Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

Авторы хотели бы отметить помощь, Памела Вашингтон и Лия Андерсон в получении Galleria mellonella для использования в данном исследовании.

Все методы, описанные полагаются на использование беспозвоночных хостов и не требуют одобрения институциональный уход животных и использовать Комитет (IACUC).
1. galleria mellonella Waxworm личинок
<ol><li>Заказать личинок от оптовиков и поставщиков, не вводить, гормоны, антибиотики ...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+candidiasis.">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li><li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+(Sit1p/Arn1p)+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion.">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li><li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade.">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li><li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach.">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li><li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

Модель waxworm G. mellonella стоит как эффективный инструмент для быстрого и воспроизводимость анализа C. albicans вирулентности. Этот подробный протокол опирается на последовательной доставки определенных инфекционных дозы на тот же сайт через партию личинок. Инфекционные доза имеет гл?...

Видов Candida являются общие человеческие Комменсалами, которые способны как оппортунистических патогенов в сильно ослабленным и дисбиотических пациентов. Хотя многие виды Candida могут вызывать заболевания, C. albicans является самой распространенной причиной распространения кандидоз1,2. Системных заболеваний результаты от C. albicans доступ кровоток через либо прямого проникновения ранее ограничительных хост барьеров или введение в хирургических сайтов и другие нарушения тела3. Candida видов использования ряда патогенных процессов могут вызвать системные заболевания в пределах узла, включая филаментацию, биопленки, уклонение иммунных клеток и бежать и железа, очистку4. В vitro подходы существуют для расследования индивидуальных патогенетических механизмов, но Животные модели продолжать предоставлять лучший вариант, чтобы исследовать весь исход болезни5,6. Предыдущие исследования подробно многие случаи перспективным в vitro исследования вирулентности, неспособность воспроизводить в vivo7,8. Таким образом, Животные модели по-прежнему необходимы для оценки вирулентности в vivo. Большинство моделей болезни полагаются на мышах в качестве суррогата для человека инфекции, несмотря на неспособность C. albicans естественно колонизировать мышиных систем как синантропных9. Беспозвоночных модели распространенных кандидоз включают нематоды Caenorhabditis elegans, фрукты fly Drosophila melanogasterи waxworm Galleria mellonella, хотя опасения по поводу основных различий в основных физиологии температуры тела пребывания и пути воздействия препятствовали их широкое признание10,11.
Совсем недавно была принята модель инфекции waxworm G. mellonella для модели патогенности широкого спектра бактериальных и грибковых патогенов12,,1314. Преимущества этой модели включают его относительно низкая стоимость, увеличение пропускной способности, простота использования и снижение этические соображения относительно животных благодеяние, по сравнению с мышиных моделях. Для исследователей это приводит к увеличению возможность протестировать несколько переменных, сильнее доверительные интервалы, более быстрое экспериментов и обход животных протоколов. G. mellonella служил в качестве платформы для быстро оценить C. albicans вирулентности после возмущения генов, необходимых для регулирования формирования, филаментацию и Джин биопленки через клинических изолятов11,15 ,16. Недавние исследования включили расследования противогрибковая эффективность с использованием G. mellonella для оценки фармакокинетики препарата активности и сопротивления параметры в естественных условиях , которые в противном случае вызов и много времени 17,18. Тем не менее исследования C. albicans вирулентности в G. mellonella было осложнено сообщается, что высокие уровни вариации в рамках экспериментов и несовместимые протоколы между исследовательскими группами, которые производят различные вирулентности фенотипов между мышами и waxworms11,13,19,,2021. Здесь мы приводим G. mellonella протокол стандартизировать C. albicans воспроизводимость увеличение инфекции, в экспериментах вирулентности, и продемонстрировать соответствие ранее описанных исследований вирулентности в мышиных модели.
Предыдущие исследования показали, что C. albicans спаривания локус (MTL) тип как на хромосоме 5 регулирует ячеек самобытности и спаривания компетенции аналогичные Saccharomyces cerevisiae и других грибов аскомицетов22. Большинство C. albicans изолятов гетерозиготных в локусе мТл , кодирование один из каждого из мТл и MTLα аллелей (MTL/α) и следовательно стерильные15, 23 , 24. потери одной из аллелей MTL через потери гетерозиготности (LOH) или мутация приводит к гомозиготных MTL или MTLα штаммов, которые могут пройти фенотипические переключатель от стерильного «белый» государства спаривания компетентные государственные «непрозрачного»25. Предыдущая работа подчеркнул, что потеря гетерозиготности MTL также уменьшает вирулентности в мышиных моделях системной инфекции через различные деформации стола26. Здесь мы подробно G. mellonella модель для распространения с помощью генетически аналогичны экспериментальный набор изображать вклад гетерозиготности мТл к вирулентности в G. mellonellaкандидоза. Мы покажем, что МРЛ конфигурации влияние C. albicans патогенности, где MTLα штаммы были менее вирулентные MTL/α и MTL клетки, подобные выводы в мышиных инфекции модель26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

Видов Candida являются общие грибковых Комменсалами людей колонизации кожи, слизистых поверхностей и желудочно-кишечного тракта. При определенных условиях Candida могут перерасти их природных ниш, что приводит к изнурительной слизистой инфекции как хорошо как опасные для жизни системных инфекций, которые являются одним из основных направлений расследования из-за их связанные высокой смертности. Животные модели распространения инфекции существуют для изучения прогрессирования заболевания и рассекает характеристики Candida патогенности. Из них Galleria mellonella waxworm инфекции модель обеспечивает экономически экспериментальный инструмент для исследования высок объём системных вирулентности. Многие другие бактерий и эукариот инфекционные агенты эффективно изучались в G. mellonella понять патогенности, что делает его широко принятой модели системы. Тем не менее изменения в метод, используемый для заразить G. mellonella можно изменить результаты фенотипических и затруднить интерпретацию результатов. Здесь мы приводим, преимущества и недостатки waxworm модели для изучения патогенеза системный кандидоз и подробно такой подход к улучшению воспроизводимость. Наши результаты выделить диапазон кинетики смертности в G. mellonella и описывают переменные, которые можно модулировать эти кинетики. В конечном итоге этот метод стоит как этического, быстрое и эффективное подход для изучения вирулентности в модели распространения кандидоза.

Здесь мы демонстрируем воспроизводимый метод для использования waxworms G. mellonella расследовать модель распространенных кандидоз инфекции с использованием C. albicans. Хранения, обслуживания и отбора личинок для инфекции являются критическим компонентом обеспечивая...

Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Galleria mellonella служит беспозвоночных модель для распространенных кандидоз. Здесь, мы подробно инфекции протокол и предоставлять вспомогательные данные для модели эффективности.

Galleria mellonella Waxworm инфекции модель для распространения кандидоз

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области Candida о вирулентности штамма и вкладе конкретных генов в эти процессы. Основными преимуществами этой техники является то, что она позволяет избежать проблем, связанных с использованием животных, является надежным, быстрым, дешевым, и обеспечивает большое количество животных за эксперимент. Вообще говоря, люди, которые являются новыми для этого метода, скорее всего, борьба немного, потому что они будут иметь некоторые трудности оценки жизнеспособности червя до начала эксперимента или они могут иметь некоторые проблемы с непоследовательной инъекции червей.Закажите личинки у оптовиков и поставщиков, которые не вводят гормоны, антибиотики или другие методы лечения личинок и которые способны поставлять и доставлять живые образцы. Когда личинки прибывают, проверьте каждый контейнер, чтобы подтвердить здоровье и жизнеспособность личинок. Здоровые личинки будут полностью погружены под постельные принадлежности, движущихся и обладающих желтой, светлой окраской загара с несколькими личинками, содержащими черные отметины или обесцвечивания вдоль тела.Личинки могут храниться в контейнерах в проветриваемом пространстве при температуре окружающей среды до двух недель. Чтобы подготовить дрожжевые клетки для инфекции Galleria mellonella, вырастить штаммы C.albicans, которые будут введены на ночь в три миллилитров свежего дрожжевого бульона-пептон-декстрозы на штамм в стандартных трубках культуры на вращающемся барабане на средней скорости и 30 градусов по Цельсию. На следующее утро, собирать клетки центрифугации, и мыть дрожжи три раза в пять миллилитров свежих PBS процентов центрифугации.После последнего мытья, повторное распределение клеток в один миллилитр свежих PBS и передачи дрожжей в микроцентрифуг трубки. Серийно разбавляют клетки в дополнительных концентрациях PBS от одного до 100, от одного до 1000 и от одного до 100 000 концентраций, и подсчитывают клетки от одного до 100 и от одного до 1000 разбавления. Отрегулируйте клетки в 2,5 раза от 10 до седьмого клетки на миллилитр концентрации PBS в новой микроцентрифугной трубке, и подтвердите точность инфекционной дозы, поместив соответствующий объем от одного до 100 000 разбавления для достижения 100 единиц формирования колонии на одной дрожжевой пептон-декстрозы агар пластины для каждой культуры, которые будут использоваться в инфекции.Чтобы заразить личинки клетками Candida, сначала распределив небольшое количество постельных принадлежностей воскового червя в один пустой, 100 на 15 сантиметров стерильную чашку Петри на биологическую репликацию, и стерилизовать 10-микролитровый шприц, оснащенный 26-калиберной иглой три раза с 10 микролитров 70%этанола и три раза с 10 микролитров PBS на стирку. Далее вихрь прививки разбавления C.albicans, и загрузить 10 микролитров клеток в шприц. Откройте один контейнер из личинок G.mellonella, и использовать палец, чтобы тщательно перевернуть постельные принадлежности, чтобы раскрыть личинки, выбирая желтый, загар личинки аналогичного размера, которые находятся в добром состоянии здоровья с отсутствием черной пигментации на телах, используя средние и указательные пальцы и большой палец, чтобы забрать одну личинку таким же образом, как схвивая карандаш.Roll личинки на спину, чтобы ноги лицом вверх, держа всю длину тела между пальцами и большим пальцем, так что личинка не в состоянии завить или оторваться от инъекции. С другой стороны, поверните шприц так, чтобы игольчатая скошенная обращена вверх, и медленно вставьте всю длину скошенной в тело на стыке с задней левой ногой, гарантируя, что игла проникает в тело и не просто толкает тело личинки внутрь. Наиболее важным шагом в этой процедуре является инъекция воскового червя таким образом, что повреждение личинки тела сводится к минимуму и полный болюс прививался.Затем ввилите все 10 микролитров инокулума Candida и извлекайте иглу. Со-дом до 10 личинок вводят из той же культуры Candida в каждом 100-на-15-миллиметровой чашки Петри после прививки, и инкубировать личинку при 37 градусов по Цельсию в течение восьми дней. Проверяйте посуду каждые 24 часа, чтобы следить за смертью.Смертность может быть первоначально оценена по затемненной пигментации, образованию черных пятен или тел, а также отсутствию движения. Чтобы подтвердить смертность, используйте пинцет, чтобы аккуратно свернуть умирающих личинок на спину и слегка тыкать личинки нижней с пинцетом. Личинки, которые начинают окукливаются в моли могут быть включены в анализ, но должны быть удалены, если они начинают линьки.Нет существенной разницы в кинетики смерти G.mellonella существует между личинками инфицированных нулю или 10 дней после прибытия. Характерные признаки болезни возникают у личинок обоих возрастов, которые поддаются инфекции, начиная с обесцвечивания, что уступает место черным пятнам до полной потери подвижности и в конечном итоге смерть. Инфекция C.albicans ускоряет этот процесс обесцвечивания и заболеваемости, но не изменяет каскад фенотипических маркеров, ведущих к смерти по сравнению с неинфицированными или инъекционными личинками PBS.Примечательно, что инфекция G.mellonella брачными гомо-или гетерозиготами от любого из протестированных клинически изолированных штаммов C.albicans производит высокие показатели смертности по сравнению с животными, введенными PBS, в то время как инъекции прототрофических производных штаммов окутывает смертельный эффект в этой модели. Важно помнить, чтобы выбрать здоровые личинки и быть нежным в обращении с личинками. Если несколько штаммов будут привиты, позаботьтесь, чтобы не позволить клеткам Candida сидеть в PBS слишком долго.После этой процедуры, другие методы, такие как иммунологическое профилирование и локализация Candida в личинках могут быть выполнены, чтобы ответить на дополнительные вопросы о взаимодействии между хозяином и грибковых патогенов во время инфекции. После своего развития, этот метод проложил путь для исследователей, чтобы исследовать candida патогенеза с использованием высокой пропускной способности форматов. Не забывайте, что работа с Candida albicans требует ухода и что стандартные меры предосторожности, включая износ оборудования личной защиты, всегда должны быть приняты при выполнении этой процедуры.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Представляем напряжения сдвига в изучении бактериальной адгезии

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Неинвазивная визуализация диссеминированный кандидоз в Личинки данио рерио

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Насекомые<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Как мощная модель инфекции по расследованию бактериального патогенеза

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Использование<em&gt; Галерея MELLONELLA</em&gt; В качестве модельного организма по изучению<em&gt; Легионелл</em&gt; Инфекция

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Анализ ущерба эпителиальных Продюсеры<em&gt; Entamoeba гистолитика</em&gt; Инфекция

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Моделирование слизистой оболочки кандидоз мальков данио рерио по плавательного пузыря инъекций

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

Флуоресцентный на основе нейраминидазы Анализ ингибирования для оценки восприимчивости вирусов гриппа к нейраминидазы Ингибитор классу противовирусных препаратов

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

Модель администрирования Galleria mellonella устные Innate иммунных реакций Study Commensal-Induced

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Использование беспозвоночных Galleria mellonella в качестве модели инфекции для изучения комплекса туберкулеза микобактерий

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Инструменты для оценки в режиме реального времени модели инфекции Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...