Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
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लेखक इस अध्ययन में उपयोग के लिए गैलेरिया mellonella प्राप्त करने में पामेला वाशिंगटन और लिआ एंडरसन की सहायता स्वीकार करना चाहते हैं ।

सभी तरीकों invertebrate मेजबान के उपयोग पर भरोसा वर्णित है और संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) अनुमोदन की आवश्यकता नहीं है ।
1. गैलेरिया mellonella Waxworm लार्वा
<ol><li>थोक व्यापारी और आपूर्तिकर्ताओं से ?...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+candidiasis.">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li><li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+(Sit1p/Arn1p)+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion.">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li><li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade.">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li><li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach.">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li><li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

जी. के. mellonella waxworm मॉडल सी. albicans डाह के द्रुत और reproducible विश्लेषण के लिए एक प्रभावी औजार के रूप में खड़ा है. इस विस्तृत प्रोटोकॉल लार्वा के एक बैच भर में एक ही साइट के लिए एक परिभाषित संक्रामक खुराक के अनुरू?...

Candida प्रजातियों आम मानव commensals है कि गंभीर रूप से प्रतिरक्षा और dysbiotic रोगियों में अवसरवादी रोगजनकों के रूप में उभर करने में सक्षम हैं । हालांकि कई Candida प्रजातियों के रोग का कारण बन सकता है, सी albicans का सबसे प्रचलित कारण है कैंडिडिआसिस1,2। सी albicans से प्रणालीगत रोग परिणाम पहले प्रतिबंधात्मक मेजबान बाधाओं या शल्य साइटों और शरीर के अंय उल्लंघनों पर परिचय के प्रत्यक्ष प्रवेश के माध्यम से खून तक पहुंचने3। Candida प्रजातियों रोगजनक प्रक्रियाओं की एक सीमा का उपयोग करने के लिए रेशा सहित मेजबान के भीतर प्रणालीगत रोग कारण, फिल्म निर्माण, प्रतिरक्षा सेल चोरी और बच, और4सफाई लोहा । में इन विट्रो दृष्टिकोण के लिए व्यक्तिगत रोगजनक तंत्र की जांच मौजूद हैं, लेकिन पशु मॉडल के लिए सबसे अच्छा रोग के परिणाम की संपूर्णता5,6जांच विकल्प प्रदान जारी है । पिछले अनुसंधान डाह के इन विट्रो जांच में होनहार के कई उदाहरण विस्तृत है vivo7,8में पुन: पेश करने में विफल । इस प्रकार, पशु मॉडल अभी भी vivo में डाह का आकलन करने के लिए आवश्यक हैं । अधिकांश रोग मॉडल चूहों पर निर्भर के रूप में एक खाना खानेवाला9के रूप में स्वाभाविक रूप से उपनिवेश murine प्रणालियों के लिए सी albicans अक्षमता के बावजूद मानव संक्रमण के लिए एक किराए के रूप में सेवा । प्रसार कैंडिडिआसिस के Invertebrate मॉडल निमेटोड Caenorhabditis एलिगेंस, फल मक्खी Drosophila melanogaster, और waxworm गैलेरिया mellonella, हालांकि बुनियादी मतभेदों के बारे में चिंताओं में शामिल बुनियादी शरीर क्रिया विज्ञान में, मेजबान शरीर के तापमान, और जोखिम के मार्गों उनके व्यापक स्वीकृति10,11बाधा उत्पंन की है।
हाल ही में, जी mellonella waxworm संक्रमण मॉडल बैक्टीरियल और कवक रोगजनकों की एक विस्तृत श्रृंखला के मॉडल pathogenicity को अपनाया गया है12,13,14। इस मॉडल के लाभ में शामिल है अपनी अपेक्षाकृत कम लागत, वृद्धि का प्रवाह, उपयोग में आसानी, और कम नैतिक murine मॉडल की तुलना में पशु beneficence के बारे में चिंताओं । शोधकर्ताओं के लिए, यह कई चर, मजबूत विश्वास अंतराल, और अधिक तेजी से प्रयोग, और पशु प्रोटोकॉल का बाईपास परीक्षण करने के लिए वृद्धि की क्षमता में तब्दील हो । जी mellonella तेजी से आकलन करने के लिए एक मंच के रूप में कार्य किया है ग. albicans डाह के लिए आवश्यक जीन के निंनलिखित गड़बड़ी का गठन, रेशा, और नैदानिक भर में जीन विनियमन के अलग से11,15 ,16. हाल के अध्ययनों की जांच में शामिल किया है रोधी प्रभावकारिता का उपयोग कर mellonella दवा गतिविधि और प्रतिरोध के फार्माकोकाइनेटिक्स में vivo सेटिंग्स, जो अन्यथा चुनौतीपूर्ण और समय लेने के तहत का आकलन करने के लिए 17,18. फिर भी, जी mellonella में सी albicans डाह के अध्ययन के प्रयोगों के भीतर भिंनता के कथित रूप से उच्च स्तर और अनुसंधान समूहों है कि अलग डाह phenotypes उत्पादन के बीच असंगत प्रोटोकॉल द्वारा जटिल किया गया है चूहों और waxworms के बीच11,13,19,20,21. यहाँ, हम C. albicans संक्रमणों को मानकीकृत करने के लिए एक जी. mellonella प्रोटोकॉल की रूपरेखा, डाह प्रयोगों में reproducibility वृद्धि, और डाह में पहले से वर्णित अध्ययनों के साथ निरंतरता का प्रदर्शन murine मॉडल.
पिछले अध्ययनों से प्रदर्शित किया कि C. albicans संभोग प्रकार की तरह (MTL) 5 गुणसूत्र पर लोकस सेल पहचान और संभोग क्षमता Saccharomyces cerevisiae और अंय Ascomycete कवक22के समान नियंत्रित करता है । C. albicans के बहुमत MTL लोकस पर heterozygous हैं, MTLएक औरMTL α alleles (MTLए/α), और फलस्वरूप बाँझ15में से प्रत्येक में से एक कूटबंधन, 23 , 24. heterozygosity (LOH) या उत्परिवर्तन के नुकसान के माध्यम से MTL alleles में से एक का नुकसान homozygous MTLएक या MTL α उपभेदों है कि बाँझ ' सफेद राज्य से एक phenotypic स्विच से गुजरना कर सकते हैं करने के लिए सुराग सहवास सक्षम ' अपारदर्शी ' अवस्था२५. पिछले काम उजागर किया है कि MTL heterozygosity की हानि भी अलग तनाव पृष्ठभूमि में प्रणालीगत संक्रमण के murine मॉडल में डाह कम कर देता है26। यहां, हम विस्तार के लिए जी mellonella मॉडल एक आनुवंशिक रूप से समान प्रयोगात्मक सेट का उपयोग करने के लिए जी mellonellaमें डाह को MTL heterozygosity के योगदान को दर्शाती है । हम बताते है कि MTL विंयास प्रभावित सी albicans pathogenicity, जहां MTLα उपभेदों दोनों विषमयएक/MTL और αएक कोशिकाओं, निष्कर्षों के समान के संबंध में कम MTL थे murine संक्रमण मॉडल के भीतर26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

Candida प्रजातियों आम कवक commensals है मनुष्यों की त्वचा बस्तियां, श्लैष्मिक सतहों, और जठरांत्र संबंधी मार्ग । कुछ शर्तों के तहत, Candida उनके प्राकृतिक श्लैष्मिक संक्रमण दुर्बल में जिसके परिणामस्वरूप niches विकसित कर सकते है और साथ ही जीवन की धमकी प्रणालीगत संक्रमण है, जो उनके संबद्ध उच्च मृत्यु दर के कारण जांच का एक प्रमुख ध्यान केंद्रित कर रहे हैं । प्रसार संक्रमण के पशु मॉडल रोग प्रगति का अध्ययन और Candida pathogenicity की विशेषताओं विदारक के लिए मौजूद हैं । इनमें से, गैलेरिया mellonella waxworm संक्रमण मॉडल प्रणालीगत डाह के उच्च प्रवाह की जांच के लिए एक लागत प्रभावी प्रयोगात्मक उपकरण प्रदान करता है । pathogenicity को समझने के लिए जी mellonella में कई अन्य बैक्टीरियल और eukaryotic संक्रामक एजेंटों का प्रभावी अध्ययन किया गया है, जिससे यह एक व्यापक रूप से स्वीकृत मॉडल प्रणाली है । फिर भी, जी mellonella संक्रमित करने के लिए इस्तेमाल किया विधि में भिंनता phenotypic परिणामों को बदल सकते है और परिणामों की व्याख्या पेचीदा । यहां, हम waxworm मॉडल के लाभों और कमियों रूपरेखा के लिए प्रणालीगत Candida रोगजनन और विस्तार के लिए एक दृष्टिकोण reproducibility में सुधार का अध्ययन । हमारे परिणाम जी mellonella में मृत्यु दर कैनेटीक्स की सीमा पर प्रकाश डाला और चर जो इन कैनेटीक्स मिलाना कर सकते है वर्णन । अंततः, इस विधि एक नैतिक, तेजी से, और लागत प्रभावी दृष्टिकोण के रूप में खड़ा है कैंडिडिआसिस का एक मॉडल में डाह अध्ययन ।

यहां, हम जी mellonella waxworms के उपयोग के लिए एक reproducible विधि प्रदर्शन C. albicansका उपयोग कर संक्रमण के एक प्रसार किया कैंडिडिआसिस मॉडल की जांच । संक्रमण के लिए लार्वा का उपयुक्त भंडारण, रखरखाव और चयन, ?...

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The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

गैलेरिया mellonella का प्रसार कैंडिडिआसिस के लिए एक invertebrate मॉडल के रूप में कार्य करता है । यहां, हम विस्तार संक्रमण प्रोटोकॉल और मॉडल के प्रभाव के लिए डेटा का समर्थन प्रदान करते हैं ।

प्रसार कैंडिडिआसिस के लिए गैलेरिया mellonella Waxworm संक्रमण मॉडल

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

इस विधि तनाव उग्रता और इन प्रक्रियाओं के लिए विशिष्ट जीन के योगदान के बारे में कैंडिडा क्षेत्र में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब में मदद कर सकते हैं । इस तकनीक के मुख्य फायदे यह हैं कि यह जानवरों के उपयोग के बारे में चिंताओं से बचा जाता है, मजबूत, तेज, सस्ता है, और प्रति प्रयोग जानवरों की उच्च संख्या प्रदान करता है। आम तौर पर, इस विधि के लिए नए व्यक्ति थोड़ा संघर्ष करेंगे क्योंकि उन्हें प्रयोग की शुरुआत से पहले कीड़े की व्यवहार्यता का आकलन करने में कुछ कठिनाई होगी या उनके पास कीड़े के असंगत इंजेक्शन के साथ कुछ मुद्दे हो सकते हैं।थोक विक्रेताओं और आपूर्तिकर्ताओं से लार्वा ऑर्डर करें जो लार्वा को हार्मोन, एंटीबायोटिक्स या अन्य उपचार पेश नहीं करते हैं और जो जीवित नमूनों को जहाज और वितरित करने में सक्षम हैं। लार्वा आने पर, लार्वा के स्वास्थ्य और व्यवहार्यता की पुष्टि करने के लिए प्रत्येक कंटेनर की जांच करें। स्वस्थ लार्वा बिस्तर के नीचे पूरी तरह से जलमग्न हो जाएगा, चलती है, और शरीर के साथ काले निशान या मलिनकिरण युक्त कुछ लार्वा के साथ एक पीला, हल्का टैन रंगना रखते हैं।लार्वा को दो सप्ताह तक परिवेश के तापमान पर हवादार स्थान में अपने कंटेनरों में संग्रहित किया जा सकता है। गैलेरिया मेलोनेला संक्रमण के लिए खमीर कोशिकाओं को तैयार करने के लिए, सी एल्बिकान उपभेदों को मध्यम गति और 30 डिग्री सेल्सियस पर घूर्णन ड्रम पर मानक संस्कृति ट्यूबों में नए खमीर-पेप्टोन-डेक्सट्रोस शोरबा प्रति तनाव के तीन मिलीलीटर में रात भर इंजेक्ट किया जाना है। अगली सुबह, अपकेंद्रण द्वारा कोशिकाओं को इकट्ठा करें, और ताजा पीबीएस प्रतिकेंद्री के पांच मिलीलीटर में तीन बार खमीर धोएं।अंतिम धोने के बाद, ताजा पीबीएस के एक मिलीलीटर में कोशिकाओं को फिर से स्थापित करें और खमीर को माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें। क्रमिक रूप से अतिरिक्त पीबीएस में कोशिकाओं को एक-से-100, वन-टू-1, 000, और एक-से-100, 000 सांद्रता में पतला करें, और कोशिकाओं को एक-से-100 और एक-से-1, 000 कमजोरुओं से गिनती करें। कोशिकाओं को एक नई माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में पीबीएस एकाग्रता के मिलीलीटर प्रति सातवीं कोशिकाओं के लिए 2.5 गुना 10 में समायोजित करें, और प्रत्येक संस्कृति के लिए संक्रमण में उपयोग किए जाने वाले एक खमीर-पेप्टोन-डेक्सट्रोस एगर प्लेट पर 100 कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों को प्राप्त करने के लिए एक-से-100, 000 कमजोर पड़ने की उचित मात्रा को चढ़ाना द्वारा संक्रामक खुराक की सटीकता की पुष्टि करें।कैंडिडा कोशिकाओं के साथ लार्वा को संक्रमित करने के लिए, सबसे पहले एक खाली, 100-बाय-15 सेंटीमीटर बाँझ पेट्री डिश प्रति जैविक दोहराने में मोम कीड़ा बिस्तर की एक छोटी राशि फैलाएं, और 70% इथेनॉल के 10 माइक्रोलीटर के साथ तीन बार और पीबीएस प्रति वॉश के 10 माइक्रोलीटर के साथ तीन बार 10-गेज सुई से लैस 10 माइक्रोलीटर सिरिंज को निष्फल करें। इसके बाद, सी एल्बिकान के टीका कमजोर पड़ने को भंवर, और सिरिंज में कोशिकाओं के 10 माइक्रोलीटर लोड करें। G.mellonella लार्वा के एक कंटेनर को खोलें, और लार्वा को उजागर करने के लिए बिस्तर को ध्यान से चालू करने के लिए एक उंगली का उपयोग करें, एक समान आकार के पीले, टैन लार्वा का चयन करें जो शरीर पर काले पिगमेंटेशन की कमी के साथ अच्छे स्वास्थ्य में हैं, मध्यम और सूचकांक उंगलियों और अंगूठे का उपयोग करके एक लार्वा को पेंसिल को समझने के समान तरीके से उठाते हैं।लार्वा को अपनी पीठ पर रोल करें ताकि पैर ऊपर आ रहे हों, उंगलियों और अंगूठे के बीच शरीर की पूरी लंबाई पकड़े ताकि लार्वा इंजेक्शन से कर्ल या दूर खींचने में असमर्थ हो। दूसरे हाथ से, सिरिंज को घुमाएं ताकि सुई बेवेल का सामना करना पड़ रहा हो, और धीरे-धीरे सबसे ऊपर बाएं पैर के साथ जंक्शन पर शरीर में बेवेल की पूरी लंबाई डालें, यह सुनिश्चित करते हुए कि सुई शरीर में प्रवेश करती है और बस लार्वा के शरीर को अंदर की ओर धक्का नहीं देती है। इस प्रक्रिया में सबसे महत्वपूर्ण कदम वैक्सवार्म का इंजेक्शन इस तरह से है कि लार्वा शरीर को नुकसान कम से कम हो और पूर्ण बोलस टीका लगाया जाता है।इसके बाद कैंडिडा इनोकुलम के पूरे 10 माइक्रोलीटर इंजेक्ट करें और सुई निकालें। टीका के बाद प्रत्येक 100-बाय-15 मिलीमीटर पेट्री डिश में एक ही कैंडिडा संस्कृति से इंजेक्ट किए गए 10 लार्वा तक सह-घर, और आठ दिनों के लिए लार्वा को 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। मौत की निगरानी के लिए हर 24 घंटे में व्यंजनों की जांच करें।मृत्यु दर का आकलन शुरू में अंधेरे पिगमेंटेशन, काले पैच या शरीर के गठन और आंदोलन की कमी से किया जा सकता है। मृत्यु की पुष्टि करने के लिए, चिमटी का उपयोग धीरे से अपनी पीठ पर मरणासन्न लार्वा रोल और हल्के से चिमटी के साथ लार्वा के नीचे के किनारे प्रहार । पतंगों में प्यूपेट करना शुरू करने वाले लार्वा को विश्लेषण में शामिल किया जा सकता है लेकिन यदि वे मोल्ट करना शुरू करते हैं तो उन्हें हटा दिया जाना चाहिए।जी.मेललोनेला मौत के काइनेटिक्स में कोई महत्वपूर्ण अंतर लार्वा संक्रमित शून्य या आगमन के 10 दिनों के बीच मौजूद है। बीमारी के लक्षण दोनों उम्र से लार्वा में उत्पन्न होते हैं जो संक्रमण का शिकार होते हैं, मलिनकिरण से शुरू होते हैं जो गतिशीलता की कुल हानि और अंततः मृत्यु से पहले काले पैच को रास्ता देता है। C.albicans के साथ संक्रमण मलिनकिरण और रुग्णता की इस प्रक्रिया को गति देता है, लेकिन असंक्रमित या पीबीएस-इंजेक्शन लार्वा की तुलना में मौत के लिए अग्रणी फेनोटाइपिक मार्कर के झरना को काफी बदल नहीं देता है।विशेष रूप से, किसी भी परीक्षण किए गए चिकित्सकीय रूप से अलग-थलग सी एल्बिकान उपभेदों से संभोग प्रकार जैसे होमो-या हेट्रोज़ीगोट्स के साथ जी.मेलोनेला का संक्रमण पीबीएस-इंजेक्शन वाले जानवरों की तुलना में मृत्यु दर की उच्च दर पैदा करता है, जबकि प्रोटोट्रोफिक डेरिवेटिव उपभेदों के इंजेक्शन इस मॉडल में घातक प्रभाव को कम करते हैं। स्वस्थ लार्वा का चयन करना और लार्वा को संभालने में कोमल होना याद रखना महत्वपूर्ण है। यदि कई उपभेदों टीका लगाया जाएगा, तो ध्यान रखें कि कैंडिडा कोशिकाओं को बहुत लंबे समय तक पीबीएस में न बैठने दें।इस प्रक्रिया के बाद, लार्वा के भीतर इम्यूनोलॉजिकल प्रोफाइलिंग और कैंडिडा स्थानीयकरण जैसे अन्य तरीकों को संक्रमण के दौरान मेजबान और फंगल रोगजनक के बीच बातचीत के बारे में अतिरिक्त सवालों के जवाब देने के लिए किया जा सकता है। इसके विकास के बाद, इस तकनीक ने शोधकर्ताओं के लिए उच्च थ्रूपुट प्रारूपों का उपयोग करके कैंडिडा रोगजनकों का पता लगाने का मार्ग प्रशस्त किया। यह न भूलें कि कैंडिडा एल्बिकान के साथ काम करने के लिए देखभाल की आवश्यकता होती है और इस प्रक्रिया को निष्पादित करते समय व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरणों के पहनने सहित मानक सावधानियां हमेशा ली जानी चाहिए।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

बैक्टीरियल आसंजन के अध्ययन में कतरें तनाव का परिचय

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Zebrafish लार्वा में गैर इनवेसिव कैंडिडिआसिस फैलाया इमेजिंग

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

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कीट<em&gt; Galleria मेल्लोनेल्ला</em&gt; एक शक्तिशाली संक्रमण बैक्टीरियल रोगजनन की जांच के लिए मॉडल के रूप में

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

का प्रयोग करें<em&gt; गैलेरिया मेल्लोनेल्ला</em&gt; एक मॉडल जीव के रूप में अध्ययन करने के लिए<em&gt; लीजोनेला pneumophila</em&gt; संक्रमण

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

द्वारा उत्पादित उपकला नुकसान का विश्लेषण<em&gt; एटामोइबा हिस्टोलिटिका</em&gt; संक्रमण

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Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Swimbladder इंजेक्शन द्वारा लार्वा zebrafish में mucosal कैंडिडिआसिस मॉडलिंग

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

प्रतिदीप्ति आधारित neuraminidase निषेध परख विषाणु-विरोधी की neuraminidase अवरोध करनेवाला वर्ग के लिए इन्फ्लूएंजा वायरस की संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

एक गैलेरिया शलभ मौखिक प्रशासन मॉडल के अध्ययन के लिए commensal प्रेरित जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

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माइकोबैक्टीरियम तपेदिक परिसर का अध्ययन करने के लिए एक संक्रमण मॉडल के रूप में इनवर्टेब्रेट गैलेरिया मेलोनेला का उपयोग

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

एक स्यूडोमोनास एरुगिनोसा संक्रमण मॉडल के वास्तविक समय के आकलन के लिए उपकरण

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...