Name: expansion of two-dimension electrospun nanofiber mats into three-dimension scaffolds
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Expansion of Two-dimension Electrospun Nanofiber Mats into Three-dimension Scaffolds at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door subsidies van het nationale Institute of General Medical Science (NIGMS) op de NIH (2P 20 GM103480-06 en 1R01GM123081 naar J.X.), de Otis Glebe Medical Research Foundation, NE LB606 en opstarten van fondsen van de Universiteit van Nebraska Medical, Inc. Centrum.

Alle in vivo procedures zoals hieronder beschreven werden goedgekeurd door het Comité van de IACUC aan de Universiteit van Nebraska Medical Center.
1. Prepareer de oplossingen voor standaard Electrospinning
<ol><li>Los in een glazen buis van 20 mL, 2 g poly(ε-caprolactone) (PCL, Mw = 80 kDa) in een oplosmiddel mengsel van dichloormethaan (DCM) en N, N-dimethylformamide (DMF) met een rantsoen van 4:1 (v/v) met een concentratie van 10% (m/v). Let op: Ingang DCM en DMF in een goed...

<ol>
	<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+electrospun+nanofibers+for+wound+healing.">Recent advances in electrospun nanofibers for wound healing.</a> Nanomedicine. 12 (11), 1335-1352 (2017).</li><li>Khandalavala, K., Jiang, J., Shuler, F. D., Xie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospun+Nanofiber+Scaffolds+with+Gradations+in+Fiber+Organization.">Electrospun Nanofiber Scaffolds with Gradations in Fiber Organization.</a> Journal of Visualized Experiments. (98), e52626 (2015).</li><li>Xie, J., Li, X., Xia, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Put+electrospun+nanofibers+to+work+for+biomedical+research.">Put electrospun nanofibers to work for biomedical research.</a> Macromolecular Rapid Communication. 29 (22), 1775-1792 (2008).</li><li>Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanofiber+membranes+with+controllable+microwells+and+structural+cues+and+their+use+in+forming+cell+microarrays+and+neuronal+networks.">Nanofiber membranes with controllable microwells and structural cues and their use in forming cell microarrays and neuronal networks.</a> Small. 7 (3), 293-297 (2011).</li><li>Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radially+aligned,+electrospun+nanofibers+as+dural+substitutes+for+wound+closure+and+tissue+regeneration+applications.">Radially aligned, electrospun nanofibers as dural substitutes for wound closure and tissue regeneration applications.</a> ACS. 4 (9), 5027-5036 (2010).</li><li>Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Aligned-to-random"+nanofiber+scaffolds+for+mimicking+the+structure+of+the+tendon-to-bone+insertion+site.">"Aligned-to-random" nanofiber scaffolds for mimicking the structure of the tendon-to-bone insertion site.</a> Nanoscale. 2 (6), 923-926 (2010).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanded+3D+Nanofiber+Scaffolds:+Cell+Penetration.">Expanded 3D Nanofiber Scaffolds: Cell Penetration.</a> Neovascularization, and Host Response. Advanced Healthcare Materials. 5 (23), 2993-3003 (2016).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanding+Two-Dimensional+Electrospun+Nanofiber+Membranes+in+the+Third+Dimension+by+a+Modified+Gas-Foaming+Technique.">Expanding Two-Dimensional Electrospun Nanofiber Membranes in the Third Dimension by a Modified Gas-Foaming Technique.</a> ACS Biomaterials Science &amp; Engineering. 10 (1), 991-1001 (2015).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CO2-expanded+nanofiber+scaffolds+maintain+activity+of+encapsulated+bioactive+materials+and+promote+cellular+infiltration+and+positive+host+response.">CO2-expanded nanofiber scaffolds maintain activity of encapsulated bioactive materials and promote cellular infiltration and positive host response.</a> Acta Biomaterialia. 68, 237-248 (2018).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanofiber-based+sutures+induce+endogenous+antimicrobial+peptide.">Nanofiber-based sutures induce endogenous antimicrobial peptide.</a> Nanomedicine. 12 (10), 2597-2609 (2017).</li><li>Dhand, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bio-inspired+crosslinking+and+matrix-drug+interactions+for+advanced+wound+dressings+with+long-term+antimicrobial+activity.">Bio-inspired crosslinking and matrix-drug interactions for advanced wound dressings with long-term antimicrobial activity.</a> Biomaterials. 138, 153-168 (2017).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+sustained+delivery+of+25-hydroxyvitamin+D3+for+production+of+antimicrobial+peptides.">Local sustained delivery of 25-hydroxyvitamin D3 for production of antimicrobial peptides.</a> Pharmaceutical Research. 32 (9), 2851-2862 (2015).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1&#945;,+25-dihydroxyvitamin+D3-eluting+nanofibrous+dressings+induce+endogenous+antimicrobial+peptide+expression.">1&#945;, 25-dihydroxyvitamin D3-eluting nanofibrous dressings induce endogenous antimicrobial peptide expression.</a> Nanomedicine (Lond). 13 (12), 1417-1432 (2018).</li><li>Ma, B., Xie, J., Jiang, J., Shuler, F. D., Bartlett, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+nanofiber+scaffolds+for+orthopedic+tissue+repair+and+regeneration.">Rational design of nanofiber scaffolds for orthopedic tissue repair and regeneration.</a> Nanomedicine. 8 (9), 1459-1481 (2013).</li></ol>

Het omzetten van traditionele 2D electrospun nanofiber matten in uitgebreide 3D steigers via CO2 drukverlaging werd onderzocht. Traditionele 2D nanofiber matten zijn met succes uitgebreide via subkritische CO2 vloeistof. De kritische stappen zijn de matten knippen zonder vervormen de randen te fabriceren 2D nanofiber matten onder een geoptimaliseerde voorwaarde (bv. met behulp scherpe chirurgische schaar). Deze CO2-uitgebreide nanofiber steigers hebben vele voor...

Het concept van de ontwikkeling van een synthetische steiger die kan worden geïmplanteerd in patiënten om hulp bij het weefselherstel en regeneratie is dat het gebied van regeneratieve geneeskunde voor decennia heeft doordrongen. De ideale synthetische steiger serveert voor het opwekken van cel migratie vanuit het omliggende gezonde weefsel, biedt een architectuur voor cel zaaien, hechting, signalering, proliferatie en differentiatie, ondersteunt vascularisatie, voorziet in voldoende oxygenatie en voeding levering, en host immuun activiteit om succes te verzekeren na implantatie1bevordert. Bovendien, kan het worden gebruikt als drager voor het insluiten van antimicrobiële moleculen bij wond genezing van1,3,6,7,8,9. De mogelijkheid om controle van de temporele vrijlating van deze biologische moleculen uit de synthetische steiger is een ander gewenst kenmerk dat wordt beschouwd als wanneer engineering steigers1.
Electrospinning is een goed benutte techniek voor het produceren van nanofiber steigers1,2,3,4,5,6. Eerdere pogingen om te maken van een steiger van de nanofiber zoals de hier besproken zijn gedaan met wisselend succes. Traditionele nanofiber steigers hebben echter slechts beperkt capaciteiten om deze doelen te bereiken. Traditionele nanofiber steigers zijn meestal twee-dimensionale matten1,3. Deze nonexpanded steigers zijn dichtbevolkte vol met kleine porie maten; Dit beperkt cel infiltratie, migratie en differentiatie als het is niet bevorderlijk voor een omgeving die vergelijkbaar genoeg zijn met die gevonden in vivo1,7,8,9. Om deze reden zijn de nieuwere technieken van 3D electrospun nanofiber steiger voorbereiding vastgesteld tot wijziging van de inherente gebreken die met 2D nanofiber matten komen. Deze technieken resulteren in 3D steigers; ze hebben echter slechts beperkt toepasbaarheid te wijten aan de productiemethoden die een waterige oplossing vereisen en trekkers van procedures. Deze verwerking resulteert in de willekeurige verdeling van de nanofibers zonder beperkte organisatie, de juiste dikte, en/of de gewenste porositeit te bieden van de adequate nanotopographic signalen die nodig voor cel migratie en proliferatie zijn. Deze factoren leiden tot de vorige 3D electrospun nanofiber steigers die geen voldoende mimicry van levende weefsels1,,7,,8,9.
Meer recente pogingen tot ontwikkeling van een uitgebreide, 3D steiger met betere biomimicry van extracellulaire matrix (ECM) zijn uitgevoerd met behulp van een waterige natrium natriumboorhydride (NaBH4) oplossing behandeling en vooraf ontworpen mallen om te helpen bij een betere controle van de vorm van de daaruit voortvloeiende steigerwerk7,8. Deze methode is echter niet ideaal aangezien het vereist het gebruik van waterige oplossingen, chemische reacties en trekkers die kan interfereren met polymeren en een ingekapselde biomoleculen die oplosbaar is in water. De gebruikte additieven kunnen ook bijwerkingen veroorzaken tijdens weefsel regeneratie8,9. De CO2 expansie methode in dit artikel beschreven sterk vermindert de verwerkingstijd, elimineert de noodzaak voor waterige oplossingen en behoudt het bedrag en de functionaliteit van biologisch actieve moleculen in grotere mate dan de eerder gevestigde methodes9.
In eerdere studies, antibiotica, zilver, 1α, 25 dihydroxyvitamin D3en antimicrobiële peptide werden LL-37 geladen in de steigers van nanofiber individueel als in combinatie te onderzoeken van het potentieel van deze steigers agenten vrijgeven verdere steun in de wond genezing9,10,12,13. Om aan te tonen deze methode van nanofiber steiger expansie, zal de Coumarine 6, een fluorescente kleurstof, in de steiger om aan te tonen van het potentieel van de steiger te embedding met diverse gewenste verbindingen worden geladen. Deze methode van uitgebreide nanofiber steiger fabricage in combinatie met ingekapselde bioactieve moleculen houdt groot potentieel in weefselregeneratie, wondgenezing, het maken van 3D weefsel modellen en de actuele levering van drugs.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Polycaprolactone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>440744</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N-Dimethlyformamide</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D-199-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>AC61093-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coumarin 6</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>546283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotating Steel Drum</td>
			<td>customized</td>
			<td></td>
			<td>This serves as a collector during electrospinning.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-831-200</td>
			<td>Coaxial spinning requires two single syringe pumps.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Revolver</td>
			<td>Lab Net International</td>
			<td>H5600</td>
			<td>Adjustable lab rotator for mixing solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needle (27G x 1 1/2&#34;)</td>
			<td>EXCELINT International Co</td>
			<td>26426</td>
			<td>This is part of the example customized coaxial nozzel shown.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needle (21G x 1 1/2&#34;)</td>
			<td>EXCELINT International Co</td>
			<td>26416</td>
			<td>This is part of the example customized coaxial nozzel shown.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Voltage DC Power Supply</td>
			<td>Gamma High Voltage Research</td>
			<td>ES30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope</td>
			<td>FEI</td>
			<td>Nova 2300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Imager 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LL 37 ELISA Kit</td>
			<td>Hycult Biotech</td>
			<td>HK321-02</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

expansion of two-dimension electrospun nanofiber mats into three-dimension scaffolds

Electrospinning is de gewenste technologie in het produceren van een synthetische, functionele Steiger als gevolg van de biomimicry extracellulaire matrix en de bestrijding van het gemak van samenstelling, structuur en diameter van vezels. Echter, ondanks deze voordelen, traditionele electrospun nanofiber steigers komen met beperkingen waaronder ongeorganiseerd nanofiber oriëntatie, lage porositeit, kleine poriegrootte en vooral tweedimensionale matten. Als zodanig, is er een grote behoefte aan de ontwikkeling van een nieuw proces voor het fabriceren van electrospun nanofiber steigers die de bovenstaande beperkingen kunnen overwinnen. Hierin is een nieuwe en eenvoudige methode geschetst. Een traditionele 2D nanofiber mat wordt omgezet in een 3D steiger met gewenste dikte, kloof afstand, porositeit en nanotopographic signalen voor cel zaaien en proliferatie door de drukverlaging subkritische CO2 vloeistof. Naast het bieden van een steiger voor weefselregeneratie optreden, biedt deze methode ook de mogelijkheid om in te kapselen bioactieve moleculen zoals antimicrobiële peptiden voor lokale drug delivery. De CO2 uitgebreid nanofiber steigers houden groot potentieel in weefselregeneratie, wondgenezing, 3D weefsel modellering en actuele drug delivery.

De werkzaamheid van traditionele 2D electrospun nanofiber matten uitbreiden naar 3D steigers via drukverlaging subkritische CO2 vloeistof werd aangetoond in verschillende capaciteiten: de dikte van de steigers verhoogd van 1 mm wanneer onbehandeld tot 2.5 mm en 19,2 mm met één en twee CO2 behandelingen, respectievelijk (figuur 3A-C). Het kenmerk porositeit-a van de architectuur van essentieel belang is voor de cel zaai...

Watch this Scientific Journal Video about Expansion of Two-dimension Electrospun Nanofiber Mats into Three-dimension Scaffolds at JoVE.com

Expansion of Two-dimension Electrospun Nanofiber Mats into Three-dimension Scaffolds

Dit artikel demonstreert de techniek van het uitbreiden van een traditionele, twee-dimensie (2D) electrospun nanofiber mat in een drie-dimensie (3D) steiger door de drukverlaging subkritische CO2 vloeistof. Deze augmented steigers zijn 3D, nauw mimic cellulaire nanotopographic signalen, en het behoud van de functies van biologische moleculen ingekapseld binnen de nanofibers.

Expansie van twee-dimensie Electrospun Nanofiber matten in de steigers van de drie-dimensie

Electrospinning has been the preferred technology in producing a synthetic, functional scaffold due to the biomimicry to extracellular matrix and the ease ...

Dit protocol rapporteerde de transformatie van traditionele elektrospun nanovezelmembranen van 2D naar 3D, via depressurisatie van subkritische CO2-vloeistof die niet eerder werd gerealiseerd. Deze methode elimineert veel problemen in verband met eerdere benaderingen, met inbegrip van het gebruik van waterige oplossingen en chemische reacties, meerdere stapprocessen, verlies van activiteit van ingekapselde biologische moleculen, en beperkingen van hydrofobe polymeren. Het aantonen van deze procedure is Shixuan Chen, een postdoc van mijn lab.Los in een 20 mililitre glazen buis twee gram PCL op in een oplosmiddelmengsel van dichloormethaan en DMF, met een vier-tegen-een verhouding bij een concentratie van 10 procent. Plaats de glazen buis in een lab rotator totdat de oplossing duidelijk wordt. De oplossing kan mengen 's nachts.Om het elektrospiningapparaat op te zetten, voegt u eerst de PCL-oplossing toe aan een spuit van 20 milliliter met een 21-meter stompe naald. Zorg ervoor dat er geen lucht in de spuit, en gescheiden buizen. Plaats een roterende stalen trommel met de grondcollector 12 centimeter van de naaldpunt.Sluit met behulp van alligatorclips de gelijkstroom hoogspanningsvoeding aan op de naald en zorg ervoor dat de collector aan de grond wordt gegrond. Voor de 20 milliliter pcl-oplossing, stel de parameter van de spuitpomp met behulp van een diameter van 20,27 millimeter, en een stroomsnelheid van 0,5 milliliter per uur. Controleer of de druppels zich op het puntje van de naald vormen.Breng een elektrisch potentieel van 20 kilovolt aan tussen de spinneret en een grondcollector op 20 centimeter afstand van de spinneret. Verzamel de uitgelijnde nanovezelmatten in een trommel en draai bij 2.000 RPM. Verzamel de PCL nanofiber matten zodra ze een dikte van ongeveer een millimeter bereiken.Dompel de PCL nanofibermatten gedurende vijf minuten onder in vloeibare stikstof. Houd de PCL nanofibermatten in vloeibare stikstof en punch PCL nanofibermatten met een punch met een diameter van 0,5 millimeter. Plaats de PCL nanofibermatten gedurende vijf minuten in vloeibare stikstof.Snijd de matten in een centimeter door een centimeter vierkanten met behulp van scherpe chirurgische schaar, terwijl ondergedompeld in vloeibare stikstof om vervorming van de randen te voorkomen. Doe de snijmat in een 30 milliliter centrifugebuis met ongeveer een gram droogijs. Sluit het deksel goed af en laat het droge ijs veranderen in vloeibare kooldioxide.Zodra de vloeistof zich in de buis heeft gevormd, laat u de druk snel los door de dop te openen. Verwijder en observeer de opgeblazen steiger van de buis. Plaats de steiger in een nieuwe centrifuge buis met droog ijs, en herhaal util de wens dikte wordt bereikt.Steriliseren van de uitgebreide nanovezel steigers in ethyleenoxide voorafgaand aan incubatie met cellen. De effectiviteit van het uitbreiden van traditionele 2D electrospun nanofiber matten in 3D steigers via depressurisatie van subkritische CO2-vloeistof wordt getoond aan de linkerkant na de tweede behandeling. De dikte van het schavot steeg van één millimeter wanneer onbehandeld tot 2,5 millimeter met één CO2-behandeling, tot 19,2 millimeter met twee CO2-behandelingen.De porositeit van de steigers steeg van 79,5 procent voor de onbehandelde matten, naar 92,1 procent na de eerste behandeling, tot 99,0 procent na de tweede behandeling. Dit is belangrijk omdat de mate van celpenetratie in een steiger, en dus de werkzaamheid ervan om regeneratie te induceren, grotendeels afhankelijk is van de porositeit. SEM-beelden laten zien dat de dichtbevolkte kuitbeenstructuur van onbehandelde 2D-matten werd omgezet in geordende, gelaagde structuren met uitgelijnde nanovezels na uitbreiding met CO2.In Vevo studies werden uitgevoerd door onderhuidse implantatie van CO2-uitgebreide nano vezel steigers met vierkante arrayed gaten aan ratten. Dit zorgt voor cellulaire migratie en proliferatie in de gaten, evenals verdere infiltratie binnen de nanovezellagen die zijn ontstaan tijdens de uitbreiding. Van week een tot vier na de implantatie, de uitgebreide steigers toonde een aanzienlijke toename van het aantal bloedvaten gevormd, en multinucleated gigantische cellen in vergelijking met een traditionele nano vezel mat.Na deze procedure kunnen verschillende moleculen, waaronder groeifactoren, aminomodulerende verbindingen, hemostatische middelen en antimicrotubaire middelen, in de nanovezelmatten worden opgenomen en worden uitgebreid in subkritische CO2-vloeistof. Dergelijke gefunctionaliseerde geëxfunctioneerde nanovezelsteigers zouden kunnen worden gebruikt om nieuwe vragen op andere wetenschappelijke gebieden te onderzoeken, zoals hemostase, preventie en behandeling van infectie, immunologie en weefselregeneratie en reparatie. Organische oplosmiddelen zijn giftig en moeten worden behandeld in een chemische kap.Bovendien moet een container die de hoge druk van subkritische CO2-vloeistof kan verdragen, worden gebruikt voor de uitzetting.

Research

JoVE Journal

Genetics

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection van CRISPR/Cas9 eiwit in Channel Catfish, Ictalurus punctatus, embryo's voor Gene Editing

The complete genome of the channel catfish, Ictalurus punctatus, has been sequenced, leading to greater opportunities for studying channel catfish gene ...

Canalostomy As a Surgical Approach to Local Drug Delivery into the Inner Ears of Adult and Neonatal Mice

Canalostomy als een chirurgische benadering van lokale Drug Delivery tot de Inner oren van volwassen en neonatale muizen

Local delivery of therapeutic drugs into the inner ear is a promising therapy for inner ear diseases. Injection through semicircular canals (canalostomy) ...

Testing the Role of Multicopy Plasmids in the Evolution of Antibiotic Resistance

De rol van zelfkopiërende plasmiden testen in de ontwikkeling van resistentie tegen antibiotica

Multicopy plasmids are extremely abundant in prokaryotes but their role in bacterial evolution remains poorly understood. We recently showed that the ...

A Simple, Rapid, and Quantitative Assay to Measure Repair of DNA-protein Crosslinks on Plasmids Transfected into Mammalian Cells

Een eenvoudige, snelle en kwantitatieve bepaling aan maatregel reparatie van DNA-proteïne Crosslinks op plasmiden Transfected in zoogdiercellen

The purpose of this method is to provide a flexible, rapid, and quantitative technique to examine the kinetics of DNA-protein crosslink (DPC) repair in ...

Lentiviral Vector Platform for the Efficient Delivery of Epigenome-editing Tools into Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Disease Models

Lentivirale Vector Platform voor de efficiënte levering van Epigenome-bewerkingsgereedschap in mens geïnduceerde pluripotente stamcel afkomstige ziekte modellen

The use of hiPSC-derived cells represents a valuable approach to study human neurodegenerative diseases. Here, we describe an optimized protocol for the ...

Generation of Tumor Organoids from Genetically Engineered Mouse Models of Prostate Cancer

Generatie van tumor Organoïden uit genetisch gemanipuleerde Muismodellen van prostaatkanker

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) ...

Introducing a Gene Knockout Directly Into the Amastigote Stage of Trypanosoma cruzi Using the CRISPR/Cas9 System

Introducing a Gene Knockout Directly Into the Amastigote Stage of Trypanosoma cruzi Using the CRISPR/Cas9 System

Introductie van een gen knock-out direct in het Amastigote stadium van Trypanosoma cruzi met behulp van het crispr/Cas9 systeem

Trypanosoma cruzi is a pathogenic protozoan parasite that causes Chagas&#8217; disease mainly in Latin America. In order to identify a novel drug target ...

Use of Drosophila S2 Cells for Live Imaging of Cell Division

Use of Drosophila S2 Cells for Live Imaging of Cell Division

Gebruik van Drosophila S2-cellen voor Live beeldvorming van celdeling

Drosophila S2 cells are an important tool in studying mitosis in tissue culture, providing molecular insights into this fundamental cellular process in a ...

Characterization of Functionally Associated miRNAs in Glioblastoma and their Engineering into Artificial Clusters for Gene Therapy

Karakterisatie van functioneel geassocieerde Mirna's in glioblastoma en hun engineering in kunstmatige clusters voor gentherapie

The biological relevance of microRNAs (miRNAs) in health and disease significantly relies on specific combinations of many simultaneously deregulated ...

Use of Freeze-thawed Embryos for High-efficiency Production of Genetically Modified Mice

Gebruik van gevriesde embryo's voor hoogrendementproductie van genetisch gemodificeerde muizen

The use of genetically modified (GM) mice has become crucial for understanding gene function and deciphering the underlying mechanisms of human diseases. ...