Name: lucifer yellow - a robust paracellular permeability marker in a cell model of the human blood-brain barrier
Uploaded: 2019-08-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lucifer Yellow - A Robust Paracellular Permeability Marker in a Cell Model of the Human Blood-brain Barrier at JoVE.com

Gli autori sono grati per il sostegno finanziario dal 2017 New Investigator Award dall'American Association of Pharmacy, un hunkele Dreaded Disease award dalla Duquesne University e i fondi di start-up School of Pharmacy per il laboratorio Manickam. Ringraziamo il laboratorio Leak (Duquesne University) per l'assistenza occidentale del blotting e per aver permesso l'uso del loro imager A 16 bit Odyssey. Vorremmo anche includere una nota speciale di apprezzamento per Kandarp Dave (laboratorio Manickam) per l'aiuto con il gonfiore occidentale.

1.Coltura cellulare generale hCMEC/D3
<ol><li>Rianimazione delle cellule congelate NOTA: tutti i lavori di manutenzione e di manutenzione della coltura cellulare sono stati eseguiti all'interno di una cappa sterile di biosicurezza. I mezzi di coltura, gli integratori e i reagenti sono stati acquistati come prodotti sterili o sterilizzati tramite filtrazione utilizzando un filtro di membrana di 0,22 m per prevenire la contaminazione microbica.<ol>
<li>Aggiungere 8,5 mL di soluzione di collagene (0,15...

<ol>
	<li>Abbott, N. J., Patabendige, A. A., Dolman, D. E., Yusof, S. R., Begley, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+blood-brain+barrier.">Structure and function of the blood-brain barrier.</a> Neurobiology Of Disease. 37 (1), 13-25 (2010).</li><li>Griep, L. 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B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood-brain+barrier-specific+properties+of+a+human+adult+brain+endothelial+cell+line.">Blood-brain barrier-specific properties of a human adult brain endothelial cell line.</a> The FASEB Journal. 19 (13), 1872-1874 (2005).</li><li>Avdeef, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+well+can+in+vitro+brain+microcapillary+endothelial+cell+models+predict+rodent+in+vivo+blood-brain+barrier+permeability?.">How well can in vitro brain microcapillary endothelial cell models predict rodent in vivo blood-brain barrier permeability?.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 43 (3), 109-124 (2011).</li><li>Rahman, N. 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Un ruolo chiave della BBB è quello di impedire lo scambio di ioni non essenziali e sostanze tossiche tra la circolazione sistemica e il cervello per mantenere l'emostasi del microambiente neurale. Una delle caratteristiche del BBB è la capacità delle cellule endoteliane capillari di formare giunzioni strette (TJ) che sigillano efficacemente il percorso paracellulare di trasporto. Abbiamo dimostrato un saggiodell'app LY P come metodo quantitativo per determinare l'apparente cinetica della formazione della ba...

La barriera emato-encefalica (BBB) è la barriera protettiva che limita l'afflusso di componenti plasmatici nel tessuto cerebrale ed è costituita da cellule endoteliali cerebrali insieme a cellule di supporto come i periciti. Il ruolo principale di BBB è quello di fungere da barriera che sigilla lo spazio tra il sangue periferico e il sistema nervoso centrale (SNC) per mantenere l'emostasi del microambiente neurale1,2. Le cellule endoteliali capillari del cervello sigillano efficacemente la via paracellulare attraverso la formazione di giunzioni strette intercellulari (TJ)1. Questa barriera protettiva consente al glucosio e ai nutrienti selezionati di entrare nel cervello mentre impedisce alla maggior parte degli ioni, sostanze tossiche e farmaci di passare attraverso questa barriera stretta. Oltre al suo ruolo protettivo, la funzione di barriera naturale della BBB rappresenta una grave sfida nello sviluppo di sistemi di somministrazione di farmaci rivolti al SNC.
I modelli di coltura cellulare in vitro del BBB sono strumenti utili per studiare la sua biologia e per comprendere gli effetti del trattamento farmacologico sull'integrità delle barriere TJ. Abbiamo usato la linea cellulare endoteliale cerebrale cerebrale (hCMEC/D3) come modello in vitro poiché è un modello accettato di endotelio cerebrale umano3 e riassume molte funzioni del BBB umano. hCMEC/D3 è una delle linee cellulari più comunemente utilizzate per la modellazione del BBB in vitro4,5,6,7,8,9. Nonostante i suoi valori relativamente bassi di resistenza elettrica transeteliale (TEER), una misura di tenuta della barriera, questa linea cellulare mantiene la maggior parte delle proprietà morfologiche e funzionali delle cellule endoteliali cerebrali, anche come monocoltura in assenza di cellule gliali coculture6,7. La linea cellulare hCMEC/D3 esprime più marcatori BBB, compresi trasportatori attivi e recettori fino al passaggio 35 circa senza subire la dedifferenziazione ai fenotipi instabili6,7,9 ,10,11. La caratteristica più sorprendente della linea cellulare hCMEC/D3 come modello BBB in vitro è la sua capacità di formare TJ5,9,11,12. Va notato che, sebbene i modelli BBB derivati da cellule staminali abbiano mostrato una maggiore permeabilità in molti studi rispetto alla linea cellulare hCMEC/D3 e esprimano alcuni marcatori BBB, devono ancora evolversi come il modello cellulare BBB più comune13. È importante sottolineare che i modelli BBB derivati dalle cellule staminali devono essere caratterizzati rispetto ai numeri massimi di passaggio che consentono alle cellule di mantenere i fenotipi BBB stabili14.
Tre metodi primari sono comunemente utilizzati per determinare l'integrità della barriera TJ,compresa la misurazione del TEER, la misurazione del coefficiente di permeabilità apparente (P app) di piccole molecole di tracciante idrofilo come il saccarosio, l'inulina, il giallo di Lucifero, ecc. e immunostaining di marcatori molecolari noti di TJ come claudin-5, zo-1, occludina, ecc5. TEER è un metodo relativamente semplice e quantitativo che misura la resistenza elettrica attraverso i monostrati cellulari coltivati su un substrato di membrana porosa5 . Tuttavia, i valori TEER possono essere influenzati da variabili sperimentali come la composizione del mezzo di coltura e il tipo di strumento di misurazione. Una probabile combinazione di questi fattori porta ad un'ampia distribuzione dei valori di TEER che vanno da 2 a 1150 cm2 nella linea cellulare hCMEC /D3 coltivata per 2-21 giorni13. L'immunostaining è un metodo visivo per determinare la presenza di proteine TJ etichettando la proteina mirata utilizzando anticorpi. Tuttavia, l'immunostaining comporta una serie di passaggi sperimentali, tra cui la necessità di fissare/permeabilizzare le cellule che possono provocare artefatti sperimentali e i segnali fluorescenti possono svanire nel tempo. I fattori di cui sopra possono portare a errori soggettivi che influiscono sulla qualità dei dati.
L'obiettivo principale di questo lavoro è quello di presentare un saggio di permeabilità apparente basata su LY determinare la cinetica di una formazione di monostrato confluente in cellule hCMEC/D3 coltivate. Sebbene altri sistemi BBB in vitro avanzati, come i sistemi di cocoltura, i sistemi microfluidici, siano imitazioni fisiologicamente più rilevanti con una funzione di barriera significativamente migliorata15,16,17, l'hCMEC/D3 l'installazione del transwell è un modello semplice e affidabile per stimare la cinetica della formazione di TJ e selezionare rapidamente l'effetto di diverse formulazioni farmacologiche sulla funzione di barriera. In generale, i valoridell'app P sono coerenti per vari soluti idrofili nei monostrati hCMEC/D3. Ad esempio, i valori diApp P segnalati per vari soluti di massa molecolare bassa (come saccarosio, mannitolo, LY, ecc.) in diversi modelli BBB in vitro sono nell'ordine di 10-4 cm/min5,18,19 , 20.Nella nostra configurazione sperimentale, le cellule endoteliali cerebrali vengono semiate su una membrana micropororosa rivestita di collagene per l'attaccamento cellulare e la formazione di monostrato per imitare la barriera in vivo. Il LY aggiunto nel lato apicale dovrebbe attraversare le giunzioni strette intercellulari e accumularsi nel lato basolaterale. Concentrazioni maggiori di LY nel lato basolaterale indicano una barriera immatura e non completamente funzionale, mentre concentrazioni più basse riflettono il trasporto limitato a causa della presenza di TJ funzionali con conseguente barriera matura.
LY è un tintura idrofilo con picchi di eccitazione/emissione distinti ed evita la necessità di radioetichettare molecole traccianti come saccarosio, mannitolo o inulina. Così, i valori di fluorescenza di LY possono essere utilizzati per calcolare direttamente la sua permeabilità paracellulare attraverso i monostrati BBB. Inoltre, rispetto a molti coloranti disponibili in commercio utilizzati in campi biomedici che soffrono di piccoli spostamenti Di Stokes come la fluoresceina21, lo spostamento di Stokes di LY è di circa 108 nm con sufficiente separazione spettrale, consentendo così i dati di fluorescenza LY come robusta lettura per determinare la permeabilità paracellulare. Abbiamo usato il gonfiore occidentale come tecnica ortogonale per dimostrare i cambiamenti nell'espressione della proteina del marcatore di giunzione stretta, o-1, nel tempo della coltura. L'espressione di O-1 rilevata tramite il gonfiore occidentale viene utilizzata per integrare i datidell'app LY P e, in combinazione, questi dati suggeriscono che i cambiamenti osservati nei valoridell'app LY P riflettono la formazione di un monostrato con un graduale aumento espressione del marcatore di giunzione stretto, .
Come sottolineato in precedenza, l'obiettivo centrale di questo lavoro è quello di dimostrare un saggio LY come una semplice tecnica per monitorare la formazione di un monostrato confluente con giunzioni strette funzionali. Tuttavia, per dimostrare un'ulteriore utilità del saggio sviluppato, abbiamo misuratol'app LY P in monostrati hCMEC/D3 trasaffetti da nanoparticelle di DNA. Gli acidi nucleici possono essere condensati in nanoparticelle polielettrolitiche con un diametro di 100-200 nm attraverso l'interazione elettrostatica tra i gruppi di polimeri caricati positivamente e i gruppi di fosfati caricati negativamente di acidi nucleici22, 23. Ci riferiamo a questi complessi come nanoparticelle di DNA (DNA NP) nel nostro lavoro. Mentre la nostra intenzione è quella di trasfecare le cellule ed esprimere la proteina desiderata, dobbiamo garantire che le proprietà della barriera dei monostrati hCMEC/D3 non siano compromesse. I nostri dati suggeriscono che un regime di trasfezione genica luciferasi standard di 4 h non cambia misurabilmente la permeabilità LY dimostrando l'utilità del saggiodell'app LY P per determinare i cambiamenti nell'integrità della barriera TJ.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1035px;" width="1033">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:545px;">hCMEC/D3 cell line</td>
			<td style="width:195px;">Cedarlane Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">102114.3C-P25</td>
			<td style="width:172px;">human cerebral microvascular endothelial cell line&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">gWizLuc</td>
			<td>Aldevron&#160;</td>
			<td>5000-5001</td>
			<td>Plasmid DNA encoding luciferase gene</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">lucifer yellow CH dilithium salt&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>155267</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Transwell inserts with polyethylene terephthalate (PET) track-etched membranes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue culture flask&#160;</td>
			<td>Olympus Plastics</td>
			<td>25-207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24-well Flat Bottom&#160;</td>
			<td>Olympus Plastics</td>
			<td>25-107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Black 96-Well Immuno Plates&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>437111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">S-MEM 1X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>1951695</td>
			<td>Spinner-minimum essential medium (S-MEM)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EBM-2</td>
			<td>Clonetics</td>
			<td>CC-3156</td>
			<td>Endothelial cell basal medium-2(EBM-2)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">phosphate-buffered saline 1X</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH3025601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagen Type I&#160;</td>
			<td>Discovery Labware, Inc.</td>
			<td>354236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Pierce BCA Protein Assay Kit&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>23227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Culture Lysis 5X Reagent&#160;</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Beetle Luciferin, Potassium Salt&#160;</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:545px;">SpectraMax i3&#160;</td>
			<td style="width:195px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Fluorescence Plate Reader</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:545px;">Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td style="width:195px;">Gibco</td>
			<td style="width:123px;">15250061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:545px;">ZO-1 Polyclonal Antibody&#160;</td>
			<td style="width:195px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:123px;">61-7300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:545px;">anti-GAPDH antibody</td>
			<td style="width:195px;">abcam</td>
			<td style="width:123px;">ab8245</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:545px;">Alexa Fluor680-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Mouse LgG(H+L)</td>
			<td style="width:195px;">Jackson ImmunoResearch Inc</td>
			<td style="width:123px;">128817</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:545px;">12-well, Flat Bottom</td>
			<td style="width:195px;">Olympus Plastics</td>
			<td style="width:123px;">25-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:545px;">RIPA buffer (5X)</td>
			<td style="width:195px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:123px;">J62524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:545px;">Aprotinin</td>
			<td style="width:195px;">Fisher BioReagents</td>
			<td style="width:123px;">BP2503-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:545px;">Odyssey CLx imager</td>
			<td style="width:195px;">LI-COR Biosciences</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>for scanning western blot membranes</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lucifer yellow - a robust paracellular permeability marker in a cell model of the human blood-brain barrier

La barriera emato-encefalica BBB è costituita da cellule endoteliali che formano una barriera tra la circolazione sistemica e il cervello per impedire lo scambio di ioni non essenziali e sostanze tossiche. Giunzioni strette (TJ) sigillano efficacemente lo spazio paracellulare nei monostrati, causando una barriera intatta. Questo studio descrive un saggio di fluorescenza basato su LY che può essereutilizzato per determinare il suo coefficiente di permeabilità apparente (P app) e a sua volta può essere utilizzato per determinare la cinetica della formazione di monostrati confluenti e la risultante giunzione stretta risultante l'integrità della barriera nei monostrati hCMEC/D3. Dimostriamo inoltre un'utilità aggiuntiva di questo saggio per determinare l'integrità funzionale di TJ nelle cellule trasfette. I nostri dati dal saggiodell'app LY P mostrano che le cellule hCMEC/D3 seminato in una configurazione transwell limitano efficacemente il trasporto paracellulare LY 7 giorni dopo la coltura. Come utilità aggiuntiva del saggio presentato, dimostriamo anche che la trasfezione delle nanoparticelle di DNA non altera il trasporto paracellulare LY nei monostrati hCMEC/D3.

In primo luogo, abbiamo determinato l'effetto del tempo di coltura sulla permeabilità LY per determinare l'apparente cinetica della formazione di TJ. I valori medidell'app LY P dal giorno 1 al seeding di 10 post sono illustrati nella Figura 2a. Il giorno 1,l'app P media era 4,25 x 10-4 cm/min e leggermente sceso a 3,32 x 10-4 cm/min il giorno 2. Il valore mediodell'app P è leggermente aumentato a 3,93 x...

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Lucifer Yellow - A Robust Paracellular Permeability Marker in a Cell Model of the Human Blood-brain Barrier

Lucifero Giallo - Un Robusto Indicatore di Permeabilità Paracellulare in un Modello Cellulare della Barriera Sangue-Cervello Umano

Presentiamo un saggio di fluorescenza per dimostrare che Lucifero Giallo (LY) è un marcatore robusto per determinare l'apparente permeabilità paracellulare dei monostrati cellulari hCMEC/ D3, un modello in vitro della barriera emato-encefalica umana. Abbiamo usato questo saggio per determinare la cinetica di una formazione di monostrato confluente nelle cellule hCMEC/D3 coltivate.

The blood-brain barrier BBB consists of endothelial cells that form a barrier between the systemic circulation and the brain to prevent the exchange of ...

Questo protocollo è una tecnica robusta per determinare l'integrità funzionale delle giunzioni strette intercellulari in un modello cellulare della barriera ematico-encefalica umana. Questo è un protocollo semplice e abbastanza economico che consente di calcolare l'apparente permeabilità in un periodo di tempo più breve invece di eseguire un saggio cinetico più lungo. Questo metodo può anche essere usato per determinare l'integrità funzionale delle giunzioni strette nelle cellule endoteliali cerebrali trasfette da nanoparticelle di DNA polimerico.Per iniziare la placcatura cellulare, posizionare inserti di coltura tissutale con membrane microporose in una piastra di coltura di 24 po '. Aggiungere 400 microlitri di collagene da 0,15 milligrammi per millilitro di tipo uno in ogni inserto di coltura tissutale. Quindi incubare per un'ora in un incubatore di anidride carbonica di 37 gradi Celsius, 5%.Dondolare delicatamente la piastra a 24 pozzi per consentire una diffusione uniforme della soluzione di collagene sulla membrana microporosa negli inserti di coltura tissutale. Dopo un'ora, rimuovere la soluzione di collagene e lavare delicatamente la membrana microporosa con 0,4 millilitri di tampone 1X PBS. Ora, le celle hCMEC/D3 della piastra con una densità di 50.000 celle per centimetro quadrato negli inserti cellulari.Posizionare la piastra da 24 pozzi con la configurazione della coltura tissutale nell'incubatore per consentire l'attacco cellulare e la proliferazione. Incubare la piastra per sette giorni per consentire alle cellule di raggiungere il 100% di confluenza. Rimuovere il mezzo di crescita a giorni diversi e trasferire 0,5 millilitri di mezzi freschi prerifavosi negli inserti di coltura tissutale.Ripetere la procedura di placcatura per l'blotting occidentale per determinare i cambiamenti nell'espressione ZO-1 per la trasfezione della nanoparticella del DNA e per il test ATP per determinare la vitalità cellulare nelle cellule trasfette. Per determinare la permeabilità apparente di Lucifer Yellow, ogni giorno dopo la semina, rimuovere il mezzo di crescita e aggiungere 1,5 millilitri di tampone di trasporto pre-riscaldato al lato basolaterale del pozzo. Ora aggiungi 58,3 microlitri di soluzione Lucifer Yellow da 20 micromolari sul lato apicico di ogni inserto trans-well.Salvare 50 microlitri della soluzione per le misurazioni della fluorescenza. Dopo aver rimosso completamente il buffer PBS residuo dal lato apicali, aggiungere la soluzione Lucifer Yellow il più rapidamente possibile per evitare di asciugare le cellule. Garantire volumi accurati della soluzione Lucifer Yellow sul lato apicico.Assicurati di aggiungere lo stesso e accurato volume della soluzione Lucifer Yellow in tutti gli inserti. Lavorare rapidamente per evitare di asciugare le cellule. Incubare le cellule in uno shaker a piastre rotanti a 100 giri/min e 37 gradi Celsius per 60 minuti.Quindi rimuovere 30 microlitri del campione Lucifero Giallo da ogni compartimento apicico. Trasferire la soluzione Lucifer Yellow da 20 micromolare e i campioni laterali apicari in tubi preetichettati. Ora diluire il campione di dieci volte utilizzando il buffer di trasporto.Rimuovere 500 microlitri da ogni compartimento basolaterale e trasferire il campione in tubi preetichettati. Prepara una serie di standard Lucifer Yellow per la curva standard. Aggiungere 100 microlitri di ogni campione standard apicale e basolaterale ad ogni pozza di una piastra nera da 96 porri in duplicato.Utilizzare un lettore di micropiacplate a fluorescenza per misurare l'intensità della fluorescenza gialla lucifera e calcolare la permeabilità apparente, come descritto nel testo del manoscritto. L'effetto del tempo di coltivazione sulla permeabilità di Lucifero Giallo è stato usato per determinare l'apparente cinetica della formazione di giunzioni strette. I valori apparenti di permeabilità sono diminuiti significativamente il settimo giorno rispetto al primo giorno, suggerendo che la barriera è diventata più stretta.I valori apparenti di permeabilità si stabilizzarono fino al giorno 10. Ciò implicava che la formazione della barriera era completa e funzionale, con conseguente diminuzione del trasporto paracellulare giallo lucifero. L'assorbimento occidentale è stato usato per rilevare cambiamenti nell'espressione della proteina di giunzione stretta ZO-1 nel tempo.Le due bande rappresentano le due isoforme ZO-1. L'analisi densitometrica ha rivelato che il valore in pixel di ZO-1 è aumentato dai giorni tre a sette dopo la semina, suggerendo che la proteina di giunzione stretta ZO-1 si è formata continuamente dai giorni tre ai sette. Dopo il trattamento di esaurimento del calcio il settimo giorno dopo la semina, la banda di ZO-1 era quasi non rilevabile, indicando che ZO-1 non era in grado di formarsi in assenza di ioni di calcio.Come mostrato nei risultati, l'assorbimento occidentale della proteina ZO-1 può essere eseguito per determinare i cambiamenti nel livello di espressione delle proteine di giunzione strette, completando i dati di attività funzionale basati su Lucifer Yellow. Abbiamo anche scoperto che l'attività funzionale delle giunzioni strette nelle cellule endoteliali cerebrali umane non era influenzata dalla trasfezione della nanoparticella del DNA.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

La creazione di substrati Patterned bidimensionali per confinamento di proteine ​​e cellule

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1  While microcontact printing ...

Ricerca

Bioingegneria

Rotating Cell Culture Systems for Human Cell Culture: Human Trophoblast Cells as a Model

Rotazione Cultura sistemi cellulari per colture cellulari umane: cellule del trofoblasto umano come modello

The field of human trophoblast research aids in  understanding the complex environment established during placentation. Due to the  nature of these ...

Improved Method for the Preparation of a Human Cell-based, Contact Model of the Blood-Brain Barrier

Migliorata metodo per la preparazione di un cell-based, Contact modello umano della barriera sanguigna del cervello

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has ...

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

Spremere cellulare come un robusto, Microfluidic intracellulare Delivery Platform

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

In Vitro Permeation of FITC-loaded Ferritins Across a Rat Blood-brain Barrier: a Model to Study the Delivery of Nanoformulated Molecules

In Vitro Permeation of FITC-loaded Ferritins Across a Rat Blood-brain Barrier: a Model to Study the Delivery of Nanoformulated Molecules

In Vitro permeazione di ferritine FITC-caricati attraverso un Rat barriera emato-encefalica: un modello per studiare la consegna di Nanoformulated Molecole

Brain microvascular endothelial cells, supported by pericytes and astrocytes endfeet, are responsible for the low permeation of large hydrosoluble drugs ...

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

Un modello di coltura a matrice extracellulare extracellulare -adipocyte umano per lo studio del crosstalk metabolico a matrice

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...

In Vitro Model of Human Cutaneous Hypertrophic Scarring using Macromolecular Crowding

In vitro Modello di umano cutaneous ipertrofico cicatrici utilizzando Macromolecular Crowding

It has been shown that in vivo tissues are highly crowded by proteins, nucleic acids, ribonucleoproteins, polysaccharides, etc. The following protocol ...

Real-Time Intravital Multiphoton Microscopy to Visualize Focused Ultrasound and Microbubble Treatments to Increase Blood-Brain Barrier Permeability

Microscopia multifotonica intravitale in tempo reale per visualizzare trattamenti a ultrasuoni e microbolle focalizzati per aumentare la permeabilità della barriera emato-encefalica

The blood-brain barrier (BBB) is a key challenge for the successful delivery of drugs to the brain. Ultrasound exposure in the presence of microbubbles ...

Construction of a Human Aorta Smooth Muscle Cell Organ-On-A-Chip Model for Recapitulating Biomechanical Strain in the Aortic Wall

Costruzione di un modello organ-on-a-chip di cellule muscolari lisce dell'aorta umana per ricapitolare la tensione biomeccanica nella parete aortica

Conventional two-dimensional cell culture techniques and animal models have been used in the study of human thoracic aortic aneurysm and dissection ...

Disruption of the Blood-Spinal Cord Barrier Using Low-Intensity Focused Ultrasound in a Rat Model

Rottura della barriera emato-spinale utilizzando ultrasuoni focalizzati a bassa intensità in un modello di ratto

Low-intensity focused ultrasound (LIFU) uses ultrasonic pulsations at lower intensities than ultrasound and is being tested as a reversible and precise ...