Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

Forfatterne vil gerne anerkende bistand af Pamela Washington og Leah Anderson at opnå barciak til brug i denne undersøgelse.

Alle metoderne er afhængige af brugen af hvirvelløse værter og kræver ikke institutionelle Animal Care og bruge udvalg (IACUC) godkendelse.
1. barciak Waxworm larver
<ol><li>Bestil larver fra grossister og leverandører, der ikke indfører hormoner, antibiotika eller andre behandlinger, at larverne og som er i stand til at sende og levere levende enheder.<ol>
<li>Sørg for at købe alle larver fra den samme leverandør i løbet af eksperimenter. Være forsigtig, når du bestille...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+candidiasis.">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li><li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+(Sit1p/Arn1p)+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion.">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li><li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade.">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li><li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach.">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li><li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

G. mellonella waxworm model står som et effektivt redskab til hurtig og reproducerbare analyse af C. albicans virulens. Denne detaljerede protokollen er afhængig af ensartet levering af en defineret infektiøse dosis til det samme sted på tværs af en batch af larver. Infektiøse dosis har en dybtgående indvirkning på G. mellonella dødelighed, mens brugen af larverne mellem deres indledende ankomst og ti dage efter modtagelsen givet lignende resultater. Tab af C. albicansMTL<stro...

Candida arter er fælles menneskelige latente, der kan opstå som opportunistiske patogener i alvorligt immunkompromitterede og dysbiotic patienter. Selv om mange Candida arter kan forårsage sygdom, er C. albicans den mest udbredte årsag til dissemineret candidiasis1,2. Systemisk sygdom skyldes C. albicans adgang til blodbanen gennem enten direkte penetration af tidligere restriktive vært barrierer eller Introduktion på kirurgisk sites og andre overtrædelser af kroppen3. Candida arter udnytte en række sygdomsfremkaldende processer til at forårsage systemiske sygdomme inden for den vært, herunder filamentation, Biofilmdannelse, immun celle skatteunddragelse og flygte og jern scavenging4. In vitro metoder eksisterer for at undersøge individuelle patogene mekanismer, men dyremodeller fortsætte med at give den bedste mulighed for at undersøge helhed af sygdom resultatet5,6. Tidligere forskning har detaljerede mange forekomster af lovende in vitro- undersøgelser af virulens ikke at gengive i vivo7,8. Således dyremodeller er stadig forpligtet til at vurdere virulens in vivo. De fleste sygdomsmodeller stole på mus til at tjene som et surrogat for menneskelige infektioner trods C. albicans manglende evne til naturligt kolonisere murine systemer som en commensal9. Hvirvelløse modeller af dissemineret candidiasis omfatter nematode Caenorhabditis elegans, frugt flyver Drosophila melanogasterog waxworm barciak, selv om bekymringer om grundlæggende forskelle i grundlæggende fysiologi, har vært krop temperaturer og eksponeringsveje hæmmet deres bred accept10,11.
Senest har er G. mellonella waxworm infektion model blevet vedtaget til model sygdomsfremkaldende evne af en bred vifte af bakterier og svampe patogener12,13,14. Fordelene ved denne model omfatter dens relativt lave omkostninger, øget overførselshastighed, brugervenlighed og reduceret etiske bekymringer med hensyn til dyrs godgørenhed sammenlignet med murine modeller. For forskere, dette udmønter sig i øget evne til at teste flere variabler, stærkere konfidensintervaller, hurtigere eksperimenter og bypass af animalske protokoller. G. mellonella har fungeret som en platform til hurtigt at vurdere C. albicans virulens efter undertrykkelse af netbårne af gener, der kræves for biofilm dannelse, filamentation og gen regulering på tværs af kliniske isolater11,15 ,16. Nylige undersøgelser har indarbejdet undersøgelse af svampedræbende effekt ved hjælp af G. mellonella at vurdere farmakokinetik drug aktivitet og modstand under i vivo indstillinger, der er ellers udfordrende og tidskrævende 17,18. Endnu, undersøgelser af C. albicans virulens i G. mellonella har været kompliceret af efter sigende høje niveauer af variation inden for eksperimenter og inkonsekvent protokoller mellem forskergrupper, der producerer forskellige virulens fænotyper mellem mus og waxworms11,13,19,20,21. Her, skitsere vi en G. mellonella protokol for at standardisere C. albicans infektioner, stigning reproducerbarhed i virulens eksperimenter, og at påvise sammenhængen med tidligere beskrevne undersøgelser af virulens i murine modeller.
Tidligere undersøgelser viste, at C. albicans parring type-lignende (MTL) locus på kromosom 5 regulerer celle identitet og parring kompetence svarende til Saccharomyces cerevisiae og andre Ascomycete svampe22. Fleste af C. albicans isolater er heterozygous på locus MTL kodning en af hver af MTLen og MTLα alleler (MTLen/α), og er derfor steril15, 23 , 24. tab af en af MTL alleler gennem tab af heterozygositet (LOH) eller mutation fører til homozygot MTLen eller MTLα stammer, der kan undergå en fænotypiske switch fra sterile 'hvide' staten til den parring kompetente 'opaque' stat25. Tidligere arbejde har fremhævet, at tab af MTL heterozogycitet også reducerer virulens i murine modeller af systemisk infektion på tværs af forskellige stamme baggrunde26. Her, detalje vi G. mellonella model for formidlet candidiasis ved hjælp af en genetisk lignende eksperimentelle sæt for at skildre bidrag af MTL heterozogycitet til virulens i G. mellonella. Vi viser at MTL konfiguration påvirket C. albicans patogenicitet, hvor MTLα stammer var mindre virulente både MTLen/α og MTLen celler, svarende til resultater inden for murine infektion model26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

Candida arter er fælles svampe latente af mennesker koloniserer huden, slimhindeinfektioner og mave-tarmkanalen. Under visse betingelser, Candida kan vokse hen over deres naturlige nicher resulterer i invaliderende slimhinde infektioner som godt som livstruende systemiske infektioner, som er en stor fokus i undersøgelsen på grund af deres tilknyttede høj dødelighed. Dyremodeller for formidlet infektion findes for at studere sygdomsprogression og dissekere Karakteristik af Candida sygdomsfremkaldende evne. Af disse giver barciak waxworm infektion model en omkostningseffektiv eksperimentelle værktøj for høj overførselshastighed undersøgelser af systemisk virulens. Mange andre bakterier og eukaryote smitsomme agenser er blevet effektivt studeret i G. mellonella at forstå sygdomsfremkaldende evne, hvilket gør det et bredt accepterede modelsystem. Endnu, variation i metoden bruges til at inficere G. mellonella kan ændre fænotypiske resultater og komplicere fortolkningen af resultaterne. Her, redegøre vi for de fordele og ulemper ved waxworm modellen til at studere systemisk Candida patogenese og detaljeret en tilgang til at forbedre reproducerbarhed. Vores resultater fremhæve vifte af dødelighed kinetik i G. mellonella og beskrive de variabler, som kan modulere disse kinetik. I sidste ende, denne metode står som en etisk, hurtig og omkostningseffektiv tilgang til at studere virulens i en model af dissemineret candidiasis.

Her viser vi en reproducerbar metode for anvendelse af G. mellonella waxworms til at undersøge en formidlet candidiasis model af infektion med C. albicans. Passende opbevaring, vedligeholdelse og udvalg af larver for infektion er kritisk komponent af forsikring reproducerbarhed i G. mellonella dødelighed (fig. 1A). Sunde larver, der er aktive, har en lys gul/tan farve, og manglende sorte pletter på kroppen bør a...

Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Barciak fungerer som en hvirvelløse model for formidlet candidiasis. Her, vi detalje infektionen protokol og give understøttende data for modellens effektivitet.

Barciak Waxworm infektion Model for formidlet Candidiasis

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

Denne metode kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål i Candida-feltet om stammevisulens og bidrag fra specifikke gener til disse processer. De største fordele ved denne teknik er, at den undgår bekymringer vedrørende dyrebrug, er robust, hurtig, billig og giver et stort antal dyr pr. forsøg. Generelt, personer, der er nye til denne metode vil sandsynligvis kæmpe en smule, fordi de vil have nogle problemer med at vurdere ormen levedygtighed forud for begyndelsen af forsøget, eller de kan have nogle problemer med inkonsekvent injektion af orme.Bestil larver fra grossister og leverandører, der ikke indfører hormoner, antibiotika eller andre behandlinger til larverne, og som er i stand til at sende og levere levende prøver. Når larverne ankommer, kontrolleres hver beholder for at bekræfte larvernes sundhed og levedygtighed. Sunde larver vil være helt nedsænket under strøelse, bevæger sig, og besidder en gul, lys tan farve med få larver, der indeholder sorte mærker eller misfarvninger langs kroppen.Larverne kan opbevares i deres beholdere i et ventileret rum ved omgivelsestemperatur i op til to uger. For at forberede gærceller til Galleria mellonella infektion, dyrke C.albicans stammer, der skal injiceres natten over i tre milliliter frisk gær-peptone-dextrose bouillon pr stamme i standard kultur rør på en roterende tromle ved medium hastighed og 30 grader Celsius. Den næste morgen, indsamle cellerne ved centrifugering, og vask gæren tre gange i fem milliliter frisk PBS per centrifugering.Efter den sidste vask skal cellerne opslænges i en milliliter frisk PBS, og gæren overføres til et mikrocentrifugerør. Serielt fortyndes cellerne i yderligere PBS ved en-til-100, en-til-1, 000 og en-til-100, 000 koncentrationer, og tælle cellerne fra en-til-100 og en-til-1, 000 fortyndinger. Juster cellerne til 2,5 gange 10 til de syvende celler pr. milliliter PBS-koncentration i et nyt mikrocentrifugerør, og bekræft nøjagtigheden af den infektiøse dosis ved at grundfænge det passende volumen af en-til-100,000 fortynding for at opnå 100 kolonidannende enheder på en gær-peptone-dextrose agar plade for hver kultur, der skal anvendes i infektion.At inficere larver med Candida celler, først sprede en lille mængde voksorm strøelse i en tom, 100-by-15 centimeter steril Petriskål pr biologisk replikat, og sterilisere en 10-mikroliter sprøjte udstyret med en 26-gauge nål tre gange med 10 mikroliter af 70% ethanol og tre gange med 10 mikroliter PBS per vask. Dernæst vortex inokulering fortynding af C.albicans, og belastning 10 mikroliter af celler i sprøjten. Åbn en beholder med G.mellonella larver, og brug en finger til forsigtigt at vende strøelse for at afdække larver, vælge gule, tan larver af samme størrelse, der er ved godt helbred med en mangel på sort pigmentering på kroppen, ved hjælp af midten og pegefingre og tommelfingeren til at afhente en larver på en måde, der svarer til at gribe en blyant.Rul larven på ryggen, så benene vender opad og holder hele kroppens længde mellem fingrene og tommelfingeren, så larven ikke kan krølle eller trække væk fra injektionen. Med den anden hånd roteres sprøjten, så kanyleskælden vender opad, og indskærer langsomt hele bevelets længde i kroppen ved krydset med det bageste venstre ben, hvilket sikrer, at nålen trænger ind i kroppen og ikke blot skubber larvens krop indad. Det mest kritiske trin i denne procedure er injektion af voksorm på en sådan måde, at skader på larve kroppen minimeres, og den fulde bolus er podet.Derefter injicere den fulde 10 mikroliter af Candida inoculum, og udtrække nålen. Co-house op til 10 larver injiceres fra samme Candida kultur i hver 100-by-15-millimeter petriskål efter inokulering, og inkubere larver ved 37 grader Celsius i otte dage. Tjek retterne hver 24 timer for at overvåge døden.Dødeligheden kan i første omgang vurderes ved formørkning pigmentering, dannelsen af sorte pletter eller organer, og en mangel på bevægelse. For at bekræfte dødeligheden, bruge pincet til forsigtigt at rulle døende larver på ryggen og let stikke larverne undersiden med pincet. Larver, der begynder at pupate i møl kan indgå i analysen, men bør fjernes, hvis de begynder at smelte.Der er ingen signifikant forskel i kinetik af G.mellonella død mellem larver inficeret nul eller 10 dage efter ankomsten. De karakteristiske tegn på sygdom opstår i larver fra begge aldre, der bukker under for infektionen, begyndende med misfarvning, der vipper til sorte pletter før et totalt tab af motilitet og i sidste ende død. Infektion med C.albicans fremskynder denne proces med misfarvning og sygelighed, men ændrer ikke i væsentlig grad kaskade af fænotopypiske markører, der fører til døden sammenlignet med ikke-inficerede eller PBS-injicerede larver.Især, infektion af G.mellonella med parring type-lignende homo-eller heterozygotes fra nogen af de testede klinisk isolerede C.albicans stammer producerer høj dødelighed sammenlignet med PBS-injicerede dyr, mens injektioner af prototrofisk afledte stammer dæmper den dødelige virkning i denne model. Det er vigtigt at huske at vælge sunde larver og at være blid i håndteringen af larverne. Hvis flere stammer vil blive podet, passe på ikke at lade Candida celler sidde i PBS for længe.Efter denne procedure, andre metoder som immunologisk profilering og Candida lokalisering i larver kan udføres for at besvare yderligere spørgsmål om samspillet mellem værten og svampepatogen under en infektion. Efter sin udvikling, denne teknik banede vejen for forskere at udforske Candida patogenese ved hjælp af høj-throughput formater. Glem ikke, at arbejde med Candida albicans kræver omhu, og at standard forholdsregler, herunder slid af personlige værnemidler, bør altid tages, mens du udfører denne procedure.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Non-invasiv Imaging af dissemineret candidiasis hos zebrafisk Larver

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som en kraftfuld Infektion modellen til bakteriel patogenese

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Anvendelse af<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som en model organisme til at studere<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Infektion

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analyse af epitelbeskadigelse Produceret af<em&gt; Entamoeba histolytica</em&gt; Infektion

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Modeling Mucosal Candidiasis i Larve Zebrafisk af swimbladder Injection

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

Fluorescensbaseret neuraminidase-inhiberingsassay i vurdering af den følsomhed over influenzavira til neuraminidaseinhibitoren Class of Antivirale

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

En barciak Oral Administration Model til Study Commensal-Induced medfødte immunrespons

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Brug af invertebrate Galleria mellonella som en infektions model til undersøgelse af Mycobacterium tuberkulose komplekset

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Værktøjer til realtidsvurdering af en Pseudomonas aeruginosa-infektionsmodel

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...