Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
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Les auteurs aimerait l’aide de Pamela Washington et Leah Anderson dans l’obtention de Galleria mellonella devant servir à cette étude.

Toutes les méthodes décrites s’appuient sur l’utilisation des hôtes d’invertébrés et ne nécessitent pas d’approbation institutionnelle animalier et utiliser Comité (IACUC).
1. les larves de teigne galleria mellonella
<ol><li>Commander des larves de grossistes et fournisseurs qui n’introduisent pas d’hormones, antibiotiques ou autres traitements aux larves et qui sont en mesure d’expédier et livrer des spécimens vivants.<ol>
<li>N’oubliez pas d’acheter tout...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+candidiasis.">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li><li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+(Sit1p/Arn1p)+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion.">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li><li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade.">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li><li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach.">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li><li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

Le modèle de teigne g. mellonella se présente comme un outil efficace pour l’analyse rapide et reproductible de la virulence de c. albicans . Ce protocole détaillé s’appuie sur une prestation uniforme d’une dose infectieuse définie au même endroit dans un lot de larves. Dose infectieuse a un impact profond sur la mortalité mellonella g. considérant que l’utilisation de larves entre leur arrivée et les dix jours suivant la réception produit des résultats similaires. Perte de l...

Les espèces de Candida sont des commensaux humaines communes qui sont capables d’en train de devenir des agents pathogènes opportunistes dans sévèrement immunodéprimés et les patients dysbiotic. Bien que plusieurs espèces de Candida peuvent provoquer des maladies, c. albicans est la cause prédominante de candidose disséminée1,2. Maladie systémique résultant c. albicans , accès à la circulation sanguine grâce à une pénétration directe des barrières de l’hôte déjà restrictives ou introduction au sites chirurgicaux et d’autres violations du corps3. Les espèces de Candida utilisent un éventail de processus pathogènes provoquent des maladies systémiques au sein de l’hôte, y compris la filamentation, la formation de biofilm, évasion de cellules immunitaires et évasion et fer nettoyage4. In vitro des approches existent pour étudier les mécanismes pathogènes individuels, mais des modèles animaux continuent de fournir la meilleure option pour enquêter sur l’ensemble des maladies résultat5,6. Des recherches antérieures a détaillé les nombreux cas de promettre en vitro enquêtes de virulence avoir omis de reproduire in vivo7,8. Ainsi, les modèles animaux sont encore nécessaires afin d’évaluer la virulence in vivo. La plupart des modèles de la maladie dépendent de la souris pour servir de substitut pour les infections humaines malgré l’incapacité de c. albicans naturellement coloniser murines systèmes comme un commensal9. Invertébrés ultrarésistant de candidose disséminée le nématode Caenorhabditis elegans, le fruit fly Drosophila melanogasteret la teigne Galleria mellonella, bien que les préoccupations au sujet des différences fondamentales en physiologie de base, la température du corps hôte et voies d’exposition ont entravé leur acceptation large10,11.
Plus récemment, le modèle d’infection de teigne g. mellonella a été adopté à la pathogénicité de modèle d’un large éventail d’agents pathogènes bactériens et fongiques12,13,14. Avantages de ce modèle incluent son coût relativement faible, une augmentation débit, facilité d’utilisation et réduit les préoccupations d’ordre éthique concernant les animaux par rapport aux modèles murins de la bienfaisance. Pour les chercheurs, cela se traduit par une capacité accrue de tester plusieurs variables, des intervalles de confiance plus fortes, l’expérimentation plus rapide et contournement des protocoles animaux. G. mellonella a servi de plateforme d’évaluer rapidement la virulence de c. albicans après perturbation des gènes nécessaires à biofilm formation filamentation et gène règlement dans l’ensemble des isolats cliniques11,15 ,,16. Des études récentes ont intégré l’enquête d’efficacité antifongique avec g. mellonella pour évaluer la pharmacocinétique de drogues est très actif et résistance sous in vivo paramètres, qui sont autrement difficile et chronophage 17,,18. Pourtant, les études de c. albicans virulence chez g. mellonella ont été compliquées par aurait été de hauts niveaux de variation au sein des expériences et des protocoles incompatibles entre les groupes de recherche qui produisent différents phénotypes de résistance entre la souris et waxworms11,13,19,20,21. Ici, nous exposons un protocole de g. mellonella visant à normaliser les infections, de c. albicans augmentation reproductibilité dans les expériences de virulence et démontrer leur cohérence avec les études décrites précédemment de virulence dans murin modèles.
Des études antérieures ont démontré que c. albicans , accouplement de type semblable (MTL) locus sur le chromosome 5 régule identité cellulaires et accouplement de compétence similaire à Saccharomyces cerevisiae et autres de champignons ascomycètes22. La majorité des isolats de c. albicans est hétérozygote au locus MTL , codant chacun des MTLun et MTLα allèles (MTLun/α) et est par conséquent stériles15, 23 , 24. perte de l’un des allèles MTL par le biais de perte d’hétérozygotie (LOH) ou mutation conduit à homozygotes MTLune ou des souches α de MTLqui peuvent subir une commutation phénotypique de l’état stérile « blanc » à la accouplement d’État compétent de « opaque »25. Les travaux précédents a mis en évidence que perte d’hétérozygotie MTL réduit également virulence dans les modèles murins d’infection systémique à travers de souche différente origines26. Ici, nous détaillons le modèle de g. mellonella pour candidose disséminée utilisant un jeu expérimental génétiquement semblable pour illustrer la contribution d’hétérozygotie MTL de virulence chez g. mellonella. Nous montrons que MTL configuration influencé pathogénicité de c. albicans , où MTLα souches étaient moins virulentes MTLun/α tant MTLa cellules, semblables aux conclusions au sein de l’infection murine modèle26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

Les espèces de Candida sont commun champignons commensaux des humains qui colonisent la peau, des muqueuses et tube digestif. Sous certaines conditions, le Candida peut proliférer leurs niches naturelles entraînant débilitante infections muqueuses comme bien comme menaçant les infections systémiques, qui sont un élément majeur de l’enquête en raison de leur taux de mortalité élevé. Les modèles animaux d’infection disséminée existent pour étudier la progression de la maladie et de disséquer les caractéristiques de pathogénicité de Candida . Parmi ces, le modèle d’infection de teigne Galleria mellonella offre un outil expérimental rentable à haut débit des investigations de virulence systémique. De nombreux autres agents infectieux bactériens et eucaryotes ont été étudiés efficacement dans g. mellonella de pathogénicité, de comprendre ce qui en fait un système modèle largement accepté. Pourtant, variation de la méthode utilisée pour infecter g. mellonella peut altérer les résultats phénotypiques et compliquer l’interprétation des résultats. Ici, nous présentons les avantages et les inconvénients du modèle réalisé pour étudier la pathogenèse de Candida systémique et une approche pour améliorer la reproductibilité en détail. Nos résultats soulignent l’éventail des cinétiques de la mortalité chez les g. mellonella et décrivent les variables qui peuvent moduler ces cinétiques. En fin de compte, cette méthode se présente comme une approche éthique, rapide et rentable pour étudier la virulence dans un modèle de candidose disséminée.

Ici, nous démontrons une méthode reproductible pour l’utilisation de g. mellonella waxworms pour enquêter sur un modèle de candidose disséminée de l’infection à l’aide de c. albicans. Le rangement, l’entretien et la sélection des larves d’infection sont une composante essentielle d’assurer la reproductibilité mellonella g. mortalité (Figure 1A). Les larves saines qui sont actifs, ont une légè...

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The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Galleria mellonella sert d’un modèle d’invertébrés pour la candidose disséminée. Ici, nous détaillons l’infection du protocole et de prévoir l’efficacité du modèle de données à l’appui.

Le modèle d’Infection de teigne Galleria mellonella pour candidose disséminée

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de Candida sur la virulence des souches et les contributions de gènes spécifiques à ces processus. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle évite les préoccupations concernant l’utilisation des animaux, est robuste, rapide, bon marché, et fournit un grand nombre d’animaux par expérience. D’une manière générale, les personnes qui sont nouvelles à cette méthode auront probablement du mal un peu parce qu’ils auront une certaine difficulté à évaluer la viabilité du ver avant le début de l’expérience ou ils pourraient avoir quelques problèmes avec l’injection incohérente des vers.Commandez des larves auprès de grossistes et de fournisseurs qui n’introduisent pas d’hormones, d’antibiotiques ou d’autres traitements aux larves et qui sont en mesure d’expédier et de livrer des spécimens vivants. Lorsque les larves arrivent, vérifiez chaque récipient pour confirmer la santé et la viabilité des larves. Les larves en bonne santé seront complètement submergées sous la literie, se déplaçant et possédant une coloration jaune et bronzée légère avec peu de larves contenant des marques noires ou des décolorations le long du corps.Les larves peuvent être stockées dans leurs contenants dans un espace ventilé à température ambiante jusqu’à deux semaines. Pour préparer les cellules à levures à l’infection à Galleria mellonella, faire pousser les souches de C.albicans à injecter pendant la nuit dans trois millilitres de bouillon frais levure-peptone-dextrose par souche dans des tubes de culture standard sur un tambour rotatif à vitesse moyenne et 30 degrés Celsius. Le lendemain matin, recueillir les cellules par centrifugation, et laver la levure trois fois en cinq millilitres de pbs frais pour centrifugation.Après le dernier lavage, resuspendre les cellules dans un millilitre de PBS frais et transférer la levure dans un tube de microcentrifugeuse. Diluer périodiquement les cellules dans des concentrations supplémentaires de PBS à 1 à 100, 1 à 1000 et une à 100 000, et compter les cellules des dilutions une à 100 et une à 1000. Réglez les cellules à 2,5 fois 10 à la septième cellule par millilitre de concentration de PBS dans un nouveau tube de microcentrifugeuse, et confirmez l’exactitude de la dose infectieuse en plafonnant le volume approprié de la dilution d’un à 100 000 pour atteindre 100 unités formant des colonies sur une plaque dextrose de levure-peptone-dextrose pour chaque culture à utiliser dans l’infection.Pour infecter les larves avec les cellules de Candida, d’abord répandre une petite quantité de litière de ver de cire dans une boîte de Pétri stérile vide de 100 par 15 centimètres par réplique biologique, et stériliser une seringue de 10 microlitres équipée d’une aiguille de calibre 26 trois fois avec 10 microlitres de 70% d’éthanol et trois fois avec 10 microlitres de PBS par lavage. Ensuite, vortex la dilution de l’inoculation de C.albicans, et charger 10 microlitres de cellules dans la seringue. Ouvrez un récipient de larves de G.mellonella, et utilisez un doigt pour retourner soigneusement la literie pour découvrir les larves, en sélectionnant des larves jaunes bronzées d’une taille similaire qui sont en bonne santé avec un manque de pigmentation noire sur le corps, en utilisant le milieu et les index et le pouce pour ramasser une larve d’une manière similaire à saisir un crayon.Rouler la larve sur son dos de sorte que les jambes sont orientées vers le haut, tenant toute la longueur du corps entre les doigts et le pouce de sorte que la larve est incapable de se courber ou de s’éloigner de l’injection. D’autre part, faites pivoter la seringue de sorte que le biseau de l’aiguille est orienté vers le haut, et insérez lentement toute la longueur du biseau dans le corps à la jonction avec la jambe gauche arrière, en veillant à ce que l’aiguille pénètre dans le corps et ne pousse pas simplement le corps de la larve vers l’intérieur. L’étape la plus critique dans cette procédure est l’injection du ver de cire de telle sorte que les dommages au corps larvaire est minimisé et le bolus complet est inoculé.Injectez ensuite les 10 microlitres de Candida inoculum et extrayez l’aiguille. Co-maison jusqu’à 10 larves injectées de la même culture Candida dans chaque plat petri de 100 x 15 millimètres après l’inoculation, et incuber la larve à 37 degrés Celsius pendant huit jours. Vérifiez la vaisselle toutes les 24 heures pour surveiller la mort.La mortalité peut d’abord être évaluée par pigmentation assombrie, la formation de taches noires ou de corps, et un manque de mouvement. Pour confirmer la mortalité, utilisez des pinces à épiler pour rouler doucement les larves moribondes sur leur dos et piquer légèrement le dessous de la larve avec les pinces à épiler. Les larves qui commencent à se puper dans les papillons de nuit peuvent être incluses dans l’analyse, mais devraient être enlevées si elles commencent à muer.Il n’existe aucune différence significative dans la cinétique de la mort de G.mellonella entre les larves infectées zéro ou 10 jours après leur arrivée. Les signes caractéristiques de la maladie apparaissent chez les larves des deux âges qui succombent à l’infection, en commençant par la décoloration qui cède la place à des taches noires avant une perte totale de motilité et éventuellement la mort. L’infection par C.albicans accélère ce processus de décoloration et de morbidité, mais ne modifie pas significativement la cascade de marqueurs phénotypiques conduisant à la mort par rapport aux larves non infectées ou injectées par PBS.Notamment, l’infection de G.mellonella par des homo-ou hétérozygotes de type accouplement provenant de l’une ou l’autre des souches c.albicans cliniquement isolées testées produit des taux élevés de mortalité par rapport aux animaux injectés par PBS, tandis que les injections de souches dérivées prototrophiques atténuent l’effet mortel de ce modèle. Il est important de se rappeler de choisir des larves saines et d’être doux dans la manipulation des larves. Si plusieurs souches sont inoculées, prenez soin de ne pas laisser les cellules De Candida s’asseoir dans le PBS trop longtemps.À la suite de cette procédure, d’autres méthodes comme le profilage immunologique et la localisation de Candida chez les larves peuvent être effectuées pour répondre à d’autres questions sur les interactions entre l’hôte et l’agent pathogène fongique lors d’une infection. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs pour explorer la pathogénie candida à l’aide de formats à haut débit. N’oubliez pas que travailler avec Candida albicans exige des soins et que des précautions standard, y compris l’usure de l’équipement de protection personnelle, doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.

Research

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