Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
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著者は、本研究で使用するためのハチミツガの取得でパメラ ワシントンとリア ・ アンダーソンの支援を認めると思います。

記載されているすべてのメソッドは無脊椎動物のホストの使用に依存し、機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) の承認は必要ありません。
1ハチミツガWaxworm 幼虫。
<ol><li>卸売業者とサプライヤー ホルモン、抗生物質、または幼虫に対する他の治療法を取り上げないでください、生きている標本は、出荷することができているから幼虫を注文します。<ol>
<li>必ず?...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. 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J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

G. mellonella waxworm モデルは、 c. アルビカンスの病原性の迅速かつ再現性の高い分析のための効果的なツールとして立っています。この詳細なプロトコルは、幼虫のバッチ間で同じサイトに定義されている伝染性の線量の一貫性のある配信に依存します。伝染性の線量は、初期の到着と受領日から 10 日間幼虫の使用生産同様の結果に対しG. mellonellaの死亡率に深い衝撃を持っ...

カンジダ種は日和見病原体として浮上することができる共通の人間によって深刻な免疫不全と dysbiotic 患者。多くのカンジダ種は、病気を引き起こすことができます、 c. アルビカンス播種性カンジダ症1,2の最も一般的な原因です。C. アルビカンス以前制限ホスト壁のいずれかの直接浸透や施術部位と他3体の違反で導入を介して血流にアクセスするから全身疾患の結果します。カンジダは、粘い、バイオ フィルム形成、免疫細胞の脱税とエスケープ、および清掃4鉄を含むホスト内で全身の病気を引き起こす病原性プロセスの範囲を利用します。個々 の病原性のメカニズムを調査する生体外でのアプローチが存在しますが、動物モデルが病気結果5,6の全体を調査するための最良の選択肢を提供し続けます。前の研究は有望な体外体内7,8の再現に失敗した病原性の調査の多くのインスタンスを詳しく説明します。したがって、モデル動物病原性を評価する必要があります体内。ほとんどの疾患モデルは、自然共生9としてマウス システムを植民地化するC. albicans無力にもかかわらず人間の感染症のためのサロゲートとして機能するマウスに依存します。播種性カンジダ症の無脊椎動物モデル線虫線虫など、フルーツ ・ フライがショウジョウバエと waxwormハチミツガ、根本的な違いについての懸念基本的な生理学、曝露の経路とホストの体温、幅広く受け入れられている10、11.を妨げています。
最近、 g. mellonella waxworm 感染モデルはモデル病原性細菌、真菌病原体12,13,14の広い範囲に採用されています。このモデルの利点の比較的低コスト、増加のスループット、使いやすさでは、削減とマウスのモデルと比較して動物の善行に関する倫理的な問題です。研究者は、複数の変数、強い信頼区間より迅速な実験や動物のプロトコルのバイパスをテストする能力の増大につながります。G. mellonellaが臨床分離株11,15 全体バイオ フィルム形成、粘いと遺伝子制御に必要な遺伝子の摂動に続くc. アルビカンスの病原性を迅速に評価するためのプラットフォームとして提供しています ,16。最近の研究は、抗真菌性の薬の活動とそれ以外に挑戦し、時間のかかるである生体内で設定の下の抵抗の薬物動態を評価するためにg. mellonellaを用いた調査を取り入れています。17,18。G. mellonellaにおけるc. アルビカンスの病原性の研究が実験と異なる病原性表現型を作り出す研究グループ間の一貫性のないプロトコル内のバリエーションの伝えられる高レベルによって複雑になっているまだ、マウスおよび waxworms11,13,19,20,21。ここでは、病原性の実験により, C. albicans感染症,増加再現性を標準化しマウスにおける病原性の前述の研究との整合性を示すG. mellonellaプロトコルをまとめましたモデル。
以前の研究は、嵌合タイプのような染色体 5 (MTL) 軌跡C. albicansが細胞の識別と合う酵母や他の子嚢菌の菌類の22と同様の能力を調節することを示した。C. アルビカンス分離株の大半中央構造線 中央構造線とα 対立遺伝子(/αMTL)のそれぞれの 1 つをエンコードMTL遺伝子座でヘテロ接合体は、したがって滅菌15,23,24. loh または突然変異の損失MTL対立遺伝子の一つの喪失はホモMTL、または滅菌 'ホワイト' 状態から表現型スイッチを受けることができる中央構造線α 系統につながる、有能な '不透明' 状態25を交配します。前作はMTLヘテロ接合性消失また別の系統の背景26で全身感染症マウスモデルにおける病原性の減少することを強調しています。ここでは、 g. mellonellaの病原性にMTLをヘテロ接合性の貢献を描写する遺伝的に類似の実験セットを使用して播種性カンジダ症のg. mellonellaモデルを詳しく説明します。MTLα 系統だった/α に中央構造線と中央構造線の調査結果と同様の細胞の両方に関してより少なく劇毒性、 c. アルビカンスの病原性をMTL構成に影響を紹介します。内マウス感染モデル26。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

カンジダ菌は、皮膚、粘膜の表面や消化管を植民地化する人間の共通の真菌によってです。特定の条件下でカンジダも生命脅迫的全身感染症として、その関連する高死亡率の原因の調査の主要な焦点である粘膜感染症の衰弱の結果自然なニッチにはびこることができます。播種性感染症の動物モデルは、病気の進行を勉強してカンジダ病原性の特性を解剖します。これらのハチミツガwaxworm 感染モデルは全身の毒性の高スループットの調査のためコスト効果の高い実験的なツールを提供します。多く他の細菌と真核生物の感染エージェントは、広く受け入れられているモデル システムg. mellonella 、病原性を理解するために効果的に研究されている.まだ、 g. mellonellaに感染するために使用方法の変化は、表現型の結果を変更し、結果の解釈を複雑にできます。ここでは、利点と欠点の waxworm モデルを全身カンジダ発症機序を研究し、再現性を向上させる方法の詳細をまとめました。我々 の結果はg. mellonellaの死亡率を反応速度論の範囲を強調表示し、これらの速度を調節することができる変数を記述します。最終的には、このメソッドは、播種性カンジダ症モデルにおける病原性を研究する倫理的な迅速かつコスト効果の高い方法として立っています。

C. アルビカンスを用いた感染症の播種性カンジダ症モデルを提案するG. mellonella waxworms の使用のための再現可能な方法を示します。適切な保管、保守、および感染幼虫の選択は、 G. mellonella死亡率 (図 1A) の再現性を保証する重要なコンポーネントです。アクティブで健康的な幼虫ライト イエロー/タンの色、この?...

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The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

ハチミツガは播種性カンジダ症の無脊椎動物モデルとして機能します。ここで、感染は詳細プロトコルし、モデルの有効性のサポート データを提供します。

播種性カンジダ症のハチミツガWaxworm 感染症モデル

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

この方法は、株毒性とこれらのプロセスに対する特定の遺伝子の寄与に関するCandida分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、動物の使用に関する懸念を避け、堅牢で、速く、安価であり、実験ごとに多くの動物を提供することです。一般的に言えば、この方法に新しい個人は、実験の開始前にワームの生存率を評価するのが難しいか、ワームの一貫性のない注入に問題がある可能性があるため、少し苦労する可能性があります。ホルモン、抗生物質、その他の治療法を幼虫に導入せず、生きた標本を出荷して配達できる卸売業者やサプライヤーから幼虫を注文してください。幼虫が到着したら、各容器を確認して、幼虫の健康状態と生存率を確認します。健康な幼虫は寝具の下に完全に沈み、動き、体に沿って黒い跡や変色を含む幼虫が少ない黄色の薄い日焼け色を持っています。幼虫は、最大2週間の周囲温度の換気された空間で容器に保管することができます。ガレリアメロネラ感染のために酵母細胞を調製するために、C.albicans株を中速および摂氏30度の回転ドラム上の標準的な培養管の1株当たり3ミリリットルで一晩注入する増殖させる。翌朝、遠心分離により細胞を採取し、1回の新鮮なPBS遠心分離を5ミリリットルで酵母を3回洗浄する。最後の洗浄後、新鮮なPBSの1ミリリットルで細胞を再懸濁し、酵母をマイクロ遠心分離チューブに移します。1対100、1対1、000、および1対100、000濃度で細胞を追加のPBSで連続して希釈し、1対100および1対1、000希釈から細胞を数える。新しいマイクロ遠心分離管中のPBS濃度の1ミリリットル当たりの7番目の細胞に細胞を2.5倍に調整し、各培養物に使用される1つの酵母ペプトンデキストロースアガープレートで100個のコロニー形成ユニットを達成するために、1〜100,000希釈の適切な体積をめっきすることによって感染量の精度を確認する。幼虫をカンジダ細胞に感染させるために、まず少量のワックスワーム寝具を生物学的複製ごとに1つの空の100〜15センチメートルの無菌ペトリ皿に広げ、10マイクロリットルの注射針を3回26ゲージの注射針を3回殺菌し、10マイクロリットルのエタノールを10マイクロリットルで3回殺菌する。次に、C.albicansの接種希釈を渦液、そして10マイクロリットルの細胞をシリンジにロードする。G.mellonella幼虫の容器を1つ開き、指を使って慎重に寝具をひっくり返して幼虫を発見し、中指と人差し指と親指を使って鉛筆をつかむのと同じように1つの幼虫を拾い上げ、体に黒い色素沈着の欠如を伴う健康な同じ大きさの黄色い日焼けした幼虫を選択します。幼虫が背中に転がして脚を上に向け、体の全長を指と親指の間に保持して、幼虫がカールしたり、注射から引き離したりできないようにします。一方、針のベベルが上向きになるように注射器を回転させ、後方の左脚との接合部でベベルの全長をゆっくりと体に挿入し、針が体に浸透し、単に幼虫の体を内側に押し込まないようにします。この手順で最も重要なステップは、幼虫の体への損傷が最小限に抑え、完全なボーラスが接種されるような方法でワックスワームの注射です。その後、カンディダ接種の完全な10マイクロリットルを注入し、針を抽出します。接種後の100%15ミリメートルのペトリ皿に同じカンジダ文化から注入された最大10匹の幼虫を共同収容し、8日間摂氏37度で幼虫をインキュベートします。24時間ごとに料理をチェックして死を監視してください。死亡率は、最初は暗い色素沈着、黒い斑点または身体の形成、および動きの欠如によって評価することができる。死亡率を確認するには、ピンセットを使用してモリバンドの幼虫を背中にそっと転がし、幼虫の下側をピンセットで軽く突きます。蛾に子犬を開始する幼虫は、分析に含めることができますが、彼らは溶融し始める場合は除去する必要があります.到着後0日または10日後に感染した幼虫の間には、G.メロネラ死の運動に有意な差は存在しない。病気の特徴的な徴候は、運動性の完全な喪失と最終的には死の前に黒い斑点に道を与える変色から始まり、感染に屈する両方の年齢から幼虫で生じる。C.albicansの感染は、変色と罹患率のこのプロセスをスピードアップしますが、感染していないまたはPBS注射された幼虫と比較して、死につながる表述語マーカーのカスケードを有意に変化させるものではありません。特に、検査された臨床的に単離されたC.albicans株のいずれかから交配型のようなホモまたはヘテロ接合性を有するG.mellllellaの感染は、PBS注入動物と比較して高い死亡率を生み出し、原始性誘導体株の注射はこのモデルの致死的効果を減衰させる。健康な幼虫を選び、幼虫の扱いに優しくすることが重要です。複数の株が接種される場合は、カンジダ細胞があまりにも長い間PBSに座らせないように注意してください。この手順に従って、免疫学的プロファイリングや幼虫内のカンジダの局在化のような他の方法を実行して、感染時の宿主病原体と真菌病原体との相互作用に関する追加の質問に答えることができます。その開発後、この技術は、研究者がハイスループット形式を使用してカンディダ病原発病を探求する道を開きました。Candida albicansで作業するには注意が必要であり、個人保護機器の摩耗を含む標準的な予防措置は、この手順を実行する間、常に取られるべきであることを忘れないでください。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

細菌付着の研究ではせん断応力を導入する

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

ゼブラフィッシュ幼生における播種性カンジダ症の非侵襲的イメージング

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

昆虫<em&gt;ハチノスツヅリガ</em&gt;細菌性病因を調査するための強力な感染モデルとして

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

使用<em&gt;ハチノスツヅリガ</em&gt;モデル生物として研究する<em&gt;レジオネラ·ニューモフィラ</em&gt;感染症

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

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プロデュース上皮損傷の解析<em&gt;赤痢アメーバ</em&gt;感染症

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

浮袋注入による幼虫ゼブラフィッシュにおける粘膜カンジダ症のモデル化

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

蛍光ベースのノイラミニダーゼ阻害アッセイ抗ウイルスのノイラミニダーゼ阻害剤クラスにインフルエンザウイルスの感受性を評価します

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

ハチミツガ口腔管理モデル Study Commensal-Induced 自然免疫応答

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

結核複合体を研究するための感染モデルとしての無脊椎動物ガレリアメロネラの使用

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

緑膿菌感染モデルのリアルタイム評価ツール

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...