Name: induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin
Uploaded: 2019-04-30T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل بمنحة RF-2011-02352331 من Ministero Italiano della Salute (إلى أرماندو غابرييلي).

تمت الموافقة على جميع إجراءات رعاية الحيوانات والإجراءات التجريبية من قبل وزارة الصحة الإيطالية (إذن رقم 456/2016-PR) وتم تنفيذها وفقا لإعلان اتفاقيات هلسنكي.
1- الفئران
<ol><li>بعد شرائها، والسماح للفئران لالتكيف لمدة 7 أيام على الأقل قبل الحقن. ملاحظة: تم إيواء الفئران في مرفق ا?...

<ol>
	<li>Iudici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Where+are+we+going+in+the+management+of+interstitial+lung+disease+in+patients+with+systemic+sclerosis?.">Where are we going in the management of interstitial lung disease in patients with systemic sclerosis?.</a> Autoimmunity Reviews. 14 (7), 575-578 (2015).</li><li>Moore, B. B., Hogaboam, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+pulmonary+fibrosis.">Murine models of pulmonary fibrosis.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (2), L152-L160 (2008).</li><li>Mouratis, M. A., Aidinis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+pulmonary+fibrosis+with+bleomycin.">Modeling pulmonary fibrosis with bleomycin.</a> Current Opinion in Pulmonary Medicine. 17 (5), 355-361 (2011).</li><li>Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bleomycin+animal+model:+a+useful+tool+to+investigate+treatment+options+for+idiopathic+pulmonary+fibrosis?.">The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis?.</a> International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 40 (3), 362-382 (2008).</li><li>Moore, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+fibrotic+lung+disease.">Animal models of fibrotic lung disease.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 49 (2), 167-179 (2013).</li><li>Schrier, D. J., Kunkel, R. G., Phan, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+strain+variation+in+murine+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">The role of strain variation in murine bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> American Review of Respiratory Disease. 127 (1), 63-66 (1983).</li><li>Phan, S. H., Kunkel, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cytokine+production+in+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">Lung cytokine production in bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> Experimental Lung Research. 18 (1), 29-43 (1992).</li><li>Capelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+manipulated+whole+human+umbilical+cord+is+a+rich+source+of+clinical-grade+human+mesenchymal+stromal+cells+expanded+in+human+platelet+lysate.">Minimally manipulated whole human umbilical cord is a rich source of clinical-grade human mesenchymal stromal cells expanded in human platelet lysate.</a> Cytotherapy. 13 (7), 786-801 (2011).</li><li>Beeravolu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Mesenchymal+Stromal+Cells+from+Human+Umbilical+Cord+and+Fetal+Placenta.">Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55224 (2017).</li><li>Moroncini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stromal+cells+from+human+umbilical+cord+prevent+the+development+of+lung+fibrosis+in+immunocompetent+mice.">Mesenchymal stromal cells from human umbilical cord prevent the development of lung fibrosis in immunocompetent mice.</a> PLoS One. 13 (6), e0196048 (2018).</li><li>Shahzeidi, S., Jeffery, P. K., Laurent, G. J., McAnulty, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+type+I+procollagen+mRNA+transcripts+in+the+lungs+of+mice+during+the+development+of+bleomycin-induced+fibrosis.">Increased type I procollagen mRNA transcripts in the lungs of mice during the development of bleomycin-induced fibrosis.</a> European Respiratory Journal. 7 (11), 1938-1943 (1994).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+hMSCs+improve+myocardial+infarction+in+mice+because+cells+embolized+in+lung+are+activated+to+secrete+the+anti-inflammatory+protein+TSG-6.">Intravenous hMSCs improve myocardial infarction in mice because cells embolized in lung are activated to secrete the anti-inflammatory protein TSG-6.</a> Cell Stem Cell. 5 (1), 54-63 (2009).</li><li>Scotton, C. J., Chambers, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleomycin+revisited:+towards+a+more+representative+model+of+IPF?.">Bleomycin revisited: towards a more representative model of IPF?.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (4), L439-L441 (2010).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).</li><li>Thomas, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation+in+mice+via+direct+laryngoscopy+using+an+otoscope.">Endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), e50269 (2014).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li><li>Dutta, S., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Men+and+mice:+Relating+their+ages.">Men and mice: Relating their ages.</a> Life Sciences. 152, 244-248 (2016).</li><li>Sueblinvong, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predisposition+for+disrepair+in+the+aged+lung.">Predisposition for disrepair in the aged lung.</a> American Journal of Medical Sciences. 344 (1), 41-51 (2012).</li><li>Moodley, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+umbilical+cord+mesenchymal+stem+cells+reduce+fibrosis+of+bleomycin-induced+lung+injury.">Human umbilical cord mesenchymal stem cells reduce fibrosis of bleomycin-induced lung injury.</a> American Journal of Pathology. 175 (1), 303-313 (2009).</li><li>How, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+mediate+the+release+of+interferon+gamma-induced+protein+10+and+alleviate+bleomycin-induced+lung+inflammation+and+fibrosis.">Induced pluripotent stem cells mediate the release of interferon gamma-induced protein 10 and alleviate bleomycin-induced lung inflammation and fibrosis.</a> Shock. 39 (3), 261-270 (2013).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TSG-6+as+a+biomarker+to+predict+efficacy+of+human+mesenchymal+stem/progenitor+cells+(hMSCs)+in+modulating+sterile+inflammation+in+vivo.">TSG-6 as a biomarker to predict efficacy of human mesenchymal stem/progenitor cells (hMSCs) in modulating sterile inflammation in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (47), 16766-16771 (2014).</li></ol>

إدارة الرغامى هو الطريق التفضيلي لإيصال العوامل الخارجية في الرئتين. منذ عدة سنوات ، تم استخدام الحقن المباشر للبلميسين في القصبة الهوائية على نطاق واسع للحث على التليف الرئوي13 ، ومؤخرا ، تم تطوير تقنيات أكثر تقدما ، غير الغازية لتحقيق هذا14،15 ...

التليف الرئوي هو عملية مرضية تقدمية تتميز بالترس المفرط لمكونات المصفوفة خارج الخلية، أساسا النوع الأول الكولاجين، في الانترستيوم الرئة، مما يؤدي إلى ضعف وظيفة الرئة. وهو السمة المميزة للعديد من أمراض الرئة البشرية مع مسببات مختلفة ويمثل عامل التكهن السريري ة الفقراء. وبما أن العلاجات الحالية محدودة إلى حد ما1، لا تزال نماذج الماوس أداة أساسية على حد سواء لمواصلة التحقيق في الآليات المسببة للأمراض التي تؤثر على بداية وتطور المرض ولتطوير مضادات الفيلية الجديدة استراتيجيات2،3.
حتى الآن، كانت إدارة bleomycin النموذج الأكثر شيوعا من التليف الرئوي المستحث تجريبيا4. بجانب طرق التسليم المتعددة (بما في ذلك الحقن الوريدي، داخل البريكيوني، تحت الجلد، والاستنشاق)، ظهرت الحقن داخل الرغامى أوداخل الرغامى من البلميسين كأكثر الطرق استخداما4و5. وقد وضعت الطريقة التي نصفها هنا لتجنب تأثير التحجيم من البلويمايسين على الغشاء المخاطي للرغامى. في الواقع، من خلال تجهر القصبة الهوائية وتصورها من خلال مجهر التشغيل، فمن الممكن تحقيق غرس كامل حجم محلول البلميسين مباشرة في مجرى الهواء السفلي دون أي انسكابات في مجرى الهواء العلوي. عندما تتوفر الخبرة الجراحية المطلوبة والأجهزة، تسمح هذه الطريقة للتحريض الآمن والقوي والقابل للاستنساخ لالتهاب الرئة والتليف، كما هو مبين أدناه.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1024px;" width="1023">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">C57BL/6 mice</td>
			<td style="width:236px;">Charles River</td>
			<td style="width:239px;">Jax Mice Stock n. 000664</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">2,2,2-Tribromoethanol (Avertin)&#160;</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:239px;">T48402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Barraquer Micro Needle Holder</td>
			<td style="width:236px;">Lawton</td>
			<td style="width:239px;">62-3755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Bleomycin sulfate</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>B1141000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">B&#252;rker chamber</td>
			<td style="width:236px;">Brand&#160;</td>
			<td style="width:239px;">718905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Culture Flasks&#160;</td>
			<td style="width:236px;">EuroClone</td>
			<td style="width:239px;">ET7076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Disposable razors</td>
			<td style="width:236px;">Unigloves</td>
			<td style="width:239px;">4080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Dissecting Forceps</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">BD311R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">DPBS</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Heating pad</td>
			<td style="width:236px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:239px;">557023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Isoflurane Vet</td>
			<td style="width:236px;">Merial Italia</td>
			<td>N01AB06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Operating Microscope</td>
			<td style="width:236px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:239px;">Model OPM 16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">TrypLE Select Enzyme</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">12563-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vannas Micro Scissors</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">OC498R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vicryl Plus 4/0 Absorbable Suture, FS-2 needle 19 mm</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon</td>
			<td style="width:239px;">VCP392ZH</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin

التليف الرئوي هو السمة المميزة للعديد من أمراض الرئة البشرية مع مسببات مختلفة. وبما أن العلاجات الحالية محدودة إلى حد ما، فإن نماذج الماوس لا تزال أداة أساسية لوضع استراتيجيات جديدة مضادة للفيليتيك. هنا نقدم طريقة فعالة للتحقيق في النشاط المضاد للفيليفي في الجسم الحي من الخلايا السترومال ية mesenchymal الإنسان التي تم الحصول عليها من الحبل السري كله (hUC-MSC) في تخفيف إصابة الرئة الناجمة عن البلوميسين. تتلقى الفئران C57BL/6 حقنة واحدة داخل الرغامى من البلميسين (1.5 U/kg من وزن الجسم)تليها ضخ مزدوج من hUC-MSC (2.5 × 10 5) في الوريد الذيل، 24 ساعة و 7 أيام بعد إدارة البليومسين. عند التضحية في الأيام 8، 14، أو 21، يتم تحليل التغيرات الالتهابية والليفية، ومحتوى الكولاجين، ووجود hUC-MSC في أنسجة الرئة المنفعلة. حقن bleomycin في القصبة الهوائية الماوس يسمح الاستهداف المباشر للرئتين، مما يؤدي إلى التهاب رئوي واسع والتليف. الإدارة النظامية لجرعة مزدوجة من hUC-MSC يؤدي إلى التعمية في وقت مبكر من إصابة الرئة الناجمة عن البلميسين. يتم تطعيم hUC-MSC عن طريق الوريد بشكل عابر في رئتي الماوس، حيث يمارسون نشاطهم المضاد للالتهابات ومضاد للفيليفي. وفي الختام، تم تطبيق هذا البروتوكول بنجاح للاختبار قبل السريري ة hUC-MSC في نموذج الماوس التجريبي للتليف الرئوي البشري. ومع ذلك، يمكن توسيع هذه التقنية بسهولة على حد سواء لدراسة تأثير المواد المختلفة التي تدار داخل التراخالية على الفيزيولوجيا المرضية للرئتين والتحقق من صحة العلاجات النظامية الجديدة المضادة للالتهابات والمضادة للفيلي.

وقد تسبب إصابة الرئة عن طريق حقن واحد داخل الرغامى من 1.5 U/kg من وزن الجسم من كبريتات البيوميسين في 100 ميكرولتر من المالحة المعقمة. تلقت الحيوانات السيطرة حقن الرغامى من حجم متساو من المالحة. تم غرس طلقتين من hUC-MSC (2.5 × 105 في 200 ميكرولتر من المالحة المعقمة) في الوريد الذيل ...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin at JoVE.com

Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin

هنا نقدم طريقة فعالة للتحقيق في النشاط المضاد للفيليمنت من الخلايا السترومال mesenchymal الإنسان غرست عن طريق الوريد التي تم الحصول عليها من الحبل السري كله بعد تحريض إصابة الرئة عن طريق حقن البلوميسين داخل الرغامى في C57BL ستة فئران هذا البروتوكول يمكن أن تمتد بسهولة إلى الاختبار قبل السريرية من العلاجات الأخرى.

تحريض إصابة الرئة الماوس عن طريق حقن الرغامى من بليموسين

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models ...

يمكن تطبيق هذا البروتوكول بنجاح على حد سواء للحث على الاستجابة الالتهابية والليفية الهامة في كلتا الرئتين عن طريق حقن endotracheal من Bleomycin والتحقق من صحة العلاجات الجهازية المضادة للالتهابات والليفية الجديدة عن طريق حقن الوريد الذيل. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن الحقن المباشر للبلوميسين في القصبة الهوائية للماوس يضمن استهداف سريع للرئتين دون أي انسكاب في مجرى الهواء العلوي مما يسمح بالتحريض الآمن والقوي والقابل للتكرار من التهاب الرئة والتليف. وسوف يكون إثبات الإجراء الدكتور فيورنزا أورلاندو، طبيب بيطري من المختبر المتعاون لدينا.للبدء، ضع الماوس المُجرّد على ظهره على منصة جراحية. إصلاح دقيق ساقيه مع شرائط الشريط الجراحية لعقد ذلك في مكان. لفرط تمديد عنق الماوس، ووضع الدعم مثل لفة القطن الأسنان تحت منطقة عنق الرحم.ثم استخدم شفرة حلاقة لحلاقة الحلق بلطف. استخدام زوج من ملقط التشريحية لقرصة الجلد. استخدام زوج من حلقة التعامل مع مقص حاد منحني لجعل شق قصيرة حوالي نصف سنتيمتر في الطول في المراسلات إلى العضلات sternohyoid الماوس.استخدام القطن الصوف العصي لوقف أي نزيف. ثم الخارجي القصبة الهوائية عن طريق تشريح حادة وتنظيف بلطف من الدهون والأنسجة الأخرى. تدوير منصة الجراحية لتوجيه الماوس مع رأسه نحو المشغل الذي يسمح للمشغل أثناء الحقن لزاوية حقنة بشكل صحيح.لتصور القصبة الهوائية، ضع الماوس تحت مجهر التشغيل. ضبط الإضاءة وتعيين التكبير بين 1 و 1.2 ثم ضبط التركيز والحدة. يمكن تمييز القصبة الهوائية بسهولة على أنها أنبوب أبيض شفاف مع حلقات القصبة الهوائية المرئية بوضوح.ماصة بلطف لخلط حل Bleomycin وpirate 100 ميكرولتر في حقنة 0.5 ملليلتر مع إبرة قياس 25 تجنب تشكيل فقاعة. مرة واحدة يتم تصور القصبة الهوائية بوضوح، ثقب بعناية مع طرف إبرة في زاوية 30 درجة. حقن ببطء 100 ميكرولترات من Bleomycin مباشرة في تجويف القصبة الهوائية.بعد الانتظار بضع ثوان لوحدة التخزين بأكملها للسفر إلى أسفل الإبرة، إزالته من القصبة الهوائية. لاحظ بضع ثوان من انقطاع النفس الذي يحدث عندما يتم إدخال الإبرة بشكل صحيح في القصبة الهوائية مما يدل على أن كامل حجم السائل قد استنشق. التخلص بأمان من الحقنة والإبرة.إغلاق اللفافة تحت الجلد والجرح الجلد مع خياطة 5-0 absorbable والسماح للحيوان لاسترداد. بعد تخدير الماوس مرة أخرى ومرة واحدة وقد تم تأكيد فقدان الوعي، ووضع الماوس تحت غطاء محرك السيارة العقيمة. استخدم قناع الوجه مع تدفق مستمر من 1.5٪ isoflurane للحفاظ على التخدير لطيف طوال التجربة.لتعزيز توسع الأوعية والسماح للحقن أسهل، نقع الذيل في الماء الدافئ لمدة دقيقتين. مزيج تعليق من الحبل السري البشري الخلايا الوماضة mesenchymal بواسطة الأنابيب بلطف لتجنب تشكيل كتلة الخلية. استلهم 200 ميكرولترات في حقنة ملليلتر واحدة مع إبرة قياس 26 تجنب تشكيل فقاعة.عقد الذيل من طرف وتصويب بلطف عليه. ثم حدد موقع الوريد الجانبي للذيل. كشط بلطف الذيل بمشرط ومسحه بنسبة 70٪ من الإيثانول.بدءا من الجزء القعر من الذيل، أدخل الإبرة في الوريد بزاوية 15 درجة. ببطء غرس 200 ميكرولترات من الخلايا الحبل السري البشري mesenchymal. لمراقبة الحقن الوريدي الناجح ، لاحظ دخول السائل إلى الوريد دون مقاومة وعدم وجود الإسراف.بعد الانتظار بضع ثوان حتى ينتقل حجم كامل أسفل الإبرة، إزالته من الوريد. ثم تطبيق الضغط لفترة وجيزة على الجرح دخول مع الشاش العقيم لمنع النزيف والسماح للحيوان للتعافي. التخلص بأمان من الحقنة والإبرة بعد التسريب.بعد حقن Bleomycin ، تم تقييم التغيرات الهستوولوجية الرئوية من قبل هيماتوكسيلين وإوسين وPicrosirius Red التلطخ يؤكد التسلل الالتهابي والتليف الواسع النطاق مقارنة ببنية الرئة الطبيعية بعد الحقن الملحي. تم تخفيف التهاب الرئة والتليف الناجم عن بلوميسين إلى حد كبير عن طريق تسريب الخلايا السترومية السترومية السودية البشرية ولكن ليس عن طريق المالحة. تم قياس ترسب الكولاجين عن طريق مقايسة الهيدروكسي برولين.بعد حقن بليوميسين، زادت مستويات الهيدروكسيل تدريجيا من اليوم الثامن إلى اليوم 14 و 21. في حين أن إضافة الحبل السري البشري الخلايا الومالية السحوقية قلّل بشكل كبير من آثار بلوميسين. مستويات التعبير من كول1A1 نوع واحد جين الكولاجين في الرئة بأكملها مرنا أظهرت أيضا زيادة تدريجية في أيام 8 و 14 و 21 التي تم تخفيضها جزئيا عن طريق علاج الحبل السري البشري مسينشيمال الخلية.وأظهرت المناعة مع أجسام مضادة محددة أن غرست الخلايا السترومية الحبل السري البشري غرست بسرعة وفعالية وصلت إلى رئة الماوس، على الرغم من أنه تم الكشف عن عدد قليل من الخلايا فقط. وتشير هذه البيانات إلى حدوث تفكك سريع للخلايا من إصابة الموقع على الرغم من التأثير الوقائي المطول. استخدام مجهر التشغيل يضمن ثقة عالية من النجاح من خلال السماح للمشغل لرصد بدقة الموضع الصحيح للإبرة في القصبة الهوائية الماوس قبل التثبيت، وبالتالي تقليل خطر الإضرار به.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

عبر الاحليل تحريض العدوى ماوس المسالك البولية

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

إعداد مستمنع ماوس النخامية للتحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبي

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

عزل خلايا الرئة ماوس شجيرى

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

الزائفة الزنجارية المستحثة الرئة الإصابات نموذج

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

نمذجة الأغشية المخاطية المبيضات في اليرقات الزرد عن طريق الحقن Swimbladder

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

التعريفي للشلل وإصابة النظام المرئي في الفئران التي تي الخلايا المحددة للبصري المياليني أقوابورين أوتوانتيجين-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

متعدد الوسائط التصوير النهج استناداً إلى التصوير المقطعي الجزيئية الصغيرة-الأشعة المقطعية والأسفار لتقييم طولية لتليف الرئة الناجمة عن بليوميسين في الفئران

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

تقييم للسآمة للخلايا وإيمونومودولاتوري آثار المواد في شرائح البشرية دقة قطع الرئة

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation

نموذج لإصابة الرئة الحادة المحدودة ذاتياً عن طريق الغرس من جانب واحد داخل الشعب الهوائية

Selective intra-bronchial instillation of hydrochloric acid (HCl) to the murine left mainstem bronchus causes acute tissue injury with histopathologic ...

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

دراسة آثار دخان السجائر على عدوى Pseudomonas في الخلايا الظهارية الرئة

Cigarette smoking is the major etiological cause for lung emphysema and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Cigarette smoking also promotes ...