Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
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Die Autoren möchten Hilfe von Pamela Washington und Leah Anderson bei der Beschaffung von Galleria Mellonella für den Einsatz in dieser Studie bestätigen.

Alle beschriebene Methoden setzen auf Einsatz von Wirbellosen Gastgeber und bedürfen keiner Zustimmung der institutionellen Animal Care und verwenden Committee (IACUC).
1. Galleria Mellonella Waxworm Larven
<ol><li>Bestellen Sie Larven von Großhändlern und Lieferanten, die nicht einzuführen, Hormone, Antibiotika oder andere Behandlungen für die Larven und die sind in der Lage zu versenden und liefern lebende Exemplare.<ol>
<li>Achten Sie darauf, alle Larven vom gleichen Liefera...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+candidiasis.">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li><li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+(Sit1p/Arn1p)+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion.">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li><li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade.">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li><li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach.">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li><li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

G. Mellonella Waxworm Modell steht als ein wirksames Instrument für die schnelle und reproduzierbare Analyse von C. Albicans Virulenz. Dieses ausführliche Protokoll stützt sich auf konsistente Bereitstellung einer definierten infektiöse Dosis an der gleichen Stelle über einen Stapel von Larven. Infektiöse Dosis hat tiefgreifende Auswirkungen auf die G. Mellonella Mortalität während der Verwendung von Larven zwischen ihren ersten Ankunft und zehn Tagen nach Erhalt zu ähnlichen Ergebniss...

Candida -Spezies sind gemeinsame menschliche Kommensalen, die in der Lage als opportunistische Krankheitserreger in Schwellenländern sind stark immungeschwächten und Dysbiotic Patienten. Obwohl viele Candida -Spezies Krankheit verursachen können, ist C. Albicans die am weitesten verbreitete Ursache von disseminierter Candidose1,2. Systemische Erkrankung ergibt sich aus C. Albicans Zugriff auf den Blutkreislauf durch entweder direkte Penetration der bisher restriktiven Host Barrieren oder Einführung in chirurgischen Websites und andere Verstöße gegen die Körper-3. Candida -Spezies nutzen eine Reihe von pathogenen Prozessen, systemische Erkrankung innerhalb des Hosts, einschließlich Filamentierung, Biofilmbildung Immunzelle ausweichen und entkommen und Eisen4Aufräumvorgang zu verursachen. In-vitro- Methoden existieren um individuelle pathogenen Mechanismen zu untersuchen, aber Tiermodellen weiterhin die beste Option, um die Gesamtheit der Krankheit Ergebnis5,6untersuchen. Die bisherige Forschung hat viele Instanzen der vielversprechenden in-vitro- Untersuchungen der Virulenz zu reproduzieren in Vivo7,8detaillierte. So, Tiermodelle sind erforderlich, um die Virulenz zu bewerten in-vivo. Die meisten Krankheitsmodelle setzen auf Mäuse, als Surrogat für Infektionen beim Menschen trotz C. Albicans Unfähigkeit, natürlich murinen Systeme besiedeln als Kommensalen9dienen. Wirbellosen Modelle von disseminierter Candidiasis gehören der Fadenwurm Caenorhabditis Elegans, die Frucht zu fliegen, Drosophila Melanogasterund Waxworm Galleria Mellonella, obwohl Bedenken über grundsätzliche Unterschiede in grundlegende Physiologie haben Host Körpertemperaturen und Expositionswege ihre breite Akzeptanz10,11. behindert
Vor kurzem wurde die G. Mellonella Waxworm Infektionsmodell, Modell Pathogenität einer Vielzahl von bakteriellen und pilzlichen Krankheitserregern12,13,14übernommen. Vorteile dieses Modells sind die relativ geringen Kosten, erhöhter Durchsatz, Benutzerfreundlichkeit und ethische Bedenken bezüglich tierischen Wohltätigkeit gegenüber murinen Modellen reduziert. Für Forscher bedeutet dies höhere Fähigkeit, mehrere Variablen, stärkere Konfidenzintervalle, schnellere experimentieren und Umgehung des tierischen Protokolle zu testen. G. Mellonella diente als Plattform, um schnell beurteilen, C. Albicans Virulenz nach Störung der Gene, die erforderlich für Biofilm-Bildung, Filamentierung und gen-Verordnung über klinische Isolate11,15 ,16. Jüngste Studien haben Untersuchung antimykotische Wirksamkeit mit G. Mellonella bewerten die Pharmakokinetik von Drogetätigkeit und Widerstand unter in-Vivo -Einstellungen, die sonst schwierig und zeitaufwendig sind integriert 17,18. Jedoch haben Studien von C. Albicans Virulenz in G. Mellonella kompliziert durch angeblich hohe Variation innerhalb Experimente und inkonsistente Protokolle zwischen Forschungsgruppen, die unterschiedliche Virulenz Phänotypen erzeugen zwischen Mäusen und Waxworms11,13,19,20,21. Hier beschreiben wir eine G. Mellonella Protokoll zur Standardisierung von C. Albicans Infektionen, Erhöhung der Reproduzierbarkeit in Virulenz Experimente, und Übereinstimmung mit den zuvor beschriebenen Studien der Virulenz in Murine zu demonstrieren Modelle.
Frühere Studien gezeigt, dass die Paarung Typ-wie (MTL) Locus auf Chromosom 5 C. Albicans Zelle Identität und Kompetenz ähnlich Saccharomyces Cerevisiae und andere Ascomycete Pilze22Paarung regelt. Die Mehrheit der C. Albicans Isolate sind heterozygot MTL Locus, Codierung eines jeden der MTLein und MTLα Allele(MTL/α), und sind folglich steril15, 23 , 24. Verlust eines MTL Allele durch Verlust der Heterozygotie (LOH) oder Mutation führt zu homozygoten MTLein oder MTL-α-Stämme, die einen phänotypischen Wechsel von der sterilen "weiße" Zustand zu unterziehen, können die Paarung zuständigen "undurchsichtig" Staat25. Bisherigen Arbeit hat hervorgehoben, dass Verlust der Heterozygotie MTL Virulenz in murinen Modellen einer systemischen Infektion über anderen Stamm Hintergründe26reduziert. Hier zeigen wir das G. Mellonella Modell für disseminierter Candidose mit genetisch ähnliche experimentelle können Sie den Beitrag der MTL Heterozygotie, Virulenz in G. Mellonelladarzustellen. Wir zeigen, dass MTL Konfiguration beeinflusst C. Albicans Pathogenität, wo MTLα Stämme waren weniger virulenten sowohl in Bezug auf MTL/α MTLein Zellen, ähnlich wie Erkenntnisse in murinen Infektion Modell26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

Candida -Spezies sind häufige Pilzinfektionen Kommensalen des Menschen besiedeln, Magen-Darm-Trakt, Haut und Schleimhaut-Oberflächen. Unter bestimmten Bedingungen kann Candida überwuchern ihre natürliche Nischen wodurch schwächenden Schleimhaut Infektionen als auch lebensbedrohliche systemische Infektionen, sind ein wichtiger Schwerpunkt der Untersuchung wegen der damit verbundenen hohen Sterblichkeitsraten. Tiermodelle der disseminierten Infektion gibt es für Fortschreiten der Krankheit zu studieren und die Merkmale der Candida Pathogenität seziert. Von diesen bietet die Galleria Mellonella Waxworm Infektionsmodell ein kostengünstige experimentelles Werkzeug für Hochdurchsatz-Untersuchungen der systemischen Virulenz. Vielen anderen bakteriellen und Eukaryoten Krankheitserregern sind effektiv in G. Mellonella , Pathogenität, verstehen untersucht worden, so dass es eine weithin akzeptierte Modellsystem. Jedoch kann Variation in der Methode verwendet, um G. Mellonella infizieren verändern phänotypischen Ergebnisse und Interpretation der Ergebnisse erschweren. Hier beschreiben wir die vor- und Nachteile des Modells Waxworm zu studieren systemischen Candida -Pathogenese und detail einen Ansatz zur Verbesserung der Reproduzierbarkeit. Unsere Ergebnisse markieren Sie den Bereich der Sterblichkeit Kinetik in G. Mellonella und beschreiben Sie die Variablen, die diese Kinetik modulieren können. Schließlich steht diese Methode als eine ethische, schnelle und kostengünstige Ansatz zur Virulenz in einem Modell von disseminierter Candidiasis zu studieren.

Hier zeigen wir eine reproduzierbare Methode für die Verwendung von G. Mellonella Waxworms ein disseminierter Candidiasis Modell einer Infektion mit C. Albicansuntersuchen. Die fachgerechte Lagerung, Wartung und Auswahl der Larven für eine Infektion sind wesentlicher Bestandteil der Versicherung Reproduzierbarkeit G. Mellonella Sterblichkeit (Abb. 1A). Gesunde Larven, die aktiv sind, haben eine helle Farbe gelb/ta...

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The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Galleria Mellonella dient als ein Wirbellosen Modell für disseminierter Candidiasis. Hier beschreiben wir die Infektion Protokoll und unterstützende Daten für das Modell Wirksamkeit.

Die Galleria Mellonella Waxworm Infektionsmodell für verbreitet Candidiasis

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Candida-Bereich über Stammvirulenz und die Beiträge bestimmter Gene zu diesen Prozessen zu beantworten. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass sie Bedenken in Bezug auf den Einsatz von Tieren vermeidet, robust, schnell, billig ist und eine hohe Anzahl von Tieren pro Experiment bietet. Im Allgemeinen werden Personen, die neu in dieser Methode sind, wahrscheinlich ein wenig kämpfen, weil sie einige Schwierigkeiten haben werden, die Wurmlebensfähigkeit vor Beginn des Experiments zu beurteilen, oder sie könnten einige Probleme mit der inkonsistenten Injektion der Würmer haben.Bestellen Sie Larven bei Großhändlern und Lieferanten, die keine Hormone, Antibiotika oder andere Behandlungen in die Larven einführen und in der Lage sind, lebende Exemplare zu versenden und zu liefern. Wenn die Larven ankommen, überprüfen Sie jeden Behälter, um die Gesundheit und Lebensfähigkeit der Larven zu bestätigen. Gesunde Larven werden vollständig unter der Bettwäsche untergetaucht, bewegen sich und besitzen eine gelbe, leichte Bräune Färbung mit wenigen Larven, die schwarze Flecken oder Verfärbungen entlang des Körpers enthalten.Die Larven können in ihren Behältern in einem belüfteten Raum bei Umgebungstemperatur bis zu zwei Wochen gelagert werden. Um die Hefezellen auf die Galleria mellonella-Infektion vorzubereiten, wachsen die C.albicans-Stämme, die über Nacht in drei Milliliter frischer Hefe-Pepton-Dextrose-Brühe pro Sorte in Standardkulturröhren auf einer rotierenden Trommel bei mittlerer Geschwindigkeit und 30 Grad Celsius injiziert werden. Am nächsten Morgen sammeln Sie die Zellen durch Zentrifugation und waschen Sie die Hefe dreimal in fünf Milliliter nfrischem PBS pro Zentrifugation.Nach der letzten Wäsche die Zellen in einem Milliliter frischer PBS wieder aufsetzen und die Hefe in ein Mikrozentrifugenrohr übertragen. Die Zellen in zusätzlichen PBS bei eins zu 100, eins zu 1, 000 und einbis100 000 Konzentrationen verdünnen und die Zellen aus den Eins-zu-100- und Eins-zu-1-Verdünnungen zählen. Passen Sie die Zellen auf 2,5 mal 10 bis zu den siebten Zellen pro Milliliter PBS-Konzentration in einem neuen Mikrozentrifugenrohr an und bestätigen Sie die Genauigkeit der infektiösen Dosis, indem Sie das entsprechende Volumen der Eins-zu-100-Verdünnung verschichten, um 100 koloniebildende Einheiten auf einer Hefe-Pepton-Dextrose-Agarplatte für jede Kultur zu erhalten, die bei einer Infektion verwendet werden soll.Um die Larven mit den Candida-Zellen zu infizieren, verteilen Sie zunächst eine kleine Menge Wachswurmeinstreu in eine leere, 100 mal 15 Zentimeter sterile Petrischale pro biologischer Replikation und sterilisieren Sie eine 10-Mikroliter-Spritze, die dreimal mit einer 26-Spur-Nadel mit 10 Mikrolitern 70%Ethanol und dreimal mit 10 MikroliterPBS pro Waschgang ausgestattet ist. Als nächstes wirbeln Sie die Inokulationsverdünnung von C.albicans aus und laden Sie 10 Mikroliter Zellen in die Spritze. Öffnen Sie einen Behälter mit G.mellonella Larven, und verwenden Sie einen Finger, um vorsichtig die Bettwäsche umzudrehen, um Larven aufzudecken, indem Sie gelbe, tan Larven ähnlicher Größe auswählen, die in guter Gesundheit sind und einen Mangel an schwarzer Pigmentierung auf den Körpern haben, indem Sie die Mittel- und Zeigefinger und den Daumen verwenden, um eine Larve in einer Weise aufzunehmen, die dem Greifen eines Bleistifts ähnelt.Rollen Sie die Larve auf den Rücken, so dass die Beine nach oben zeigen und die gesamte Länge des Körpers zwischen den Fingern und dem Daumen halten, so dass die Larve nicht in der Lage ist, sich zu krümmen oder von der Injektion wegzuziehen. Mit der anderen Hand drehen Sie die Spritze so, dass die Nadelabschrägung nach oben gerichtet ist, und legen Sie langsam die gesamte Länge der Abschrägung in den Körper an der Kreuzung mit dem hintersten linken Bein ein, um sicherzustellen, dass die Nadel in den Körper eindringt und nicht einfach den Körper der Larve nach innen drückt. Der kritischste Schritt in diesem Verfahren ist die Injektion des Wachswurms in einer Weise, dass Schäden am Larvenkörper minimiert und der volle Bolus geimpft wird.Dann injizieren Sie die vollen 10 Mikroliter Candida inoculum, und extrahieren Sie die Nadel. Beherbergen Sie bis zu 10 Larven aus der gleichen Candida-Kultur in jeder 100-mal-15-Millimeter-Petrischale nach der Impfung und bebrüten die Larve acht Tage lang bei 37 Grad Celsius. Überprüfen Sie die Gerichte alle 24 Stunden, um den Tod zu überwachen.Die Sterblichkeit kann zunächst durch verdunkelte Pigmentierung, die Bildung von schwarzen Flecken oder Körpern und Bewegungsmangel beurteilt werden. Um die Sterblichkeit zu bestätigen, verwenden Sie eine Pinzette, um moribunde Larven sanft auf ihren Rücken zu rollen und die Unterseite der Larve mit der Pinzette leicht zu stochern. Larven, die beginnen, in Motten zu verpupvern, können in die Analyse einbezogen werden, sollten aber entfernt werden, wenn sie anfangen zu molten.Es besteht kein signifikanter Unterschied in der Kinetik des G.mellonella-Todes zwischen Larven, die null oder 10 Tage nach der Ankunft infiziert sind. Die charakteristischen Krankheitszeichen entstehen bei Larven aus beiden Altersgruppen, die der Infektion erliegen, beginnend mit Verfärbungen, die schwarzen Flecken vor einem totalen Verlust der Beweglichkeit und schließlich dem Tod weichen. Die Infektion mit C.albicans beschleunigt diesen Prozess der Verfärbung und Morbidität, verändert aber nicht signifikant die Kaskade von phänotychen Markern, die zum Tod führen, im Vergleich zu nicht infizierten oder PBS-injizierten Larven.Insbesondere die Infektion von G.mellonella mit paarenden typähnlichen Homo- oder Heterozygoten aus einem der getesteten klinisch isolierten C.albicans-Stämme führt zu hohen Sterblichkeitsraten im Vergleich zu PBS-injizierten Tieren, während Injektionen von prototrophen Derivatestämmen die tödliche Wirkung in diesem Modell dämpfen. Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, gesunde Larven zu wählen und sanft mit den Larven umzugehen. Wenn mehrere Stämme geimpft werden, achten Sie darauf, dass die Candida-Zellen nicht zu lange im PBS sitzen.Nach diesem Verfahren können andere Methoden wie immunologische Profilierung und Candida-Lokalisierung innerhalb von Larven durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen über die Wechselwirkungen zwischen dem Wirt und Pilzerreger während einer Infektion zu beantworten. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher, Candida Pathogenese mit Hochdurchsatzformaten zu erforschen. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Candida albicans Sorgfalt erfordert und dass Standardvorkehrungen, einschließlich des Tragens von persönlichen Schutzausrüstungen, immer während der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden sollten.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introducing Schubspannung in der Studie der bakteriellen Adhäsion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Nicht-invasive Bildgebung von disseminierter Candidiasis in Zebrafischlarven

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Das Insekt<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Als leistungsfähiges Infektion Modell zur bakterielle Pathogenität Untersuchen

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Die Verwendung von<em&gt; Galleria mellon</em&gt; Als Modellorganismus zum Studium<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Infektion

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

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Die Analyse der epithelialen Schäden Produziert von<em&gt; Entamoeba histolytica</em&gt; Infektion

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

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Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

Fluoreszenz-basierte Neuraminidase-Inhibitionsassay die Empfänglichkeit der Influenza-Viren an die Neuraminidase-Inhibitor-Klasse von Anti-Virus zu beurteilen

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

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The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

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