجويف باستخدام شاشة الفيديو الحية للمساعدة في هذا الموضع. ابدأ في تسجيل تدفق الفيديو وسجل الالتهاب، وتقييم التهاب القولون المرتبط بـ GvHD من خلال تسجيل المعلمات كما هو موضح.عندما تم تحديد موقع تسجيل، نقل المنظار بلطف وقليلا ذهابا وإيابا لتقييم المعلمات المختلفة. لتقييم تناسق المعلمة والبراز، ضع المنظار على مسافة أوسع بالنسبة إلى جدار القولون. لتقييم الحبيبات والأوعية الدموية من الآفة، وضع المنظار في القرب من جدار القولون، وتطبيق بعناية التوتر جيدا الدوس على جدار القولون مع غيض من المنظار.عند الانتهاء من عملية التسجيل، إيقاف التسجيل. بالمقارنة مع الضوابط، زرع الخلايا الجذعية المسببة للحساسية كما هو موضح ينتج تحريض قوية مستنسخة من النمط الظاهري GvHD النظامية، مع زيادة تدريجية عشرات GvHD السريرية في الحيوانات المتلقية. تم تكييف هذه المعايير المصغرة القابلة للتقييم بالمنظار خصيصًا من التهاب القولون السينيجيني المبلغ عنه سابقًا في سياق معلمات تسجيل التهاب القولون القائم على الاستجابة للوصف الدقيق والتسخيص والدرجات للآفات المرتبطة بمرض GvHD المعوية في القولون القاصي.في الواقع ، فإن نظام الدرجات القائم على المناظير المصغرة يتيح تمييزًا سهلًا للفئران المتلقية للغدد الليمفاوية المانحة مع علامات شديدة على التهاب الأمعاء من فئران التحكم التي تخلو من GvHD . في المقابل ، لم تظهر أنسجة القولون من الفئران التحكم في عدم وجود ، على الأكثر ، علامات التهاب الأنسجة الهدولوجية المعتدلة ، بالاتفاق مع الغياب الفعلي لعلامات التهاب القولون القابلة للكشف عن منظار صغير.وعلاوة على ذلك، دراسات الارتباط بين مصغرة بالمنظار وهستووباولوجي تقييم نشاط التهاب القولون ودرجات GvHD النظامية تثبت أن مصغرة بالمنظار بعض عشرات أقل من أو يساوي ثلاثة التنبؤ بشكل موثوق بغياب منتصف إلى أعلى درجة المعوية GvHD المرتبطة gvHD التهاب الدرجات القولونية التي تم الحصول عليها من الدرجات الهدولوجية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن شدة GvHD المعوية المقدرة بالمنظار تظهر ارتباطًا مع نشاط مرض GvHD الجهازي. لتوحيد نتائج التقييم بالمنظار المصغر لالتهاب القولون وضمان قابلية المقارنة عبر الفئران المختلفة والتجارب مع مرور الوقت ، يجب اختيار موقع تشريحي محدد للتسجيل.بالإضافة إلى تسجيل التهاب القولون، تسمح قناة العمل المدمجة داخل الإعداد بالمنظار المصغر باسترجاع خزعات الأنسجة الموجهة للعرض التي تنطبق على تحليلات المصب المختلفة، مثل علم الأنسجة المعياري. نظرًا للطبيعة غير الغازية للتنظير المصغر ، يمكن تقييم التهاب القولون الحاد المرتبط بـ GvHD مرارًا وتكرارًا داخل نفس الحيوان في أي وقت تقريبًا ، مما يؤدي إلى رؤى رائعة في GvHD المعوي.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

تحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبية في الفئران SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

تحريض الطعم ضد المضيف المرض و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; مراقبة الخلايا T باستخدام نموذج MHC المطابقة الفئران

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

تحريض الفئران المعوية التهاب عن طريق نقل بالتبني من المستجيب CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; عالية</sup&gt; خلايا T في الفئران العوز المناعي

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

تحريض التجريبية المناعة الذاتية التهاب الدماغ في الفئران وتقييم توزيع الأمراض التي تعتمد على خلايا المناعة في الأنسجة المختلفة

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

والطريقة غير الغازية ومن الناحية الفنية غير كثيفة للتحريض وPhenotyping التجريبية البكتيرية والالتهاب الرئوي في الفئران

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice

تحريض استجابة التهابية في الثقافات الابتدائية الكبدية من الفئران

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

تقييم للسآمة للخلايا وإيمونومودولاتوري آثار المواد في شرائح البشرية دقة قطع الرئة

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

Induction and Scoring of Graft-Versus-Host Disease in a Xenogeneic Murine Model and Quantification of Human T Cells in Mouse Tissues using Digital PCR

الحث والتهديف من مرض الكسب غير المشروع مقابل المضيف في نموذج المورين Xenogeneic والقياس الكمي للخلايا تي البشرية في أنسجة الماوس باستخدام PCR الرقمية

Acute graft-versus-host disease (GVHD) is a significant limitation for patients receiving hematopoietic stem cell transplant as therapy for hematological ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

تحريض التهاب الكبد المناعي الذاتي الناجم عن الأدوية في الفئران BALB / c لدراسة آلياته المسببة للأمراض

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...

Bone Marrow Transplantation Platform to Investigate the Role of Dendritic Cells in Graft-versus-Host Disease

منصة زرع نخاع العظم للتحقيق في دور الخلايا التطبيب في مرض الكسب غير المشروع مقابل المضيف

Allogeneic bone marrow transplantation (BMT) is an effective therapy for hematological malignancies due to the graft-versus-leukemia (GVL) effect to ...