Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

המחברים רוצה להכיר בסיוע ווושינגטון פמלה אנדרסון לאה בהשגת Galleria mellonella לשימוש במחקר זה.

כל השיטות המתוארות מסתמכים על שימוש של המארחים הגעה, אינם דורשים טיפול בעלי חיים מוסדיים אישור ועדת להשתמש (IACUC).
1. הזחלים Waxworm גלריה (galleria) mellonella
<ol><li>סדר הזחלים סיטונאים וספקים זה לא להציג את הורמונים, אנטיביוטיקה או טיפולים אחרים לזחלים, אשר מסוגלים יצורים חיים כאלה ע?...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+candidiasis.">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li><li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+(Sit1p/Arn1p)+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion.">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li><li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade.">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li><li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach.">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li><li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

המודל waxworm mellonella ג עומד ככלי יעיל עבור ניתוח לשחזור וברכבות של התקפה אלימה אלביקנס ג . פרוטוקול מפורט זה נשענת על משלוח עקבי של מנה זיהומיות מוגדר לאותו אתר ברחבי אוסף של הזחלים. מינון זיהומיות יש השפעה עמוקה על התמותה mellonella ג ואילו השימוש הזחלים שלהם ההגעה הראשונית בין 10 ימי?...

קנדידה המינים נפוצים commensals אדם המסוגלים מתעוררים כמו פתוגנים אופורטוניסטים ב immunocompromised קשות ומטופלים dysbiotic. למרות קנדידה מינים רבים יכולים לגרום למחלות, ג אלביקנס הוא הגורם הנפוץ ביותר של קנדידה המופץ1,2. מחלה מערכתית נובעת אלביקנס ג גישה לזרם הדם דרך גם חדירה ישירה של מחסומי מארח קודם לכן מגבילים או מבוא-אתרי כירורגי ולפרצות אחרות של גוף3. קנדידה מינים לנצל מגוון של תהליכים פתוגניים לגרום למחלה מערכתית בתוך המארח כולל filamentation, ביופילמים, התחמקות תא החיסון ואת הבריחה של ברזל ניקוי4. גישות במבחנה לחקור מנגנונים פתוגניים בודדים, אך מודלים חייתיים לספק את האפשרות הטובה ביותר לחקור את מכלול של המחלה התוצאה5,6. מחקרים קודמים מפורטות מקרים רבים של המבטיח במבחנה חקירות של התקפה אלימה נכשל להתרבות ויוו7,8. לפיכך, מודלים בעלי חיים נדרשים עדיין להעריך התקפה אלימה ויוו. רוב הדגמים המחלה להסתמך על עכברים לשמש פונדקאית עבור זיהומים האדם למרות חוסר אלביקנס ג ליישב באופן טבעי מערכות מאתר כמו commensal9. הגעה מודלים של קנדידה המופץ כוללים את תולעים נימיות Caenorhabditis elegans, הפרי לטוס דרוזופילה melanogaster, את waxworm mellonella גלריה (galleria), למרות חששות לגבי ההבדלים הבסיסיים ב. אנדרופינים, חום הגוף המארח והנתיבים של חשיפה יש הקשו שלהם הסכמה רחבה10,11.
לאחרונה, המודל זיהום mellonella ג waxworm אומץ כדי דגם פתוגניות של מגוון רחב של חיידקים ופטריות פתוגנים12,13,14. היתרונות של מודל זה כוללים שלה בעלות נמוכה יחסית, עלתה התפוקה, להקל על השימוש, להפחית חששות אתיים לגבי בעלי חיים בחסד לעומת מודלים מאתר. לחוקרים, זה מיתרגם יכולת מוגברת כדי לבדוק מרובות משתנים מרווחי ביטחון חזקה יותר, מהירה יותר ניסויים, מעקף של פרוטוקולים בעלי חיים. Mellonella ג שימש כפלטפורמה להעריך במהירות אלביקנס ג התקפה אלימה בעקבות ההפרעות של גנים הדרושים עבור biofilm היווצרות filamentation, ג'ין רגולציה על פני מבודד קלינית11,15 ,16. מחקרים שנעשו לאחרונה שילבו החקירה של פטריות יעילות שימוש mellonella ג כדי להעריך את פרמקוקינטיקה של פעילות סמים והתנגדות תחת ויוו הגדרות, שהן מאתגרת אחרת, זמן רב 17,18. ובכל זאת, מחקרים של התקפה אלימה אלביקנס ג ב mellonella ג יש כבר מורכב על ידי רמות גבוהות הדיווחים של וריאציה בתוך ניסויים ופרוטוקולים לא עקביים בין קבוצות המחקר המייצרים פנוטיפים התקפה אלימה שונות בין עכברים, waxworms11,13,19,20,21. פה, אנו מכינים mellonella ג פרוטוקול לתקנן אלביקנס ג זיהומים, עלייה הפארמצבטית בניסויים התקפה אלימה, ומדגימים עקביות עם מחקרים שתואר לעיל של התקפה אלימה ב מאתר מודלים.
מחקרים קודמים הראו כי אלביקנס ג ההזדווגות, כמו סוג לוקוס (MTL) בכרומוזום 5 מסדיר תא זהות, הזדווגות כשירות הדומה האפייה ו פטריות אחרות Ascomycete22. הרוב המכריע של אלביקנס ג מבודד משפחתית ולא משפחתית הטרוזיגוטיים- MTL מיקומה, קידוד אחד מכל סוג של MTL ו- MTLα אללים (MTL/α), והם סטרילי כתוצאה מכך15, 23 , 24. אובדן אחד אללים MTL דרך אובדן של heterozygosity (LOH) או מוטציה מוביל homozygous MTL או שמקודדים α MTLיכולות לעבור מתג פנוטיפי מהמדינה 'לבן' סטרילי ההזדווגות המוסמכת המדינה 'אטום'25. העבודות הקודמות הדגישה כי אובדן הטרוזיגוטיות MTL גם מקטין התקפה אלימה במודלים מאתר של זיהום סיסטמי על פני רקעים זן שונה26. כאן, אנו מפרטים לדוגמא קנדידה המופץ באמצעות ערכה ניסוי דומה גנטית כדי לתאר את התרומה הטרוזיגוטיות MTL לאלימות ולגרימת ב mellonella ג mellonella ג . אנחנו מראים MTL תצורה השפיעו אלביקנס ג פתוגניות, איפה MTLα זנים היו פחות ארסית ביחס MTL/αוהן MTL תאים, בדומה לממצאי בתוך זיהום מאתר דגם26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

המינים קנדידה commensals פטרייתי הנפוץ של בני האדם colonizing את העור משטחים הרירית, מערכת העיכול. בתנאים מסוימים, קנדידה יכולה והדבר נישות הטבעי שלהם וכתוצאה מכך מתישה זיהומים הרירית כמו טוב כמו סכנת חיים זיהומים מערכתית, המהווים מוקד מרכזי של החקירה בשל שיעורי התמותה גבוהים המשויך שלהם. מודלים חייתיים של זיהום המופץ קיימות עבור הלומדים התקדמות המחלה, לנתח את המאפיינים של קנדידה פתוגניות. אלה, המודל זיהום waxworm mellonella גלריה (galleria) מספק כלי ניסיוני חסכונית עבור תפוקה גבוהה חקירות של התקפה אלימה מערכתית. רבים אחרים בקטריאליים ו האיקריוטים מדבקים ביעילות נחקרו ב mellonella ג להבין פתוגניות, שהופך אותו מערכת מודל נפוצה ומקובלת. ובכל זאת, וריאציה של השיטה שבה נעשה שימוש כדי להדביק את mellonella ג יכול לשנות תוצאות פנוטיפי ומסבכים פרשנות של התוצאות. כאן, אנחנו חלוקה לרמות את היתרונות והחסרונות של המודל waxworm ללמוד פתוגנזה קנדידה מערכתית ואף פירוט גישה לשיפור הפארמצבטית. התוצאות שלנו להאיר את הטווח של קינטיקה התמותה ב mellonella ג , לתאר את המשתנים אשר יכול לווסת קינטיקה אלה. בסופו של דבר, שיטה זו ניצבת גישה אתית, מהירה וחסכונית ללמוד התקפה אלימה במודל של קנדידה המופץ.

. הנה, נדגים שיטה ישימה עבור השימוש mellonella ג waxworms לחקור מודל קנדידה המופץ של זיהום באמצעות אלביקנס ג. האחסון המתאים, תחזוקה מבחר של הזחלים זיהום הינם המכריעים של מבטח הפארמצבטית בתמותה mellonella ג (איור 1א'). הזחלים בריא הפעילים, יש צבע צהו...

Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Mellonella גלריה (galleria) משמש מודל הגעה עבור המופץ קנדידה. כאן, אנחנו מפרטים את הזיהום פרוטוקול ולספק נתונים התומכים לאפקטיביות של הדגם.

לדוגמא Galleria mellonella Waxworm זיהום קנדידה המופץ

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום קנדידה על ארסיות המתח ועל התרומות של גנים ספציפיים לתהליכים אלה. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא נמנעת מחששות לגבי שימוש בבעלי חיים, היא חזקה, מהירה, זולה, ומספקת מספר גבוה של בעלי חיים לכל ניסוי. באופן כללי, אנשים חדשים בשיטה זו צפויים להיאבק קצת כי הם יתקשו להעריך את הכדאיות תולעת לפני תחילת הניסוי או שאולי יש להם כמה בעיות עם הזרקה לא עקבית של התולעים.הזמינו זחלים מסיטונאים וספקים שלא מציגים הורמונים, אנטיביוטיקה או טיפולים אחרים לזחלים ומצליחים לשלוח ולספק דגימות חיות. כאשר הזחלים מגיעים, לבדוק כל מיכל כדי לאשר את הבריאות ואת הכדאיות של הזחלים. זחלים בריאים יהיו שקועים לחלוטין מתחת למצעים, נעים, ובעלים צבע צהוב, שזוף בהיר עם כמה זחלים המכילים סימנים שחורים או שינויי צבע לאורך הגוף.הזחלים יכולים להיות מאוחסנים במיכלים שלהם בחלל מאוורר בטמפרטורת הסביבה עד שבועיים. כדי להכין את תאי השמרים לזיהום מלונלה גלריה, לגדל את זנים C.albicans להיות מוזרק לילה בשלושה מיליליטר של מרק שמרים טריים פפטונה-דקסטרוז לכל זן בצינורות תרבות סטנדרטית על תוף מסתובב במהירות בינונית ו 30 מעלות צלזיוס. למחרת בבוקר, לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה, ולשטוף את השמרים שלוש פעמים בחמישה מיליליטר של PBS טריים אחוז צנטריפוגה.לאחר הכביסה האחרונה, תן שימוש חוזר בתאים במיליליטר אחד של PBS טרי ולהעביר את השמרים לתוך צינור microcentrifuge. לדלל באופן סדרתי את התאים ב- PBS נוספים בריכוזים של 1 ל- 100, אחד ל- 1, 000 ו- 1 ל- 100, וספירת התאים מהדילולים של אחד ל- 100 ו- 1 ל- 1, 000. להתאים את התאים ל 2.5 פעמים 10 לתאים השביעיים למיליליטר של ריכוז PBS בצינור microcentrifuge חדש, ולאשר את הדיוק של המינון הזיהומי על ידי ציפוי הנפח המתאים של אחד ל 100, 000 דילול כדי להשיג 100 יחידות יוצרות מושבה על צלחת אחת שמרים-peptone-dextrose אגר עבור כל תרבות לשמש זיהום.כדי להדביק את הזחלים בתאי קנדידה, ראשית להפיץ כמות קטנה של מצעים תולעי שעווה לתוך אחד ריק, 100 על 15 ס"מ צלחת פטרי סטרילית לכל שכפול ביולוגי, ו לעיקור מזרק 10 מיקרוליטר מצויד מחט 26 מד שלוש פעמים עם 10 microliters של 70% אתנול שלוש פעמים עם 10 microliters של PBS לכל לשטוף. לאחר מכן, מערבולת דילול החיסון של C.albicans, ולהעמיס 10 microliters של תאים לתוך המזרק. פתח מיכל אחד של זחלי G.mellonella, ולהשתמש באצבע כדי להפוך בזהירות את המצעים מעל כדי לחשוף זחלים, בחירת זחלים צהובים, שזופים בגודל דומה כי הם במצב בריאותי טוב עם חוסר פיגמנטציה שחורה על הגופים, באמצעות האצבעות האמצעיות והאינדקס והאגודל להרים זחל אחד באופן דומה לתפוס עיפרון.מגלגלים את הזחל על גבו כך שהרגליים פונות כלפי מעלה, מחזיקים את אורך הגוף המלא בין האצבעות והאגודל כך שהזחל אינו מסוגל להתכרבל או להתרחק מהזריקה. עם היד השנייה, לסובב את המזרק כך המחט משופע פונה כלפי מעלה, לאט להכניס את כל אורך השכבה לתוך הגוף בצומת עם הרגל השמאלית האחורית ביותר, להבטיח כי המחט חודר לגוף ולא פשוט לדחוף את הגוף של הזחל פנימה. הצעד הקריטי ביותר בהליך זה הוא הזרקה של תולעת השעווה באופן כזה שנזק לגוף הזחל ממוזער והבולוס המלא מחוסן.ואז להזריק את מלא 10 microliters של קנדידה inoculum, ולחלץ את המחט. בית שותף עד 10 זחלים מוזרק מאותה תרבות קנדידה בכל צלחת פטרי 100 על ידי 15 מילימטר בעקבות חיסון, ו דגירה הזחל ב 37 מעלות צלזיוס במשך שמונה ימים. בדוק את הכלים כל 24 שעות כדי לפקח על המוות.התמותה יכולה להיות מוערכת בתחילה על ידי פיגמנטציה כהה, היווצרות של כתמים שחורים או גופים, וחוסר תנועה. כדי לאשר תמותה, השתמש פינצטה בעדינות לגלגל זחלים moribund על גבם בקלילות לתקוע את החלק התחתון של הזחל עם פינצטה. זחלים שמתחילים להתרומם לתוך עש ניתן לכלול בניתוח אבל צריך להיות מוסר אם הם מתחילים molt.אין הבדל משמעותי בקינטיקה של מוות G.mellonella קיים בין זחלים נגועים אפס או 10 ימים לאחר ההגעה. הסימנים האופייניים למחלה מתעוררים בזחלים משני הגילאים שנכנעים לזיהום, החל מ שינוי צבע שמ מפנה את הדרך לטלאים שחורים לפני אובדן מוחלט של תנועתיות ובסופו של דבר מוות. זיהום עם C.albicans מאיץ את התהליך הזה של שינוי צבע ותחלואה, אך אינו משנה באופן משמעותי את מפל סמנים פנוטיפיים המובילים למוות בהשוואה לזחלים לא מודבקים או מוזרקים PBS.יש לציין כי הזיהום של G.mellonella עם הומו-או הטרוזיגוטים דמויי סוג הזדווגות מכל אחד מהזנים המבודדים קלינית C.albicans מייצר שיעורים גבוהים של תמותה בהשוואה לבעלי חיים המוזרקים ל- PBS, בעוד שזריקות של זנים נגזרים פרוטוטרופיים מחשלות את האפקט הקטלני במודל זה. חשוב לזכור לבחור זחלים בריאים להיות עדינים בטיפול בזחלים. אם זנים מרובים יהיו מחוסנים, לדאוג לא לתת לתאי קנדידה לשבת PBS במשך זמן רב מדי.בעקבות הליך זה, שיטות אחרות כמו פרופיל חיסוני ולוקליזציה קנדידה בתוך הזחלים ניתן לבצע כדי לענות על שאלות נוספות על האינטראקציות בין המארח פתוגן פטרייתי במהלך זיהום. לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים לחקור את קנדידה פתוגנזה באמצעות פורמטים תפוקה גבוהה. אל תשכח כי עבודה עם קנדידה אלביקנים דורש טיפול, כי אמצעי זהירות סטנדרטיים, כולל ללבוש ציוד הגנה אישית, תמיד צריך להינקט בעת ביצוע הליך זה.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

היכרות עם מתח שאר בחקר הדבקה חיידקית

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

הדמיה לא פולשנית של פטרת מופצת הזחלים דג הזברה

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

החרקים<em&gt; גלרית mellonella</em&gt; כדגם זיהום רב עצמה כדי לחקור פתוגנזה קטריאלי

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

שימוש<em&gt; Mellonella Galleria</em&gt; כאורגניזם מודל לחקר<em&gt; הלגיונלה pneumophila</em&gt; זיהום

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

ניתוח של נזק אפיתל הופק על ידי<em&gt; Histolytica Entamoeba</em&gt; זיהום

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

דוגמנות רירית פטרת בזחל דג הזברה על ידי הזרקת Swimbladder

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

קרינה המבוססת Assay Neuraminidase העיכוב להעריך את הרגישות של שפעת וירוסים אל Neuraminidase המונע המחלקה של תרופות אנטי-ויראליות

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

גלרייה mellonella מודל הניהול אוראלי את תגובות מערכת החיסון מולדים Study Commensal-Induced

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

השימוש חסרי חוליות גלריה מלאבלה כמודל זיהום לחקור את מתחם שחפת של פטרת

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

כלים להערכה בזמן אמת של מודל זיהום פסאודומונס ארוגינוזה

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...