Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

De auteurs wil erkennen de hulp van Pamela Washington en Leah Anderson bij het verkrijgen van de wasmot voor gebruik in deze studie.

Alle methoden zijn afhankelijk van gebruik van ongewervelde gastheren en vereisen geen goedkeuring van institutionele Animal Care en gebruiken Comité (IACUC).
1. wasmot Waxworm larven
<ol><li>De larven van de volgorde van groothandels en leveranciers die geen hormonen, antibiotica of andere behandelingen om de larven invoeren en die kunnen verzenden en leveren van levende specimens.<ol>
<li>Zorg ervoor dat alle larven kopen van dezelfde leverancier in de loop van experimenten. Wees...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+candidiasis.">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li><li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+(Sit1p/Arn1p)+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion.">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li><li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade.">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li><li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach.">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li><li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

Het waxworm-model van G. mellonella staat als een effectief instrument voor de snelle en reproduceerbare analyse van C. albicans virulentie. Dit gedetailleerde protocol is gebaseerd op consistente levering van een gedefinieerde infectieuze dosis aan dezelfde site over een batch van larven. Infectieuze dosis heeft een diepgaande invloed op G. mellonella mortaliteit, terwijl gebruik van larven tussen hun eerste aankomst en tien dagen na ontvangst soortgelijke resultaten opgeleverd. Verlies van de...

Candida -soorten zijn gemeenschappelijke menselijke commensals die kunnen ontpopt zich als een opportunistische pathogenen in ernstig immuungecompromitteerde en dysbiotic patiënten. Hoewel veel Candida -soorten, leiden ziekte tot kan, is C. albicans de meest voorkomende oorzaak van gedissemineerde candidiasis1,2. Systemische ziekten voortvloeit uit C. albicans toegang tot de bloedbaan via beide rechtstreekse penetratie van eerder restrictief host belemmeringen of introductie op chirurgische sites en andere inbreuken op het lichaam3. Candida -soorten maken gebruik van een aantal pathogene processen veroorzaken systemische ziekten binnen de host met inbegrip van filamentation, vorming van biofilms, immuun cel belastingontduiking en ontsnappen, en ijzer opruiming4. In vitro methoden bestaan om te onderzoeken van individuele pathogene mechanismen, maar dierlijke modellen blijven met de beste optie om te onderzoeken van het geheel van5,6van de uitkomst van de ziekte. Eerder onderzoek heeft veel exemplaren van veelbelovende in vitro onderzoeken van virulentie bij gebreke te reproduceren in vivo7,8gedetailleerd. Dus, dierlijke modellen zijn nog steeds vereist om te beoordelen van virulentie in vivo. De meeste modellen van de ziekte, is afhankelijk van muizen om te dienen als een surrogaat voor menselijke infecties ondanks C. albicans onvermogen om te koloniseren natuurlijk lymfkliertest systemen als een commensale9. Ongewervelde modellen van gedissemineerde candidiasis omvatten de nematode Caenorhabditis elegans, de vrucht vliegen Drosophila melanogaster, en de waxworm wasmot, hoewel bezorgdheid over fundamentele verschillen in de basis fysiologie, hebben host lichaam temperaturen en blootstellingswegen belemmerd hun brede acceptatie10,11.
Recentelijk is de G. mellonella waxworm infectie model overgenomen aan model pathogeniteit van een breed scala van bacteriële en schimmelinfecties ziekteverwekkers12,13,14. Voordelen van dit model zijn relatief lage kosten, hogere doorvoer opnemen, gebruiksgemak en verminderde ethische bezwaren met betrekking tot dierlijke weldadigheid ten opzichte van lymfkliertest modellen. Voor onderzoekers vertaalt dit in meer mogelijkheden voor het testen van meerdere variabelen, sterkere betrouwbaarheidsintervallen, snellere experimenten en bypass van dierlijke protocollen. G. mellonella heeft gediend als een platform voor het snel beoordelen C. albicans virulentie na verstoring van genen die vereist is voor de biofilm vorming, filamentation en gene verordening via klinische isolaten11,15 ,16. Recente studies hebben opgenomen onderzoek van antischimmel werkzaamheid met behulp van G. mellonella te beoordelen van de farmacokinetiek van drug activiteit en weerstand onder in vivo instellingen die anders uitdagend en tijdrovend 17,18. Nog, hebben studies van C. albicans virulentie in G. mellonella is bemoeilijkt door naar verluidt hoge niveaus van variatie binnen experimenten en inconsistent protocollen tussen onderzoeksgroepen die verschillende fenotypes van virulentie produceren tussen muizen en waxworms11,13,19,20,21. Hier, schetsen we een G. mellonella protocol om te standaardiseren C. albicans infecties, verhoging van de reproduceerbaarheid in virulentie experimenten, en tonen van consistentie met eerder beschreven studie van virulentie in RattenUitrustingen modellen.
Vorige studies aangetoond dat het C. albicans type-achtige (MTL) locus op chromosoom 5 paring regelt cel identiteit en bevoegdheid vergelijkbaar met Saccharomyces cerevisiae en andere Ascomycota schimmels22paring. De meerderheid van C. albicans isolaten zijn heterozygoot op de MTL locus, codering een van elk van de MTLeen en MTLα allelen (MTLeen/α), en zijn bijgevolg steriele15, 23 , 24. verlies van één van de allelen MTL door verlies van heterozygoten (LOH) of mutatie leidt tot homozygoot MTLeen of MTLα stammen die kunnen ondergaan een fenotypische schakelaar van de steriele 'witte' staat aan de paring bevoegde 'ondoorzichtig' staat25. Vorige werk heeft benadrukt dat verlies van MTL heterozygoten vermindert ook de virulentie in lymfkliertest modellen van systemische infectie over verschillende stam achtergronden26. Hier, detail we de G. mellonella model voor gedissemineerde candidiasis met behulp van een genetisch gelijkaardige experimentele reeks verbeelden de bijdrage van MTL heterozygoten naar virulentie in G. mellonella. We laten zien dat MTL configuratie beïnvloed C. albicans pathogeniteit, waar MTLα stammen waren minder virulente met betrekking tot zowel MTLeen/α en MTLeen cellen, vergelijkbaar met de bevindingen model26binnen lymfkliertest infectie.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

Candida -soorten zijn gemeenschappelijk schimmels commensals van de mens, de huid, de mucosal oppervlakken, en de maag-darmkanaal te koloniseren. Onder bepaalde voorwaarden, kan Candida hun natuurlijke gebieden resulterend in slopende mucosal infecties als goed als levensbedreigende systemische infecties, die een belangrijk aandachtspunt van onderzoek als gevolg van hun bijbehorende hoge sterftecijfers zijn overwoekeren. Dierlijke modellen van gedissemineerde infectie bestaan voor bestuderen van progressie van de ziekte en de ontrafeling van de kenmerken van Candida pathogeniteit. Van deze biedt de wasmot waxworm infectie model een kosteneffectieve experimentele rol voor high-throughput onderzoek van systemische virulentie. Vele andere bacteriële en eukaryote infectieuze agentia zijn effectief bestudeerd in G. mellonella te begrijpen van de pathogeniteit, waardoor het een algemeen aanvaarde modelsysteem. Variatie in de methode gebruikt voor het infecteren van G. mellonella kan echter veranderen van fenotypische resultaten en interpretatie van de resultaten bemoeilijken. We schetsen hier, de voordelen en nadelen van het model van de waxworm te bestuderen van systemische Candida pathogenese en een aanpak ter verbetering van de reproduceerbaarheid in detail te beschrijven. Onze resultaten wijzen op het bereik van sterfte kinetiek in G. mellonella en beschrijven van de variabelen die deze kinetiek moduleren kunnen. Deze methode staat uiteindelijk, als een ethische, snelle en kosteneffectieve benadering bestuderen de virulentie in een model van gedissemineerde candidiasis.

Hier tonen we een reproduceerbare methode voor het gebruik van G. mellonella waxworms te onderzoeken van een gedissemineerde candidiasis model van infectie met C. albicans. De juiste opslag, onderhoud en selectie van larven voor infectie zijn kritische component reproduceerbaarheid te verzekeren in G. mellonella sterfte(Figuur 1). Gezonde larven, die actief zijn, hebben een lichte kleur geel/tan, en gebrek aan zwart...

Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Wasmot fungeert als een ongewervelde model voor gedissemineerde candidiasis. Hier, we detail de infectie protocol en ondersteunende gegevens verstrekken voor de effectiviteit van het model.

De wasmot Waxworm infectie Model voor verspreid Candidiasis

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het Candida-veld over stamvirulentie en de bijdragen van specifieke genen aan deze processen. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het vermijdt bezorgdheid met betrekking tot het gebruik van dieren, is robuust, snel, goedkoop, en biedt een groot aantal dieren per experiment. In het algemeen, individuen die nieuw zijn voor deze methode zal waarschijnlijk worstelen een beetje, omdat ze wat moeite met het beoordelen van worm levensvatbaarheid voorafgaand aan het begin van het experiment of ze kunnen een aantal problemen met inconsistente injectie van de wormen hebben.Bestel larven bij groothandelaren en leveranciers die geen hormonen, antibiotica of andere behandelingen aan de larven introduceren en die in staat zijn om levende specimens te verzenden en te leveren. Wanneer de larven aankomen, controleert u elke container om de gezondheid en levensvatbaarheid van de larven te bevestigen. Gezonde larven zullen volledig onder het beddengoed worden ondergedompeld, bewegen en een gele, lichte tankleuring bezitten met weinig larven die zwarte vlekken of verkleuringen langs het lichaam bevatten.De larven kunnen maximaal twee weken in hun containers worden opgeslagen in een geventileerde ruimte bij omgevingstemperatuur. Ter voorbereiding van de gistcellen voor Galleria mellonella infectie, groeien de C.albicans stammen worden geïnjecteerd 's nachts in drie milliliter verse gist-peptone-dextrose bouillon per stam in standaard cultuur buizen op een roterende trommel op gemiddelde snelheid en 30 graden Celsius. De volgende ochtend, verzamel de cellen door centrifugatie, en was de gist drie keer in vijf milliliter verse PBS per percentrifugatie.Na de laatste wasbeurt, resuspend cellen in een milliliter verse PBS en breng de gist in een microcentrifuge buis. Verdun de cellen in extra PBS in extra PBS in één tot 100, één-op-1,000 en één-tot-100,000-concentraties en tel de cellen van de één-op-100 en één-op-1,000-verdunningen. Pas de cellen aan op een 2,5 keer 10 tot de zevende cellen per milliliter PBS-concentratie in een nieuwe microcentrifugebuis en bevestig de nauwkeurigheid van de infectieuze dosis door het juiste volume van de één-op-100,000-verdunning te beplating om 100 kolonievormende eenheden te bereiken op één gist-peptone-dextrose agarplaat voor elke cultuur die bij infectie moet worden gebruikt.Om de larven te infecteren met de Candida cellen, eerst verspreid een kleine hoeveelheid waxworm beddengoed in een lege, 100-bij-15 centimeter steriele petrischaal per biologische repliceren, en steriliseren een 10-microliter spuit uitgerust met een 26-gauge naald drie keer met 10 microliter van 70% ethanol en drie keer met 10 microliter van PBS per wasbeurt. Vervolgens vortex de inenting verdunning van C.albicans, en belasting 10 microliter cellen in de spuit. Open een container G.mellonella larven en gebruik een vinger om het beddengoed voorzichtig om te draaien om larven te ontdekken, en selecteer gele, bruine larven van een vergelijkbare grootte die in goede gezondheid verkeren met een gebrek aan zwarte pigmentatie op het lichaam, met behulp van het midden en wijsvingers en de duim om een larve op te pikken op een manier die lijkt op het grijpen van een potlood.Rol de larve op zijn rug, zodat de benen naar boven gericht, met de volledige lengte van het lichaam tussen de vingers en duim, zodat de larve niet in staat is om te krullen of weg te trekken van de injectie. Met de andere kant, draai de spuit, zodat de naald schuine kant naar boven wordt gericht, en langzaam steek de gehele lengte van de schuine kant in het lichaam op de kruising met de achterste linkerbeen, ervoor te zorgen dat de naald doordringt het lichaam en niet alleen duwen het lichaam van de larve naar binnen. De meest kritieke stap in deze procedure is de injectie van de wasworm op een zodanige wijze dat schade aan het larve lichaam wordt geminimaliseerd en de volledige bolus wordt ingeënt.Injecteer vervolgens de volledige 10 microliter van Candida enenoculum en haal de naald eruit. Co-house tot 10 larven geïnjecteerd uit dezelfde Candida cultuur in elke 100-bij-15-millimeter petrischaal na inenting, en broeden de larve op 37 graden Celsius gedurende acht dagen. Controleer de afwas elke 24 uur om de dood te controleren.De mortaliteit kan in eerste instantie worden beoordeeld door verduisterde pigmentatie, de vorming van zwarte vlekken of lichamen, en een gebrek aan beweging. Om sterfte te bevestigen, gebruik je een pincet om stervende larven zachtjes op hun rug te rollen en de onderkant van de larve licht te porren met de pincet. Larven die beginnen te verpoppen in motten kunnen worden opgenomen in de analyse, maar moeten worden verwijderd als ze beginnen te vervellen.Er bestaat geen significant verschil in de kinetiek van de dood van G.mellonella tussen larven die nul of 10 dagen na aankomst besmet zijn. De karakteristieke tekenen van ziekte doen zich voor bij larven van beide leeftijden die bezwijken voor de infectie, te beginnen met verkleuring die plaatsmaakt voor zwarte vlekken voor een totaal verlies van beweeglijkheid en uiteindelijk de dood. Infectie met C.albicans versnelt dit proces van verkleuring en morbiditeit, maar verandert de cascade van fenotypische markers die leiden tot de dood niet significant in vergelijking met niet-geïnfecteerde of PBS-geïnjecteerde larven.Met name de infectie van G.mellonella met paringstype-achtige homo-of heterozygoten van een van de geteste klinisch geïsoleerde C.albicans stammen produceert hoge sterftecijfers in vergelijking met PBS-geïnjecteerde dieren, terwijl injecties van prototrofische derivatenstammen het dodelijke effect in dit model verzachten. Het is belangrijk om te onthouden om gezonde larven te kiezen en voorzichtig te zijn in het hanteren van de larven. Als meerdere stammen zullen worden ingeënt, zorg ervoor dat de Candida cellen niet te lang in de PBS zitten.Na deze procedure kunnen andere methoden zoals immunologische profilering en Candida lokalisatie binnen larven worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden over de interacties tussen de gastheer en schimmelpathogen tijdens een infectie. Na de ontwikkeling maakte deze techniek de weg vrij voor onderzoekers om Candida pathogenese te verkennen met behulp van high-throughput formaten. Vergeet niet dat het werken met Candida albicans zorg vereist en dat standaard voorzorgsmaatregelen, waaronder de slijtage van persoonlijke beschermingsmiddelen, altijd moeten worden genomen tijdens het uitvoeren van deze procedure.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introductie van Shear Stress in de studie van bacteriële hechting

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Niet-invasieve beeldvorming van gedissemineerde candidiasis in de zebravis Larven

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Het Insect<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Als een krachtige Infectie model te Bacteriële Pathogenese Onderzoek

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Gebruik<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Als modelorganisme om te studeren<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Infectie

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analyse van de epitheelbeschadiging Geproduceerd door<em&gt; Entamoeba histolytica</em&gt; Infectie

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Modelleren candidiasis van de slijmvliezen in larvale zebravis door zwemblaas Injection

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

Fluorescentie gebaseerde neuraminidase remmingstest om de gevoeligheid van de influenza virussen zijn voorgesteld om de neuraminidase remmer Class of Antivirals

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

Een mondelinge beheermodel voor wasmot te Study Commensal-Induced aangeboren immuunresponsen

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Gebruik van de ongewervelde Galleria wasmot als een infectie model voor de studie van de Mycobacterium tuberculose complex

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools voor de real-time beoordeling van een Pseudomonas aeruginosa-infectiemodel

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...