Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

Forfatterne ønsker å erkjenne hjelp av Pamela Washington og Leah Anderson å skaffe Galleria mellonella for bruk i denne studien.

Alle metodene beskrevet stole på bruk av virvelløse verter og krever ikke at institusjonell Animal Care og bruke Committee (IACUC) godkjenning.
1. galleria mellonella Waxworm larver
<ol><li>Bestill larver fra grossister og leverandører som ikke innføre hormoner, antibiotika eller andre behandlinger til larvene og som er i stand til å sende og levere levende prakteksemplarer.<ol>
<li>Husk å kjøpe alle larver fra samme leverandør i løpet av eksperimentering. Vær forsiktig n?...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+candidiasis.">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li><li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+(Sit1p/Arn1p)+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion.">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li><li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade.">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li><li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach.">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li><li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

G. mellonella waxworm modellen står som et effektivt verktøy for rask og reproduserbar analyse av C. albicans virulens. Denne detaljerte protokollen er avhengig av konsekvent levering av en definert smittsomme dose til det samme området over en gruppe med larver. Smittsomme dose har en betydelig innflytelse på G. mellonella dødelighet mens bruk av Larvene mellom første ankomst og ti dager etter mottak produsert lignende resultater. Tap av det C. albicansMTLen all...

Candida arter er vanlig menneskelige commensals som kan fremstår som opportunistisk patogener i alvorlig nedsatt immunforsvar og dysbiotic pasienter. Selv om mange Candida arter kan forårsake sykdom, er C. albicans den mest utbredte årsaken til spres candidiasis1,2. Systemisk sykdom skyldes C. albicans tilgang til blodet gjennom enten direkte gjennomtrengning av tidligere restriktive vert barrierer eller introduksjon kirurgiske områder og andre brudd på kroppen3. Candida arter benytte et spekter av patogene prosesser til systemisk sykdom i verten inkludert filamentation, biofilm formasjon, immun celle evasion og flukt og jern scavenging4. In vitro tilnærminger eksisterer for å undersøke personlige patogene mekanismer, men dyremodeller fortsette å tilby det beste alternativet å undersøke hele sykdom utfallet5,6. Tidligere forskning har detaljert mange forekomster av lovende i vitro undersøkelser av virulens unnlater å reprodusere i vivo7,8. Dermed dyremodeller er fortsatt nødvendig for å vurdere virulens i vivo. De fleste sykdom modeller er avhengige av mus som et surrogat for menneskelige infeksjoner tross C. albicans manglende evne til å kolonisere naturlig murine systemer som commensal9. Virvelløse modeller av spres candidiasis inkludere Rundormer Caenorhabditis elegans, frukt fly Drosophila melanogaster, og waxworm Galleria mellonella, selv om bekymringer om grunnleggende forskjeller i grunnleggende anatomi har vert kroppen temperaturer og eksponeringsmåter hemmet deres bred aksept10,11.
Mest nylig er G. mellonella waxworm infeksjon modellen vedtatt å modell virusets av en rekke bakterier og sopp patogener12,13,14. Fordelene med denne modellen inkluderer dens relativt lav pris, økt gjennomstrømning, brukervennlighet og redusert Etiske bekymringene om dyr godgjørenhet sammenlignet med murine modeller. For forskere gir dette økt evne til å teste flere variabler, sterkere konfidensintervaller, raskere eksperimentering og omkjøringsvei dyr protokoller. G. mellonella har fungert som en plattform for å raskt vurdere C. albicans virulens etter forstyrrelsene av gener kreves for biofilm formasjon, filamentation og gene regulering over kliniske isolater11,15 ,16. Nyere studier har innarbeidet undersøkelse av soppdrepende effekt bruke G. mellonella å vurdere farmakokinetikken av narkotika aktivitet og motstand under i vivo innstillinger som ellers utfordrende og tidkrevende 17,18. Ennå, studier av C. albicans virulens i G. mellonella har blitt komplisert med angivelig høye nivåer av variasjon i eksperimenter og inkonsekvent protokoller flerfaglig som produserer ulike virulens fenotyper mellom mus og waxworms11,13,19,20,21. Her skissere vi en G. mellonella protokoll for å standardisere C. albicans infeksjoner, øke reproduserbarhet virulens eksperimenter og demonstrere samsvar med beskrevet tidligere studier av virulens i Trouble modeller.
Tidligere studier viste at C. albicans parring type-lignende (MTL) locus på kromosom 5 regulerer celle identitet og mating kompetanse Saccharomyces cerevisiae og andre Ascomycete sopp22. Flertallet av C. albicans isolerer er heterozygote på MTL locus, koding av hver av de MTLen og MTLα alleler(MTLi /α), og er derfor bakteriefri15, 23 , 24. tapet av en av MTL alleler gjennom tap av heterozygosity (LOH) eller mutasjon fører til homozygous MTLen eller MTLα stammer som kan gjennomgå en fenotypiske bryter fra sterilt "hvit" staten til den parring kompetent "ugjennomsiktig" state25. Tidligere arbeid har understreket at tap av MTL heterozygosity også reduserer virulens i murine modeller av systemisk smitte over forskjellige belastning bakgrunner26. Her detalj vi G. mellonella modell for spres candidiasis med en genetisk like eksperimentelle for å skildre bidrag av MTL heterozygosity til virulens i G. mellonella. Vi viser at MTL konfigurasjon påvirket C. albicans virusets, hvor MTLα stammer var mindre virulente med hensyn til både MTLi /αog MTLen celler, ligner på funn modell26i murine infeksjon.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

Candida arter er vanlig sopp commensals mennesker kolonisere huden, mucosal overflater, og mage-tarmkanalen. Under visse forhold kan Candida overgrow deres naturlige nisjene som resulterer i ødeleggende mucosal infeksjoner som vel som livstruende systemisk infeksjoner, som er av undersøkelse på grunn av deres tilknyttede høy dødelighet. Dyr modeller av spres infeksjonen eksisterer for å studere sykdomsprogresjon og dissekere karakteristikkene av Candida virusets. Av disse gir Galleria mellonella waxworm infeksjon modellen en kostnadseffektiv eksperimentelle verktøyet for høy gjennomstrømming undersøkelser av systemisk virulens. Mange andre bakterielle og eukaryotic smittsomme stoffer har vært effektivt studerte G. mellonella å forstå virusets, gjør det en allment akseptert modellsystem. Likevel, variasjon i måten du infisere G. mellonella kan endre fenotypiske resultater og komplisere tolkning av resultatene. Her skissere vi fordelene og ulempene av waxworm modellen å studere systemisk Candida patogenesen og detalj en tilnærming for å forbedre reproduserbarhet. Våre resultater markere utvalget av dødelighet kinetics i G. mellonella og beskriver variabler som kan modulerer disse kinetics. Til slutt, denne metoden står som en etisk, rask og kostnadseffektiv tilnærming til å studere virulens i en modell av spres candidiasis.

Her viser vi en reproduserbar metode for bruk av G. mellonella waxworms å undersøke en spres candidiasis modell av infeksjon med C. albicans. Den oppbevaring, vedlikehold og utvalg av Larvene for infeksjon er kritisk komponent i opprettholde reproduserbarhet i G. mellonella dødelighet (figur 1A). Sunn larver som er aktive, har en lys gul/tan farge, og manglende svarte flekker på kroppen skal brukes for dette sys...

Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Galleria mellonella fungerer som en virvelløse modell for spres candidiasis. Her vi detalj infeksjon protokollen og gi støttedata for modellens effektivitet.

Galleria mellonella Waxworm infeksjon modell for spres Candidiasis

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål i Candida-feltet om belastnings virulens og bidrag fra bestemte gener til disse prosessene. De viktigste fordelene med denne teknikken er at den unngår bekymringer om dyrebruk, er robust, rask, billig og gir høyt antall dyr per eksperiment. Generelt sett, personer som er nye til denne metoden vil trolig slite litt fordi de vil ha noen problemer med å vurdere orm levedyktighet før begynnelsen av eksperimentet, eller de kan ha noen problemer med inkonsekvent injeksjon av ormene.Bestill larver fra grossister og leverandører som ikke introduserer hormoner, antibiotika eller andre behandlinger til larver og som er i stand til å sende og levere levende prøver. Når larvene kommer, sjekk hver beholder for å bekrefte larvenes helse og levedyktighet. Friske larver vil bli helt nedsenket under sengetøyet, beveger seg og har en gul, lys brunfarge med få larver som inneholder svarte merker eller misfarging langs kroppen.Larvene kan lagres i sine beholdere i et ventilert rom ved omgivelsestemperatur i opptil to uker. For å forberede gjærcellene for Galleria mellonellainfeksjon, vokse C.albicans stammer som skal injiseres over natten i tre milliliter av fersk gjær-pepton-dekstrose kjøttkraft per belastning i standard kulturrør på en roterende trommel med middels hastighet og 30 grader Celsius. Neste morgen, samle cellene ved sentrifugering, og vaske gjær tre ganger i fem milliliter av fersk PBS per sentrifugering.Etter den siste vasken, resuspend celler i en milliliter frisk PBS og overføre gjær til en mikrocentrifuge tube. Fortynne cellene i ekstra PBS ved en-til-100, en-til-1, 000 og en-til-100 000 konsentrasjoner, og telle cellene fra en-til-100 og en-til-1, 000 fortynninger. Juster cellene til en 2,5 ganger 10 til de syvende cellene per milliliter PBS-konsentrasjon i et nytt mikrocentrifugerør, og bekreft nøyaktigheten av den smittsomme dosen ved å plating riktig volum av en-til-100,000 fortynning for å oppnå 100 kolonidannende enheter på en gjær-pepton-dekstrose agar plate for hver kultur som skal brukes i infeksjon.For å infisere larver med Candida-cellene, spred først en liten mengde voksorm sengetøy i en tom, 100-by-15 centimeter steril petriskål per biologisk replikering, og steriliser en 10-mikroliters sprøyte utstyrt med en 26-gauge nål tre ganger med 10 mikroliter på 70% etanol og tre ganger med 10 mikroliter PBS per vask. Deretter virvler inokulasjonsfortynningen av C.albicans, og laster 10 mikroliter celler inn i sprøyten. Åpne en beholder med G.mellonella larver, og bruk en finger til å forsiktig snu sengetøyet for å avdekke larver, velge gule, brune larver av samme størrelse som er i god helse med mangel på svart pigmentering på kroppene, ved hjelp av mellom- og pekefingrene og tommelen for å plukke opp en larve på en måte som ligner på å gripe en blyant.Rull larven på ryggen slik at beina vender opp, og holder hele lengden på kroppen mellom fingrene og tommelen slik at larven ikke klarer å krølle eller trekke seg bort fra injeksjonen. Med den annen side roterer du sprøyten slik at nålekanten vender opp, og setter sakte hele lengden på skråkanten inn i kroppen i krysset med det bakre venstre benet, slik at nålen trenger inn i kroppen og ikke bare skyver larvens kropp innover. Det mest kritiske trinnet i denne prosedyren er injeksjon av voksormen på en slik måte at skade på larvalkroppen minimeres og hele bolusen er inokulert.Injiser deretter hele 10 mikroliter candida inokuleum, og trekk ut nålen. Co-house opptil 10 larver injisert fra samme Candida kultur i hver 100-by-15-millimeter Petri skål etter inokulasjon, og inkuber larven på 37 grader Celsius i åtte dager. Sjekk oppvasken hver 24.Dødeligheten kan i utgangspunktet vurderes ved formørk pigmentering, dannelse av svarte flekker eller kropper, og mangel på bevegelse. For å bekrefte dødeligheten, bruk pinsett til å forsiktig rulle moribund larver på ryggen og lett stikke larvens underside med pinsettene. Larver som begynner å pupere i møll kan inkluderes i analysen, men bør fjernes hvis de begynner å smelte.Ingen signifikant forskjell i kinetikken til G.mellonella død eksisterer mellom larver smittet null eller 10 dager etter ankomst. De karakteristiske tegn på sykdom oppstår i larver fra begge aldre som bukker under for infeksjonen, som begynner med misfarging som gir vei til svarte flekker før et totalt tap av motilitet og til slutt død. Infeksjon med C.albicans fremskynder denne prosessen med misfarging og sykelighet, men endrer ikke signifikant kaskade av fenotypiske markører som fører til døden sammenlignet med uinfiserte eller PBS-injiserte larver.Spesielt produserer infeksjonen av G.mellonella med parring type-lignende homo-eller heterozygotes fra noen av de testede klinisk isolerte C.albicans stammer høye dødelighetsrater sammenlignet med PBS-injiserte dyr, mens injeksjoner av prototrofiske derivatstammer demper den dødelige effekten i denne modellen. Det er viktig å huske å velge sunne larver og å være forsiktig med å håndtere larver. Hvis flere stammer vil bli vaksinert, pass på å ikke la Candida-cellene sitte i PBS for lenge.Etter denne prosedyren kan andre metoder som immunologisk profilering og Candida lokalisering i larver utføres for å svare på flere spørsmål om interaksjonene mellom verten og sopppatogenet under en infeksjon. Etter utviklingen banet denne teknikken veien for forskere å utforske Candida patogenese ved hjelp av høy gjennomstrømningsformater. Ikke glem at det å arbeide med Candida albicans krever forsiktighet, og at standard forholdsregler, inkludert slitasje på personlig verneutstyr, alltid bør tas mens du utfører denne prosedyren.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Non-invasiv bildediagnostikk av utbredt candidiasis i sebrafisk Larver

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Insektet<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som en kraftig infeksjon Model for å etterforske Bakteriell Patogenese

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Ved å bruke<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som modellorganisme for å studere<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Infeksjon

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analyse av epitelisk skade produsert av<em&gt; Entamoeba histolytica</em&gt; Infeksjon

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Modellering candidiasis i slimhinner i Larvesebrafisk av Swimbladder Injection

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

Fluorescens-baserte Neuraminidase inhiberingsanalyse for å vurdere i hvilken grad influensavirus til neuraminidase Inhibitor Class of Antivirale

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

Galleria mellonella muntlig administrasjonsmodell til Study Commensal-Induced medfødte immunreaksjoner

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Bruk av virvelløse Galleria mellonella som en infeksjon modell for å studere Mycobacterium tuberkulose kompleks

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Verktøy for sanntidsvurdering av en Pseudomonas aeruginosa infeksjonsmodell

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...