Name: expansion of two-dimension electrospun nanofiber mats into three-dimension scaffolds
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Expansion of Two-dimension Electrospun Nanofiber Mats into Three-dimension Scaffolds at JoVE.com

Эта работа была поддержана, субсидии от национального института Генеральной медицинской науки (NIGMS) в низ (2P 20 GM103480-06 и 1R01GM123081 к J.X.), Отис Glebe медицинский исследовательский фонд, NE LB606 и запуска средства от Медицинский Университет штата Небраска Центр.

Все процедуры в естественных условиях , изложенных ниже были утверждены Комитетом IACUC медицинского центра Университета Небраски.
1. Подготовьте решения для стандартных Electrospinning
<ol><li>В 20 мл стеклянной трубки, растворяют 2 g poly(ε-caprolactone) (PCL, Mw = 80 кДа) в жидкостной смеси Д?...

<ol>
	<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+electrospun+nanofibers+for+wound+healing.">Recent advances in electrospun nanofibers for wound healing.</a> Nanomedicine. 12 (11), 1335-1352 (2017).</li><li>Khandalavala, K., Jiang, J., Shuler, F. D., Xie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospun+Nanofiber+Scaffolds+with+Gradations+in+Fiber+Organization.">Electrospun Nanofiber Scaffolds with Gradations in Fiber Organization.</a> Journal of Visualized Experiments. (98), e52626 (2015).</li><li>Xie, J., Li, X., Xia, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Put+electrospun+nanofibers+to+work+for+biomedical+research.">Put electrospun nanofibers to work for biomedical research.</a> Macromolecular Rapid Communication. 29 (22), 1775-1792 (2008).</li><li>Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanofiber+membranes+with+controllable+microwells+and+structural+cues+and+their+use+in+forming+cell+microarrays+and+neuronal+networks.">Nanofiber membranes with controllable microwells and structural cues and their use in forming cell microarrays and neuronal networks.</a> Small. 7 (3), 293-297 (2011).</li><li>Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radially+aligned,+electrospun+nanofibers+as+dural+substitutes+for+wound+closure+and+tissue+regeneration+applications.">Radially aligned, electrospun nanofibers as dural substitutes for wound closure and tissue regeneration applications.</a> ACS. 4 (9), 5027-5036 (2010).</li><li>Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Aligned-to-random"+nanofiber+scaffolds+for+mimicking+the+structure+of+the+tendon-to-bone+insertion+site.">"Aligned-to-random" nanofiber scaffolds for mimicking the structure of the tendon-to-bone insertion site.</a> Nanoscale. 2 (6), 923-926 (2010).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanded+3D+Nanofiber+Scaffolds:+Cell+Penetration.">Expanded 3D Nanofiber Scaffolds: Cell Penetration.</a> Neovascularization, and Host Response. Advanced Healthcare Materials. 5 (23), 2993-3003 (2016).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanding+Two-Dimensional+Electrospun+Nanofiber+Membranes+in+the+Third+Dimension+by+a+Modified+Gas-Foaming+Technique.">Expanding Two-Dimensional Electrospun Nanofiber Membranes in the Third Dimension by a Modified Gas-Foaming Technique.</a> ACS Biomaterials Science &amp; Engineering. 10 (1), 991-1001 (2015).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CO2-expanded+nanofiber+scaffolds+maintain+activity+of+encapsulated+bioactive+materials+and+promote+cellular+infiltration+and+positive+host+response.">CO2-expanded nanofiber scaffolds maintain activity of encapsulated bioactive materials and promote cellular infiltration and positive host response.</a> Acta Biomaterialia. 68, 237-248 (2018).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanofiber-based+sutures+induce+endogenous+antimicrobial+peptide.">Nanofiber-based sutures induce endogenous antimicrobial peptide.</a> Nanomedicine. 12 (10), 2597-2609 (2017).</li><li>Dhand, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bio-inspired+crosslinking+and+matrix-drug+interactions+for+advanced+wound+dressings+with+long-term+antimicrobial+activity.">Bio-inspired crosslinking and matrix-drug interactions for advanced wound dressings with long-term antimicrobial activity.</a> Biomaterials. 138, 153-168 (2017).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+sustained+delivery+of+25-hydroxyvitamin+D3+for+production+of+antimicrobial+peptides.">Local sustained delivery of 25-hydroxyvitamin D3 for production of antimicrobial peptides.</a> Pharmaceutical Research. 32 (9), 2851-2862 (2015).</li><li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1&#945;,+25-dihydroxyvitamin+D3-eluting+nanofibrous+dressings+induce+endogenous+antimicrobial+peptide+expression.">1&#945;, 25-dihydroxyvitamin D3-eluting nanofibrous dressings induce endogenous antimicrobial peptide expression.</a> Nanomedicine (Lond). 13 (12), 1417-1432 (2018).</li><li>Ma, B., Xie, J., Jiang, J., Shuler, F. D., Bartlett, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+nanofiber+scaffolds+for+orthopedic+tissue+repair+and+regeneration.">Rational design of nanofiber scaffolds for orthopedic tissue repair and regeneration.</a> Nanomedicine. 8 (9), 1459-1481 (2013).</li></ol>

Преобразование традиционной 2D electrospun нановолокно коврики в расширенной 3D леса, который был исследован через CO2 разгерметизации. Традиционные 2D нановолокно маты являются успешно расширенной через подкритической CO2 жидкости. Важнейшие шаги являются изготовить 2D на...

Концепция разработки синтетических эшафот, что может быть имплантирован в пациентов для оказания помощи в ткани ремонт и восстановление является одним, что пронизывает поле регенеративной медицины на протяжении десятилетий. Идеально синтетической лески призвана побудить миграции клеток от окружающих здоровых тканей, обеспечивает архитектуру для клеток посева, адгезии, сигнализации, пролиферации и дифференцирования, поддерживает васкуляризации, позволяет для адекватной оксигенации и Доставка питания и поощряет узла иммунной активности для обеспечения успеха после имплантации1. Кроме того она может использоваться как носителя для встраивания антимикробной молекул для оказания помощи в ранозаживляющее1,3,6,,78,9. Способность контролировать временного освобождения этих биологических молекул из синтетической лески является еще одним желательным атрибутом, который считается когда инженерных помостами1.
Electrospinning был оптимально техника для производства нановолокно подмости1,2,3,4,5,6. Предыдущие попытки создания нановолокно леску как обсуждаемые здесь было сделано с различной степенью успеха. Однако традиционные нановолокно леса имеют ограниченные способности для достижения этих целей. Традиционные нановолокно леса были главным образом двумерных коврики1,3. Эти nonexpanded леса плотно упакованы с размерами малые поры; Это ограничивает клеток инфильтрата, миграции и дифференциации, как он не способствовать созданию условий, которые аналогичны достаточно найдено в естественных условиях1,,78,9. По этой причине были созданы новые методы подготовки эшафот нановолокно 3D electrospun внести самосущие пороки, которые приходят с 2D нановолокно коврики. Эти методы приводят в 3D леса; Однако они ограниченную применимость из-за методов производства, требующих водных растворов и для процедур. Такая обработка приводит к случайное распределение nanofibers без ограничения Организации, надлежащей толщины или желаемого пористость предоставлять адекватные nanotopographic сигналы, которые необходимы для распространения и миграции клеток. Эти факторы приводят в предыдущих подмостей нановолокно 3D electrospun, которые не имеют адекватного мимикрии жизни тканей1,,78,9.
Более недавние попытки разработки расширенного, 3D леску с лучше biomimicry внеклеточного матрикса (ECM) выполнены с использованием водного раствора натрия боргидрид (NaBH4) решения лечения и готовые формы для лучшего контроля Результирующая форма эшафот7,8. Однако этот метод не является идеальным, как это требует использования водные растворы, химических реакций и паром для лиофильной сушки, что может помешать полимеров и любой инкапсулированные биомолекул, которые растворимы. Добавки, используемые также могут вызывать побочные эффекты во время регенерации тканей8,9. Метод расширения CO2 , изложенные в этой статье, значительно уменьшает время обработки, устраняет потребность в водных растворах и сохраняет размер и функциональность биологически активных молекул в большей степени, чем ранее установленные методы9.
В предыдущих исследованиях, антибиотики, серебро, 1α, 25 dihydroxyvitamin D3и антимикробного пептида LL-37 были загружены в подмости нановолокно индивидуально и в сочетании исследовать потенциал этих лесов выпустить агентов Далее помощь в ранозаживляющее9,10,12,13. Для целей демонстрации этот метод расширения нановолокно эшафот, Клексан 6, флуоресцентные краски, загружается в эшафот чтобы продемонстрировать потенциал внедрения на эшафот с различными желаемых соединений. Этот метод изготовления расширенной нановолокно леса в сочетании с инкапсулированным биоактивных молекул имеет большой потенциал в регенерации тканей, заживление ран, создание моделей 3D ткани и актуальные доставки наркотиков.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Polycaprolactone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>440744</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N-Dimethlyformamide</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D-199-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>AC61093-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coumarin 6</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>546283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotating Steel Drum</td>
			<td>customized</td>
			<td></td>
			<td>This serves as a collector during electrospinning.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-831-200</td>
			<td>Coaxial spinning requires two single syringe pumps.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Revolver</td>
			<td>Lab Net International</td>
			<td>H5600</td>
			<td>Adjustable lab rotator for mixing solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needle (27G x 1 1/2&#34;)</td>
			<td>EXCELINT International Co</td>
			<td>26426</td>
			<td>This is part of the example customized coaxial nozzel shown.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needle (21G x 1 1/2&#34;)</td>
			<td>EXCELINT International Co</td>
			<td>26416</td>
			<td>This is part of the example customized coaxial nozzel shown.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Voltage DC Power Supply</td>
			<td>Gamma High Voltage Research</td>
			<td>ES30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning Electron Microscope</td>
			<td>FEI</td>
			<td>Nova 2300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Imager 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LL 37 ELISA Kit</td>
			<td>Hycult Biotech</td>
			<td>HK321-02</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

expansion of two-dimension electrospun nanofiber mats into three-dimension scaffolds

Electrospinning был предпочтительной технологии в производстве синтетических, функциональный эшафот благодаря biomimicry внеклеточного матрикса и легкость контроля состава, структуры и диаметр волокон. Однако несмотря на эти преимущества, традиционные electrospun нановолокно, подмости поставляются с ограничениями в том числе дезорганизованы нановолокно ориентации, низкую пористость, малые поры и главным образом двумерных коврики. Таким образом существует большая потребность в разработке новый процесс для изготовления electrospun нановолокно леса, которые можно преодолеть указанные выше ограничения. В настоящем документе изложены Роман и простой метод. Традиционные 2D нановолокно мат преобразуется в 3D леску с нужной толщины, зазор расстояние, пористость и nanotopographic сигналы для заполнения ячейки и распространения через разгерметизации подкритической CO2 жидкости. Помимо леску для регенерации тканей происходит, этот метод также предоставляет возможность инкапсулировать биологически активных молекул, таких как противомикробные пептиды для местных лекарств. CO2 расширены нановолокно подмости провести большой потенциал в регенерации тканей, заживление ран, моделирование 3D ткани и актуальные лекарств.

Эффективность расширения традиционных 2D electrospun нановолокно коврики в 3D леса через разгерметизации подкритической CO2 жидкости был продемонстрирован в различных качествах: толщина подмости увеличилась с 1 мм при лечения до 2,5 мм и 19,2 мм с одной и двумя CO2 обра...

Watch this Scientific Journal Video about Expansion of Two-dimension Electrospun Nanofiber Mats into Three-dimension Scaffolds at JoVE.com

Expansion of Two-dimension Electrospun Nanofiber Mats into Three-dimension Scaffolds

Эта статья демонстрирует технику расширения традиционной, два измерение (2D) electrospun нановолокно мат в три измерения (3D) леску через разгерметизации подкритической CO2 жидкости. Эти дополненной подмостей являются 3D, тесно имитировать сотовой nanotopographic сигналы и сохранить функции биологических молекул, инкапсулируются в нановолокон.

Расширение двух измерение Electrospun нановолокно коврики в три измерение подмости

Electrospinning has been the preferred technology in producing a synthetic, functional scaffold due to the biomimicry to extracellular matrix and the ease ...

Этот протокол сообщил о преобразовании традиционных электроспун нановофибрембранов из 2D в 3D, путем разгерметизации подкритической жидкости CO2, которая не была реализована ранее. Этот метод устраняет многие проблемы, связанные с предыдущими подходами, в том числе использование aqueous решений и химических реакций, многоступчатые процессы, потеря активности инкапсулированных биологических молекул, а также ограничения гидрофобных полимеров. Демонстрация этой процедуры Shixuan Чэнь, postdoc из моей лаборатории.В стеклянной трубке на 20 миллилитров растворяют два грамма ПХЛ в растворительной смеси дихлорметана и DMF, при соотношении 4 к одному при концентрации 10 процентов. Поместите стеклянную трубку в лабораторный ротатор до тех пор, пока раствор не станет ясным. Раствор может смешиваться в течение ночи.Чтобы настроить электроспиннинг аппарат, во-первых, добавить pcL решение 20 миллилитров шприц с 21 калибровочный тупой иглой прилагается. Убедитесь, что в шприце нет воздуха, а также диссоциированные трубки. Поместите вращающийся стальной барабан с наземным коллектором в 12 сантиметрах от кончика иглы.Используя зажимы аллигатора, подключите к игле высоковольтный источник питания прямого тока и убедитесь, что коллектор заземлен. Для 20 миллилитров раствора PCL установите параметр шприц-насоса диаметром 20,27 миллилитров и скоростью потока 0,5 миллилитров в час. Проверьте, формируются ли капли на кончике иглы.Нанесите электрический потенциал в 20 киловольт между спиннеретом и наземным коллектором, расположенным в 20 сантиметрах от спиннерета. Соберите выровненные нановофиберные коврики в барабане, вращаясь при 2000 об/мин. Соберите коврики PCL нановонфиль, как только они достигнут толщины около одного миллиметра.Погрузите коврики ПХЛ нановонфиль в жидкий азот в течение пяти минут. Храните коврики pcL нановонфиль в жидком азоте и пробивай коврики из нановофиберы PCL ударом диаметром 0,5 миллиметра. Поместите коврики ПХЛ нановонфиль в жидкий азот в течение пяти минут.Разрежьте коврики на один сантиметр на один сантиметр квадратов с помощью острых хирургических ножниц во время погружения в жидкий азот, чтобы избежать деформации краев. Поместите разрезанный коврик в 30-миллилитровую центрифугу с примерно одним граммом сухого льда. Плотно крышка крышки, и позволяют сухой лед, чтобы превратиться в жидкий углекислый газ.Как только жидкость образуется в трубке, быстро отпустите давление, открыв крышку. Удалить и наблюдать пыхтел эшафот из трубки. Поместите эшафот в новую центрифугу трубки с сухим льдом, и повторить util желание толщина достигается.Стерилизовать расширенные нановофиберные леса в оксиде этилена до инкубации с клетками. Эффективность расширения традиционных 2D электроспун нановофиберных ковриков в 3D леса через разгерметизацию субкритической жидкости CO2 показана слева после второй обработки. Толщина эшафота увеличилась с одного миллиметра при отсутствии лечения до 2,5 миллиметра при одной обработке CO2, до 19,2 миллиметра с двумя обработками CO2.Пористость лесов увеличилась с 79,5 процента для необработанных ковриков, до 92,1 процента после первого лечения, до 99,0 процента после второго лечения. Это важно, потому что степень проникновения клеток в эшафот, и, таким образом, его эффективность, чтобы вызвать регенерацию, в значительной степени зависит от пористости. Sem изображения показывают, что плотно упакованные фибулярной структуры необработанных 2D коврики были преобразованы в упорядоченные, слоистые структуры с выровненными нановолокна после расширения с CO2.В Vevo исследования были проведены подкожной имплантации CO2-расширенных нановолокна леса с квадратными отверстиями для крыс. Это позволяет клеточной миграции и пролиферации в отверстиях, а также дальнейшее проникновение в слои нановолокна, которые были созданы во время расширения. С первой по четыре недели после имплантации, расширенные леса показали значительное увеличение числа кровеносных сосудов формируется, и многоядерных гигантских клеток по сравнению с традиционными нано волокна коврик.После этой процедуры различные молекулы, включая факторы роста, аминомодулирующие соединения, гемостатические агенты и антимитокулярные агенты, могут быть включены в коврики из нановолокна и расширены в субкритической жидкости CO2. Такие функциональные расширенные эшафоты нановолокна могут быть использованы для изучения новых вопросов в других научных областях, таких как гемостаз, профилактика и лечение инфекции, иммунология, регенерация и ремонт тканей. Органические растворители токсичны и должны обрабатываться в химическом капюшоне.Кроме того, контейнер, который может выдержать высокое давление субкритической жидкости CO2 должны быть использованы для расширения.

Research

JoVE Journal

Genetics

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Микроинъекции ТРИФОСФАТЫ/Cas9 белка в канал сома, сомик punctatus, эмбрионы для редактирования гена

The complete genome of the channel catfish, Ictalurus punctatus, has been sequenced, leading to greater opportunities for studying channel catfish gene ...

Canalostomy As a Surgical Approach to Local Drug Delivery into the Inner Ears of Adult and Neonatal Mice

Canalostomy как хирургический подход к местным лекарств в внутренний уши взрослых и новорожденных мышей

Local delivery of therapeutic drugs into the inner ear is a promising therapy for inner ear diseases. Injection through semicircular canals (canalostomy) ...

Testing the Role of Multicopy Plasmids in the Evolution of Antibiotic Resistance

Проверка роли применим плазмид в эволюции антибиотикорезистентности

Multicopy plasmids are extremely abundant in prokaryotes but their role in bacterial evolution remains poorly understood. We recently showed that the ...

A Simple, Rapid, and Quantitative Assay to Measure Repair of DNA-protein Crosslinks on Plasmids Transfected into Mammalian Cells

Простой, быстрый и количественные Assay мера ремонт ДНК белковых сшивки на плазмид Transfected в клетки млекопитающих

The purpose of this method is to provide a flexible, rapid, and quantitative technique to examine the kinetics of DNA-protein crosslink (DPC) repair in ...

Lentiviral Vector Platform for the Efficient Delivery of Epigenome-editing Tools into Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Disease Models

Лентивирусные вектор платформа для эффективной доставки Epigenome-инструменты для редактирования в человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток болезни моделей

The use of hiPSC-derived cells represents a valuable approach to study human neurodegenerative diseases. Here, we describe an optimized protocol for the ...

Generation of Tumor Organoids from Genetically Engineered Mouse Models of Prostate Cancer

Поколение опухолевых органоидов из генетически модифицированных моделей мыши рака простаты

Methods based on homologous recombination to modify genes have significantly furthered biological research. Genetically engineered mouse models (GEMMs) ...

Introducing a Gene Knockout Directly Into the Amastigote Stage of Trypanosoma cruzi Using the CRISPR/Cas9 System

Introducing a Gene Knockout Directly Into the Amastigote Stage of Trypanosoma cruzi Using the CRISPR/Cas9 System

Представляя ген нокаут непосредственно в Amastigote Этап trypanosoma cruzi Использование CRISPR / Cas9 системы

Trypanosoma cruzi is a pathogenic protozoan parasite that causes Chagas&#8217; disease mainly in Latin America. In order to identify a novel drug target ...

Use of Drosophila S2 Cells for Live Imaging of Cell Division

Use of Drosophila S2 Cells for Live Imaging of Cell Division

Использование Дрозофилы S2 клетки для живой визуализации клеточного отдела

Drosophila S2 cells are an important tool in studying mitosis in tissue culture, providing molecular insights into this fundamental cellular process in a ...

Characterization of Functionally Associated miRNAs in Glioblastoma and their Engineering into Artificial Clusters for Gene Therapy

Характеристика функционально связанных miRNAs в глиобластоме и их инженерии в искусственные кластеры для генной терапии

The biological relevance of microRNAs (miRNAs) in health and disease significantly relies on specific combinations of many simultaneously deregulated ...

Use of Freeze-thawed Embryos for High-efficiency Production of Genetically Modified Mice

Использование замороженных оттаять эмбрионов для высокоэффективного производства генетически модифицированных мышей

The use of genetically modified (GM) mice has become crucial for understanding gene function and deciphering the underlying mechanisms of human diseases. ...