Name: a new portable in vitro exposure cassette for aerosol sampling
Uploaded: 2019-02-22T13:00:00
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Gli autori vorrei ringraziare Boris Solomonov e la Virginia Commonwealth innovazione macchina negozio per aiutare con la prototipazione rapida del dispositivo. Gli autori inoltre ringraziare Cristian Romero-Fuentes del gruppo Lewinski, Dr. Vitaliy Avrutin, Dr. Dmitry Pestov e la Virginia Commonwealth nanomateriali Core caratterizzazione Facility per il loro aiuto con caratterizzazione delle particelle. Questo lavoro è stato sostenuto dai fondi di avvio forniti al Dr. Lewinski da College of Engineering presso la Virginia Commonwealth University.

Gli operatori devono indossare dispositivi di protezione individuale (camice, guanti, occhiali) quando eseguire passaggi 1, 2, 3, 5 e 6.
1. preparazione dei materiali
<ol><li>
Preparare i materiali per l'assemblaggio del sistema e l'esposizione assicurare la ripetibilità.
	<ol>
<li>Assicurati di uso nuovo o etanolo al 70% pulito ¼" diametro interno conduttivo della tubazione e ¼" diametro esterno connettori per l'assembly di sistema.</li>
		<li>Archivio test materiali inc...

Cartucce filtro forniscono un metodo semplice, poco costoso di raccolta aerosol nella zona di respirazione; Tuttavia, campioni di aerosol estratti dai filtri non rappresentano l'intero aerosol (cioè gas, sostanze volatili e polveri) e di conseguenza limitare la valutazione degli effetti biologici correlati. Usando il disegno iniziale della cassetta filtro 37 mm, il PIVEC è progettato per mantenere la portabilità e imitare la deposizione in vivo delle particelle da inalazione. Il PIVEC è significativamente in...

Campionamento personale utilizzando tecniche in vitro potrebbe fornire informazioni complete per quanto riguarda gli effetti biologici degli aerosol sul posto di lavoro. 1 esposizioni agli agenti inquinanti nell'aria comprendono esposizioni alla sostanza chimica stessa, per i campioni di aria raccolti, sommerso in condizioni dove il gas viene introdotto alla sospensione di cellule, le esposizioni intermittenti usando un dispositivo come un rocker, o diretto esposizioni all'interfaccia aria-liquido (ALI). 2 molte di queste tecniche vengono eseguite con le cellule che crescono in sospensione o il prelievo di campioni prima dell'esposizione, ognuno dei quali può influenzare lo studio tossicologico a causa di potenziali cambiamenti l'aerosol. 3 per evitare questi cambiamenti, il laboratorio può essere portato al campo utilizzando diversi in vitro sistemi di esposizione di cultura ALI che sono utilizzati nella letteratura,4,5,6,7, 8,9,10,11,12,13 tuttavia, pochi sono disponibili in commercio. 8 , 9 , 12 questi sistemi sono spesso ingombranti, soprattutto quando compresi gli strumenti per regolare la temperatura e l'umidità dell'ambiente cellulare e la portata dell'aerosol del campione. Utilizzando il PIVEC, esposizioni di aerosol possono essere eseguite di fuori di un ambiente di laboratorio tradizionale o all'interno della zona di respirazione mentre che imita condizioni di inalazione.
La determinazione di aerosol deposizione in vitro è importante per l'indagine degli effetti sulla salute a causa di inalazione. La zona di respirazione, l'area all'interno di 30 cm dalla bocca e dal naso,14 è fondamentale per comprendere l'esposizione alle nanoparticelle e collegamento agli effetti biologici nei polmoni. 2 spesso, la deposizione sulle cellule è definita come un efficienza di deposizione, le particelle depositate sul e preso dalle cellule divise per le particelle somministrate al sistema6,15 o su una base di massa degli importi stessi. 4 , 16 i metodi correnti per aerosol nella zona di respirazione di misurazione sono filtro basato, catturando particelle su un periodo di campionamento specificato e utilizzando i filtri di condurre ulteriori test. 17 monitoraggio personale richiede un piccolo sistema che viene fornito con il compromesso di meno campioni.
Ci sono molti approcci per determinare gli effetti sulla salute da esposizione ad un aerosol. Il modello di ALI consente per l'aerosol deve essere somministrato direttamente alle cellule attraverso l'aria come in uno scenario di esposizione reale, ma è più conveniente e meno tempo intensivo che in vivo studi mentre che imita le barriere di aria-liquido ad esempio gli occhi, pelle e polmoni. Le cellule del polmone cresciute presso le ALI hanno la capacità di generare un strato di sbarramento polarizzato,18,19 che produce tratti fisiologici che assomigliano in vivo epitelio polmonare, compresa la produzione di muco e di agente tensioattivo in specifici linee cellulari bronchiali o alveolare, ciglia battendo,19 giunzioni strette, polarizzazione delle cellule e20 19,. 18 cambiamenti come questi possono influenzare la risposta cellulare misurata negli studi di tossicità. 21 inoltre, ALI in vitro modello risultati sono spesso più sensibile di cellule esposti via sospensione modelli22 e sono in grado di tossicità da inalazione acuta in vivo modello. 23 , 24 di conseguenza, un sistema di esposizione di ALI che è in grado di eseguire misure all'interno della zona di respirazione è un passaggio naturale.
Esponendo le cellule ad aerosol direttamente alla sorgente di emissione, indagine degli effetti di tutti i gas, composti semi-volatili e particelle coinvolte nella miscela si verifica. Quando la miscela viene raccolto su un filtro, i gas e composti volatili non vengono acquisiti e la miscela intera non può essere studiata. Inoltre, la ricostituzione delle particelle in una polvere o una sospensione liquida può portare all'aggregazione o interazioni particella-fluido, come dissoluzione, in sospensione liquida. 25 , 26 quando le particelle dell'aerosol sono aggiunto al liquido, c'è un maggiore potenziale per agglomerazione,25,27 formazione di una corona di proteina,28 o interazione con i composti nel liquido, che può influenzare la deposizione e influenzare la risposta biologica. 29 , 30
Esposizione presso le ALI si basa su tre principali aerosol profili, nube sedimentazione, parallelo flusso e flusso perpendicolare. Cloud di sedimentazione, utilizzato da aria-liquido Interfaccia cella esposizione (ALICE),4 è un sistema batch dove depositare i particelle attraverso gravitazionale e diffusionale stabilirsi come l'aerosol viene trattato come una singola unità. Flusso parallelo, utilizzato dagli Aerosol elettrostatica in vitro Exposure System (gronda)5 e multicultura esposizione camera (MEC) II,6 consente di deposizione mediante l'aggiunta del moto browniano attraverso il profilo di flusso. Flusso perpendicolare, utilizzato da un microsprayer,7 camera del nebulizzatore Nano per tossicità In Vitro (NACIVT),11 e commerciale ALI sistemi8,9,10,12, aggiunge il compressione di particelle all'interno della regione di deposizione. Molti di questi sistemi di esposizione sono grandi e ingombranti, che richiedono sistemi in eccesso per aerosol pre-condizionamento, pompe per il flusso, o persino il riscaldamento alloggiamenti per l'incubazione delle cellule. Questa grande dimensione diminuisce la portabilità del sistema. Invece di campionamento direttamente alla sorgente di emissione, questi sistemi hanno spesso portati agli aerosol lab o modello generato per analisi di campioni. La complessità dell'aerosol emesso può essere perso nella traduzione dal campo al laboratorio. Il PIVEC è più piccolo rispetto ai sistemi attuali, con una superficie esterna di circa 460 cm2 e pesa solo 60 grammi, con controllo termico e umidità incorporato nel sistema consentendo un dispositivo altamente portatile. La dimensione ridotta e il peso consentono al sistema di essere indossati o adottate per la fonte di esposizione, permettendo il campionamento diretto.
Le grandi dimensioni degli attuali sistemi di esposizione diminuisce anche la capacità di eseguire il campionamento per studiare gradienti spaziale delle concentrazioni. Questa risoluzione è chiave effetti tossicologici di molte potenzialità ambientali e rischi professionali come scarico veicolare particolato materia o sul posto di lavoro attività per determinare dove si verifica la nebulizzazione. Immediatamente post-emissione, là si trasforma in una variazione spaziale nella concentrazione di particelle. Questo cresce con il tempo come le particelle disperdono in tutta l'atmosfera e questi effetti possono modificare sulla base delle condizioni ambientali, quali temperatura, pressione, vento e sole. Le particelle possono cominciare a età e ossidare pure una volta emesso31,32 e tassi di dispersione sono influenzati dalla topografia; concentrazioni più elevate si trovano nel Canyon e tunnel, dove gli effetti di dispersione sono rallentati, e concentrazioni più basse possono essere trovate dove c'è una grande area per dispersione. 33 questi cambiamenti nei tassi di dispersione possono avere effetti significativi sulla salute umana e possono essere visto quando confronta il numero di asmatici adulti che vivono in urbano contro in ambienti rurali. 34 mentre molti sistemi di esposizione forniscono campioni multipli in una sola volta, sistemi multipli sono necessari con un'abbondanza di grandi apparecchiature per eseguire la risoluzione spaziale.
Portando il laboratorio al campo, al momento dell'analisi può essere ridotta utilizzando l'intera cellula come un sensore. Seguendo gli endpoint e i meccanismi biologici noti può aiutare nella determinazione della composizione di aerosol e dimensione. A causa dei metodi di liquidazione lento, tra cui la clearance mucociliare, fagocitosi e traslocazione, queste particelle sono spesso interagendo con le cellule per circa giorni a settimane3 generazione di stress ossidativo, infiammazione e anche la morte delle cellule. Questi endpoint biologici possono essere i punti di partenza per le vie di risultato avverso per malattia cardiovascolare o malattia polmonare ostruttiva cronica. Inoltre, Wiemenn et al. eseguite una serie di saggi in vitro da confrontare con i valori della letteratura per la tossicità a breve termine in vivo per via inalatoria. 35 Risposta in vivo è stato previsto con due dei quattro risultati positivi dai test di citotossicità tramite rilascio di lattato deidrogenasi, stress ossidativo dalla formazione di perossido di idrogeno e riduzione di glutatione e rilascio e infiammazione potenziale da gene dell'alfa di fattore di necrosi tumorale. Fuori dieci ossidi metallici di dimensioni nanometriche testati, sei testato come attivo (ossido di titanio, ossido di zinco e ossido di cerio diversi quattro) con esposizioni in vitro con conferma in vivo. 
Al fine di studiare gli effetti degli aerosol in un ambiente professionale, il nostro laboratorio ha sviluppato il PIVEC per le esposizioni nel campo. Inoltre, il PIVEC può essere indossato per campionamento personale monitorare e studiare l'esposizione di inalazione come il 37 mm filtro cassetta36 o più sistemi possono essere utilizzati per ottenere una risoluzione spaziale all'interno di una determinata area. In questo protocollo, la caratterizzazione e l'uso del PIVEC è discusso. Dopo l'esposizione, gli effetti biologici sono osservati mediante saggi di citotossicità.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Scanning mobility particle sizer (SMPS)</td>
			<td>TSI, Inc.</td>
			<td>3910</td>
			<td>NanoSMPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical particle sizer (OPS)</td>
			<td>TSI, Inc.</td>
			<td>3330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Pipe, 4&#34; Long</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>4830K116</td>
			<td>Standard-Wall 304/304L, Threaded on Both Ends, 1/8 Pipe Size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brass Ball Valve with Lever Handle</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>4112T12</td>
			<td>Compact High-Pressure Rating, 1/8 NPT Female</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel Pipe, 2&#34; Long</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>7753K121</td>
			<td>Standard Wall, Threaded on One End, 1/8 Pipe Size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPA filter</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>09-744-12</td>
			<td>HEPA-Cap Disposable Air Filtration Capsule</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Generator</td>
			<td>PISCO USA</td>
			<td>VCH10-018C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PIVEC</td>
			<td>VCU</td>
			<td></td>
			<td>For design please contact authors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resistive heater</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4&#34; barbed connectors</td>
			<td>Zefon International, Inc.</td>
			<td>459743</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porous tubing</td>
			<td>Scientific Commodities, Inc.</td>
			<td>BB2062-1814A</td>
			<td>Hydrophilic 10 um pores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Battery power bank</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture insert</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>353095</td>
			<td>24 well plate insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Forceps</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>09-753-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer Pipette</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>13-711-27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Fiber Filters</td>
			<td>SKC</td>
			<td>225-7</td>
			<td>Binder-Free Type AE Filter 37 MM 1.00 um pore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra Micro Balance</td>
			<td>A&#38;D</td>
			<td>BM-22</td>
			<td>Housed in environmental chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37 mm filter cassette</td>
			<td>SKC</td>
			<td>225-3250</td>
			<td>Filter Cassette Blank, 37 mm, Clear Styrene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Variable flow vacuum pump</td>
			<td>SKC</td>
			<td>220-5000TC</td>
			<td>AirChek TOUCH, 5 to 5000 mL/min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper Particles</td>
			<td>U.S. Research Materials, Inc.</td>
			<td>US1090</td>
			<td>40 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper Particles</td>
			<td>U.S. Research Materials, Inc.</td>
			<td>US1088</td>
			<td>100 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper Particles</td>
			<td>U.S. Research Materials, Inc.</td>
			<td>US1117M</td>
			<td>800 nm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a new portable in vitro exposure cassette for aerosol sampling

Questo protocollo introduce un nuovo in vitro l'esposizione sistema, capace di essere indossati, compresa la caratterizzazione e la performance. Sistemi di esposizione in vitro interfaccia aria-liquido (ALI) sono spesso grandi e ingombranti, rendendo il trasporto al campo e funzionamento alla sorgente di emissione o all'interno della zona di respirazione difficile. Attraverso la miniaturizzazione di questi sistemi, il laboratorio può essere portato al campo, accelerando il tempo di elaborazione e che forniscono un metodo più appropriato di esposizione che non altera l'aerosol prima di contattare le cellule. Il portatile In vitro l'esposizione Cassette (PIVEC) si adatta una cassetta filtro 37mm per consentire per la tossicità in vitro test di fuori di un ambiente di laboratorio tradizionale. Il PIVEC è stato caratterizzato utilizzando tre dimensioni delle nanoparticelle rame per determinare l'efficienza di deposizione basata su gravimetrico e numero analisi della concentrazione delle particelle. Citotossicità iniziali esperimenti sono stati eseguiti con cellule del polmone esposte per determinare la capacità del sistema di depositare particelle mantenendo attuabilità delle cellule. Il PIVEC fornisce un'efficienza di deposizione simile o maggiore quando si confrontano dispositivi di flusso perpendicolare disponibile in vitro l'esposizione. Nonostante il basso rendimento del campione, le piccole dimensioni dà alcuni vantaggi per la corrente in vitro ALI sistemi di esposizione. Questi includono la capacità di essere indossati per il monitoraggio personale, mobilità dal laboratorio per la fonte di emissione e la possibilità di set-up più sistemi per risoluzione spaziale mantenendo un utente più basso costano. Il PIVEC è un sistema in grado di raccogliere aerosol nel campo e all'interno della zona di respirazione su un modello di aria-interfacciato, in vitro .

Tossicologia occupazionale in vitro coinvolge mantenere vitalità cellulare durante l'esecuzione di esposizione di aerosol. Il sistema di PIVEC è mostrato in Figura 2, tra cui la temperatura e controllo dell'umidità e la PIVEC consumato. La temperatura è stata mantenuta utilizzando un riscaldatore resistivo alimentati a batteria e l'aerosol umidificato utilizzando aumentato umidificazione naturale attraverso un tubo poroso, a contatto col prodotto...

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A New Portable In Vitro Exposure Cassette for Aerosol Sampling

Una nuovo portatile In Vitro l'esposizione Cassette per il campionamento di Aerosol

Qui, presentiamo un protocollo per eseguire le esposizioni portatile cellulare aerosol e misurare la risposta cellulare. Il metodo utilizza cellule, coltivate all'interfaccia aria-liquido, che imita in vivo fisiologia. Risposta cellulare agli aerosol di rame delle nanoparticelle è stato osservato come lo stress ossidativo attraverso la generazione di specie reattive dell'ossigeno e citotossicità come rilascio del lattato deidrogenasi.

This protocol introduces a new in vitro exposure system, capable of being worn, including its characterization and performance. Air-liquid interface (ALI) ...

Questo protocollo è significativo, in quanto il PIVEC consente l'esposizione diretta di una coltura cellulare agli aerosol del mondo reale. Il sistema può essere avvisato di campionare la stessa aria respirata da una persona, consentendo un nuovo tipo di monitoraggio della qualità dell'aria. Il vantaggio principale di questa tecnica è la facilità di catturare aerosol su cellule polmonari coltivate in luoghi inaccessibili ai sistemi da banco, come alla fonte di ammissione o all'interno della zona di respirazione.A dimostrare la procedura saranno la dottoressa Lynn Secondo, una neolaureata del mio laboratorio, e Nathaniel Wygal, uno studente universitario del mio laboratorio. Per questo esperimento, materiali di prova immagazzinati e ambiente controllato per 24 ore prima del test. Per assemblare il sistema di dispersione a secco, collegare la valvola a sfera a un'estremità del tubo filettato lungo 1/8 pollice.Questo serve come tramoggia di particelle. Attraverso l'estremità aperta della tramoggia delle particelle, mettere la quantità desiderata di nanoparticelle di rame. Quindi chiudere la tramoggia delle particelle con un'altra valvola a sfera.Collegare il tubo lungo due pollici e di dimensioni 1/8 alla valvola. Posizionare un tubo di diametro esterno lungo tre pollici e 1/2 pollice attorno al tubo da due pollici. Inserire un filtro HEPA all'interno del tubo corto, assicurandosi che la direzione del flusso sia attraverso la valvola a sfera.Utilizzando la filettatura, collegare il generatore di vuoto all'altra valvola a sfera. Quindi, collegare il generatore di vuoto al serbatoio dell'aria. Mettere tubi di diametro esterno da 1/4 di pollice sopra l'uscita del generatore di vuoto per collegarlo alla configurazione sperimentale.Ruotare la valvola principale e le valvole di regolazione sul serbatoio dell'aria per impostare il flusso desiderato. Aprire la valvola a sfera, più vicina al filtro HEPA, quindi aprire la valvola a sfera più vicina al generatore di vuoto. Tienili aperti durante la caratterizzazione o l'esposizione prima di chiuderli.Prima la valvola a sfera più vicina al generatore di vuoto e poi la valvola a sfera più vicina al filtro HEPA. Chiudere le valvole principali e regolatorie sul serbatoio dell'aria per interrompere il flusso. Per pulire, utilizzare il 70% di etanolo per lavare le valvole a sfera e il generatore di vuoto.Mettere tubi metallici in autoclave per la sterilizzazione. Dopo aver coltivato le cellule all'interfaccia del liquido dell'aria, lasciare che le cellule equilibrano per 24 ore. Per assemblare, prendere la base PIVEC con il pozzo rivolto verso l'alto e collegare l'adattatore di inserimento delle impostazioni cultura delle celle nella parte superiore.Aggiungere quattro millilitri di mezzi di coltura cellulare al pozzo della base del PIVEC utilizzando una micropipetta. Utilizzare le pinzette per posizionare l'inserto delle impostazioni cultura delle celle all'interno dell'adattatore. Con la parte stretta del pezzo superiore PIVEC rivolto verso l'alto, connettersi all'adattatore.Con attenzione, avvolgere PIVEC con un unico strato di nastro adesivo. Spingere per collegare pezzi di cassetta da 37 millimetri nella parte superiore e inferiore del PIVEC. Posizionare adattatori spinati da 1/4 di pollice nell'ingresso e nell'uscita della cassetta.Avvolgere il riscaldatore resistivo intorno a PIVEC con i fili alla base. Nastro da fissare. Avvolgere PIVEC con otto colpi di foglio di alluminio per l'isolamento e fissare con nastro adesivo.Collegare tubi di diametro esterno da 1/2 pollice all'adattatore nella parte superiore del PIVEC. Rimuovere i tubi porosi dall'acqua sterile e posizionarsi all'interno dei tubi sopra PIVEC. Sistema di trasferimento sul cofano dei fumi e bloccare il PIVEC sul supporto dell'anello e fissare.Collegare PIVEC al sistema aerosol collegando i tubi da 1/4 di diametro all'uscita del generatore di aerosol ai tubi porosi. Collegare l'uscita del PIVEC a tubi da 1/4 di diametro collegati a un filtro HEPA e a una pompa per vuoto tramite un connettore Y. Accendere le valvole e impostare la portata della pompa su 0,5 litri al minuto.Esporre le cellule alle nanoparticelle di rame per dieci minuti prima di chiudere le valvole e spegnere la pompa. Rimuovere PIVEC dal sistema aerosol. Estraere l'inserto di coltura cellulare utilizzando una pinzetta e posizionarlo nella piastra sterile del pozzo per iniziare i saggi biologici desiderati.Punti di esposizione proposti, rimettere l'inserto nell'incubatore di anidride carbonica. Aspirare i supporti da PIVEC utilizzando un contagocce. Utilizzare il 70% di etanolo per lavare il PIVEC e sterilizzarlo con luce ultravioletta per almeno 30 minuti prima dell'esperimento successivo.Il PIVEC è stato caratterizzato usando tre dimensioni di nanoparticelle di rame per determinare l'efficienza della deposizione. Una maggiore deposizione si osserva complessivamente per il design dei 24 pozzi, quindi il design dei sei pozzi. Diminuisce leggermente per 100 nanometri rispetto alle particelle di rame da 40 nanometri e 800 nanometri.La concentrazione del numero di particelle degli aerosol di nanoparticelle di rame è stata determinata dal sizer di particelle di mobilità a scansione a base di filtro, così come dalle misurazioni del sizer di particelle ottiche. L'analisi post-esposizione può essere accelerata determinando la relazione di dose tra il filtro da 37 millimetri e l'inserto di coltura cellulare. Il confronto mostra una forte correlazione per particelle di rame di 800 nanometri con un valore p inferiore a 0,05.Rispetto ai sistemi di esposizione in vitro a flusso perpendicolare in tutta la letteratura, l'efficienza di deposizione del PIVEC nell'intervallo delle dimensioni delle particelle testate è paragonabile o aumentata rispetto ai valori riportati. La cosa più importante da ricordare è che sebbene questo protocollo dimostri l'uso del PIVEC in un ambiente di laboratorio, è stato progettato per misurare le risposte cellulari agli aerosol nel sito di esposizione. Quando si eseguono test in loco, è importante caratterizzare l'efficienza di deposizione dell'aerosol di prova.L'efficienza di deposizione determina la dose depositata di particelle a cui sono esposte le cellule. Ulteriori test biologici possono essere eseguiti per indagare più endpoint di risposta cellulare a causa dell'esposizione. Il PIVEC è stato utilizzato per valutare la risposta cellulare dovuta agli aerosol generati durante i processi di stampa 3D, come il getto del legante metallico e la fabbricazione di filamenti fusi.L'uso di nanoparticelle, in particolare in forma di aerosol, può essere pericoloso e qualsiasi esposizione deve essere eseguita in una cappa aspirante. Il lavoro cellulare dovrebbe essere fatto in un armadietto di bio-sicurezza.

Research

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