Name: the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis
Uploaded: 2018-11-17T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

Författarna vill erkänna hjälp av Pamela Washington och Leah Anderson att erhålla Galleria mellonella för användning i denna studie.

Alla metoder beskrivs förlita sig på användning av ryggradslösa värdar och kräver inte institutionella djur hand och använda kommittén (IACUC) godkännande.
1. galleria mellonella Waxworm larver
<ol><li>Beställa larver från grossister och leverantörer som inte introducerar hormoner, antibiotika eller andra behandlingar för att larverna och som klarar att transportera och leverera levande exemplar.<ol>
<li>Glöm inte att köpa alla larver från samma leverantör under lop...

<ol>
	<li>Kauffman, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+multicenter+surveillance+study+of+funguria+in+hospitalized+patients.+The+National+Institute+for+Allergy+and+Infectious+Diseases+(NIAID)+Mycoses+Study+Group.">Prospective multicenter surveillance study of funguria in hospitalized patients. The National Institute for Allergy and Infectious Diseases (NIAID) Mycoses Study Group.</a> Clinical Infectious Diseases. 30 (1), 14-18 (2000).</li><li>Horn, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+outcomes+of+candidemia+in+2019+patients:+data+from+the+prospective+antifungal+therapy+alliance+registry.">Epidemiology and outcomes of candidemia in 2019 patients: data from the prospective antifungal therapy alliance registry.</a> Clinical Infectious Diseases. 48 (12), 1695-1703 (2009).</li><li>Pfaller, M. A., Diekema, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+invasive+candidiasis:+a+persistent+public+health+problem.">Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem.</a> Clinical Microbiology Reviews. 20 (1), 133-163 (2007).</li><li>Sardi, J. C., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+species:+current+epidemiology,+pathogenicity,+biofilm+formation,+natural+antifungal+products+and+new+therapeutic+options.">Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options.</a> Journal of Medical Microbiology. 62, 10-24 (2013).</li><li>Segal, E., Frenkel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+in+Vivo+Models+of+Candidiasis.">Experimental in Vivo Models of Candidiasis.</a> J Fungi (Basel). 4 (1), (2018).</li><li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+candidiasis.">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols in Immunology. 105, 11-17 (2014).</li><li>Heymann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+siderophore+iron+transporter+of+Candida+albicans+(Sit1p/Arn1p)+mediates+uptake+of+ferrichrome-type+siderophores+and+is+required+for+epithelial+invasion.">The siderophore iron transporter of Candida albicans (Sit1p/Arn1p) mediates uptake of ferrichrome-type siderophores and is required for epithelial invasion.</a> Infection and Immunity. 70 (9), 5246-5255 (2002).</li><li>Priest, S. J., Lorenz, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Virulence-Related+Phenotypes+in+Candida+Species+of+the+CUG+Clade.">Characterization of Virulence-Related Phenotypes in Candida Species of the CUG Clade.</a> Eukaryotic Cell. 14 (9), 931-940 (2015).</li><li>Savage, D. C., Dubos, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+indigenous+yeast+in+the+murine+stomach.">Localization of indigenous yeast in the murine stomach.</a> J Bacteriol. 94 (6), 1811-1816 (1967).</li><li>Ewbank, J. J., Zugasti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans:+model+host+and+tool+for+antimicrobial+drug+discovery.">C. elegans: model host and tool for antimicrobial drug discovery.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (3), 300-304 (2011).</li><li>Amorim-Vaz, S., Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+the+virulence+of+Candida+albicans+transcription+factor+mutants+using+Galleria+mellonella+and+mouse+infection+models.">Examining the virulence of Candida albicans transcription factor mutants using Galleria mellonella and mouse infection models.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 367 (2015).</li><li>Harding, C. R., Schroeder, G. N., Collins, J. W., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Galleria+mellonella+as+a+model+organism+to+study+Legionella+pneumophila+infection.">Use of Galleria mellonella as a model organism to study Legionella pneumophila infection.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50964 (2013).</li><li>Jacobsen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+virulence+of+Candida.">Galleria mellonella as a model host to study virulence of Candida.</a> Virulence. 5 (2), 237-239 (2014).</li><li>Tsai, C. J., Loh, J. M., Proft, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+infection+models+for+the+study+of+bacterial+diseases+and+for+antimicrobial+drug+testing.">Galleria mellonella infection models for the study of bacterial diseases and for antimicrobial drug testing.</a> Virulence. 7 (3), 214-229 (2016).</li><li>Hirakawa, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+phenotypic+intra-species+variation+in+Candida+albicans.">Genetic and phenotypic intra-species variation in Candida albicans.</a> Genome Research. 25 (3), 413-425 (2015).</li><li>Dunn, M. J., Kinney, G. M., Washington, P. M., Berman, J., Anderson, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+diversification+accompanies+gene+family+expansion+of+MED2+homologs+in+Candida+albicans.">Functional diversification accompanies gene family expansion of MED2 homologs in Candida albicans.</a> PLoS Genetics. 14 (4), (2018).</li><li>Astvad, K. M. T., Meletiadis, J., Whalley, S., Arendrup, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluconazole+Pharmacokinetics+in+Galleria+mellonella+Larvae+and+Performance+Evaluation+of+a+Bioassay+Compared+to+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+for+Hemolymph+Specimens.">Fluconazole Pharmacokinetics in Galleria mellonella Larvae and Performance Evaluation of a Bioassay Compared to Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for Hemolymph Specimens.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (10), (2017).</li><li>Mesa-Arango, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+non-mammalian+host+Galleria+mellonella+can+be+used+to+study+the+virulence+of+the+fungal+pathogen+Candida+tropicalis+and+the+efficacy+of+antifungal+drugs+during+infection+by+this+pathogenic+yeast.">The non-mammalian host Galleria mellonella can be used to study the virulence of the fungal pathogen Candida tropicalis and the efficacy of antifungal drugs during infection by this pathogenic yeast.</a> Med Mycol. 51 (5), 461-472 (2013).</li><li>Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+virulence+of+Candida+albicans+mutants+in+mice+and+Galleria+mellonella+larvae.">Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 34 (2), 153-157 (2002).</li><li>Fuchs, B. B., O'Brien, E., Khoury, J. B., Mylonakis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+using+Galleria+mellonella+as+a+model+host+to+study+fungal+pathogenesis.">Methods for using Galleria mellonella as a model host to study fungal pathogenesis.</a> Virulence. 1 (6), 475-482 (2010).</li><li>Kavanagh, K., Fallon, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galleria+mellonella+larvae+as+models+for+studying+fungal+virulence.">Galleria mellonella larvae as models for studying fungal virulence.</a> Fungal Biology Reviews. 24 (1-2), 79-83 (2010).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285 (5431), 1271-1275 (1999).</li><li>Legrand, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homozygosity+at+the+MTL+locus+in+clinical+strains+of+Candida+albicans:+karyotypic+rearrangements+and+tetraploid+formation.">Homozygosity at the MTL locus in clinical strains of Candida albicans: karyotypic rearrangements and tetraploid formation.</a> Molecular Microbiology. 52 (5), 1451-1462 (2004).</li><li>Lockhart, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Candida+albicans,+white-opaque+switchers+are+homozygous+for+mating+type.">In Candida albicans, white-opaque switchers are homozygous for mating type.</a> Genetics. 162 (2), 737-745 (2002).</li><li>Miller, M. G., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White-opaque+switching+in+Candida+albicans+is+controlled+by+mating-type+locus+homeodomain+proteins+and+allows+efficient+mating.">White-opaque switching in Candida albicans is controlled by mating-type locus homeodomain proteins and allows efficient mating.</a> Cell. 110 (3), 293-302 (2002).</li><li>Wu, W., Lockhart, S. R., Pujol, C., Srikantha, T., Soll, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterozygosity+of+genes+on+the+sex+chromosome+regulates+Candida+albicans+virulence.">Heterozygosity of genes on the sex chromosome regulates Candida albicans virulence.</a> Molecular Microbiology. 64 (6), 1587-1604 (2007).</li><li>Herrero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRE5+gene+null+mutant+strains+of+Candida+albicans+are+avirulent+and+have+altered+cell+wall+composition+and+hypha+formation+properties.">KRE5 gene null mutant strains of Candida albicans are avirulent and have altered cell wall composition and hypha formation properties.</a> Eukaryotic Cell. 3 (6), 1423-1432 (2004).</li><li>Hall, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mnn2+mannosyltransferase+family+modulates+mannoprotein+fibril+length,+immune+recognition+and+virulence+of+Candida+albicans.">The Mnn2 mannosyltransferase family modulates mannoprotein fibril length, immune recognition and virulence of Candida albicans.</a> PLoS Pathogens. 9 (4), 1003276 (2013).</li><li>Wojda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+of+the+greater+wax+moth+Galleria+mellonella.">Immunity of the greater wax moth Galleria mellonella.</a> Journal of Insect Science. 24 (3), 342-357 (2017).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+Sequence+of+Galleria+mellonella+(Greater+Wax+Moth).">Genome Sequence of Galleria mellonella (Greater Wax Moth).</a> Genome Announcements. 6 (2), (2018).</li><li>Krappmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lightning+up+the+worm:+How+to+probe+fungal+virulence+in+an+alternative+mini-host+by+bioluminescence.">Lightning up the worm: How to probe fungal virulence in an alternative mini-host by bioluminescence.</a> Virulence. 6 (8), 727-729 (2015).</li><li>Chowdhary, A., Voss, A., Meis, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug-resistant+Candida+auris:+'new+kid+on+the+block'+in+hospital-associated+infections.">Multidrug-resistant Candida auris: 'new kid on the block' in hospital-associated infections.</a> Journal of Hospital Infection. 94 (3), 209-212 (2016).</li><li>Delarze, E., Ischer, F., Sanglard, D., Coste, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+a+Gaussia+princeps+Luciferase+reporter+system+in+Candida+albicans+for+in+vivo+detection+in+the+Galleria+mellonella+infection+model.">Adaptation of a Gaussia princeps Luciferase reporter system in Candida albicans for in vivo detection in the Galleria mellonella infection model.</a> Virulence. 6 (7), 684-693 (2015).</li></ol>

G. mellonella waxworm modellen står som ett effektivt verktyg för snabba och reproducerbara analys av C. albicans virulens. Detta detaljerade protokoll förlitar sig på konsekvent leverans av en definierad infektiös dos till samma plats över ett parti av larver. Smittsam dos har en djupgående inverkan på G. mellonella dödlighet medan användning av larver mellan sin första ankomst och tio dagar från mottagandet gav liknande resultat. Förlust av C. albicansMTLen</stro...

Candida -arter är vanliga mänskliga förknippas som kan utvecklas till opportunistiska patogener i kraftigt nedsatt immunförsvar och dysbiotic patienter. Även om många Candida arter kan orsaka sjukdom, är C. albicans den vanligaste orsaken till disseminerad candidiasis1,2. Systemisk sjukdom resulterar från C. albicans åtkomst till blodomloppet genom antingen direkt penetration av tidigare restriktiva värd hinder eller introduktion på kirurgiska webbplatser och andra överträdelser av kroppen3. Candida -arter utnyttja en rad patogena processer att orsaka systemisk sjukdom inom värden inklusive filamentation, biofilm bildning, immunceller skatteflykt och fly och järn rensning4. In vitro -metoder finns för att undersöka enskilda patogena mekanismer, men djurmodeller fortsätta att tillhandahålla det bästa alternativet att undersöka hela sjukdomen resultatet5,6. Tidigare forskning har detaljerade många förekomster av lovande in vitro- undersökningar av virulens underlåta att reproducera i vivo7,8. Således, djurmodeller är fortfarande krävs för att bedöma virulens invivo. De flesta sjukdomsmodeller lita på möss att tjäna som ett surrogat för mänskliga infektioner trots C. albicans oförmåga att naturligt kolonisera murina system som en kommensaler9. Ryggradslösa modeller av disseminerad candidiasis inkluderar Nematoden Caenorhabditis elegans, frukten flyga Drosophila melanogaster, och waxworm Galleria mellonella, trots farhågor om grundläggande skillnader grundläggande fysiologi, har mottagande organ temperaturer, och exponeringsvägar hindras deras bred acceptans10,11.
G. mellonella waxworm infektion modellen har nyligen antagits till modell patogenicitet av ett brett utbud av bakterie- och svamp patogener12,13,14. Fördelar med denna modell inkluderar dess relativt låga kostnader, ökad genomströmning, användarvänlighet och minskad etiska betänkligheter angående djur Godhetsprincipen jämfört med murin modeller. För forskare leder detta till ökad förmåga att testa flera variabler, starkare konfidensintervall, mer snabb experimenterande och förbikopplingen av animaliskt protokoll. G. mellonella har fungerat som en plattform för att snabbt bedöma C. albicans virulens efter störning av gener krävs för biofilm bildning, filamentation och gen förordning över kliniska isolat11,15 ,16. Nyligen genomförda studier har införlivat utredning av svampdödande effekt använder G. mellonella för att utvärdera farmakokinetiken av drogen aktivitet och motstånd under i vivo inställningar, som är annars utmanande och tidskrävande 17,18. Ännu, studier av C. albicans virulens i G. mellonella har komplicerats av enligt uppgift höga variation inom experiment och inkonsekvent protokoll mellan forskargrupper som producerar olika virulens fenotyper mellan möss och waxworms11,13,19,20,21. Här, beskriver vi ett G. mellonella protokoll för att standardisera C. albicans infektioner, ökning reproducerbarhet i virulens experiment och visa deras överensstämmelse med tidigare beskrivna studier av virulens i murin modeller.
Tidigare studier har visat att den C. albicans parning typ-liknande (MTL) locus på kromosom 5 reglerar cellidentiteten och parning kompetens liknar Saccharomyces cerevisiae och andra Ascomycete svampar22. Majoriteten av C. albicans isolat är heterozygot på det MTL locus, kodning en av varje av de MTLen och MTLα allelerna (MTLen/α), och är följaktligen steril15, 23 , 24. förlusten av en av de MTL allelerna genom förlust av heterozygositet (LOH) eller mutation leder till homozygot MTLen eller MTLα stammar som kan genomgå en fenotypisk switch från steril 'vit' staten till den parning behöriga 'ogenomskinlig' statens25. Tidigare arbeten har belyst att förlust av MTL heterozygositet också minskar virulens i murina modeller av systemisk infektion över annan stam bakgrunder26. Här, detalj vi G. mellonella modellen för disseminerad candidiasis med en genetiskt lika experimentell för att skildra MTL heterozygositet till virulens i G. mellonellabidrag. Vi visar att MTL konfiguration påverkat C. albicans patogenicitet, där MTLα stammar var mindre virulenta med avseende på både MTLen/α och MTLen celler, liknande fynd inom murina infektion modell26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:852px;" width="853">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Galleria mellonella</td>
			<td style="width:140px;">Snackworms.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Buy twice as many worms as expected to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 uL, Model 1701 N SYR Cemented needle, 26G, type 2 syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dish, 100X15 mm, 500 pack</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge tube, 1.7 mL, 500 pack</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Phosphate Buffered Saline (Biotechnology grade), 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">97062-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:427px;">Ethanol absolute, &#8805;99.5% pure, 500 mL</td>
			<td style="width:140px;">Millipore Sigma</td>
			<td>EM-EX0276-1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:427px;">autoclaved ddH2O</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the galleria mellonella waxworm infection model for disseminated candidiasis

Candida -arter är gemensamma svamp förknippas av människor kolonisera den hud, slemhinnor och mag-tarmkanalen. Under vissa förutsättningar, kan Candida växa över sina naturliga nischer som resulterar i försvagande slemhinne infektioner som väl som livshotande systemiska infektioner, som är ett stort fokus på utredning på grund av deras associerade hög dödlighet. Djurmodeller av disseminerad infektion finns för att studera sjukdomsutveckling och dissekera kännetecknen av Candida patogenicitet. Av dessa ger Galleria mellonella waxworm infektion modellen en kostnadseffektiv experimentella verktyg för hög genomströmning undersökningar av systemisk virulens. Många andra bakteriella och eukaryota infektiösa agens har effektivt studerats i G. mellonella att förstå patogenicitet, gör det allmänt accepterade modellsystem. Ännu, variation i den metod som används för att infektera G. mellonella kan ändra fenotypiska utfall och komplicera tolkningen av resultaten. Här, beskriver vi fördelar och nackdelar av waxworm modell att studera systemisk Candida patogenes och beskriva en strategi för att förbättra reproducerbarheten. Våra resultat belysa utbudet av dödlighet kinetics i G. mellonella och beskriver de variabler som kan modulera dessa kinetik. I slutändan står denna metod som en etisk, snabb och kostnadseffektiv metod att studera virulens i en modell av disseminerad candidiasis.

Här visar vi en reproducerbar metod för användning av G. mellonella waxworms att undersöka en disseminerad candidiasis modell av infektion med C. albicans. Den lämplig för förvaring, underhåll och urval av larver för infektion är kritisk komponent i försäkring reproducerbarhet i G. mellonella dödlighet (figur 1A). Friska larver som är aktiva, har en ljus gul/tan färg, och brist på svarta fläckar på...

Watch this Scientific Journal Video about The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis at JoVE.com

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Galleria mellonella fungerar som en ryggradslösa modell för disseminerad candidiasis. Här, vi detalj infektionen protokoll och ge underlag för modellens effektivitet.

Galleria mellonella Waxworm infektion modell för disseminerad Candidiasis

Candida species are common fungal commensals of humans colonizing the skin, mucosal surfaces, and gastrointestinal tract. Under certain conditions, ...

Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor i Candidafältet om stam virulens och bidragen från specifika gener till dessa processer. De största fördelarna med denna teknik är att den undviker oro för djuranvändning, är robust, snabb, billig, och ger ett stort antal djur per experiment. Generellt sett, individer som är nya för denna metod kommer sannolikt att kämpa lite eftersom de kommer att ha vissa svårigheter att bedöma mask lönsamhet före början av experimentet eller de kan ha vissa problem med inkonsekvent injektion av maskar.Beställ larver från grossister och leverantörer som inte inför hormoner, antibiotika eller andra behandlingar till larverna och som kan leverera och leverera levande exemplar. När larverna anländer, kontrollera varje behållare för att bekräfta larvernas hälsa och livskraft. Friska larver kommer att vara helt nedsänkt under sängkläder, flytta, och som har en gul, ljus solbränna färgning med få larver som innehåller svarta märken eller missfärgningar längs kroppen.Larverna kan förvaras i sina behållare i ett ventilerat utrymme vid omgivningstemperatur i upp till två veckor. För att förbereda jästceller för Galleria mellonella infektion, odla C.albicans stammar som skall injiceras över natten i tre milliliter av färsk jäst-pepton-dextrose buljong per stam i standardkultur rör på en roterande trumma på medelhög hastighet och 30 grader Celsius. Nästa morgon, samla cellerna genom centrifugering, och tvätta jästen tre gånger i fem milliliter färsk PBS per centrifugering.Efter den sista tvätten, resuspend celler i en milliliter av färsk PBS och överföra jästen i en mikrocentrifug röret. Seriebespäna cellerna i ytterligare PBS vid en-till-100, en-till-1, 000 och en-till-100, 000 koncentrationer, och räkna cellerna från en-till-100 och en-till-1, 000 utspädningar. Justera cellerna till en 2,5 gånger 10 till de sjunde cellerna per milliliter PBS-koncentration i ett nytt mikrocentrifugrör, och bekräfta noggrannheten hos den infektiösa dosen genom att plätera lämplig volym av den en-till-100, 000 utspädning för att uppnå 100 kolonibildande enheter på en jäst-pepton-dextrosegar plattan för varje kultur som ska användas vid infektion.För att infektera larverna med Candida-cellerna, först sprida en liten mängd vaxmask sängkläder i en tom, 100-by-15 centimeter steril Petriskål per biologisk replikat, och sterilisera en 10-microliter spruta utrustad med en 26-gauge nål tre gånger med 10 mikroliter på 70%etanol och tre gånger med 10 mikroliter pbs per tvätt. Därefter virvel inokulationen utspädning av C.albicans, och belastning 10 mikroliter av celler i sprutan. Öppna en behållare med G.mellonella larver, och använd ett finger för att försiktigt vända sängkläderna över för att avslöja larver, välja gula, bruna larver av liknande storlek som är vid god hälsa med brist på svart pigmentering på kropparna, med hjälp av mitten och pekfingrarna och tummen för att plocka upp en larv på ett sätt som liknar att förstå en penna.Rulla larven på ryggen så att benen är vända uppåt, håller hela kroppens längd mellan fingrarna och tummen så att larven inte kan krypa eller dra bort från injektionen. Med den andra handen, rotera sprutan så nålen avfasning är vänd uppåt, och sakta för in hela längden av avfasningen i kroppen i korsningen med det bakersta vänstra benet, se till att nålen tränger in i kroppen och inte bara trycka kroppen av larven inåt. Det mest kritiska steget i detta förfarande är injektion av vaxmasken på ett sådant sätt att skador på larvkroppen minimeras och fullbolusen inokuleras.Injicera sedan hela 10 mikroliter av Candida inokulat, och extrahera nålen. Samhus upp till 10 larver injiceras från samma Candida kultur i varje 100-by-15-millimeter Petri skålen efter inokulering, och inkubera larven vid 37 grader Celsius i åtta dagar. Kontrollera disken var 24:e timme för att övervaka döden.Dödligheten kan inledningsvis bedömas genom mörka pigmentering, bildandet av svarta fläckar eller kroppar, och en brist på rörelse. För att bekräfta dödligheten, använd pincett för att försiktigt rulla döende larver på ryggen och peta lätt larvens undersida med pincetterna. Larver som börjar poppa i malar kan ingå i analysen men bör tas bort om de börjar smälta.Ingen signifikant skillnad i kinetiken för G.mellonella död finns mellan larver smittade noll eller 10 dagar efter ankomst. De karakteristiska sjukdomstecken uppstår hos larver från båda åldrar som ger efter för infektionen, som börjar med missfärgning som ger vika för svarta fläckar före en total förlust av motilitet och så småningom död. Infektion med C.albicans snabbar upp denna process av missfärgning och sjuklighet men ändrar inte avsevärt kaskaden av fenotypiska markörer som leder till döden jämfört med oinfekterade eller PBS-injicerade larver.Särskilt, infektionen av G.mellonella med parning typliknande homo-eller heterozygotes från någon av de testade kliniskt isolerade C.albicans stammar producerar hög dödlighet jämfört med PBS-injicerade djur, medan injektioner av prototrofa derivat stammar dämpar den dödliga effekten i denna modell. Det är viktigt att komma ihåg att välja friska larver och att vara försiktig i hanteringen av larverna. Om flera stammar kommer att inokuleras, se till att inte låta Candida cellerna sitta i PBS för länge.Efter detta förfarande kan andra metoder som immunologisk profilering och Candida lokalisering inom larver utföras för att svara på ytterligare frågor om interaktionerna mellan värd och svamp patogen under en infektion. Efter dess utveckling banade denna teknik vägen för forskare att utforska Candida patogenes med hjälp av hög genomströmning format. Glöm inte att arbeta med Candida albicans kräver omsorg och att standard försiktighetsåtgärder, inklusive slitage av personlig skyddsutrustning, alltid bör vidtas när du utför detta förfarande.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Galleria mellonella Waxworm Infection Model for Disseminated Candidiasis

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introduktion Shear stress i studien av bakteriell vidhäftning

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Icke-invasiv avbildning av disseminerad candidiasis i zebrafisk Larver

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Insekten<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Som en kraftfull infektion modell för att undersöka bakteriell patogenes

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Användning av<em&gt; Galleria mellon</em&gt; Som modellorganism för att studera<em&gt; Legionella pneumophila</em&gt; Infektion

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analys av epitelskada Producerad av<em&gt; Entamoeba histolytica</em&gt; Infektion

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Modellering Mucosal candidiasis i larvZebraFish genom Swimbladder Injektion

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

Fluorescens-baserade neuraminidas Inhibition analys för att bedöma känsligheten hos influensavirus till The neuraminidashämmaren Class of Virushämmande

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

En Galleria mellonella Oral Administration modell till Study Commensal-Induced medfödda immunsvar

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex

Användning av ryggradslösa Galleria mellonella som en infektions modell för att studera den Mycobacterium tuberkulos Complex

Tuberculosis is the leading global cause of infectious disease mortality and roughly a quarter of the world&#8217;s population is believed to be infected ...

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Tools for the Real-Time Assessment of a Pseudomonas aeruginosa Infection Model

Verktyg för realtidsbedömning av en Pseudomonas aeruginosa-infektionsmodell

Pseudomonas aeruginosa (Pa) is one of the most common opportunistic pathogens associated with cystic fibrosis (CF). Once Pa colonization is established, a ...