Name: a middle cerebral artery occlusion technique for inducing post-stroke depression in rats
Uploaded: 2019-05-22T13:00:00
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Ringraziamo il professor Olena Severynovska del dipartimento di fisiologia, facoltà di biologia, ecologia e medicina, Oles Honchar Dnipro University, Dnipro, Ucraina per il suo sostegno e utili contributi alle nostre discussioni. I dati ottenuti fanno parte della tesi di dottorato di R.K..

Il Comitato per la cura degli animali dell'Università Ben-Gurion del Negev, Israele ha approvato tutte le procedure di trattamento e di prova utilizzate in questo protocollo.
1. preparazione dei ratti per la procedura sperimentale
Nota: Selezionare maschi adulti Sprague-Dawley ratti di peso 300-350 g.
<ol><li>Casa i ratti, quattro per gabbia, in un Vivarium a 22 ° c e 40% di umidità, con un invertito 12 h ciclo chiaro/scuro (luci off a 8:00 a.m...

Uno dei modi in cui la tecnica MCAO qui presentata potrebbe essere ritenuta più sicura rispetto al modello originale MCAO è illustrata dal fatto che la Corte dei conti e le sue filiali, tra cui l'arteria occipitale, la lingua terminale e l'arteria mascellare, non sono compromesse Quando si occludere l'MCA tramite l'ICA. L'offset originale del modello MCAO della ECA (e delle sue filiali), dissezione e coagulando distalmente i46, provoca la masticazione compromessa, a causa di un compromesso con l...

L'ictus è quarto nell'elenco delle malattie perpetrare la morte negli Stati Uniti1,2,3, mentre provoca la maggior parte delle disabilità negli adulti nei paesi sviluppati4; Questo rende il colpo un contendente leader tra i problemi di salute più significativi del mondo. La normalità nei pazienti colpiti da ictus è rara, con circa il 15%-40% delle vittime di sopravvivenza che soffrono di invalidità permanente, il 20% che richiede cure istituzionali 3 mesi dopo l'inizio della corsa5, e circa un terzo dei sopravvissuti di 6 mesi che necessitano di altri per aiutarli a vivere ogni giorno6. Stroke riferito anche per le crescenti spese sanitarie nazionali7. Le stime dell'associazione americana del cuore hanno costi legati all'ictus negli Stati Uniti a oltre $50 miliardi in 20108.
Non solo ictus provoca danni a lungo termine degli individui, ma alcuni sopravvissuti tendono a soffrire disturbi emotivi e comportamentali, come la demenza, affaticamento, ansia, depressione, delirio, e l'aggressione9,10,11 ,12,13,14. Il sequel psicologico più ricorrente dopo un ictus è la depressione post-ictus (PSD), diagnosticata in circa 40%-50% di sopravvivenze15,16,17. La depressione indotta da ictus provoca una maggiore morbilità e mortalità18,19,20,21,22. La fisiopatologia della PSD non è nota completamente, ma è apparentemente causata da molteplici fattori ed è legata alla disabilità, al danno cognitivo e al sito di lesione23.
Il modello di ratto dell'ischemia focale cerebrale, creato da MCAO, è il modello animale più diffuso di ictus24,25,26,27. Nel dimostrare l'induzione della PSD nei ratti attraverso l'occludendo dell'MCA tramite l'ICA, sono impiegate tecniche che riducono al minimo la mortalità e la variabilità nel modello MCAO28.
L'obiettivo principale di questo protocollo è quello di delineare i passi per indurre PSD nei ratti, occludendo l'MCA attraverso l'ICA, un modello modificato di MCAO, che riduce la mortalità e il risultato della variabilità28. Gli obiettivi specifici includono l'esecuzione di esami neurologici e istologici (che determinano il Punteggio di gravità neurologica [NSS], il volume della zona di infarto e l'edema cerebrale) per verificare l'efficacia di MCAO e l'utilizzo di test comportamentali per esaminare la influenza di questa procedura MCAO sullo sviluppo di disturbi emotivi, principalmente PSD.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:572px;" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Absorbent pad</td>
			<td style="width:71px;">-</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:167px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Black lusterless perspex box</td>
			<td style="width:71px;">-</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td>(120 cm &#215; 60 cm &#215; 60 cm), divided into a 25% central zone and the surrounding border zone</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bottles</td>
			<td style="width:71px;">Techniplast</td>
			<td style="width:119px;">ACBT0262SU</td>
			<td>150 ml bottles filled with 100 ml of water and 100 ml 1%(w/v) sucrose solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Electric Shock</td>
			<td>Heat System Ultasonic Inc.</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Horizon-XL</td>
			<td colspan="2">Mennen Medical Ltd</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Imaging System</td>
			<td style="width:71px;">Kodak</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td>For imaging and quantification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Monofilament</td>
			<td style="width:71px;">-</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paper towels</td>
			<td style="width:71px;">Pharmacy</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td>Dry towels used for keeping rats dry after immersing them in water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pexiglass cylinder</td>
			<td style="width:71px;">-</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td>a 100 cm tall and 40 cm in diameter cylinder used for carrying out the forced swim test</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Purina Chow</td>
			<td style="width:71px;">Purina</td>
			<td align="right" style="width:119px;">5001</td>
			<td>Rodent laboratory chow given to rats, mice and hamster is a life-cycle nutrition that has been used in biomedical researc for over 5 decades. Provided to rats ad libitum in this experiment</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Rat Cages</td>
			<td style="width:71px;">Techniplast</td>
			<td style="width:119px;">2000P</td>
			<td>Conventional housing for rodents. Was used for housing rats throughout the experiment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scanner&#160;</td>
			<td>Canon CanoScan</td>
			<td style="width:119px;">4200F</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Video Camera</td>
			<td style="width:71px;">ETHO-VISION (Noldus)</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td>Digital video camera for high definition recording of rat behavior under open field test</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a middle cerebral artery occlusion technique for inducing post-stroke depression in rats

La depressione post-ictus (PSD) è la più ricorrente di tutte le complicazioni psichiatriche risultanti da un ictus ischemico. Una maggioranza maggiore (circa 60%) di tutti i pazienti affetti da ictus ischemico soffrono di PSD, un disturbo considerato un precursore ischemico correlato al colpo per aumentare la morte e la degradazione in salute. La patofisiologia della PSD è ancora oscura. Per studiare il meccanismo di sviluppo e l'occorrenza di PSD ulteriormente, e per scoprire una terapia, abbiamo tentato di sviluppare un nuovo protocollo che richiede occludendo l'arteria cerebrale centrale (MCA) attraverso l'arteria carotide interna (ICA) nei ratti. Questo protocollo descrive un modello di PSD indotto nei ratti attraverso l'occlusione dell'arteria cerebrale centrale (MCAO). Utilizzati anche nell'esperimento sono il test di nuoto forzato Porsolt e il test di preferenza di saccarosio per confermare e valutare l'umore depressivo dei ratti sotto inchiesta. Invece di inserire il catetere attraverso l'arteria carotide esterna (ECA), come previsto per la procedura originaria, questa tecnica MCAO ha il monofilamento che passa direttamente attraverso l'ICA. Questa tecnica MCAO è stata sviluppata pochi anni fa e porta ad una riduzione della mortalità e della variabilità. È generalmente accettato che i criteri utilizzati siano preferenziali nella selezione dei modelli biologici. I dati ottenuti con questo protocollo dimostrano che questo modello di MCAO potrebbe essere un modo per indurre PSD nei ratti e potrebbe potenzialmente portare alla comprensione della fisiopatologia e del futuro sviluppo di nuovi farmaci e altri agenti neuroprotettivi.

I risultati istologici (tabella 1) hanno rivelato un volume di infarto statisticamente significativo come percentuale del cervello totale (p < 0,0001) post-MCAO rispetto agli animali del gruppo Sham-Control. Anche riferito è stato un edema cerebrale statisticamente significativo quando la valutazione dal gruppo sperimentale (p < 0,0003) è stato messo fianco a fianco con quello del gruppo Sham-controllo.
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A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats

Qui presentiamo un protocollo per indurre la depressione post-ictus nei ratti, occludendo l'arteria cerebrale centrale attraverso l'arteria carotide interna. Usiamo il test di nuoto forzato Porsolt e il test di preferenza del saccarosio per confermare e valutare gli Stati d'animo depressivi indotti.

Una tecnica di occlusione dell'arteria cerebrale media per indurre la depressione post-ictus nei ratti

Post-stroke depression (PSD) is the most recurrent of all psychiatric complications resulting from an ischemic stroke. A greater majority (about 60%) of ...

Il nostro protocollo propone una nuova tecnica di occlusione dell'arteria cerebrale mediale nei ratti per aiutare a studiare il meccanismo dello sviluppo della depressione post-ictus e per trovare una terapia più efficiente. Il vantaggio principale della nostra tecnica è la sua capacità di ridurre la variabilità nei cambiamenti di peso, nell'edema cerebrale e nel volume infarto e di ridurre al minimo le morti legate alla procedura. Dopo aver confermato una mancanza di risposta al pizzico di coda in un ratto Sprague Dawley maschio da 300 a 350 grammi, posizionare l'animale su una piastra riscaldante di 37 gradi Celsius e utilizzare una sonda rettale per monitorare la temperatura corporea del nucleo.Applicare un unguento sugli occhi dell'animale e radere i capelli dal collo. Quindi, disinfettare la pelle esposta con il 70% di clorexidina alcolica e coprire il topo con il drappo chirurgico sterile prima di eseguire l'occlusione secondo tecniche standard. Per ottenere il punteggio di gravità neurologica, posizionare un ratto occluso su una superficie piana e consentire all'animale di muoversi liberamente.Dopo un minuto, tirare delicatamente il topo all'indietro per la coda e classificare la risposta dell'andatura dell'animale. Per misurare il volume infarto, scansionare le fette di cervello macchiate preparate con una risoluzione di 1.600 per 1.600 punti per pollice e ritagliare e standardizzare la scala per tutte le immagini. Quindi, caricare le immagini standardizzate in un programma software di analisi delle immagini appropriato e utilizzare uno strumento di tracciamento per misurare l'area del pallore contrassegnato in sei fette consecutive di due millimetri per determinare la dimensione infar zione come percentuale dell'intera fetta cerebrale.Da 30 a 33 giorni dopo l'intervento chirurgico, trasferire gli animali in una stanza chiusa, silenziosa e leggera in gabbie individuali e posizionare una bottiglia contenente 100 millilitri di soluzione di saccarosio all'1% in ogni gabbia per 24 ore. Il giorno dopo, rimuovere le bottiglie, nonché il cibo e l'acqua potabile per 12 ore. Al termine del periodo di privazione, mettere una bottiglia contenente 100 millilitri di soluzione di saccarosio all'1% e una bottiglia contenente 100 millilitri di acqua di rubinetto in ogni gabbia per quattro ore.Quindi, registrare il volume della soluzione di saccarosio e dell'acqua consumata per consentire il calcolo dell'affinità con la preferenza per il saccarosio per ciascun animale. Per il test di nuoto forzato di Porsolt, da 30 a 33 giorni dopo l'intervento chirurgico, posizionare prima ogni topo in un cilindro verticale in plexiglass contenente 80 centimetri di acqua di 25 gradi Celsius per 15 minuti. Alla fine del periodo di assuazione, lasciare asciugare il topo per 15 minuti nel recinto riscaldato a 32 gradi Celsius prima di riportare l'animale nella sua gabbia di casa.Il giorno successivo, riportare il topo al cilindro per gli ultimi cinque minuti, registrando il test di cinque minuti per consentire il calcolo della durata totale dell'immobilità durante quel periodo. L'analisi istologica rivela un volume infarto statisticamente significativo come percentuale del volume totale del cervello post-MCAO rispetto agli animali nel gruppo di controllo fittizio. Un edema cerebrale statisticamente significativo si osserva anche negli animali da esperimento rispetto al gruppo di controllo fittizio.Gli animali MCAO dimostrano prestazioni neurologiche inferiori rispetto agli animali finti a 50 minuti, 24 ore e sette giorni dopo l'intervento chirurgico. I ratti MCAO consumano anche una quantità significativamente inferiore di saccarosio e mostrano un'immobilità più lunga durante i test di nuoto forzato di Porsalt rispetto agli animali finti. Questo è un modello importante per gli studi di ictus comportamentale e potrebbe servire come strumento per valutare le terapie future o fornire dati preclinici critici sull'efficacia delle sostanze terapeutiche.

Research

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