Name: induction of intestinal graft-versus-host disease and its mini-endoscopic assessment in live mice
Uploaded: 2019-02-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice at JoVE.com

Bu çalışmada ortak araştırma merkezleri (CRC) 221 (CRC/TR221-DFG, #324392634; proje B03) (için K.H.) ve CRC 1181 (CRC-DFG, proje B05) (için K.H.) tarafından desteklenen, her ikisi de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, Alman Araştırma Vakfı) tarafından finanse edilen.

Deneysel yöntem tanımlamak burada Ansbach'da, Bavyera, Almanya hükümeti tarafından onaylanmış olması.
1. GvHD indüksiyon
<ol><li>0. gün: Alıcı farelerin tüm vücuda radyasyon vermeliyiz
	<ol>
<li>Kadın CD45.2+ H2kd kullanmak+ BALB/c en az 10 haftalık alıcılar fareler.</li>
		<li>Ağırlık ve ağırlık GvHD İndüksiyon öncesi alıcı farelerin kaydedin. Not: Alıcı en az vücut ağırlığı 20 g olduğundan emin...

<ol>
	<li>Ferrara, J. L., Levine, J. E., Reddy, P., Holler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft-versus-host+disease.">Graft-versus-host disease.</a> The Lancet. 373, 1550-1561 (2009).</li><li>Magenau, J., Runaas, L., Reddy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+understanding+the+pathogenesis+of+graft-versus-host+disease.">Advances in understanding the pathogenesis of graft-versus-host disease.</a> British Journal of Haematology. 173, 190-205 (2016).</li><li>Ball, L. M., Egeler, R. M., Party, E. P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+GvHD:+pathogenesis+and+classification.">Acute GvHD: pathogenesis and classification.</a> Bone Marrow Transplantation. 41, 58-64 (2008).</li><li>Naymagon, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+graft-versus-host+disease+of+the+gut:+considerations+for+the+gastroenterologist.">Acute graft-versus-host disease of the gut: considerations for the gastroenterologist.</a> Nature Reviews. Gastroenterology &amp; Hepatology. 14, 711-726 (2017).</li><li>Zeiser, R., Blazar, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+of+acute+and+chronic+graft-versus-host+disease:+how+predictive+are+they+for+a+successful+clinical+translation.">Preclinical models of acute and chronic graft-versus-host disease: how predictive are they for a successful clinical translation.</a> Blood. 127, 3117-3126 (2016).</li><li>Cooke, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+of+idiopathic+pneumonia+syndrome+after+bone+marrow+transplantation:+I.+The+roles+of+minor+H+antigens+and+endotoxin.">An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: I. The roles of minor H antigens and endotoxin.</a> Blood. 88, 3230-3239 (1996).</li><li>Anthony, B. A., Hadley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+graft-versus-host+disease+and+in+vivo+T+cell+monitoring+using+an+MHC-matched+murine+model.">Induction of graft-versus-host disease and in vivo T cell monitoring using an MHC-matched murine model.</a> Journal of Visualized Experiments. (66), e3697 (2012).</li><li>Beilhack, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+acute+graft-versus-host+disease+by+blocking+T-cell+entry+to+secondary+lymphoid+organs.">Prevention of acute graft-versus-host disease by blocking T-cell entry to secondary lymphoid organs.</a> Blood. 111, 2919-2928 (2008).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+colonoscopy+in+live+mice.">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nature Protocols. 1, 2900-2904 (2006).</li><li>Buchele, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+Inflammatory+T+Helper+Cells+via+Retinoic+Acid-Related+Orphan+Receptor+Gamma+t+Is+Ineffective+to+Prevent+Allo-Response-Driven+Colitis.">Targeting Inflammatory T Helper Cells via Retinoic Acid-Related Orphan Receptor Gamma t Is Ineffective to Prevent Allo-Response-Driven Colitis.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1138 (2018).</li><li>Ullrich, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BATF-dependent+IL-7RhiGM-CSF++T+cells+control+intestinal+graft-versus-host+disease.">BATF-dependent IL-7RhiGM-CSF+ T cells control intestinal graft-versus-host disease.</a> The Journal of Clinical Investigation. 128 (3), 916-930 (2018).</li><li>Kaplan, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+antigens+determine+graft-versus-host+disease+phenotype.">Target antigens determine graft-versus-host disease phenotype.</a> Journal of Immunology. 173, 5467-5475 (2004).</li></ol>

İndüksiyon metodolojisi ve mini-endoskopik kolon fenotip bağırsak GvHD sırasında gözlenen değerlendirmenin protokolünü açıklar. Bu bağırsak GvHD boyuna ve noninvazif (yani, başlangıcından kolon tezahürü ve ilerleme maksimal hastalık aktivitesi kadar) tüm hastalığı boyunca çalışmaya bilim adamları daha geniş amacı hizmet vermektedir.
Ancak, orada bazı önemli adımlar ve önemli sınırlamalar deneyci teknolojileri ilgili bilimsel bağlamda uygulanmadan önce dikk...

Hematopoetik maligniteler, doğrudan hematopoetik kök hücre bölmesi ve kontrolsüz doğan hızla ilerliyor ve ağır immün aracılı bozuklukları çoğu kez allo-HCT1,2gerçekleştirmek için göstergeler. Ancak, her ne kadar prognostik yararlı Greft-versus-tümör yanıt dosyasının örneği için muhasebe, donör lenfositler sık inducing ve sağlıklı doku bileşenleri allo-HCT alıcı içinde istenmeyen bir immün aracılı saldırıya teşvik , Greft - versus - host hastalığı3olarak adlandırılan bir süreç. Belirtiler gut, sözde bağırsak GvHD akut GvHD, hangi ciddi formları ile yüksek ölüm oranı1,2,4rutin olarak ilişkili en korkulan komplikasyonu temsil eder.
Allo-HCT genel olarak, fare modelleri tanımlamak ve bağışıklık aracılıklı mekanizmalar GvHD5patogenezinde temel eğitim için çok değerli araçlar ortaya çıkmıştır. Ancak, kinetik değerlendirilmesi, örneğin, yararlı etkileri zaman içinde canlı fareler roman tedavi müdahaleler rutin dayanan klinik GvHD belirlenmesi puanları6. Bu sınavların yansıtmak uygun olmakla birlikte, örneğin, genel hastalık yükü (yani, sistemik GvHD), klinik olmaması güvenilir bir şekilde organ özgü belirtiler ayna için duyarlılık puanları (örneğin, gut). Bu nedenle, sonuçlar, örneğin bu sistemleri genellikle Puanlama dayanır gut-koruyucu etkileri belirli bir terapötik müdahale açısından yetersiz kalmaktadır.
Roman tüm vücut icadı ile önemli gelişmeler rağmen yöntemleri yöntemleri doğrudan ve özellikle her iki kollarındaki veya floresan genetik fare modelleri7,8, belgili tanımlık kullanım ile birlikte görüntüleme bağırsak değerlendirmek GvHD tezahürü canlı farelerde eksik. Dolayısıyla, bu engeli aşmak için sonraki bölümde açıklanan bağırsak GvHD fenotip endoskopik değerlendirme protokolü arkasındaki mantığı olduğunu. Ayrıca, motivasyon defa, hücresel, morfolojik ve moleküler özellikleri detaylı bir değerlendirmesini beri deneysel fareler numaraları azaltmak da (örneğin, histopatoloji veya moleküler biyoloji), bağırsak GvHD tezahürü sonuçta deneysel fare kurban gerektirmiştir.
Bizim kurum daha önce syngeneic kolit modelleri9sırasında kolon tezahürlerini bir mini-endoskopik değerlendirme metodolojisi olarak bildirdi. Burada sunulan iletişim kuralında, biz rafine ve colonoscopic uyarlanmış bir MHC sınıf HCT ve donör lenfosit alloreactive nakli üzerine bağırsak GvHD ile canlı farelerde alloresponse tahrik kolit için matris Puanlama ben tamamen ayarı uyumsuz . Biz dört parametre GvHD ilgili bağırsak kolon lezyonlar yansıtmak uygun tespit. Ayrıca, kolayca bağırsak GvHD belirli bir fare bir zaman noktasında bulunması önem derecesi hakkında okuyucu bilgilendirir yeni bir skor sonuçlanan herhangi bir tek belirleyici, ince ayarlı bir sınıflandırma sağlayan bir sistem kurduk. Histopatolojik analizleri üzerinde belirli bir eşiğe endoskopik bir skor orta yüksek sınıf doku iltihabı güvenilir bir şekilde tahmin doğruladı. Bu nedenle, mini-endoskopik değerlendirme rutin olarak deneysel farelerin fedakarlık gerektirir altın standart histopatoloji çalışma yerine göstermek için görünür. Önemlisi, bu iletişim kuralını hemen hemen herhangi bir zamanda noktada uygulanabilir ve hastalık10,11boyunca tekrar tekrar kullanılabilir. Ayrıca, bioluminescence bağımlı yaklaşımlar kullanımı aksine, ışığını genetik olarak değiştirilmiş fareler gibi emek yoğun ve zaman alan ölçümleri gereklidir ve bu nedenle, hemen hemen herhangi bir fare hat üzerinde metodoloji uygulanabilir faiz.
Birlikte, allo-HCT hastalarda şiddetli bağırsak GvHD, zararlı klinik açıdan verilen alınan hızlı bilimsel ilerleme ve bağışıklık patogenezinde temel moleküler mekanizmaları içine daha fazla fikir acilen ihtiyaç vardır. Benzer şekilde, önemli, etik konuları bilgi kazanç deneysel fareler en az sayıda kullanımı ile elde edilmelidir talep ediyorum. Bu nedenle, her ikisi de bağırsak GvHD keşfetmek araştırma topluluğu alacaklar izlemek ve canlı deneysel Mouse bağırsak GvHD notu için deneysel çalışma zincirindeki kolon seri mini-endoskopik değerlendirme uygulayarak gelişmiş olabilir tanıdı modelleri, açıklanan ve burada sunulan protokolündeki doğrulanmış olarak.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1249px;" width="1249">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">BIOBEAM 2000 Gamma Irradiator</td>
			<td style="width:216px;">Gamma-Service Meical GmbH</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td style="width:479px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Phosphate-buffered saline (PBS )</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>D8662-6x500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Semken Forceps (lenght: 13 cm; serrated, curved tips)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11009-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hardened Fine Scissors (lenght: 8,5 cm; straight tips; cutting edge: 24 mm)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI-1640 Medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td>R8758-500ML&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Hypodermic needle (26G)</td>
			<td style="width:216px;">B. Braun Melsungen AG</td>
			<td align="right" style="width:152px;">4657683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">1 mL syring</td>
			<td style="width:216px;">B. Braun Melsungen AG</td>
			<td style="width:152px;">9166017V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">50 mL tube</td>
			<td style="width:216px;">Sarstedt Ag &#38; Co.KG</td>
			<td align="right" style="width:152px;">62,547,254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Cell strainer with a 40 &#181;m mesh screen</td>
			<td style="width:216px;">BD Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ammonium chloride (NH4Cl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td>
			<td style="width:152px;">11209</td>
			<td>ingredient of ACK lysing buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate (Na2EDTA)</td>
			<td>Carl Roth GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td style="width:152px;">8043.2</td>
			<td>ingredient of ACK lysing buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Potassium bicarbonate (KHCO3)</td>
			<td>Merck KGaA</td>
			<td style="width:152px;">1,048,540,500</td>
			<td>ingredient of ACK lysing buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD90.2 MicroBeads, mouse</td>
			<td>Miltenyi Biotec GmbH</td>
			<td>130-049-101</td>
			<td>magnet cell separation to isolate T cell-depleted bone marrow cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pan T Cell Isolation Kit II, mouse</td>
			<td>Miltenyi Biotec GmbH</td>
			<td>130-095-130</td>
			<td>magnet cell separation to isolate splenic T cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 700 anti-mouse CD45.2 Antibody (clone: 104; lot: B252126; RRID: AB_493731)</td>
			<td style="width:216px;">Biolegend</td>
			<td>109822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pacific Blue anti-mouse CD3 Antibody (clone: 17A2; lot: B227246; RRID: AB_493645)</td>
			<td style="width:216px;">Biolegend</td>
			<td>100214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FITC anti-mouse CD4 Antibody (clone: GK1.5; lot: B225057; RRID: AB_312691)</td>
			<td style="width:216px;">Biolegend</td>
			<td>100406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PE/Cy7 anti-mouse CD45.1 Antibody (clone: A20; lot: B217246; RRID: AB_1134168)</td>
			<td style="width:216px;">Biolegend</td>
			<td>110730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">APC/Cy7 anti-mouse CD8a Antibody (clone: 53-6.7, lot: B247008; RRID: AB_312753)</td>
			<td style="width:216px;">Biolegend</td>
			<td>100714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Filtrated bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:216px;">Pan Biotec</td>
			<td>P40-47500</td>
			<td>ingredient of FACS buffer&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96-well polystyrene V-bottom plates</td>
			<td style="width:216px;">Greiner Bio-One</td>
			<td align="right">651201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Polystyrene Round-Bottom Tube (5 mL)</td>
			<td style="width:216px;">Falcon</td>
			<td align="right" style="width:152px;">352052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BD LSRFortessa II flow cytometer</td>
			<td>BD Bioscience Co.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Insulin syringe with sterile interior (30G)</td>
			<td style="width:216px;">BD</td>
			<td align="right" style="width:152px;">324826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Oxy Vet Oxymat 3</td>
			<td style="width:216px;">Eickemeyer</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td>oxygen concentrator&#160; for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">NarkoVet&#160;</td>
			<td style="width:216px;">Eickemeyer</td>
			<td align="right">213062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Plexiglass chamber&#160;</td>
			<td style="width:216px;">Eickemeyer</td>
			<td align="right">214620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Straight Forward Telescope</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td>64301 AA</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protection and Examination Sheath</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td>61029 C</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Examination Sheath with working channel</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td>61029 D</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">Biopsy Forceps</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td style="width:152px;">61071 ZJ&#160;</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;175 Watt SCB XenonLight Source</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td align="right">20132120</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fiber Optic Light Cable</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td style="width:152px;">495 NL</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image 1 S3 Camera Head</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td align="right">22220030</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image 1 SCB Camera Control Unit</td>
			<td style="width:216px;">KARL STORZ SE &#38;Co KG</td>
			<td align="right">22200020</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:403px;">LCD monitor</td>
			<td style="width:216px;">Olympus</td>
			<td>OEV181H</td>
			<td>part of the experimental setup for colonoscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Forane / Isofluran</td>
			<td>AbbVie Inc.&#160;</td>
			<td>B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formaldehyde solution 37 %</td>
			<td>Carl Roth GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td style="width:152px;">7398.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5,0 mL Dispenser tip&#160;</td>
			<td style="width:216px;">Eppendorf AG</td>
			<td align="right">30089456</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of intestinal graft-versus-host disease and its mini-endoscopic assessment in live mice

Akut Greft - versus - host hastalığı (GvHD) en ciddi komplikasyonu daha önce Allojeneik Hematopoietik kök hücre nakli (allo-HCT) yüz geçiren hastalar temsil eder ve sık sık bir zavallı klinik sonuçlar ile ilişkilidir. Süre, örneğin, deri belirtileri GvHD genellikle kurulan bağışıklık baskılayıcı tedavilere cevap vardır ve bu nedenle, önemli bir ders, varlığı ve özellikle parçalarının orta-için-alt bağırsak bağırsak GvHD yoğunluğunu almıyorsun güçlü etkisi sonucu ve genel olarak hasta akut GvHD. tedavi olanakları ile yaşama aslında sadece orta etkileri hastalık için Azaltıcı verimli klasik bağışıklık baskılayıcı acentelere sınırlı. Bu nedenle, doku yerleşik bağışıklık cascade hakkında detaylı bilgi bağırsak microbiota değiştirir ve stromal yanıt önceden üzerine ve bağırsak GvHD başlangıçlı sonra acilen olaylar ve altta yatan mekanizmaları anlamak için gereken onun patogenez ve yenilikçi tedavi olanakları geliştirmek için. Fare modelleri GvHD sık tanımlamak ve işlevsel moleküller ve putatively bağırsak GvHD sürüş yolları değerlendirmek için istihdam edilmektedir. Değerlendirmek ve akut GvHD notu için kurulan puanları düzenli olarak sistemik GvHD oldukça yansıtan çeşitli parametrelerin oluşmaktadır beri Ancak, özel olarak izlemek ve bağırsak iltihabı zaman içinde değerlendirmek anlamına gelir aslında eksik bulgular. Bağırsak GvHD ayrıntılı değerlendirme çalışmaları böylece aslında boyuna hariç olmak üzere fare, ötenazi kullanarak sınırlama getirildi (yani, kinetik) kolon bölmenin altında verilen bir deneysel koşul analizleri (örneğin, antikor aracılı proinflamatuar sitokin abluka) (yani, in vivo) canlı farelerde. Mini-endoskopik yerinde değerlendirme burada açıklanan allo HCT tedavi farelerin distal kolon bağırsak iltihabı ve b) seçeneği aşağı akım analizleri için doku örneği toplamak için farklı yönleri ayrıntılı bir) bir makroskopik değerlendirme sağlar Gözlem süresi boyunca çeşitli zaman puan. Genel olarak, mini-endoskopik yaklaşım preklinik noninvaziv izleme ve bağırsak GvHD değerlendirilmesi büyük bir ilerleme sağlar.

Distal kolon, bağırsak GvHD ilişkili lezyon mini-endoskopik değerlendirilmesi açıklayan geçerli protokol kurulan ve daha önce şiddetli akut GvHD manken sistemik indüksiyon tabi farelerde doğrulanmış. Bu çalışmada, biz tam olarak hangi BALB/C'de fareler öğrenirim ışınlanmış, ardından T hücre tükenmiş Allojenik Kemik iliği nakli vealloreactive C57BL/6 CD3 GvHD indükleyici yönetim modeli sistemi eşleşmeyen bir MHC sınıf kullanılan + T lenfositler...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice at JoVE.com

Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice

İndüksiyon bağırsak Graft - versus - host hastalığı ve canlı fareler, Mini-endoskopik değerlendirme

Burada, Allojeneik Hematopoietik kök hücre transplantasyonu açıklar ve distal kolonun tekrarlayan mini-endoskopik değerlendirme yerinde varlığı, özellikleri ve canlı içinde kolon iltihabı şiddeti için izin veren bir protokol mevcut bağırsak graft - versus - host hastalığı fareler.

Acute graft-versus-host disease (GvHD) represents the most severe complication that patients previously undergoing allogeneic hematopoietic stem cell ...

Canlı farelerde kolon mini-endoskopik değerlendirilmesi allojenik, hematopoetik kök hücre nakli üzerine akut graf-versus-host hastalığı, GvHD, bağırsak belirtileri araştırmak için önemli deneysel destek sağlar. Akut GvHD'ye bağlı kolitin invaziv olmayan değerlendirmesi altın standart histopatolojinin yerine geçerek doku örneklerini gereksiz hale getirmek için tekrarlanan hayvan kurbanlarını tamamlayabilir. Prosedürü gösteren Vera Buchele, benim laboratuvarımdan bir post-doc olacaktır.Alıcı BALB/c farelerinin toplam vücut ışınlamabir gün sonra, temiz bir çalışma kılıfı üzerinde eğilimli pozisyonda bir CD-45.1 canlı 5B6 SJL donör fare yerleştirin ve bir chilles topuk kürk kaldırmak için bir 13 cm kavisli ve tırtıklı ucu bir simkin forseps kullanın. Sertleştirilmiş 8,5 cm ince makas kullanarak düz uçları ile, ön bacaklar dan deri ve kürk kaldırılmasını kolaylaştırmak için kesi cranially uzatarak, forceps ve bir topuk arasında deri eğim. Deri arka ekstremitelerden çıkarıldığında, her kalça, ayak bileği ve diz eklemi ile kesilir.Her arka ekstremitenin uyluk ve sapını, buz üzerinde PVS ile dolu tek bir 92 mm Petri kabında saklayın ve her kemikten mümkün olduğunca fazla kas çıkarın ve her temizlenmiş uyluk ve tibia'yı ıslak buz üzerinde steril RPMI 1640 orta 50 mL'lik bir tüpe aktarın. Kemik iliğini izole etmek için, bir seferde bir kemiği taze RPMI 1640 ortamıyla dolu yeni bir 92 mL Petri kabına aktarın ve her kemiğin uçlarını kesmek için neşter kullanın. Daha sonra, kemikleri bir seferde 1 mL taze ortamla 5 mL orta içeren 50 mL'lik toplama tüpüne yıkamak için 26 kalibrelik iğne ile donatılmış 1 mL şırınga kullanın.Tüm kemikler temizlendiğinde, hücreleri 40 mikrometrelik örgü ekran hücresüzden yeni bir 50 mL toplama tüpüne filtrelemeden önce tek hücreli bir süspansiyon oluşturmak için ufalanmış kemik iliği parçalarını yavaşça yukarı ve aşağı inceleyin. Hücreleri santrifüj ile peletve oda sıcaklığında üç dakikalık kuluçka için amonyum klorür potasyum lisis tampon 5 mL hücreleri yeniden askıya. Kuluçka sonunda, 10 mL PVS ile reaksiyonu durdurun ve hücreleri tekrar santrifüj edin.Yeniden sayma için taze PVS 2 mL pelet askıya ve aşağı akış akışı sitometrik analiz için altıncı hücre aliquot altı kez 10 kenara koyun. Daha sonra, cd90.2-pozitif T hücrelerini üreticinin talimatlarına göre, kemik iliği tek hücreli süspansiyondan manyetik olarak tüketmek için ticari olarak kullanılabilen bir hücre saflaştırma kiti kullanın ve ayrılmadan önce ve ayrılmadan sonra hücre saflığı ve bileşiminin aşağı akış akışı sitometrik analizi için T-hücre tükenen t-hücre-tükenmiş eluat bir kez 10 kenara koyun. Daha sonra, her Bir ışınlanmış alıcı hayvanın venöz sinüs retrobulbar uzaya intravenöz PVS 100 mikrolitre beş kez 10 enjekte etmek için 30-gauge iğne ile donatılmış bir 1-mL şırınga kullanın.Ertesi gün, bir donör hayvandan hasat edilen bir dalak 50 mL toplama tüpünde 40 mikrometrelik bir örgü süzgeciüzerine yerleştirin ve dalak dokusunu tüpe süzgeçten geçirmek için şırınga pistonlu kullanın. Tüm splenositleri toplamak için süzgeci ve pistonu PVS ile yıkayın ve hücreleri santrifüj ile pelet. Kırmızı kan hücresi lisisi kanıtlandıktan sonra, beyaz kan hücrelerini saymak için yeniden askıya alın ve aşağı akış sitometrik analizi için altıncı hücre aliquot'una altı kez 10'luk bir kenara koyun.Toplam splenositlerden toplam CD3-pozitif T-hücre izolasyonu için, üreticinin talimatlarına göre ticari olarak kullanılabilen bir hücre saflaştırma kiti kullanın ve ayrılmadan önce ve sonra hücre saflığının ve bileşiminin aşağı akış akışı sitometrik analizi için pozitif hücre fraksiyonundan bir kez 10'dan altıncı CD3-pozitif T-hücre aliquot'una bir kenara koyun. Daha sonra, GvHD'yi indüklemek için her alıcı farenin retrobulbar uzayına 100 mikrolitre PVS intravenöz olarak beşinci alloreaktif CD3-pozitif T hücrelerine yedi kez 10 enjekte edin. Distal kolorektal bölgenin mini endoskopisi ile GvHD ile ilişkili lezyonları puanlamak için, bir elinizle kuyruk kökünün hemen üzerinde alıcı bir hayvanın kuyruğunu kaldırın ve diğer elinizi kullanarak anüs yoluyla rektuma endoskopu dikkatlice takın.Hava akımı kolorektal lümeni şişirirken, endoskobu aboral yönde yavaşça ve dikkatlice ileri doğru hareket ettirin. Kolon bağırsak yaralanmaları önlemek için, bu konumlandırma yardımcı olmak için canlı video ekranı kullanarak lümen orta alanda endoskop tutun. Video akışını kaydetmeye ve iltihabı puanlamaya başlayın, gösterildiği gibi parametreleri puanlayarak kolon GvHD ile ilgili iltihabı değerlendirin.Bir puanlama noktası bulunduğunda, farklı parametreleri değerlendirmek için endoskopu hafifçe ve hafifçe ileri ve geri hareket ettirin. Parametre translucency ve dışkı tutarlılığını değerlendirmek için, kolon duvarı ile ilgili olarak daha geniş bir mesafede endoskop yerleştirin. Lezyonun tanecikliliğini ve vaskülaritesini değerlendirmek için, endoskopu kolon duvarına yakın bir yerde yerleştirin ve endoskopucu ucuyla kolon duvarına dikkatlice doslanmış gerilim uygulayın.Puanlama işlemi tamamlandıktan sonra, kaydı durdurun. Kontrollerle karşılaştırıldığında, allojenik hematopoeik kök hücre nakli, sistemik GvHD fenotipinin tekrarlanabilir derecede sağlam indüksiyonuna neden olur ken, alıcı hayvanlarda klinik GvHD skorları giderek artmaktadır. Bu mini-endoskopik olarak değerlendirilebilen kriterler özellikle allo-response-driven kolit skorlama parametreleri bağlamında daha önce bildirilen syngeneic kolit ten uyarlanmıştır kesin açıklama, puanlama, ve distal kolonda intestinal GvHD hastalığı ile ilişkili lezyonların derecelendirilmesi.Gerçekten de, mini-endoskopik tabanlı derecelendirme sistemi aslında GvHD yoksun kontrol farelerden bağırsak iltihabı ciddi belirtileri ile donör-lenfosit alan farelerin kolay bir ayrımcılık sağlar. Mini-endoskopik tabanlı derecelendirme sistemi histopatolojik çalışmalar geçersiz kılınması ciddi GvHD ile ilgili inflamasyon etkilenen farelerin kolon benzer güçlü histopatolojik belirtileri görüntülemek doğruladı. Buna karşılık, kontrol farelerin kolon dokuları hiçbir görüntülenen, en fazla, inflamasyon hafif histopatolojik işaretler, kolit mini-endoskopik olarak tespit edilebilir işaretlerin sanal yokluğu ile uyum içinde.Ayrıca, mini-endoskopik ve histopatolojik olarak değerlendirilmiş kolit aktivitesi ile sistemik GvHD skorları arasındaki korelasyon çalışmaları, histopatolojik derecelendirmeden elde edilen orta-yüksek dereceli bağırsak GvHD ilişkili kolon inflamasyon skorlarının eksikliğini güvenilir bir şekilde tahmin eden mini endoskopik olarak üçten daha az veya üç etek puanın belirlendiğini göstermektedir. Buna ek olarak, endoskopik olarak değerlendirilen intestinal GvHD şiddeti sistemik GvHD hastalığı aktivitesi ile korelasyon gösterir. Kolon iltihabının mini-endoskopik değerlendirmesinin sonuçlarını standartlaştırmak ve zaman içinde farklı fareler ve deneyler arasında karşılaştırılabilirliği sağlamak için puanlama için tanımlanmış bir anatomik alan seçilmelidir.Kolon iltihabı puanlama ek olarak, mini-endoskopik kurulum içinde yerleşik çalışma kanalı standart histopatoloji gibi çeşitli downstream analizleri için geçerli görüş güdümlü doku biyopsileri alınmasına olanak sağlar. Mini endoskopinin non-invaziv doğası nedeniyle, akut GvHD ilişkili kolit tekrar tekrar hemen her zaman aynı hayvan içinde değerlendirilebilir, bu nedenle bağırsak GvHD içine büyüleyici anlayışlar vererek.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

SJL Farelerde Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve<em&gt; In Vivo</emBir MHC-eşlemeli murin Model Kullanma&gt; T Hücre İzleme

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Efektör CD4 Evlatlık transferi ile Kemirgen Bağırsak Enflamasyon indüksiyonu<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Yüksek</sup&gt; Bağışık yetmezliği olan farelere içine T Hücreleri

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

Çeşitli Dokularda Bağışıklık Hücreleri Hastalık bağımlı Dağıtım Fareler ve Değerlendirilmesi Deneysel Otoimmün Ensefalomyelitli indüksiyon

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Farelerde Deneysel Bakteriyel Pnömoni İndüksiyonunun ve fenotipleme bir Non-invaziv ve Teknik Olmayan yoğun Yöntem

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of an Inflammatory Response in Primary Hepatocyte Cultures from Mice

Fare Primer Hepatosit Kültürler bir inflamatuar yanıtın indüksiyon

The liver plays a decisive role in the regulation of systemic inflammation. In chronic kidney disease in particular, the liver reacts in response to the ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Sitotoksik değerlendirilmesi ve insan hassas kesim akciğer dilimleri maddelerin etkileri Immunomodulatory

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

Induction and Scoring of Graft-Versus-Host Disease in a Xenogeneic Murine Model and Quantification of Human T Cells in Mouse Tissues using Digital PCR

Bir Xenogeneic Murine modelinde Graft-versus-Host hastalığının indüksiyon ve skorlama ve dijital PCR kullanarak fare dokularında ınsan T hücrelerinin ölçümü

Acute graft-versus-host disease (GVHD) is a significant limitation for patients receiving hematopoietic stem cell transplant as therapy for hematological ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

Patojenik Mekanizmalarının İncelenmesi için BALB/c Farelerde İlaca Bağlı, Otoimmün Hepatitin İndüklenmesi

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...

Bone Marrow Transplantation Platform to Investigate the Role of Dendritic Cells in Graft-versus-Host Disease

Kemik İliği Transplantasyon Platformu Greft-versus-Host Hastalığında Dendritik Hücrelerin Rolünü Araştırmak Için

Allogeneic bone marrow transplantation (BMT) is an effective therapy for hematological malignancies due to the graft-versus-leukemia (GVL) effect to ...