Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
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Los autores desean reconocer la ayuda de Pamela Washington y Leah Anderson en la obtención de Galleria mellonella para su uso en este estudio.

Todos los métodos descritos dependen del uso de hospedadores invertebrados y no requieren de aprobación institucional cuidado Animal y el Comité uso (IACUC).
1. larvas de galleria mellonella Waxworm
<ol><li>Larvas del orden de mayoristas y proveedores que no introducen hormonas, antibióticos u otros tratamientos para las larvas y que son capaces de enviar y entregar a especímenes vivos.<ol>
<li>Asegúrese de comprar todas las larvas del mismo proveedor durante el curso de la ex...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+candidiasis.">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li><li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+(Sit1p/Arn1p)+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion.">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li><li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade.">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li><li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach.">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li><li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

El modelo de g. mellonella waxworm se erige como una herramienta eficaz para el análisis rápido y reproducible de la virulencia de C. albicans . Este protocolo detallado se basa en una implementación consistente de una dosis infecciosa definida al mismo sitio a través de un lote de larvas. Dosis infecciosa tiene un profundo impacto sobre la mortalidad de g. mellonella mientras que uso de larvas entre su llegada inicial y diez días siguientes a la recepción produjo resultados similares. P?...

Las especies de Candida son comensales humanos comunes que son capaces de emerger como patógenos oportunistas en severamente inmunocomprometidos y pacientes disbiotica. Aunque muchas especies de Candida pueden causar enfermedad, C. albicans es la causa más frecuente de candidiasis diseminada1,2. Enfermedad sistémica resulta de C. albicans de acceso a la circulación sanguínea a través de cualquier penetración directa de las barreras del huésped previamente restrictivas o introducción en sitios quirúrgicos y otros incumplimientos del cuerpo3. Las especies de Candida utilizan una gama de procesos patógenos para causar enfermedad sistémica en el host incluyendo filamentación, formación de biopelículas, evasión inmune celular, escape y plancha limpieza4. Existen enfoques in vitro para investigar los mecanismos patogénicos, pero modelos animales continúan proporcionando la mejor opción para investigar la totalidad de la enfermedad resultado5,6. La investigación anterior ha detallado muchas instancias de prometedoras investigaciones en vitro de virulencia pudiendo reproducir en vivo7,8. Por lo tanto, se requiere evaluar virulencia modelos animales en vivo. Más modelos de la enfermedad dependen de ratones para servir como un sustituto para las infecciones humanas a pesar de la incapacidad de C. albicans coloniza naturalmente sistemas murinos como un comensal9. Los modelos invertebrados de candidiasis diseminada incluyen el nematodo elegans de Caenorhabditis, la fruta la mosca Drosophila melanogastery waxworm Galleria mellonella, aunque preocupaciones acerca de las diferencias fundamentales en fisiología básica, las temperaturas del cuerpo anfitrión y las rutas de exposición han obstaculizado su amplia aceptación10,11.
Más recientemente, se ha adoptado el modelo de infección de g. mellonella waxworm a patogenicidad de modelo de una amplia gama de bacterias y hongos patógenos12,13,14. Ventajas de este modelo son su relativamente bajo costo, mayor rendimiento, facilitan de uso y reducción preocupaciones éticas sobre beneficencia animal comparado con modelos murinos. Para los investigadores, esto se traduce en mayor capacidad de prueba de múltiples variables, intervalos de confianza más fuerte, más rápida experimentación y derivación de protocolos animal. G. mellonella ha servido como una plataforma para evaluar rápidamente la virulencia de C. albicans después de perturbación de los genes necesarios para biofilm formación, filamentación y gene regulación a través de aislamientos clínicos de11,15 ,16. Estudios recientes han incorporado la investigación de la eficacia antifúngica utilizando g. mellonella para evaluar la farmacocinética de la droga actividad y resistencia en vivo en configuración, que son otra manera desafiante y mucho tiempo 17,18. Sin embargo, estudios de virulencia de C. albicans en g. mellonella han sido complicados por presuntamente altos niveles de variación dentro de los experimentos y protocolos incompatibles entre grupos de investigación que producen distintos fenotipos de virulencia entre ratones y waxworms11,13,19,20,21. Aquí, describimos un protocolo de g. mellonella para normalizar la reproducibilidad de aumento de infecciones, C. albicans en experimentos de virulencia y demostrar coherencia con estudios previamente descritos de virulencia en murine modelos.
Estudios previos demostraron que C. albicans (MTL) de tipo-como locus en el cromosoma 5 de acoplamiento regula célula identidad y competencia similar a Saccharomyces cerevisiae y otros ascomiceto hongos22de apareamiento. La mayoría de los aislamientos de C. albicans es heterocigoto en el locus MTL , codificación de cada uno de los MTLuna y MTLα alelos (MTLun/α) y es por lo tanto estéril15, 23 , 24. pérdida de uno de los alelos MTL por la pérdida del heterocigoto (LOH) o mutación conduce a homocigótica MTLuna o MTLα cepas que pueden experimentar un cambio fenotípico desde el estado estéril 'blanco' a la apareamiento de estado 'opaco' competente25. Trabajo previo ha puesto de manifiesto que la pérdida de heterocigoto MTL reduce también virulencia en modelos murinos de infección sistémica por cepa diferente fondos26. Aquí detallamos el modelo de g. mellonella para candidiasis diseminada con un conjunto experimental genéticamente similar para representar la contribución de MTL heterocigoto a la virulencia en g. mellonella. Mostramos que la configuración de MTL influenciada patogenicidad de C. albicans , donde MTLα fueron menos virulenta con respecto aun/α MTLy MTLa las células, similares a resultados en modelo murino infección26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

Las especies de Candida son comensales hongos comunes de los seres humanos colonizando la piel, superficies mucosas y tracto gastrointestinal. Bajo ciertas condiciones, la Candida puede cubran sus nichos naturales dando por resultado debilitante mucosas infecciones como infecciones sistémicas así como peligrosa para la vida, que son un foco importante de la investigación debido a su alta mortalidad asociada. Modelos animales de infección diseminada existen para estudiar la progresión de la enfermedad y las características de patogenicidad de Candida de disección. De estos, el modelo de infección de waxworm Galleria mellonella proporciona una rentable herramienta experimental para investigaciones de alto rendimiento de virulencia sistémica. Muchos otros agentes infecciosos bacterianos y eucariotas han sido efectivamente estudiados en g. mellonella para entender patogenicidad, convirtiéndolo en un sistema modelo ampliamente aceptado. Sin embargo, variación en el método utilizado para infectar a g. mellonella puede alterar los resultados fenotípicos y complicar la interpretación de los resultados. Aquí describiremos las ventajas e inconvenientes del modelo waxworm estudiar patogenia de Candida sistémica y un enfoque para mejorar la reproducibilidad del detalle. Nuestros resultados destacan la gama de la cinética de mortalidad en g. mellonella y describen las variables que pueden modular la cinética de estos. En última instancia, este método se erige como un enfoque ético, rápido y rentable para el estudio de virulencia en un modelo de candidiasis diseminada.

Aquí, demostramos un método reproducible para el uso de g. mellonella waxworms investigar un modelo de candidiasis diseminada de la infección con C. albicans. El adecuado almacenamiento, mantenimiento y selección de larvas para la infección son componente fundamental de asegurar reproducibilidad en g. mellonella mortalidad (figura 1A). Larvas sanas que son activas, tienen un color amarillo/tan claro, y parches ...

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The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Galleria mellonella sirve como un modelo de invertebrado para la candidiasis diseminada. Aquí detallamos la infección el protocolo y proporcionar datos de apoyo para la efectividad del modelo.

El modelo de infección de Waxworm Galleria mellonella para la Candidiasis diseminada

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de Candida sobre la virulencia de la tensión y las contribuciones de genes específicos a estos procesos. Las principales ventajas de esta técnica son que evita las preocupaciones con respecto al uso animal, es robusta, rápida, barata y proporciona un alto número de animales por experimento. En términos generales, los individuos que son nuevos en este método probablemente lucharán un poco porque tendrán alguna dificultad para evaluar la viabilidad del gusano antes del comienzo del experimento o podrían tener algunos problemas con la inyección inconsistente de los gusanos.Pedir larvas de mayoristas y proveedores que no introducen hormonas, antibióticos u otros tratamientos a las larvas y que son capaces de enviar y entregar especímenes vivos. Cuando lleguen las larvas, revise cada recipiente para confirmar la salud y viabilidad de las larvas. Las larvas sanas estarán completamente sumergidas debajo de la ropa de cama, moviéndose y poseyendo una coloración amarilla y ligera con pocas larvas que contengan marcas negras o decoloraciones a lo largo del cuerpo.Las larvas se pueden almacenar en sus recipientes en un espacio ventilado a temperatura ambiente durante un máximo de dos semanas. Para preparar las células de levadura para la infección por mellonella Galleria, haga crecer las cepas de C.albicans para ser inyectadas durante la noche en tres mililitros de caldo fresco de levadura-peptona-dextrosa por cepa en tubos de cultivo estándar en un tambor giratorio a velocidad media y 30 grados Celsius. A la mañana siguiente, recoger las células por centrifugación, y lavar la levadura tres veces en cinco mililitros de PBS fresco por centrifugación.Después del último lavado, resuspender las células en un mililitro de PBS fresco y transferir la levadura a un tubo de microcentrífuga. Diluir en serie las células en PBS adicionales a una a 100, de uno a 1.000 y de uno a 100.000 concentraciones, y contar las células de las diluciones de uno a 100 y de uno a 1.000. Ajustar las células a una 2,5 veces 10 a las séptimas células por mililitro de concentración de PBS en un nuevo tubo de microcentrífuga, y confirmar la precisión de la dosis infecciosa mediante la enchacación del volumen adecuado de la dilución de uno a 100 000 para lograr 100 unidades formadoras de colonias en una placa de levadura-peptona-dextgarrosa para cada cultivo que se utilizará en la infección.Para infectar las larvas con las células de Candida, primero esparza una pequeña cantidad de ropa de cama de gusano de cera en una placa Petri estéril vacía de 100 por 15 centímetros por réplica biológica, y esteriliza una jeringa de 10 microlitros equipada con una aguja de calibre 26 tres veces con 10 microlitros de 70% de etanol y tres veces con 10 microlitros de PBS por lavado. A continuación, vórtice la dilución de inoculación de C.albicans, y cargar 10 microlitros de células en la jeringa. Abra un recipiente de larvas de G.mellonella, y use un dedo para girar cuidadosamente la ropa de cama para descubrir larvas, seleccionando larvas amarillas de un tamaño similar que están en buen estado de salud con una falta de pigmentación negra en los cuerpos, utilizando los dedos medio e índice y el pulgar para recoger una larva de una manera similar a agarrar un lápiz.Enrolle la larva sobre su espalda para que las piernas estén mirando hacia arriba, sosteniendo toda la longitud del cuerpo entre los dedos y el pulgar para que la larva sea incapaz de curvarse o alejarse de la inyección. Con la otra mano, gire la jeringa para que el bisel de la aguja esté mirando hacia arriba, e inserte lentamente toda la longitud del bisel en el cuerpo en la unión con la pierna izquierda más trasera, asegurando que la aguja penetre en el cuerpo y no simplemente empuje el cuerpo de la larva hacia adentro. El paso más crítico en este procedimiento es la inyección del gusano de cera de tal manera que el daño al cuerpo larvario se minimiza y se inocula el bolo completo.A continuación, inyecte los 10 microlitros completos de Candida inoculum y extraiga la aguja. Co-casa hasta 10 larvas inyectadas del mismo cultivo de Candida en cada plato de Petri de 100 por 15 milímetros después de la inoculación, e incubar la larva a 37 grados centígrados durante ocho días. Revisa los platos cada 24 horas para controlar la muerte.La mortalidad puede evaluarse inicialmente por pigmentación oscurecida, la formación de manchas o cuerpos negros y la falta de movimiento. Para confirmar la mortalidad, usa pinzas para rodar suavemente larvas moribundas sobre sus espaldas y pinchar ligeramente la parte inferior de la larva con las pinzas. Las larvas que comienzan a pupar en polillas se pueden incluir en el análisis, pero deben ser removidas si comienzan a mudarse.No existe ninguna diferencia significativa en la cinética de la muerte por G.mellonella entre las larvas infectadas cero o 10 días después de la llegada. Los signos característicos de la enfermedad surgen en larvas de ambas edades que sucumben a la infección, comenzando con la decoloración que da paso a manchas negras antes de una pérdida total de motilidad y finalmente la muerte. La infección por C.albicans acelera este proceso de decoloración y morbilidad, pero no altera significativamente la cascada de marcadores fenotípicos que conducen a la muerte en comparación con las larvas no infectadas o inyectadas por PBS.En particular, la infección de G.mellonella con homo-o heterocigotos tipo de apareamiento de cualquiera de las cepas C.albicans clínicamente aisladas probadas produce altas tasas de mortalidad en comparación con los animales inyectados por PBS, mientras que las inyecciones de cepas derivadas prototróficas atenúan el efecto letal en este modelo. Es importante recordar elegir larvas sanas y ser suave en el manejo de las larvas. Si se inocularán varias cepas, tenga cuidado de no dejar que las células de Candida se sienten en el PBS durante demasiado tiempo.Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como el perfil inmunológico y la localización de Candida dentro de las larvas para responder preguntas adicionales sobre las interacciones entre el huésped y el patógeno fúngico durante una infección. Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores exploraran la patogénesis de Candida utilizando formatos de alto rendimiento. No olvide que trabajar con Candida albicans requiere cuidado y que las precauciones estándar, incluyendo el uso de equipos de protección personal, siempre deben tomarse durante la realización de este procedimiento.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

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During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Investigación

Inmunología e Infección

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

La imagen no invasiva de la candidiasis diseminada en larvas de pez cebra

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The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

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The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

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