Name: expansion of two-dimension electrospun nanofiber mats into three-dimension scaffolds
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
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Diese Arbeit wurde unterstützt durch Zuschüsse aus dem National Institute of General Medical Science (NIGMS) an den NIH (2P-20 GM103480-06 und 1R01GM123081, J.X), Otis Glebe Medical Research Foundation, NE LB606 und Start-up-Fonds von der University of Nebraska Medical Zentrum.

Alle in-Vivo -Verfahren unten umrissen wurden vom IACUC an der University of Nebraska Medical Center genehmigt.
1. bereiten Sie die Lösungen für Standard Elektrospinnen
<ol><li>In einer Glasröhre 20 mL auflösen 2 g poly(ε-caprolactone) (PCL, Mw = 80 kDa) in einem Lösungsmittelgemisch von Dichlormethan (DCM) und N, N-Dimethylformamid (DMF) mit einem 4:1-Verhältnis (V/V) in einer Konzentration von 10 % (w/V). Achtung: Griff DCM und DMF in einer gut belüfteten Kapuze, Belast...

<ol>
	<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+electrospun+nanofibers+for+wound+healing.">Recent advances in electrospun nanofibers for wound healing.</a> Nanomedicine. 12 (11), 1335-1352 (2017).</li><li>Khandalavala, K., Jiang, J., Shuler, F. D., Xie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospun+Nanofiber+Scaffolds+with+Gradations+in+Fiber+Organization.">Electrospun Nanofiber Scaffolds with Gradations in Fiber Organization.</a> Journal of Visualized Experiments. (98), e52626 (2015).</li><li>Xie, J., Li, X., Xia, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Put+electrospun+nanofibers+to+work+for+biomedical+research.">Put electrospun nanofibers to work for biomedical research.</a> Macromolecular Rapid Communication. 29 (22), 1775-1792 (2008).</li><li>Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanofiber+membranes+with+controllable+microwells+and+structural+cues+and+their+use+in+forming+cell+microarrays+and+neuronal+networks.">Nanofiber membranes with controllable microwells and structural cues and their use in forming cell microarrays and neuronal networks.</a> Small. 7 (3), 293-297 (2011).</li><li>Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radially+aligned,+electrospun+nanofibers+as+dural+substitutes+for+wound+closure+and+tissue+regeneration+applications.">Radially aligned, electrospun nanofibers as dural substitutes for wound closure and tissue regeneration applications.</a> ACS. 4 (9), 5027-5036 (2010).</li><li>Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Aligned-to-random"+nanofiber+scaffolds+for+mimicking+the+structure+of+the+tendon-to-bone+insertion+site.">"Aligned-to-random" nanofiber scaffolds for mimicking the structure of the tendon-to-bone insertion site.</a> Nanoscale. 2 (6), 923-926 (2010).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanded+3D+Nanofiber+Scaffolds:+Cell+Penetration.">Expanded 3D Nanofiber Scaffolds: Cell Penetration.</a> Neovascularization, and Host Response. Advanced Healthcare Materials. 5 (23), 2993-3003 (2016).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanding+Two-Dimensional+Electrospun+Nanofiber+Membranes+in+the+Third+Dimension+by+a+Modified+Gas-Foaming+Technique.">Expanding Two-Dimensional Electrospun Nanofiber Membranes in the Third Dimension by a Modified Gas-Foaming Technique.</a> ACS Biomaterials Science &amp; Engineering. 10 (1), 991-1001 (2015).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CO2-expanded+nanofiber+scaffolds+maintain+activity+of+encapsulated+bioactive+materials+and+promote+cellular+infiltration+and+positive+host+response.">CO2-expanded nanofiber scaffolds maintain activity of encapsulated bioactive materials and promote cellular infiltration and positive host response.</a> Acta Biomaterialia. 68, 237-248 (2018).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanofiber-based+sutures+induce+endogenous+antimicrobial+peptide.">Nanofiber-based sutures induce endogenous antimicrobial peptide.</a> Nanomedicine. 12 (10), 2597-2609 (2017).</li><li>Dhand, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bio-inspired+crosslinking+and+matrix-drug+interactions+for+advanced+wound+dressings+with+long-term+antimicrobial+activity.">Bio-inspired crosslinking and matrix-drug interactions for advanced wound dressings with long-term antimicrobial activity.</a> Biomaterials. 138, 153-168 (2017).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+sustained+delivery+of+25-hydroxyvitamin+D3+for+production+of+antimicrobial+peptides.">Local sustained delivery of 25-hydroxyvitamin D3 for production of antimicrobial peptides.</a> Pharmaceutical Research. 32 (9), 2851-2862 (2015).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1&#945;,+25-dihydroxyvitamin+D3-eluting+nanofibrous+dressings+induce+endogenous+antimicrobial+peptide+expression.">1&#945;, 25-dihydroxyvitamin D3-eluting nanofibrous dressings induce endogenous antimicrobial peptide expression.</a> Nanomedicine (Lond). 13 (12), 1417-1432 (2018).</li><li>Ma, B., Xie, J., Jiang, J., Shuler, F. D., Bartlett, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+nanofiber+scaffolds+for+orthopedic+tissue+repair+and+regeneration.">Rational design of nanofiber scaffolds for orthopedic tissue repair and regeneration.</a> Nanomedicine. 8 (9), 1459-1481 (2013).</li></ol>

Traditionelle 2D Electrospun Nanofaser Matten verwandeln in erweiterten 3D Gerüste, die über CO2 Druckentlastung untersucht wurde. Traditionelle 2D Nanofaser-Matten sind erfolgreich erweiterte über unterkritischen CO2 Flüssigkeit. Die entscheidenden Schritte sind 2D Nanofaser Matten unter einer optimierten Zustand herzustellen und schneiden Sie die Matten ohne Verformung der Kanten (zB. mit scharfen chirurgische Schere). Diese CO-2-erweiterte Nanofaser Scaff...

Das Konzept für die Entwicklung einer synthetischen Gerüst, das Patienten zur Gewebereparatur und Regeneration Unterstützung implantiert werden kann ist eine, die dem Gebiet der regenerativen Medizin seit Jahrzehnten durchdrungen hat. Das ideale synthetischen Gerüst dient der Zellwanderung aus den umliegenden gesunden Gewebes zu induzieren, bietet eine Architektur für Zelle Aussaat, Adhäsion, Signalisierung, Proliferation und Differenzierung, unterstützt Vaskularisierung, ermöglicht eine ausreichende Sauerstoffzufuhr und Ernährung-Lieferung, und fördert die Host Immunaktivität um Erfolg nach Implantation1zu gewährleisten. Darüber hinaus kann es als Träger verwendet werden für die Einbettung antimikrobielle Moleküle gerne bei Wundheilung1,3,6,7,8,9. Die Fähigkeit zur Steuerung der zeitlichen Freisetzung dieser biologischen Moleküle aus synthetischen Gerüst ist ein weiteres wünschenswert Attribut, das gilt als Engineering1Gerüste.
Elektrospinnen wurde eine gut genutzte Technik zur Herstellung von Nanofaser Scaffolds1,2,3,4,5,6. Frühere Versuche, ein Nanofaser-Gerüst wie die hier diskutierten erstellen sind auf unterschiedlichem Erfolg durchgeführt worden. Allerdings haben traditionelle Nanofaser Scaffolds Fähigkeiten zur Erreichung dieser Ziele begrenzt. Traditionelle Nanofaser Scaffolds wurden meist zweidimensionale Matten1,3. Diese nonexpanded Gerüste sind dicht mit kleinen Porengrößen gepackt; Dies schränkt Zelle eindringen, Migration und Differenzierung, da es nicht zur Förderung einer Umgebung ähnlich genug, um in Vivo1,7,8,9zu finden. Aus diesem Grund wurden neuere Techniken der 3D Electrospun Nanofaser Gerüst Vorbereitung eingerichtet, um die inhärente Makel zu ändern, die mit 2D Nanofaser-Matten kommen. Diese Techniken führen zu 3D Gerüste; Allerdings haben sie Anwendbarkeit aufgrund der Produktionsmethoden erfordern wässrige Lösungen und Gefriertrocknung Verfahren beschränkt. Diese Verarbeitung führt die zufällige Verteilung der Nanofasern ohne eingeschränkte Organisation, richtige Dicke und/oder gewünschte Porosität, die angemessene Nanotopographic Cues bereitzustellen, die notwendig sind für Zelle Migration und Proliferation. Diese Faktoren führen zu der vorherigen 3D Electrospun Nanofaser Gerüste, die angemessene Nachahmung des Lebens fehlt Gewebe1,7,8,9.
Neuere Versuche zur Entwicklung einer erweiterten, 3D Gerüst mit besseren Biomimetik der extrazellulären Matrix (ECM) sind durchgeführt worden, mit einer wässrigen Natrium Natriumborhydrid (NaBH4) Lösung Behandlung und vordefinierten Formen zugunsten besserer Kontrolle über die Form der resultierenden Gerüst7,8. Diese Methode ist jedoch nicht ideal, da es die Verwendung von wässrigen Lösungen, chemische Reaktionen und Gefriertrocknung erfordert, die stören können, mit Polymeren und gekapselten Biomoleküle, die wasserlöslich sind. Verwendeten Zusatzstoffe können auch Nebenwirkungen während Gewebe-Regeneration-8,-9. Die CO2 Erweiterung Methode in diesem Artikel beschriebenen stark reduziert die Verarbeitungszeit, eliminiert die Notwendigkeit für wässrige Lösungen und erhält den Betrag und die Funktionalität von biologisch aktiven Molekülen in einem größeren Ausmaß als die zuvor bewährte Methoden9.
In früheren Studien, Antibiotika, Silber, 1α, 25-Dihydroxyvitamin D-3und antimikrobiellen Peptid waren LL-37 in Nanofaser Scaffolds geladen, einzeln und in Kombination zu untersuchen, das Potenzial dieser Gerüste, Agenten, um freizugeben Weitere Hilfe bei der Wundheilung9,10,12,13. Für die Zwecke der Nachweis dieser Methode der Nanofaser Gerüst Expansion, wird Coumarine 6, einem Fluoreszenzfarbstoff in das Gerüst, um das Potenzial der Einbettung des Gerüsts mit verschiedenen gewünschten Verbindungen demonstrieren geladen werden. Diese Methode der erweiterten Nanofaser Gerüst Fertigung in Verbindung mit gekapselten bioaktiven Moleküle birgt ein großes Potenzial im Gewebe-Regeneration, Wundheilung, die Erstellung von 3D Gewebemodelle und die aktuelle Abgabe von Medikamenten.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Polycaprolactone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>440744</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N-Dimethlyformamide</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D-199-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>AC61093-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coumarin 6</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>546283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotating Steel Drum</td>
			<td>customized</td>
			<td></td>
			<td>This serves as a collector during electrospinning.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-831-200</td>
			<td>Coaxial spinning requires two single syringe pumps.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Revolver</td>
			<td>Lab Net International</td>
			<td>H5600</td>
			<td>Adjustable lab rotator for mixing solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needle (27G x 1 1/2&#34;)</td>
			<td>EXCELINT International Co</td>
			<td>26426</td>
			<td>This is part of the example customized coaxial nozzel shown.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needle (21G x 1 1/2&#34;)</td>
			<td>EXCELINT International Co</td>
			<td>26416</td>
			<td>This is part of the example customized coaxial nozzel shown.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Voltage DC Power Supply</td>
			<td>Gamma High Voltage Research</td>
			<td>ES30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope</td>
			<td>FEI</td>
			<td>Nova 2300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Imager 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LL 37 ELISA Kit</td>
			<td>Hycult Biotech</td>
			<td>HK321-02</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

expansion of two-dimension electrospun nanofiber mats into three-dimension scaffolds

Elektrospinnen wurde die bevorzugte Technologie in der Herstellung von synthetischen, funktionale leski aufgrund der Biomimetik, extrazelluläre Matrix und die einfache Kontrolle der Zusammensetzung, der Struktur und der Durchmesser der Fasern. Jedoch trotz dieser Vorteile traditionellen Electrospun Nanofaser kommen Gerüste mit Einschränkungen auch unorganisiert Nanofaser Orientierung, niedrige Porosität, kleiner Porengröße und hauptsächlich zweidimensionale Matten. Als solche gibt es ein großes Bedürfnis nach Entwicklung ein neues Verfahren zur Herstellung von Electrospun Nanofaser Scaffolds, die die oben genannten Einschränkungen überwunden werden können. Hier ist eine neue und einfache Methode beschrieben. Eine traditionelle 2D Nanofaser-Matte wandelt sich in ein 3D Gerüst mit gewünschten Stärke, Abstand, Porosität und Nanotopographic Signale, um Zelle zu Aussaat und Vermehrung durch die Druckentlastung der unterkritischen CO2 Flüssigkeit zu ermöglichen. Neben ein Gerüst für die Regeneration des Gewebes auftreten, bietet diese Methode auch die Möglichkeit, die bioaktiven Moleküle wie antimikrobielle Peptide für lokale Medikamentenapplikation zu Kapseln. Die CO2 erweitert Nanofaser Scaffolds halten großes Potenzial im Gewebe-Regeneration, Wundheilung, 3D Gewebe Modellierung und topischen Medikamenten.

Die Wirksamkeit der Erweiterung traditionelle 2D Electrospun Nanofaser Matten in 3D Gerüste über Druckentlastung der unterkritischen CO2 Flüssigkeit zeigte sich in verschiedenen Funktionen: die Dicke der Gerüste von 1 mm bis 2,5 mm unbehandelt erhöht und 19,2 mm mit einem oder zwei CO2 Behandlungen, bzw. (Abb. 3A-C). Die Porosität-ein Merkmal der Architektur entscheidend für die Zelle Aussaat-auch in die erhöhte ...

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Expansion of Two-dimension Electrospun Nanofiber Mats into Three-dimension Scaffolds

Dieser Artikel beschreibt die Technik der Expansion einer traditionellen, zwei-Dimension (2D) Electrospun Nanofaser-Matte in leska 3 Dimension (3D) durch die Druckentlastung der unterkritischen CO2 Flüssigkeit. Diese erweiterte Gerüste sind 3D, eng mimischen zellulären Nanotopographic Hinweise, und bewahren die Funktionen der biologischen Moleküle innerhalb der Nanofasern gekapselt.

Expansion des zwei-Dimension Electrospun Nanofaser Matten in drei Dimension Gerüste

Electrospinning has been the preferred technology in producing a synthetic, functional scaffold due to the biomimicry to extracellular matrix and the ease ...

Dieses Protokoll berichtete über die Umwandlung traditioneller elektrogesponnener Nanofasermembranen von 2D auf 3D durch Druckaufschlagisierung subkritischer CO2-Flüssigkeit, die zuvor nicht realisiert wurde. Diese Methode beseitigt viele Probleme im Zusammenhang mit früheren Ansätzen, einschließlich der Verwendung von wässrigen Lösungen und chemischen Reaktionen, mehrstufige Prozesse, Verlust der Aktivität von verkapselten biologischen Molekülen, und Einschränkungen von hydrophoben Polymeren. Diesem Verfahren wird Shixuan Chen demonstriert, ein Postdoc aus meinem Labor.In einem 20-Liter-Glasrohr zwei Gramm PCL in einem Lösungsmittelgemisch aus Dichlormethan und DMF auflösen, mit einem Verhältnis von vier zu eins bei einer Konzentration von 10 Prozent. Legen Sie das Glasrohr in einen Laborrotator, bis die Lösung klar wird. Die Lösung kann sich über Nacht mischen.Um das Elektrospinngerät einzurichten, fügen Sie zunächst die PCL-Lösung zu einer 20-Milliliter-Spritze mit einer 21 Gauge stumpfen Nadel hinzu. Stellen Sie sicher, dass sich keine Luft in der Spritze befindet und dissoziierte Schläuche. Legen Sie eine rotierende Stahltrommel mit dem Bodenkollektor 12 Zentimeter von der Nadelspitze entfernt.Schließen Sie die Gleichstrom-Hochspannungsversorgung mit Alligatorclips an die Nadel an und stellen Sie sicher, dass der Kollektor geerdet ist. Legen Sie für die 20 Milliliter PCL-Lösung den Parameter der Spritzenpumpe mit einem Durchmesser von 20,27 Millimetern und einer Durchflussrate von 0,5 Milliliter pro Stunde fest. Prüfen Sie, ob sich die Tröpfchen an der Spitze der Nadel bilden.Tragen Sie ein elektrisches Potential von 20 Kilovolt zwischen dem Spinneret und einem Bodensammler auf, der sich 20 Zentimeter vom Spinneret entfernt befindet. Sammeln Sie die ausgerichteten Nanofasermatten in einer Trommel, die sich bei 2.000 Umdrehungen pro Minute dreht. Sammeln Sie die PCL-Nanofasermatten, sobald sie eine Dicke von etwa einem Millimeter erreichen.Tauchen Sie die PCL-Nanofasermatten fünf Minuten lang in flüssigen Stickstoff ein. Bewahren Sie die PCL-Nanofasermatten in flüssigem Stickstoff auf und stanzen Sie PCL-Nanofasermatten mit einem Stempel von 0,5 Millimetern. Legen Sie die PCL-Nanofasermatten fünf Minuten lang in flüssigen Stickstoff.Schneiden Sie die Matten mit einer scharfen chirurgischen Schere in einen Zentimeter um einen Zentimeter Quadrate, während Sie in flüssigen Stickstoff getaucht werden, um eine Verformung der Kanten zu vermeiden. Legen Sie die geschnittene Matte in ein 30 Milliliter Zentrifugenrohr mit etwa einem Gramm Trockeneis. Den Deckel fest verschließen und das Trockeneis in flüssiges Kohlendioxid verwandeln lassen.Sobald sich die Flüssigkeit im Rohr gebildet hat, lassen Sie den Druck schnell los, indem Sie die Kappe öffnen. Entfernen und beobachten Sie das aufgeblasene Gerüst aus dem Rohr. Legen Sie das Gerüst in ein neues Zentrifugenrohr mit Trockeneis, und wiederholen Sie die Wunschdicke erreicht wird.Sterilisieren Sie die expandierten Nanofasergerüste in Ethylenoxid vor der Inkubation mit Zellen. Die Wirksamkeit der Erweiterung traditioneller 2D-Elektrospunten Nanofasermatten zu 3D-Gerüsten durch Druckaufschlag von subkritischer CO2-Flüssigkeit wird auf der linken Seite nach der zweiten Behandlung gezeigt. Die Dicke des Gerüstes stieg bei unbehandelter Behandlung von einem Millimeter auf 2,5 Millimeter bei einer CO2-Behandlung auf 19,2 Millimeter bei zwei CO2-Behandlungen.Die Porosität der Gerüste stieg von 79,5 Prozent für die unbehandelten Matten auf 92,1 Prozent nach der ersten Behandlung auf 99,0 Prozent nach der zweiten Behandlung. Dies ist wichtig, da der Grad der Zelldurchdringung in ein Gerüst und damit seine Wirksamkeit zur Regeneration weitgehend von der Porosität abhängt. SEM-Bilder zeigen, dass die dicht gepackte fibuläre Struktur unbehandelter 2D-Matten nach der Expansion mit CO2 in geordnete, geschichtete Strukturen mit ausgerichteten Nanofasern umgewandelt wurde.In Vevo wurden Studien durch subkutane Implantation von CO2-expandierten Nanofasergerüsten mit quadratisch angeordneten Löchern an Ratten durchgeführt. Dies ermöglicht eine zelluläre Migration und Proliferation innerhalb der Löcher sowie eine weitere Infiltration innerhalb der Nanofaserschichten, die während der Expansion entstanden sind. Von Woche eins bis vier nach der Implantation zeigten die erweiterten Gerüste einen signifikanten Anstieg der Anzahl der gebildeten Blutgefäße und multinukleierten Riesenzellen im Vergleich zu einer herkömmlichen Nanofasermatte.Nach diesem Verfahren können verschiedene Moleküle wie Wachstumsfaktoren, Aminomodulierende Verbindungen, hämostatische Wirkstoffe und antimikrotubuläre Wirkstoffe in die Nanofasermatten integriert und in subkritischer CO2-Flüssigkeit erweitert werden. Solche funktionalisierten erweiterten Nanofasergerüste könnten verwendet werden, um neue Fragen in anderen wissenschaftlichen Bereichen zu erforschen, wie Hämostase, Prävention und Behandlung von Infektionen, Immunologie und Geweberegeneration und -reparatur. Organische Lösungsmittel sind giftig und sollten in einer chemischen Haube behandelt werden.Darüber hinaus sollte ein Behälter, der den hohen Druck von subkritischer CO2-Flüssigkeit aushalten kann, für die Expansion verwendet werden.

Research

JoVE Journal

Genetics

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Mikroinjektion CRISPR/Cas9 Protein in Channel Catfish, Ictalurus Punctatus, Embryonen für Gene Editing

The complete genome of the channel catfish, Ictalurus punctatus, has been sequenced, leading to greater opportunities for studying channel catfish gene ...

Forschung

Genetik

Canalostomy As a Surgical Approach to Local Drug Delivery into the Inner Ears of Adult and Neonatal Mice

Canalostomy als ein chirurgisches Vorgehen zu Local Drug Delivery in das innere Ohr von Erwachsenen und Neugeborenen Mäusen

Local delivery of therapeutic drugs into the inner ear is a promising therapy for inner ear diseases. Injection through semicircular canals (canalostomy) ...

Testing the Role of Multicopy Plasmids in the Evolution of Antibiotic Resistance

Testen die Rolle des Multicopy Plasmide in der Entwicklung von Antibiotika-Resistenzen

Multicopy plasmids are extremely abundant in prokaryotes but their role in bacterial evolution remains poorly understood. We recently showed that the ...

A Simple, Rapid, and Quantitative Assay to Measure Repair of DNA-protein Crosslinks on Plasmids Transfected into Mammalian Cells

Ein einfacher, rasches und quantitativen Assay zur Maßnahme Reparatur von DNA-Protein-Querverbindungen auf Plasmide transfiziert in Säugerzellen

The purpose of this method is to provide a flexible, rapid, and quantitative technique to examine the kinetics of DNA-protein crosslink (DPC) repair in ...

Lentiviral Vector Platform for the Efficient Delivery of Epigenome-editing Tools into Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Disease Models

Lentivirale Vektor-Plattform für die effiziente Bereitstellung von Epigenom-editing-Tools in menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen abgeleitet Krankheitsmodelle

The use of hiPSC-derived cells represents a valuable approach to study human neurodegenerative diseases. Here, we describe an optimized protocol for the ...

Generation of Tumor Organoids from Genetically Engineered Mouse Models of Prostate Cancer

Generierung von Tumororganoiden aus gentechnisch veränderten Mausmodellen von Prostatakrebs

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) ...

Introducing a Gene Knockout Directly Into the Amastigote Stage of Trypanosoma cruzi Using the CRISPR/Cas9 System

Introducing a Gene Knockout Directly Into the Amastigote Stage of Trypanosoma cruzi Using the CRISPR/Cas9 System

Einführung eines Gene Knockout direkt in die Amastigote-Phase von Trypanosoma cruzi mit dem CRISPR/Cas9-System

Trypanosoma cruzi is a pathogenic protozoan parasite that causes Chagas&#8217; disease mainly in Latin America. In order to identify a novel drug target ...

Use of Drosophila S2 Cells for Live Imaging of Cell Division

Use of Drosophila S2 Cells for Live Imaging of Cell Division

Einsatz von Drosophila S2-Zellen für Live Imaging of Cell Division

Drosophila S2 cells are an important tool in studying mitosis in tissue culture, providing molecular insights into this fundamental cellular process in a ...

Characterization of Functionally Associated miRNAs in Glioblastoma and their Engineering into Artificial Clusters for Gene Therapy

Charakterisierung von funktional assoziierten miRNAs in Glioblastom und deren Engineering in künstliche Cluster für die Gentherapie

The biological relevance of microRNAs (miRNAs) in health and disease significantly relies on specific combinations of many simultaneously deregulated ...

Use of Freeze-thawed Embryos for High-efficiency Production of Genetically Modified Mice

Verwendung von gefriergetauten Embryonen für die hocheffiziente Produktion von gentechnisch veränderten Mäusen

The use of genetically modified (GM) mice has become crucial for understanding gene function and deciphering the underlying mechanisms of human diseases. ...