Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

الكتاب تود أن تقر مساعدة واشنطن باميلا وأندرسون ليا في الحصول على Galleria mellonella لاستخدامها في هذه الدراسة.

تعتمد على استخدام تستضيف اللافقاريات جميع الأساليب المذكورة ولا تتطلب موافقة "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك).
1-"اليرقات واكسورم" galleria mellonella
<ol><li>ترتيب اليرقات من تجار الجملة والموردين أن عدم الأخذ بالهرمونات أو المضادات الحيوية، أو العلاجات الأخرى ?...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+candidiasis.">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li><li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+(Sit1p/Arn1p)+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion.">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li><li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade.">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li><li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach.">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li><li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

نموذج واكسورم ميلونيلا G. تقف كأداة فعالة لتحليل سريع واستنساخه من ضراوة المبيضة . هذا البروتوكول مفصلاً يعتمد على التسليم متسقة من جرعة المعدية المحددة إلى نفس الموقع عبر دفعة يرقات. الجرعة المعدية تأثيراً عميقا على وفيات ميلونيلا G. بينما استخدام اليرقات بين وصولهم الأولى ...

أنواع المبيضات هي كومينسالس البشرية المشتركة التي قادرة على الظهور كمسببات الأمراض الانتهازية في خيم والمرضى ديسبيوتيك. على الرغم من أن العديد من أنواع المبيضات يمكن أن يسبب المرض، المبيضة السبب الأكثر شيوعاً لداء المبيضات نشرها1،2. الأمراض الجهازية النتائج من المبيضة الوصول إلى مجرى الدم عن طريق أما الاختراق المباشر من الحواجز المضيفة سابقا تقييداً أو مقدمة في مواقع العمليات الجراحية وانتهاكات أخرى ل الجسم3. أنواع المبيضات الاستفادة من مجموعة من العمليات المسببة للأمراض أن تسبب الأمراض الجهازية داخل البلد المضيف بما في ذلك فيلامينتيشن وتشكيل بيوفيلم والتهرب من الخلايا المناعية والهروب والحديد الكسح4. في المختبر النهج الموجودة للتحقيق في الآليات المسببة للأمراض الفردية، ولكن النماذج الحيوانية تواصل تقديم أفضل خيار للتحقيق بأكملها المرض نتيجة5،6. بحوث سابقة مفصلة حالات كثيرة واعدة في المختبر التحقيقات من ضراوة الفشل في إعادة إنتاج في فيفو7،8. وهكذا، نماذج حيوانية لا يزال يتعين تقييم فوعة المجراة في. معظم الأمراض نماذج تعتمد على الفئران لتكون بمثابة بديل للإصابات البشرية على الرغم من عجز المبيضة بطبيعة الحال استعمار أنظمة مورين ك commensal9. نماذج اللافقاريات لداء المبيضات نشرها تشمل ديدان أسطوانية ايليجانس كاينورهابديتيس، الثمرة ذبابة melanogaster المورفولوجية، وواكسورم Galleria mellonella، على الرغم من المخاوف حول الخلافات الأساسية في الفسيولوجيا الأساسية، أعاقت درجات حرارة الجسم المضيف، وطرق التعرض على قبول واسع10،11.
وفي الآونة الأخيرة، اتخذ نموذج العدوى واكسورم ميلونيلا G. لنموذج القدرة الإمراضية لمجموعة واسعة من مسببات الأمراض البكتيرية والفطرية12،،من1314. مزايا هذا النموذج تشمل تكلفة منخفضة نسبيا، وزيادة الإنتاجية، وسهولة الاستخدام، وتقليل الشواغل الأخلاقية فيما يتعلق بالحيوانات اللبنة مقارنة بنماذج مورين. للباحثين، وهذا يترجم إلى زيادة القدرة على اختبار متعددة المتغيرات وفواصل الثقة أقوى والتجريب أكثر سرعة وتجاوز بروتوكولات الحيوان. زاي-ميلونيلا كانت بمثابة منصة لتقييم سرعة الفوعة المبيضة بعد اضطراب الجينات المطلوبة لتنظيم بيوفيلم تشكيل، وفيلامينتيشن، والجينات عبر يعزل السريرية11،15 ،16. أدرجت الدراسات الأخيرة تحقيق الفعالية المضادة للفطور استخدام mellonella زاي- تقييم الدوائية لنشاط المخدرات والمقاومة تحت في فيفو الإعدادات، وهي تتحدى خلاف ذلك ومضيعة للوقت 17،18. حتى الآن، قد تعقدت دراسات ضراوة المبيضة في ميلونيلا زاي- يقال أن ارتفاع مستويات التباين داخل التجارب وبروتوكولات غير متناسقة بين المجموعات البحثية التي تنتج تباين فوعة تعمل بين الفئران وواكسورمس11،،من1319،،من2021. هنا، فإننا مخطط بروتوكول ميلونيلا G. لتوحيد المبيضة العدوى، زيادة إمكانية تكرار نتائج التجارب الفوعة، وإثبات الاتساق مع دراسات تم وصفه مسبقاً من ضراوة في الفئران نماذج.
أظهرت الدراسات السابقة أن ينظم المبيضة التزاوج مثل نوع (MTL) موقعا على الكروموسوم 5 هوية الخلية والتزاوج اختصاص مماثلة إلى Saccharomyces cerevisiae وغيرها الفطريات أسكوميسيتي22. أن غالبية عزل المبيضة متخالف في محور MTL ، ترميز واحد من كل من MTL و MTLα الآليلات (MTL/α)، و عقيمة وبالتالي15، 23 , 24-فقدان واحد من الآليلات MTL من خلال فقدان هيتيروزيجوسيتي (لوه) أو طفرة يؤدي إلى متماثل MTL أو سلالات α MTLالتي يمكن أن تخضع لتبديل المظهرية من الدولة 'أبيض' عقيمة التزاوج المختصة في الدولة 'معتمة'25. وقد أبرزت أعمال سابقة أن فقدان هيتيروزيجوسيتي MTL يقلل أيضا من ضراوة في نماذج موريني العدوى الجهازية عبر سلالة مختلفة الخلفيات26. هنا، نحن التفصيل نموذج ميلونيلا G. داء المبيضات نشرها باستخدام مجموعة تجريبية مماثلة وراثيا لتصور مساهمة هيتيروزيجوسيتي MTL بضراوة في ميلونيلا غ. نظهر أن التكوين MTL تتأثر القدرة الإمراضية المبيضة ، حيث كانت MTLα سلالات أقل ضراوة فيما يتعلق MTL/α و MTL الخلايا، مماثلة للنتائج التي توصل إليها ضمن نموذج العدوى موريني26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

أنواع المبيضات هي commensals الفطرية المشتركة للبشر استعمار الجلد والأسطح المخاطية، والجهاز الهضمي. تحت ظروف معينة، يمكن أن كسا المبيضات منافذها الطبيعية أدى المنهكة التهابات الأغشية المخاطية الانتانات الجهازية جيدا كما تهدد الحياة، ومحور رئيسي للتحقيق بسبب معدلات وفيات عالية المرتبطة بها. وتوجد نماذج حيوانية لنشر العدوى لدراسة تطور المرض وتشريح خصائص المبيضات الإمراضية. هذه، يوفر النموذج العدوى واكسوورم Galleria mellonella أداة تجريبية فعالة من حيث التكلفة للتحقيق الفائق من ضراوة الجهازية. كثيرة أخرى البكتيرية وحقيقية النواة العوامل المعدية تم فعالاً درسوا في ميلونيلا G. فهم الإمراضية، مما يجعل من نظام نموذج مقبول على نطاق واسع. حتى الآن، يمكن أن يغير النتائج المظهرية الاختلاف في الأسلوب المتبع لتصيب G. mellonella وتعقيد تفسير النتائج. هنا، فإننا مخطط مزايا وعيوب نموذج واكسوورم الدراسة النظامية المبيضات المرضية واتباع نهج لتحسين إمكانية تكرار نتائج بالتفصيل. تمييز نطاق حركية الوفيات في ميلونيلا G. نتائجنا وتصف المتغيرات التي يمكن أن تعدل هذه الحركية. في نهاية المطاف، يقف هذا الأسلوب كنهج الأخلاقية وسريعة وفعالة من حيث التكلفة لدراسة ضراوة في نموذج لداء المبيضات نشرها.

هنا، علينا أن نظهر أسلوب استنساخه لاستخدام ميلونيلا G. واكسورمس للتحقيق في نموذج نشر داء المبيضات العدوى استخدام المبيضة. التخزين المناسبة، والصيانة، واختيار يرقات للعدوى عنصر حاسم في تأمين إمكانية تكرار نتائج في وفيات G. ميلونيلا (الشكل 1<s...

Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Galleria mellonella يخدم كنموذج اللافقاريات لداء المبيضات نشرها. هنا، نحن بالتفصيل العدوى البروتوكول وتقديم البيانات الداعمة لفعالية هذا النموذج.

نموذج العدوى واكسوورم Galleria mellonella "نشر داء المبيضات"

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في حقل المبيضات حول فدة الإجهاد ومساهمات جينات محددة في هذه العمليات. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تتجنب المخاوف المتعلقة باستخدام الحيوانات ، وهي قوية وسريعة ورخيصة ، وتوفر أعدادًا عالية من الحيوانات في التجربة الواحدة. بشكل عام ، فإن الأفراد الذين هم جدد على هذه الطريقة من المرجح أن النضال قليلا لأنهم سوف يكون لديهم بعض الصعوبة في تقييم قابلية البقاء دودة قبل بداية التجربة أو قد يكون لديهم بعض القضايا مع حقن غير متناسقة من الديدان.طلب اليرقات من تجار الجملة والموردين التي لا تقدم الهرمونات أو المضادات الحيوية أو غيرها من العلاجات إلى اليرقات والتي هي قادرة على شحن وتسليم العينات الحية. عند وصول اليرقات ، تحقق من كل حاوية للتأكد من صحة اليرقات وقابليتها للتطبيق. سوف تكون مغمورة تماما اليرقات صحية تحت الفراش، تتحرك، وتمتلك الأصفر، لون تان الضوء مع عدد قليل من اليرقات التي تحتوي على علامات سوداء أو تلونات على طول الجسم.يمكن تخزين اليرقات في حاوياتها في مساحة تهوية في درجة الحرارة المحيطة لمدة تصل إلى أسبوعين. لإعداد خلايا الخميرة لعدوى جاليريا ميلونيلا، تنمو سلالات C.albicans ليتم حقنها بين عشية وضحاها في ثلاثة ملليلتر من خميرة الطازجة بيبتون- مرق dextrose لكل سلالة في أنابيب الثقافة القياسية على طبل الدورية في سرعة متوسطة و 30 درجة مئوية. في صباح اليوم التالي، وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي، وغسل الخميرة ثلاث مرات في خمسة ملليلتر من برنامج تلفزيوني جديد في الطرد المركزي.بعد الغسيل الأخير ، تُعيد تثبيت الخلايا في ملليلتر واحد من PBS الطازجة ونقل الخميرة إلى أنبوب microcentrifuge. بشكل متسلسل تمييع الخلايا في برنامج تلفزيوني إضافي في واحد إلى 100، واحد إلى 1، 000، واحد إلى 100، 000 تركيزات، وفرز الخلايا من واحد إلى 100 واحد إلى 1، 000 dilutions. ضبط الخلايا إلى 2.5 مرة 10 إلى الخلايا السابعة لكل ملليلتر من تركيز برنامج تلفزيوني في أنبوب جديد microcentrifuge، وتأكيد دقة الجرعة المعدية عن طريق طلاء الحجم المناسب من واحد إلى 100، 000 تخفيف لتحقيق 100 مستعمرة تشكيل وحدات على واحد الخميرة بيبتون ديكستروز لوحة أغار لكل ثقافة لاستخدامها في العدوى.لتصيب اليرقات مع خلايا المبيضات، نشرت أولا كمية صغيرة من الفراش الدودة الشمعية في واحد فارغ، 100 في 15 سنتيمترا طبق بيتري معقمة لكل تكرار بيولوجي، وتعقيم حقنة 10 ميكرولتر مجهزة إبرة 26 قياس ثلاث مرات مع 10 ميكرولترات من 70٪ الإيثانول وثلاث مرات مع 10 ميكرومترات من PBS لكل غسل. بعد ذلك ، دوامة تخفيف التطعيم من C.albicans ، وتحميل 10 ميكرولترات من الخلايا في الحقنة. افتح حاوية واحدة من يرقات G.mellonella ، واستخدم إصبعًا لتحويل الفراش بعناية للكشف عن اليرقات ، واختيار يرقات تان صفراء ذات حجم مماثل تتمتع بصحة جيدة مع عدم وجود تصبغ أسود على الأجسام ، باستخدام الأصابع الوسطى والمفهرسة والإبهام لالتقاط يرقة واحدة بطريقة مشابهة لفهم قلم رصاص.لفة اليرقة على ظهرها بحيث تواجه الساقين حتى، وعقد طول كامل من الجسم بين الأصابع والإبهام بحيث اليرقة غير قادر على حليقة أو سحب بعيدا عن الحقن. مع ناحية أخرى، تدوير الحقنة بحيث شطبة إبرة تواجه لأعلى، وأدخل ببطء كامل طول شطبة في الجسم عند تقاطع مع الساق اليسرى في أقصى الظهر، وضمان أن الإبرة تخترق الجسم ولا تدفع ببساطة جسم اليرقة إلى الداخل. الخطوة الأكثر أهمية في هذا الإجراء هو حقن الدودة الشمعية بطريقة تقلل من الأضرار التي لحقت بالجسم اليرقات ويتم تلقيح البلح الكامل.ثم حقن كامل 10 ميكرولترات من المبيضات inoculum، واستخراج الإبرة. شارك في إيواء ما يصل إلى 10 يرقات حقنت من نفس ثقافة المبيضات في كل طبق بيتري 100 في 15 ملليمتر بعد التطعيم ، وتحتضن اليرقة عند 37 درجة مئوية لمدة ثمانية أيام. تحقق من الأطباق كل 24 ساعة لمراقبة الموت.يمكن في البداية تقييم الوفيات عن طريق التصبغ المظلم ، وتشكيل بقع سوداء أو أجسام ، وعدم وجود حركة. لتأكيد الوفيات ، استخدم الملاقط لتلف بلطف اليرقات المحتضرة على ظهورهم وكزة طفيفة على الجانب السفلي لليرقة مع الملاقط. يمكن تضمين اليرقات التي تبدأ في العث في التحليل ولكن يجب إزالتها إذا بدأت في العث.لا يوجد فرق كبير في حركة موت G.mellonella بين اليرقات المصابة صفر أو 10 أيام بعد الوصول. تنشأ العلامات المميزة للمرض في اليرقات من كلا الأعمار التي تستسلم للعدوى ، بدءًا من تغير اللون الذي يفسح المجال للبقع السوداء قبل فقدان الحركة التامة والموت في نهاية المطاف. عدوى مع C.albicans يسرع هذه العملية من تغير اللون والمراضة ولكن لا يغير بشكل كبير من سلسلة من علامات فينوتيبيك مما يؤدي إلى الموت مقارنة مع اليرقات غير المصابة أو التي حقنها PBS.وتجدر الإشارة إلى أن عدوى G.mellonella مع التزاوج مثل نوع الهومو أو غير المترادفات من أي من سلالات C.albicans المعزولة سريريا اختبار تنتج معدلات عالية من الوفيات بالمقارنة مع الحيوانات التي حقنها PBS، في حين أن حقن سلالات مشتقة prototrophic يخفف من التأثير القاتل في هذا النموذج. من المهم أن تتذكر أن تختار يرقات صحية وأن تكون لطيفًا في التعامل مع اليرقات. إذا سيتم تلقيح سلالات متعددة، والحرص على عدم السماح لخلايا المبيضات الجلوس في برنامج تلفزيوني لفترة طويلة جدا.بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل التنميط المناعي وتوطين المبيضات داخل اليرقات للإجابة على أسئلة إضافية حول التفاعلات بين المضيف والمسببات الفطرية أثناء العدوى. بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين لاستكشاف التسبب في المبيضات باستخدام تنسيقات عالية الإنتاجية. لا ننسى أن العمل مع المبيضات albicans يتطلب الرعاية، وأن الاحتياطات القياسية، بما في ذلك ارتداء معدات الحماية الشخصية، ينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

إدخال إجهاد القص في دراسة الالتصاق الجرثومي

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

غير الغازية التصوير من المبيضات المنتشر في يرقات اسماك الزرد

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

والحشرات<em&gt; جاليريا mellonella</em&gt; نموذجا عدوى قوية المعنية بالتحقيق في إمراض البكتيرية

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

استخدام<em&gt; غاليريا mellonella</em&gt; كما كائن نموذج لدراسة<em&gt; البكتيريا المستروحة</em&gt; عدوى

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

تحليل الأضرار الظهارية التي تنتجها<em&gt; المتحولة الحالة للنسج</em&gt; عدوى

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

نمذجة الأغشية المخاطية المبيضات في اليرقات الزرد عن طريق الحقن Swimbladder

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

مضان القائم على النورامينيداز تثبيط الفحص لتقييم مدى حساسية فيروسات الأنفلونزا إلى والنورامينيداز المانع فئة من الأدوية المضادة للفيروسات

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

نموذج الإدارة عن طريق الفم Galleria mellonella للاستجابات المناعية الفطرية Study Commensal-Induced

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

استخدام اللافقاريات جاليريا ميلونيلا كنموذج للعدوى لدراسة مجمع السل الميكوباكتيريوم

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

أدوات للتقييم في الوقت الحقيقي لنموذج عدوى السودوموناس aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...