Name: isolation, purification, and differentiation of osteoclast precursors from rat bone marrow
Uploaded: 2019-05-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Purification, and Differentiation of Osteoclast Precursors from Rat Bone Marrow at JoVE.com

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (81473692) к Юн мА. Авторы благодарят весь коллектив медицинского исследовательского центра первого колледжа клинической медицины в Нанкинском университете китайской медицины.

Все методы, связанные с животными, описанным здесь, одобрены институциональным Комитетом по уходу и использованию животных (ИАКУК) Нанкинского университета китайской медицины.
1. Настройка
<ol><li>Подготовьте несколько продольно срезанные 1 мл пипетки (1 см) и несколько 1,5 м?...

<ol>
	<li>Boyle, W. J., Simonet, W. S., Lacey, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclast+differentiation+and+activation.">Osteoclast differentiation and activation.</a> Nature. 423 (6937), 337-342 (2003).</li><li>Kular, J., Tickner, J., Chim, S. M., Xu, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+the+regulation+of+bone+remodelling+at+the+cellular+level.">An overview of the regulation of bone remodelling at the cellular level.</a> Clinical Biochemistry. 45 (12), 863-873 (2012).</li><li>Park, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+of+the+reduced+enamel+epithelium+and+its+implications+for+bone+resorption+during+tooth+eruption.">Apoptosis of the reduced enamel epithelium and its implications for bone resorption during tooth eruption.</a> Journal Of Molecular Histology. 44 (1), 65-73 (2013).</li><li>Boyde, A., Ali, N. N., Jones, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resorption+of+dentine+by+isolated+osteoclasts+in+vitro.">Resorption of dentine by isolated osteoclasts in vitro.</a> British Dental Journal. 156 (6), 216-220 (1984).</li><li>Chambers, T. J., Revell, P. A., Fuller, K., Athanasou, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resorption+of+bone+by+isolated+rabbit+osteoclasts.">Resorption of bone by isolated rabbit osteoclasts.</a> Journal of Cell Science. 66, 383-399 (1984).</li><li>Takahashi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclast-like+cell+formation+and+its+regulation+by+osteotropic+hormones+in+mouse+bone+marrow+cultures.">Osteoclast-like cell formation and its regulation by osteotropic hormones in mouse bone marrow cultures.</a> Endocrinology. 122 (4), 1373-1382 (1988).</li><li>Takahashi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoblastic+cells+are+involved+in+osteoclast+formation.">Osteoblastic cells are involved in osteoclast formation.</a> Endocrinology. 123 (5), 2600-2602 (1988).</li><li>Suda, T., Takahashi, N., Martin, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+osteoclast+differentiation.">Modulation of osteoclast differentiation.</a> Endocrine Reviews. 13 (1), 66-80 (1992).</li><li>Yoshida, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+mutation+osteopetrosis+is+in+the+coding+region+of+the+macrophage+colony+stimulating+factor+gene.">The murine mutation osteopetrosis is in the coding region of the macrophage colony stimulating factor gene.</a> Nature. 345 (6274), 442-444 (1990).</li><li>Yasuda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclast+differentiation+factor+is+a+ligand+for+osteoprotegerin/osteoclastogenesis-inhibitory+factor+and+is+identical+to+TRANCE/RANKL.">Osteoclast differentiation factor is a ligand for osteoprotegerin/osteoclastogenesis-inhibitory factor and is identical to TRANCE/RANKL.</a> Proceedings of The National Academy of Sciences of The United States of America. 95 (7), 3597-3602 (1998).</li><li>Lacey, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoprotegerin+ligand+is+a+cytokine+that+regulates+osteoclast+differentiation+and+activation.">Osteoprotegerin ligand is a cytokine that regulates osteoclast differentiation and activation.</a> Cell. 93 (2), 165-176 (1998).</li><li>Marino, S., Logan, J. G., Mellis, D., Capulli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+culture+of+osteoclasts.">Generation and culture of osteoclasts.</a> BoneKEy Reports. 3, 570 (2014).</li><li>Pei, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluoride+decreased+osteoclastic+bone+resorption+through+the+inhibition+of+NFATc1+gene+expression.">Fluoride decreased osteoclastic bone resorption through the inhibition of NFATc1 gene expression.</a> Environmental Toxicology. 29 (5), 588-595 (2014).</li><li>Arnett, T. R., Dempster, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+pH+on+bone+resorption+by+rat+osteoclasts+in+vitro.">Effect of pH on bone resorption by rat osteoclasts in vitro.</a> Endocrinology. 119 (1), 119-124 (1986).</li><li>Arnett, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+is+a+major+stimulator+of+osteoclast+formation+and+bone+resorption.">Hypoxia is a major stimulator of osteoclast formation and bone resorption.</a> Journal of Cellular Physiology. 196 (1), 2-8 (2003).</li><li>Orriss, I. R., Arnett, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+osteoclast+cultures.">Rodent osteoclast cultures.</a> Methods in Molecular Biology. 816, 103-117 (2012).</li><li>Quinn, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+receptor+antibodies+in+the+identification+of+osteoclasts.">Calcitonin receptor antibodies in the identification of osteoclasts.</a> Bone. 25 (1), 1-8 (1999).</li></ol>

Способность получать и изучать остеокласты в пробирке является критическим и фундаментальным навыком для любого исследователя, желающего изучать костный метаболизм, что может помочь понять механизмы костной поглощающей болезни и развить новые терапевтические агенты. В настоящем ис?...

Костный гомеостаз – это сложный физиологический процесс, регулируемый остеокластами костной ткани и образующие костные остеобласты1. Равновесие между остеобластным и остеокластов активностью при посредничестве остеобластов и остеокластов, соответственно, крайне важно для поддержания здоровья костей и гомеостаза, поскольку возмущения в костном гомеостазе могут приводить к заболеваниям костей, таким как аномальный рост костей или потеря плотности костной ткани. Как уникальные кости-резорбции, остеокласты имеют важное значение при заболеваниях, связанных с аномальной костной разрушения, включая остеопороз, периодонтит, и перипротеза остеолиза2,3.
Развитие Остеокласт в основном делится на два этапа. Методы, созданные Бойде et al.4 и камерами et al.5 , составили первый этап в 1980-х годах. Они получили относительно обильные остеокласты из костей новорожденных животных, что является быстрым периодом реконструкции. Остеокласты выпускаются путем фрагментации и перемешивания костей в специальной среде. Тем не менее, клетки, полученные этим методом, являются низкими по количеству и чистоте. Вторым этапом было развитие культур дальнего действия остеокластов, использование клеток гематопоэтических родословных, полученных из костного мозга6. Цитокинов, таких как 1а, 25-дигидроксивитамин D3, простагландин Е2 (PGE-2) и паратиреоидный гормон (ПТГ), которые добавляются в среду культуры, действуют через систему остеобластов/стромальных клеток, чтобы стимулировать образование остеокластов7,8 . Однако чистота и количество остеокластов, полученных этим методом, не могут удовлетворить потребности современной молекулярной биологии. Затем, открытие макрофагов колонии-стимулирующий фактор (м-КСФ) и рецептор активатора для ядерного фактора-Клаб лиганда (rankl) сделать остеокластогенез легче9,10,11, и метод использования м-КСФ и RANKL непосредственно стимулировать образование остеокластов широко используется во всем мире. Тем не менее, есть еще некоторые детали в методологии, которые должны быть улучшены.
В настоящее время наиболее часто используемый метод остеокластов, описанный Марино et al.12 и пей et al.13, часто требует удаления окружающих тканей вокруг кости и использует стерилизованные иглы для смыва костного мозга с Завершенные средства массовой информации. Есть некоторые недостатки этого процесса, в том числе тот факт, что (1) удаление окружающих тканей вокруг кости требует много времени и большой хирургической техники, (2) кости хрупкие и может привести к оттоку костного мозга, (3) полость костного мозга может быть слишком крошечные, чтобы флеш, и (4) есть риск травмы Stick иглы. Чтобы избежать этих проблем, мы центрифугирования труб, содержащих кости для костного мозга, а не иглы промывка костного мозга. Здесь мы представляем стабильный и безопасный метод, который изолирует костный мозг за меньшее время и с меньшими усилиями по сравнению с традиционной процедурой. Вместе с использованием градиента центрифугирования плотности мы получаем большое количество полностью дифференцированных остеокластов в пробирке.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acid Phosphatase, Lekocyte (TRAP) kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>387A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic Hard Tissue Slicer</td>
			<td>Lecia</td>
			<td>RM2265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine femoral bone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Purchased by ourselves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Incubator</td>
			<td>Heraus</td>
			<td>BB16/BB5060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sarana</td>
			<td>s-fbs-au-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Rabbit IgG H&#38;L (Alexa Fluor 488)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab150077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hard Tissue Grinders</td>
			<td>Lecia</td>
			<td>SP-2600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histopaque Kit</td>
			<td>TianJing Haoyang</td>
			<td>TBD2013DR</td>
			<td>Silicified centrifugal tube amd cell separation solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hochest33342</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B2261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Phase Contrast Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Fluorescence Microscope</td>
			<td>Lecia</td>
			<td>DMI-3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM, no Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11090-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin, Liquid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti-Calcitonin receptor</td>
			<td>Bioss</td>
			<td>bs-0124R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Rat M-CSF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>400-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Rat sRANK Ligand</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>400-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis Buffer</td>
			<td>Absin</td>
			<td>abs47014932</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscopy</td>
			<td>FEI</td>
			<td>Quanta 200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>89649</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation, purification, and differentiation of osteoclast precursors from rat bone marrow

Остеокласты большие, многоядерные, и кости-расрезные клетки моноцитов-макрофагов линии, которые формируются путем слияния моноцитов или прекурсоров макрофагов. Чрезмерное резорбция кости является одним из наиболее значимых клеточных механизмов, ведущих к остеолитических заболеваний, включая остеопороз, периодонтит, и перипротеза остеомолиза. Основной физиологической функцией остеокластов является поглощение как гидроксиапатитового минерального компонента, так и органической матрицы костной ткани, генерирующей характерный вид резорбции на поверхности костей. Есть относительно мало остеокластов по сравнению с другими клетками в организме, особенно у взрослых костей. Недавние исследования были посвящены тому, как получить более зрелые остеокласты за меньшее время, что всегда было проблемой. В лабораториях в целях получения более зрелых остеокластов были разработаны некоторые усовершенствования в методах изоляции и культуры. Здесь мы вводим метод, который изолирует костный мозг за меньшее время и с меньшими усилиями по сравнению с традиционной процедурой, используя специальное и простое устройство. С использованием градиента центрифугирования плотности, мы получаем большое количество полностью дифференцированных остеокластов из крысиного костного мозга, которые определены классическими методами.

Цель протокола заключалась в том, чтобы удобно изолировать и очищать большое количество прекурсоров остеокластов и успешно вызывать остеокласты. Дополняя M-СМЖ и RANKL, гигантские остеокласты были замечены в дни 5-6. Формирование остеокластов было успешно идентифицирова...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Purification, and Differentiation of Osteoclast Precursors from Rat Bone Marrow at JoVE.com

Isolation, Purification, and Differentiation of Osteoclast Precursors from Rat Bone Marrow

Изоляция, очищение, и дифференциация Остеокласт прекурсоров из костного мозга крысы

Остеокласты представляют собой тканеспецифические макрофаги, полученные из моноцитов-макрофагов линии гемопоэтических стволовых клеток. Этот протокол описывает, как изолировать клетки костного мозга, чтобы получить большое количество остеокластов при одновременном снижении риска несчастных случаев, найденных в традиционных методах.

Osteoclasts are large, multinucleated, and bone-resorbing cells of the monocyte-macrophage lineage that are formed by the fusion of monocytes or ...

Этот метод имеет важное значение, поскольку он может быть использован для получения большого количества полностью дифференцированных остеокластов in vitro. Основным преимуществом этого метода является то, что он является более стабильным и безопасным и изолирует костный мозг за меньшее время и с меньшими усилиями по сравнению с традиционным производством. Этот метод может обеспечить стабильный источник остеокластов, которые являются важным объектом метаболических заболеваний костей, включая остеопороз, пародонтит и перипротетический остеолиз.С незначительными изменениями, этот протокол также может быть подходящим для получения различных видов костного мозга, полученных клеток у крыс или других животных. Для начала поместите усыпляемых животных на дезинфицированную доску в положении лежа. Используя стерильные ножницы, сделать разрез примерно один сантиметр в длину на проксимальной бедренной кости, чтобы очистить кожу.Далее, вскрыть бедренной кости и голени. Тщательно и осторожно, сократить двусторонние части соединения вокруг бедра, колена и голеностопного сустава, чтобы изолировать голени и бедренной кости. Отрежьте часть тканей вокруг кости, убедившись, что быть тщательным.Затем поместите очищенные кости в блюдо с пятью миллилитров полной культуры среды. Используйте стерильные ножницы, чтобы отрезать длинную кость. Используйте одну миллилитровую шприц-иглу, чтобы тщательно промыть полость костного мозга 10 миллилитров полных средств массовой информации до тех пор, пока полость костного мозга не станет белой.Перенесите эту клеточную подвеску в 50-миллилитровую трубку и процедите ее с помощью 70-метрового ситечко, чтобы удалить оставшуюся ткань. Добавьте пять миллилитров буфера красного лиза крови и инкубировать клетки на льду в течение восьми минут. После этого центрифуга клетки в 250 раз G в течение пяти минут, чтобы дать ячейки гранулы.Аспирировать супернатант и повторное течение клеток в 10 миллилитров полного средства массовой информации. Используйте гемоцитометр для подсчета ячеек и расчета времени, затраченного на действия, предпринятые для этого метода. Во-первых, поместите усыпляемых животных на дезинфицированную доску в положении лежа.Используя стерильные ножницы, сделать разрез примерно один сантиметр в длину на проксимальной бедренной кости, чтобы очистить кожу. Далее, вскрыть бедренной кости и голени. Отрежьте части тканей вокруг кости, хотя нет необходимости удалять ткани полностью.Промыть голени и бедренной кости с 12 миллилитров PBS, а затем разрезать их пополам. Поместите snipped голени и бедренной кости в подготовленный один миллилитр пипетки кончик, и поместите это в подготовленную трубку микро центрифуги. Центрифуга трубки три раза при 1000 раз G и при четырех градусах по Цельсию в течение 45 секунд.После этого удалите кончик пипетки, содержащий кость, из трубки, оставив костный мозг в трубке. Добавить 200 микролитров PBS в трубку, и пипетки вверх и вниз неоднократно распадаются костного мозга тщательно. Перенесите эту клеточную подвеску в 50-миллилитровую трубку и отфильтрув ее 70-микрометровым ситечком, чтобы удалить оставшиеся ткани.Затем используйте гемоцитометр для подсчета ячеек и расчета времени, затраченных на шаги, предпринятые в этом разделе. Добавьте шесть миллилитров раствора разделения клеток в стерильную силико-центробежную трубку. Добавьте разбавленную клеточную суспензию в трубку.После добавления подвески между слоем ячеек и раствором разделения появится четкий предел. Затем прилипать кончик пипетки к внутренней поверхности трубки под углом 45 градусов. Центрифуга слоистых раствора в горизонтальной центрифуге при 500 раз G в течение 30 минут.После этого, аспирировать облачно второй слой, который содержит целевые клетки сверху вниз. Перенесите клетки-мишени в новую трубку. Добавить пять миллилитров PBS для мытья клеток, и центрифуга на 250 раз G в течение пяти минут.Повторите этот процесс стирки, добавив PBS и центрифугирования в общей сложности три моет. Повторное высасывка клеточных гранул со средой индукции костного мозга. Используйте гемоцитометр для подсчета клеток.Затем добавьте пять-восемь миллилитров индукционной среды костного мозга, чтобы получить окончательный раствор клеток в 300 000 клеток на миллилитр. Добавьте один миллилитр этого клеточного раствора к каждому колодец из 24 хорошо пластины. После инкубации клеток при 37 градусах по Цельсию в течение 24 часов, осторожно аспирировать от среды и добавить один миллилитр индукции остеокласта среды для каждой хорошо.Аккуратно агитировать пластину и вернуть ее в инкубатор. Каждые 48 часов, удалить и заменить 0,8 миллилитров индуцции остеокласта среды из каждой хорошо. Агитировать пластину осторожно, прежде чем вернуть его в инкубатор.Чтобы начать предварительное лечение костных ломтиков, используйте микроэлектровую пилу, чтобы разрезать свежую бедренную кору бедренной кости на два сантиметра толщиной ломтиками вдоль продольной оси. После резки и измельчения ломтиков, мыть ломтики, погружая их в стакан деионизированной воды и подвергая их ультразвуку на 100 герц в течение одного часа. Повторите этот процесс стирки три раза.Погрузите вымытые ломтики в 75%-ный алкоголь в течение двух часов. Затем, аспирировать от алкоголя и подвергать каждый слайд ломтиков ультрафиолетового света в течение одного часа на чистой платформе. Чтобы начать toluidine голубое окрашивание, поместите предварительно обработанные кости ломтиками в колодцы 24 хорошо пластины.После этого добавьте культурную среду в 24 хорошо пластины, чтобы погрузить кости ломтиками в течение двух часов. Завод и вызвать клетки, как поопродемонстрировано ранее. После остеокластов появились в четыре-шесть дней, мыть ломтики с одним миллилитр 0,25 молярного гидроксида аммония.Sonicate ломтики три раза в течение пяти минут каждый, чтобы удалить живые клетки и для анализа ямы ресорбции на кости ломтиками. Затем удалите гидроксид аммония и испачкайте ломтики одним миллилитром 1%толуидинового синего раствора на ломтик в течение двух минут. Вымойте пятна ломтиками с PBS.Случайным образом выберите пять представлений и используйте программное обеспечение для анализа изображений для выполнения полуколиченого анализа области ресорбции. Во-первых, префикс кости ломтиками с одним миллилитром 2,5%glutaraldehyde на ломтик в течение двух часов при комнатной температуре. Sonicate префиксированные ломтики три раза в течение трех минут каждый с одним молярным гидроксидом аммония, чтобы удалить клетки.Затем удалите гидроксид аммония и трижды промыть ломтики костей с помощью PBS, при этом каждая стирка длится 12 минут. Исправить промывают кости ломтиками с 1%osmic кислоты в течение двух часов при комнатной температуре. Выполните обезвоживание градиента этанола, как указано в текстовом протоколе.После этого замените этанол изоамил ацетат на 15 минут. Пальто ломтики с золотым палладием и анализировать их путем сканирования электронной микроскопии. В этом исследовании, большое количество прекурсоров остеокласта были изолированы, очищены и успешно индуцированных стать остеокластов.Дополняя M-CSF и RANKL, гигантские остеокласты рассматриваются в дни пять-шесть. Формирование этих остеокластов успешно идентифицируется путем окрашивания ловушек. Большие и фиолетовые клетки считаются положительными клетками TRAP с несколькими ядрами.С помощью этого метода, это типично для получения 800 остеокластов, содержащих до 30 ядер на остеокласта в 24 хорошо пластины. По сравнению с традиционным методом, этот улучшенный метод экономит около 20 минут в течение всего процесса изоляции. Использование костных ломтиков для оценки активности костной ресорбции является типичным методом in vitro.Через толуйдин синий окрашивания, область резорбции визуализирована как светло-зеленый. Структуру и характеристики костных ям можно четко наблюдать путем сканирования электронной микроскопии. CTR, один из остеокластов конкретных маркеров клеток, имеет решающее значение для выявления остеокластов и изучения формирования остеокластов в кости.Положительное выражение CTR четко определяет остеокласты и отличает их от макрофагов поликарионов. CTR четко указывается в иммунофлуоресценции анализы зеленого цвета, в то время как синий указывает на ядра клеток. Убедитесь в том, чтобы не перелом бедренной кости и голени, чтобы избежать потери костного мозга.Человек, который никогда не выполнял этот метод раньше, может бороться при оказании помощи клеткам решение операции. Наконечник пипетки должен быть прилип к внутренней поверхности трубки и храниться под углом 45 градусов к внутренней поверхности.

Research

JoVE Journal

Biology

Culture of myeloid dendritic cells from bone marrow precursors

Культура миелоидных дендритных клеток из костного мозга прекурсоров

Myeloid dendritic cells (DCs) are frequently used to study the interactions between innate and adaptive immune mechanisms and the early response to ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Подготовка первичных гемопоэтических клеточных культур из костного мозга мышей для Электропорация

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Homing of Hematopoietic Cells to the Bone Marrow

Homing гемопоэтических клеток в костном мозге

Homing is the phenomenon whereby transplanted hematopoietic cells are able to travel to and engraft or establish residence in the bone marrow.  Various ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Дифференциация эмбриональных стволовых клеток в олигодендроцитов прекурсоров

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Isolation and Purification of Kinesin from Drosophila Embryos

Isolation and Purification of Kinesin from Drosophila Embryos

Выделение и очистка от кинезин Drosophila Эмбрионы

Motor proteins move cargos along microtubules, and transport them to specific sub-cellular locations. Because altered transport is suggested to underlie a ...

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

Выделение кровеносных сосудов, полученных мультипотентные прекурсоров от человека скелетных мышц

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

Osteoclast Derivation from Mouse Bone Marrow

Остеокластов Вывод из костного мозга мыши

Osteoclasts are highly specialized cells that are derived from the monocyte/macrophage lineage of the bone marrow. Their unique ability to resorb both the ...

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

Изоляция, характеристика и дифференцировка сердца стволовых клеток от сердца взрослого мыши

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...

Isolation and Differentiation of Primary White and Brown Preadipocytes from Newborn Mice

Выделение и дифференциация первичных белых и коричневых преадипоцитов у новорожденных мышей

The understanding of the mechanisms underlying adipocyte differentiation and function has greatly benefited from the use of immortalized white ...

Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria

Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria

Масштабируемое выделение и очистка внеклеточных везикул от кишечной палочки и других бактерий

Diverse bacterial species secrete ~20-300 nm extracellular vesicles (EVs), comprised of lipids, proteins, nucleic acids, glycans, and other molecules ...