Name: a new portable in vitro exposure cassette for aerosol sampling
Uploaded: 2019-02-22T13:00:00
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Die Autoren möchten Boris Solomonov und der Virginia Commonwealth Innovation Machine Shop für Hilfe mit rapid Prototyping Gerät danken. Die Autoren möchten auch Danke Cristian Romero-Fuentes des Arbeitskreises Lewinski, Dr. Vitaliy Avrutin, Dr. Dmitry Pestov und die Virginia Commonwealth Nanomaterialien Kern Charakterisierung Anlage für ihre Hilfe mit Partikelcharakterisierung. Diese Arbeit wurde von Startup-Fonds Dr. Lewinski von der College of Engineering an der Virginia Commonwealth University zur Verfügung gestellten unterstützt.

Betreiber tragen persönlichen Schutzausrüstung (z.B. Kittel, Handschuhe, Schutzbrille) beim Ausführen der Schritte 1, 2, 3, 5 und 6.
1. Vorbereitung der Materialien
<ol><li>
Bereiten Sie Materialien für System-Montage und Belichtung Wiederholbarkeit zu gewährleisten.
	<ol>
<li>Stellen Sie sicher, Einsatz neuer oder 70 % igem Ethanol gereinigt ¼" Innendurchmesser leitfähigen Schlauch und ¼" Außendurchmesser Anschlüsse für den Systemaufbau.</li>
		<li>Shop Testmater...

Filterkassetten bieten eine einfache, kostengünstige Methode des Sammelns Aerosole in die Atemzone; jedoch Aerosol Proben extrahiert vom Filter nicht repräsentieren das gesamte Aerosol (d.h. Gase, flüchtigen Stoffen und Partikeln) und daher die Bewertung der damit verbundenen biologischen Wirkungen zu begrenzen. Mit den ersten Entwurf der 37-mm-Filter-Kassette, die PIVEC soll Portabilität zu erhalten und die in Vivo Abscheidung von Partikeln aus Inhalation zu imitieren. Die PIVEC ist deutlich kleiner als die...

Persönlichen Probenahme mittels in-vitro- Techniken könnten umfassende Informationen über die biologischen Wirkungen der Aerosole am Arbeitsplatz. 1 Forderungen an Verunreinigungen in der Luft enthalten Forderungen gegenüber dem chemischen Stoff selbst, um die gesammelten Luftproben getauchten Bedingungen wo das Gas die Zellsuspension intermittierende Exposition mit einem Gerät wie ein Rocker oder direkte eingeführt ist Forderungen an der Grenzfläche Luft-Flüssigkeit (ALI). 2 viele dieser Techniken erfolgt mit Zellen in Suspension oder die Entnahme von Proben vor der Belichtung, von die jede die toxikologische Studie aufgrund von möglichen Änderungen in das Aerosol beeinflussen kann. 3 um diese Änderungen zu vermeiden, kann das Labor zum Feld mit mehreren in-vitro- ALI Kultur Belichtung Systeme gebracht werden, die in der Literatur,4,5,6,7verwendet werden, 8,9,10,11,12,13 aber nur wenige sind im Handel erhältlich. 8 , 9 , 12 dieser Systeme sind oft sperrig, vor allem wenn Sie Instrumente zur Regulierung der Temperatur und Luftfeuchtigkeit von der zellulären Umgebung und der Durchflussmenge des Aerosols Probe. Mithilfe der PIVEC können Aerosol Belichtungen außerhalb einer traditionellen Testumgebung oder innerhalb der Atemzone durchgeführt werden, während der Inhalation Bedingungen imitiert.
Die Bestimmung des Aerosol Deposition in Vitro ist wichtig, die Untersuchung der Auswirkungen auf die Gesundheit durch Inhalation. Der Atemzone ist der Bereich innerhalb 30 cm vom Mund und Nase,14 entscheidend für das Verständnis der Exposition mit Nanopartikeln und für die Anbindung an die biologischen Effekte in der Lunge. 2 oft die Ablagerung auf Zellen einen Wirkungsgrad von Ablagerung, die Partikel abgeschieden auf und von den Zellen geteilt durch die Partikel in die System-6,-15 oder Masse anhand der gleichen Mengen verabreicht aufgenommen bezeichnet. 4 , 16 die aktuellen Methoden zur Messung von Aerosolen in die Atemzone sind Filter basieren, Erfassung von Teilchen innerhalb einer bestimmten Abtastzeitabschnitts und Filter verwenden, um weitere Tests durchzuführen. 17 persönliche Überwachung erfordert ein kleines System, das mit dem Kompromiss von weniger Proben kommt.
Es gibt viele Ansätze, die die gesundheitlichen Auswirkungen von Aussetzung zu ein Aerosol zu bestimmen. Das ALI-Modell ermöglicht das Aerosol direkt auf die Zellen durch die Luft wie ein echter Expositionsszenario verabreicht werden aber es ist kostengünstiger und weniger zeitintensiv als in Vivo Studien während imitiert die Luft-Flüssigkeit Barrieren wie die Augen, Haut und Lunge. Gewachsen auf der ALI Lungenzellen haben die Fähigkeit, erzeugen eine polarisierte Sperrschicht,18,19 die physiologischen Eigenschaften, die das in Vivo Lunge Epithel produziert, einschließlich Schleim und Tensid Produktion in bestimmten ähneln bronchiale oder alveoläre Zelllinien, Zilien schlagen,19 tight Junctions,19,20 und Zelle Polarisation. 18 Änderungen wie diese die zelluläre Reaktion gemessen in Toxizitätsstudien beeinflussen können. 21 darüber hinaus ergibt sich ALI in-vitro- Modell sind oft empfindlicher als Zellen über Aussetzung Modelle22 verfügbar gemacht und sind in der Lage zum Modell akuten in Vivo Inhalation Toxizität. 23 , 24 daher ist ein ALI Belichtungssystem, die Durchführung von Messungen innerhalb der Atemzone kann ein logischer nächster Schritt.
Indem man die Zellen Aerosol direkt an der Quelle der Emission, tritt Untersuchung der Auswirkungen aller Gase, semi-flüchtige Verbindungen und Partikel in die Mischung beteiligt. Wenn die Mischung auf einem Filter gesammelt, die Gase und flüchtige Verbindungen werden nicht erfasst und die ganze Mischung kann nicht untersucht werden. Darüber hinaus kann die Rekonstitution der Partikel in ein Pulver oder eine flüssige Suspension zu Aggregation oder Partikel-Fluid Interaktionen, wie Auflösung, in der liquid Suspension führen. 25 , 26 wenn Aerosol-Partikel in der Flüssigkeit hinzugefügt werden, gibt es ein höheres Potenzial für die Agglomeration,25,27 Bildung eines Proteins Corona,28 oder Interaktion mit Verbindungen in die Flüssigkeit, die Ablagerung beeinflussen können und beeinflussen Sie die biologische Reaktion. 29 , 30
Exposition in der ALI basiert auf drei wesentlichen Aerosol Profile, Wolke Beilegung, parallel Fluss und senkrecht Fluss. Cloud, Abrechnung, verwendet durch Air-Liquid Interface Zelle Exposition (ALICE),4 ist ein Batchsystem einzahlen wo Partikel durch Schwerkraft und Diffusionsprozess absetzen, da das Aerosol als eine Einheit behandelt wird. Parallele Strömung, verwendet durch die elektrostatische Aerosol in-vitro- Belichtung System (Traufe)5 und Multikultur Exposition Kammer (MEC) II,6 ermöglicht die Abscheidung durch die Zugabe von Brownsche Bewegung durch das Strömungsprofil. Senkrecht-Flow, verwendet durch eine Mikrosprayer,7 Nano Nebelkammer für In-vitro-Toxizität (NACIVT),11 und kommerziellen ALI Systeme8,9,10,12, fügt die Impaktion von Partikel in der Ablagerung-Region. Viele dieser Belichtung Systeme sind groß und sperrig, dass überschüssige Systeme für Aerosol Vorklimatisierung, Pumpen für die Strömung, oder sogar Heizung Kammern für die Inkubation der Zellen. Dieser große Größe verringert die Portabilität des Systems. Anstelle von Probenahme direkt an der Quelle der Emission haben diese Systeme oft Proben ins Labor oder Modell Aerosole erzeugt für die Analyse. Die Komplexität des emittierten Aerosols kann in der Übersetzung aus dem Bereich ins Labor verloren. Die PIVEC ist kleiner als die aktuelle Systeme mit einer Außenfläche von ca. 460 cm2 und wiegt nur 60 Gramm, mit thermischen und Feuchtigkeitskontrolle in das System ermöglicht ein sehr portables Gerät integriert. Die geringere Größe und Gewicht lassen das System getroffen, um die Quelle der Exposition, direkte Probenahme bei schönem oder getragen werden.
Die Größe der aktuellen Belichtung Systeme verringert auch die Fähigkeit, Probenahme zur Untersuchung der räumlichen Gradienten in Konzentrationen führen. Diese Auflösung ist Schlüssel bei der Bestimmung von toxikologischer Wirkungen vieler Potenzial Umwelt-und betriebliche Unfallgefährdungen wie Feinstaub Angelegenheit oder am Arbeitsplatz Tätigkeiten Fahrzeugverkehr Auspuff bei Aerosolization auftritt. Sofort nach Emission, dort wird eine räumliche Abweichung in Partikelkonzentration. Dies wächst mit der Zeit wie die Partikel in der Atmosphäre zu verteilen und diese Effekte können je nach den Umgebungsbedingungen wie Temperatur, Druck, Wind und Sonne. Partikel können beginnen zu altern und oxidieren auch einmal abgegebene31,32 und Zerstreuung Preise von der Topographie betroffen sind; höhere Konzentrationen finden Sie in den Schluchten und Tunnel, wo Dispersionseffekte werden verlangsamt, und niedrigere Konzentrationen finden wo gibt es eine große Fläche für Dispersion. 33 diese Steuersatzänderungen Streuung können erhebliche Auswirkungen auf die menschliche Gesundheit haben und können gesehen werden, wenn die Zahl der Asthmatiker Erwachsenen Leben in städtischen und in ländlichen Gebieten zu vergleichen. 34 während viele Belichtung Systeme mehrere Proben gleichzeitig zur Verfügung stellen, sind mehrere Systeme erforderlich mit einer Fülle von Großgeräten räumlichen Auflösung durchführen.
Indem das Labor auf das Feld, kann die Zeit der Analyse mithilfe der ganzen Zelle als Sensor verringert werden. Nach bekannten biologischen Mechanismen und Endpunkte kann bei der Ermittlung der Aerosol-Zusammensetzung und Größe helfen. Aufgrund der langsamen Clearance-Methoden, einschließlich Mucociliary Clearance, Phagozytose und Translokation sind diese Partikel oft Interaktion mit Zellen ca. Tage bis Wochen3 Erzeugung von oxidativen Stress, Entzündungen und sogar Zelltod. Diese biologische Endpunkte können Ausgangspunkte für negativen Ausgang Wege zur kardiovaskulären Erkrankungen oder chronisch obstruktiver Lungenerkrankung sein. Wiemenn Et Al. durchgeführt darüber hinaus eine Reihe von in-vitro- Tests mit Literatur Werte für kurzfristige in Vivo Inhalation Toxizität zu vergleichen. 35 In Vivo Antwort wurde mit zwei der vier positive Ergebnisse aus Tests Zytotoxizität über Laktat-Dehydrogenase Release, oxidativen Stress von Glutathion Reduktion und Wasserstoffperoxid Bildung und Freisetzung und Entzündung von potenziellen vorhergesagt. Das Tumor-Nekrose-Faktor alpha gen. Aus zehn Schichtmaterialien Metalloxide getestet, sechs getestet als aktiv (Titandioxid, Zinkoxid und vier verschiedenen Cerium-Oxid) mit Aufnahmen in Vitro mit Bestätigung in Vivo. 
Zur Untersuchung der Auswirkungen von Aerosolen in einem beruflichen Umfeld entwickelt unser Labor PIVEC für Aufnahmen im Bereich. Darüber hinaus die PIVEC kann für persönliche Probenahme zu überwachen und untersuchen Inhalationsexposition wie die 37-mm-Filter Kassette36 getragen werden oder mehrere Systeme können verwendet werden, um räumliche Auflösung in einem bestimmten Gebiet zu erreichen. In diesem Protokoll wird die Charakterisierung und Einsatz von der PIVEC diskutiert. Nach der Belichtung werden die biologischen Effekte durch Zytotoxizität Assays beobachtet.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Scanning mobility particle sizer (SMPS)</td>
			<td>TSI, Inc.</td>
			<td>3910</td>
			<td>NanoSMPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical particle sizer (OPS)</td>
			<td>TSI, Inc.</td>
			<td>3330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Pipe, 4&#34; Long</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>4830K116</td>
			<td>Standard-Wall 304/304L, Threaded on Both Ends, 1/8 Pipe Size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brass Ball Valve with Lever Handle</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>4112T12</td>
			<td>Compact High-Pressure Rating, 1/8 NPT Female</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel Pipe, 2&#34; Long</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>7753K121</td>
			<td>Standard Wall, Threaded on One End, 1/8 Pipe Size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPA filter</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>09-744-12</td>
			<td>HEPA-Cap Disposable Air Filtration Capsule</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Generator</td>
			<td>PISCO USA</td>
			<td>VCH10-018C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PIVEC</td>
			<td>VCU</td>
			<td></td>
			<td>For design please contact authors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resistive heater</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4&#34; barbed connectors</td>
			<td>Zefon International, Inc.</td>
			<td>459743</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porous tubing</td>
			<td>Scientific Commodities, Inc.</td>
			<td>BB2062-1814A</td>
			<td>Hydrophilic 10 um pores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Battery power bank</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture insert</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>353095</td>
			<td>24 well plate insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Forceps</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>09-753-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer Pipette</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>13-711-27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Fiber Filters</td>
			<td>SKC</td>
			<td>225-7</td>
			<td>Binder-Free Type AE Filter 37 MM 1.00 um pore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Micro Balance</td>
			<td>A&#38;D</td>
			<td>BM-22</td>
			<td>Housed in environmental chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37 mm filter cassette</td>
			<td>SKC</td>
			<td>225-3250</td>
			<td>Filter Cassette Blank, 37 mm, Clear Styrene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable flow vacuum pump</td>
			<td>SKC</td>
			<td>220-5000TC</td>
			<td>AirChek TOUCH, 5 to 5000 mL/min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper Particles</td>
			<td>U.S. Research Materials, Inc.</td>
			<td>US1090</td>
			<td>40 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper Particles</td>
			<td>U.S. Research Materials, Inc.</td>
			<td>US1088</td>
			<td>100 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper Particles</td>
			<td>U.S. Research Materials, Inc.</td>
			<td>US1117M</td>
			<td>800 nm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a new portable in vitro exposure cassette for aerosol sampling

Dieses Protokoll stellt ein neues in-vitro- Belichtung System, getragen wird, einschließlich seiner Charakterisierung und Leistung. Air-Liquid-Schnittstelle (ALI) in-vitro- Belichtung Systeme sind oft groß und sperrig, Transport zum Feld und Betrieb an der Quelle der Emission oder innerhalb der Atemzone erschwert. Durch Miniaturisierung dieser Systeme kann im Labor gebracht werden, zum Feld, Beschleunigung Verarbeitungszeit und Bereitstellung einer angebrachter Belichtungsmethode, die nicht das Aerosol vor der Kontaktaufnahme mit den Zellen verändert wird. Die Portable In-vitro- Exposition Kassette (PIVEC) passt eine 37-mm-Filterkassette für in-vitro- Toxizitätstests außerhalb der traditionellen Labor ermöglichen. Die PIVEC war geprägt mit drei Größen der Kupfernanopartikel Ablagerung Effizienz basierend auf gravimetrische bestimmen und Partikelanalyse Nummer Konzentration. Anfängliche Zytotoxizität Experimente wurden mit exponierten Lungenzellen zu bestimmen, die Fähigkeit des Systems, Partikel zu hinterlegen, unter Beibehaltung der Zellviabilität durchgeführt. Die PIVEC bietet eine ähnliche oder höhere Ablagerung Effizienz im Vergleich zur verfügbaren senkrecht fließen in-vitro- Belichtungsgeräte. Trotz der geringeren Probendurchsatz verleiht der Kleinheit einige Vorteile der aktuellen in-vitro- ALI Belichtung Systeme. Dazu gehören die Fähigkeit, persönliche Überwachung getragen werden, Mobilität aus dem Labor, um die Quelle der Emissionen und die Option zum Einrichten mehrerer Systeme für räumliche Auflösung und gleichzeitig einen niedrigeren Benutzer Kosten. Die PIVEC ist ein System, das Sammeln von Aerosolen im Feld und in die Atemzone auf einem Luft-Schnittstelle, in-vitro- Modell.

Am Arbeitsplatz in-vitro- Toxikologie umfasst Erhaltung zelluläre Lebensfähigkeit während der Durchführung von Aerosol-Exposition. Das PIVEC-System ist in Abbildung 2, unter anderem die Temperatur und feuchte-Steuerung und abgenutzte PIVEC dargestellt. Die Temperatur wurde über eine batteriebetriebene Ohmsche Heizung gepflegt und das Aerosol befeuchtet mit erhöht natürliche Befeuchtung durch eine poröse, benetzte Rohr. In einer kontrollierten...

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A New Portable In Vitro Exposure Cassette for Aerosol Sampling

Eine neue Portable In-vitro- Exposition Kassette für Aerosol-Sampling

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um tragbare zellulären Aerosol Belichtungen durchführen und zelluläre Reaktion zu messen. Die Methode verwendet Zellen, an der Luft-Flüssigkeit-Schnittstelle, imitiert in Vivo Physiologie gewachsen. Zelluläre Reaktion auf Kupfer Nanopartikel Aerosole wurde als oxidativer Stress durch reaktiven Sauerstoff-Spezies-Generation und Zytotoxizität als Laktat-Dehydrogenase Freisetzung beobachtet.

This protocol introduces a new in vitro exposure system, capable of being worn, including its characterization and performance. Air-liquid interface (ALI) ...

Dieses Protokoll ist von Bedeutung, da der PIVEC eine direkte Exposition einer Zellkultur gegenüber realen Aerosolen ermöglicht. Das System kann davor warnen, dieselbe Luft zu beproben, die eine Person atmet, was eine neue Art der Überwachung der Luftqualität ermöglicht. Der Hauptvorteil dieser Technik ist die einfache Erfassung von Aerosolen an kultivierten Lungenzellen an Orten, die für Tischsysteme nicht zugänglich sind, z. B. an der Zulassungsquelle oder innerhalb der Atemzone.Demonstriert wird das Verfahren von Dr.Lynn Secondo, einem Absolventen meines Labors, und Nathaniel Wygal, einem Studenten aus meinem Labor. Für dieses Experiment gespeicherte Prüfmaterialien und kontrollierte Umgebung für 24 Stunden vor dem Test. Um das trockene Dispersionssystem zu montieren, schließen Sie das Kugelhahn an ein Ende des vier Zoll langen, 1/8 großen Gewinderohres an.Dieser dient als Partikeltrichter. Durch das offene Ende des Partikeltrichters in die gewünschte Menge an Kupfer-Nanopartikeln geben. Schließen Sie dann den Partikelbehälter mit einem weiteren Kugelhahn.Schließen Sie das zwei Zoll lange, 1/8 große Rohr an das Ventil an. Legen Sie einen drei Zoll langen, 1/2 Zoll Außendurchmesser Rohre um das Zwei-Zoll-Rohr. Setzen Sie einen HEPA-Filter in den kurzen Schlauch ein, um sicherzustellen, dass die Strömungsrichtung durch das Kugelventil erfolgt.Schließen Sie den Vakuumgenerator mit Dem Gewinde an das andere Kugelhahn an. Schließen Sie dann den Vakuumgenerator an den Lufttank an. Legen Sie einen Außendurchmesser über den Auslass des Vakuumgenerators, um ihn an den Versuchsaufbau anzuschließen.Drehen Sie das Hauptventil und die Reglerventile am Lufttank, um den gewünschten Durchfluss einzustellen. Öffnen Sie das Kugelhahn, am nächsten an HEPA-Filter dann öffnen Sie das Kugelhahn am nächsten zum Vakuumgenerator. Halten Sie sie während der Charakterisierung oder Belichtung offen, bevor Sie sie schließen.Zuerst das Kugelhahn am nächsten an Vakuumgenerator, und dann das Kugelhahn am nächsten HEPA-Filter. Schließen Sie Haupt- und Reglerventile am Lufttank, um den Durchfluss zu stoppen. Zum Aufräumen verwenden Sie 70% Ethanol, um Kugelhähne und Vakuumgenerator zu waschen.Legen Sie Metallrohre in Autoklaven für die Sterilisation. Nach der Kultivierung von Zellen an der Luftflüssigkeitsschnittstelle, lassen Sie Zellen für 24 Stunden ausausgleichen. Um zu montieren, nehmen Sie die PIVEC-Basis mit dem Gut nach oben und verbinden Sie die Zellkultur-Einsatzadapter auf der Oberseite.Fügen Sie mit einer Mikropipette vier Milliliter Zellkulturmedien in den Brunnen der Basis des PIVEC ein. Verwenden Sie eine Pinzette, um den Zellkultureinsatz innerhalb des Adapters zu platzieren. Mit dem schmalen Teil des PIVEC-Oberteils nach oben, schließen Sie sich an den Adapter an.Wickeln Sie PIVEC sorgfältig mit einer einzigen Schicht Klebeband. Drücken Sie, um 37-Millimeter-Kassettenteile auf oberund unten von PIVEC zu verbinden. Legen Sie 1/4 Zoll Stacheladapter in Kassetteneinlass und Auslass.Wrap Resistive Heizung um PIVEC mit den Drähten an der Basis. Band zum Sichern. Wrap PIVEC mit acht Runden Aluminiumfolie für die Isolierung, und sichern Sie mit Klebeband.Schließen Sie einen Außendurchmesser mit einem Außendurchmesser an den Adapter auf der Oberseite des PIVEC an. Poröse Schläuche aus sterilem Wasser entfernen und in Schläuche auf PIVEC legen. Transfersystem zur Rauchhaube und Klemmen des PIVEC am Ringständer und sicher.Schließen Sie PIVEC an das Aerosolsystem an, indem Sie die Rohre mit einem Durchmesser von 1,4 Zoll am Ausgang des Aerosolgenerators mit den porösen Schläuchen verbinden. Schließen Sie den Ausgang des PIVEC an Rohre mit einem Durchmesser von 1/4 Zoll an, die über einen Y-Anschluss mit einem HEPA-Filter und einer Vakuumpumpe verbunden sind. Schalten Sie die Ventile ein und stellen Sie den Pumpendurchfluss auf 0,5 Liter pro Minute ein.Setzen Sie die Zellen zehn Minuten lang Kupfer-Nanopartikeln aus, bevor Sie die Ventile schließen und die Pumpe abschalten. Entfernen Sie PIVEC aus dem Aerosolsystem. Nehmen Sie den Zellkultureinsatz mit einer Pinzette heraus und legen Sie ihn in die sterile Brunnenplatte, um gewünschte biologische Tests zu beginnen.Vorgeschlagene Expositionszeitpunkte, setzen Sie den Einsatz zurück in den Kohlendioxid-Inkubator. Aspirieren Sie Medien von PIVEC mit einem Traber. Verwenden Sie 70% Ethanol, um PIVEC zu waschen und es mit ultraviolettem Licht für mindestens 30 Minuten vor dem nächsten Experiment zu sterilisieren.Der PIVEC wurde mit drei Größen von Kupfer-Nanopartikeln charakterisiert, um die Abscheidungseffizienz zu bestimmen. Erhöhte Ablagerung wird insgesamt für die 24 Brunnen-Design beobachtet, dann die sechs Brunnen-Design. Im Vergleich zu 40 Nanometer und 800 Nanometer Kupferpartikeln nimmt er für 100 Nanometer leicht ab.Die Partikelkonzentration von Kupfer-Nanopartikel-Aerosolen wurde durch filterbasierte Scan-Mobilitätspartikel-Sizer sowie optische Partikel-Sizer-Messungen bestimmt. Die Analyse nach der Exposition kann beschleunigt werden, indem die Dosisbeziehung zwischen dem 37-Millimeter-Filter und dem Zellkultureinsatz bestimmt wird. Der Vergleich zeigt eine starke Korrelation für 800 Nanometer Kupferpartikel mit einem p-Wert von weniger als 0,05.Im Vergleich zu in-vitro-Expositionssystemen mit senkrechtem Fluss in der gesamten Literatur ist die Abscheidungseffizienz des PIVEC über den Bereich der getesteten Partikelgrößen mit den gemeldeten Werten vergleichbar oder erhöht. Das Wichtigste, was man sich merken sollte, ist, dass dieses Protokoll zwar die Verwendung des PIVEC in einer Laborumgebung demonstriert, aber entwickelt wurde, um die zellulären Reaktionen auf Aerosole am Expositionsort zu messen. Bei der Durchführung von Vor-Ort-Tests ist es wichtig, die Abscheidungseffizienz des Testaerosols zu charakterisieren.Die Abscheidungseffizienz bestimmt die abgeschiedene Dosis von Partikeln, denen die Zellen ausgesetzt sind. Zusätzliche biologische Assays können durchgeführt werden, um mehr zelluläre Reaktionsendpunkte aufgrund der Exposition zu untersuchen. Der PIVEC wurde verwendet, um die zelluläre Reaktion aufgrund von Aerosolen zu bewerten, die während 3D-Druckprozessen erzeugt werden, wie z. B. Metallbinder-Jetting und Schmelzfilamentherstellung.Die Verwendung von Nanopartikeln, insbesondere in Aerosolform, kann gefährlich sein, und jegliche Exposition sollte in einer Dunstabzugshaube durchgeführt werden. Die zelluläre Arbeit sollte in einem Biosicherheitsschrank durchgeführt werden.

Research

JoVE Journal

Environment

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Verfahren für Kreuze in<em&gt; Setaria viridis</em&gt;, Ein New Model System für die Gräser

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Forschung

Umwelt

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Entomopathogenic nematodes (a.k.a. EPN) represent a group of soil-inhabiting nematodes that parasitize a wide range of insects. These nematodes belong to ...

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