Name: induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin
Uploaded: 2019-04-30T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door een subsidie RF-2011-02352331 van Ministero Italiano della Salute (aan Armando Gabrielli).

Alle dierenverzorging en experimentele procedures werden goedgekeurd door het Italiaanse ministerie van volksgezondheid (vergunning n. 456/2016-PR) en uitgevoerd volgens de verklaring van de Verdragen van Helsinki.
1. muizen
<ol><li>Laat de muizen na de aanschaf gedurende ten minste 7 dagen vóór de injectie acclimeren. Opmerking: muizen werden ondergebracht in de dieren faciliteit onder pathogeen-vrije omstandigheden, werden gehandhaafd onder constante temperatuur en vochtigheid op een ...

<ol>
	<li>Iudici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Where+are+we+going+in+the+management+of+interstitial+lung+disease+in+patients+with+systemic+sclerosis?.">Where are we going in the management of interstitial lung disease in patients with systemic sclerosis?.</a> Autoimmunity Reviews. 14 (7), 575-578 (2015).</li><li>Moore, B. B., Hogaboam, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+pulmonary+fibrosis.">Murine models of pulmonary fibrosis.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (2), L152-L160 (2008).</li><li>Mouratis, M. A., Aidinis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+pulmonary+fibrosis+with+bleomycin.">Modeling pulmonary fibrosis with bleomycin.</a> Current Opinion in Pulmonary Medicine. 17 (5), 355-361 (2011).</li><li>Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bleomycin+animal+model:+a+useful+tool+to+investigate+treatment+options+for+idiopathic+pulmonary+fibrosis?.">The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis?.</a> International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 40 (3), 362-382 (2008).</li><li>Moore, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+fibrotic+lung+disease.">Animal models of fibrotic lung disease.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 49 (2), 167-179 (2013).</li><li>Schrier, D. J., Kunkel, R. G., Phan, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+strain+variation+in+murine+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">The role of strain variation in murine bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> American Review of Respiratory Disease. 127 (1), 63-66 (1983).</li><li>Phan, S. H., Kunkel, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cytokine+production+in+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">Lung cytokine production in bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> Experimental Lung Research. 18 (1), 29-43 (1992).</li><li>Capelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+manipulated+whole+human+umbilical+cord+is+a+rich+source+of+clinical-grade+human+mesenchymal+stromal+cells+expanded+in+human+platelet+lysate.">Minimally manipulated whole human umbilical cord is a rich source of clinical-grade human mesenchymal stromal cells expanded in human platelet lysate.</a> Cytotherapy. 13 (7), 786-801 (2011).</li><li>Beeravolu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Mesenchymal+Stromal+Cells+from+Human+Umbilical+Cord+and+Fetal+Placenta.">Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55224 (2017).</li><li>Moroncini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stromal+cells+from+human+umbilical+cord+prevent+the+development+of+lung+fibrosis+in+immunocompetent+mice.">Mesenchymal stromal cells from human umbilical cord prevent the development of lung fibrosis in immunocompetent mice.</a> PLoS One. 13 (6), e0196048 (2018).</li><li>Shahzeidi, S., Jeffery, P. K., Laurent, G. J., McAnulty, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+type+I+procollagen+mRNA+transcripts+in+the+lungs+of+mice+during+the+development+of+bleomycin-induced+fibrosis.">Increased type I procollagen mRNA transcripts in the lungs of mice during the development of bleomycin-induced fibrosis.</a> European Respiratory Journal. 7 (11), 1938-1943 (1994).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+hMSCs+improve+myocardial+infarction+in+mice+because+cells+embolized+in+lung+are+activated+to+secrete+the+anti-inflammatory+protein+TSG-6.">Intravenous hMSCs improve myocardial infarction in mice because cells embolized in lung are activated to secrete the anti-inflammatory protein TSG-6.</a> Cell Stem Cell. 5 (1), 54-63 (2009).</li><li>Scotton, C. J., Chambers, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleomycin+revisited:+towards+a+more+representative+model+of+IPF?.">Bleomycin revisited: towards a more representative model of IPF?.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (4), L439-L441 (2010).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).</li><li>Thomas, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation+in+mice+via+direct+laryngoscopy+using+an+otoscope.">Endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), e50269 (2014).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li><li>Dutta, S., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Men+and+mice:+Relating+their+ages.">Men and mice: Relating their ages.</a> Life Sciences. 152, 244-248 (2016).</li><li>Sueblinvong, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predisposition+for+disrepair+in+the+aged+lung.">Predisposition for disrepair in the aged lung.</a> American Journal of Medical Sciences. 344 (1), 41-51 (2012).</li><li>Moodley, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+umbilical+cord+mesenchymal+stem+cells+reduce+fibrosis+of+bleomycin-induced+lung+injury.">Human umbilical cord mesenchymal stem cells reduce fibrosis of bleomycin-induced lung injury.</a> American Journal of Pathology. 175 (1), 303-313 (2009).</li><li>How, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+mediate+the+release+of+interferon+gamma-induced+protein+10+and+alleviate+bleomycin-induced+lung+inflammation+and+fibrosis.">Induced pluripotent stem cells mediate the release of interferon gamma-induced protein 10 and alleviate bleomycin-induced lung inflammation and fibrosis.</a> Shock. 39 (3), 261-270 (2013).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TSG-6+as+a+biomarker+to+predict+efficacy+of+human+mesenchymal+stem/progenitor+cells+(hMSCs)+in+modulating+sterile+inflammation+in+vivo.">TSG-6 as a biomarker to predict efficacy of human mesenchymal stem/progenitor cells (hMSCs) in modulating sterile inflammation in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (47), 16766-16771 (2014).</li></ol>

Endotracheale toediening is de voorkeursroute voor het leveren van exogene agentia in de longen. Sinds enkele jaren is de directe injectie van bleomycine in de luchtpijp op grote schaal gebruikt voor het opwekken van pulmonale fibrose13 en recentelijk zijn er geavanceerdere, niet-invasieve technieken ontwikkeld om deze14,15 ,16.
De hier beschreven methode biedt verschillende z...

Pulmonale fibrose is een progressief pathologisch proces dat wordt gekenmerkt door de overmatige depositie van extracellulaire matrix componenten, voornamelijk type I collageen, in het Long interstitium, wat leidt tot een verminderde longfunctie. Het is het kenmerk van verschillende menselijke longziekten met een verschillende etiologie en vertegenwoordigt een slechte klinische prognostische factor. Aangezien de huidige therapieën vrij beperkt zijn1, Muismodellen blijven een essentieel instrument zowel voor het verdere onderzoek van de pathogene mechanismen beïnvloeden het ontstaan en de progressie van de ziekte en voor de ontwikkeling van nieuwe antifibrotische strategieën2,3.
Tot op heden is de toediening van bleomycine het meest toegepaste model van experimenteel geïnduceerde pulmonale fibrose4. Naast meerdere methoden (waaronder intraveneuze, intraperitoneale, subcutane en inhalationele), zijn intratracheale of Endotracheale injecties van bleomycine ontstaan als de meest gebruikte routes4,5. De methode die we hierin beschrijven is ontwikkeld om het scalaire effect van bleomycine op het tracheale slijmvlies te voorkomen. In feite is het door het exterioriseren van de luchtpijp en het visualiseren ervan door middel van een operatiemicroscoop het mogelijk om de indrukking van het gehele volume bleomycine oplossing rechtstreeks in de lagere luchtweg te bereiken zonder morsen in de bovenste luchtweg. Wanneer de vereiste chirurgische expertise en instrumentatie beschikbaar zijn, zorgt deze methode voor de veilige, robuuste en reproduceerbare inductie van longontsteking en fibrose, zoals hieronder gerapporteerd.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1024px;" width="1023">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">C57BL/6 mice</td>
			<td style="width:236px;">Charles River</td>
			<td style="width:239px;">Jax Mice Stock n. 000664</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">2,2,2-Tribromoethanol (Avertin)&#160;</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:239px;">T48402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Barraquer Micro Needle Holder</td>
			<td style="width:236px;">Lawton</td>
			<td style="width:239px;">62-3755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Bleomycin sulfate</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>B1141000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">B&#252;rker chamber</td>
			<td style="width:236px;">Brand&#160;</td>
			<td style="width:239px;">718905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Culture Flasks&#160;</td>
			<td style="width:236px;">EuroClone</td>
			<td style="width:239px;">ET7076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Disposable razors</td>
			<td style="width:236px;">Unigloves</td>
			<td style="width:239px;">4080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Dissecting Forceps</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">BD311R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">DPBS</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Heating pad</td>
			<td style="width:236px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:239px;">557023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Isoflurane Vet</td>
			<td style="width:236px;">Merial Italia</td>
			<td>N01AB06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Operating Microscope</td>
			<td style="width:236px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:239px;">Model OPM 16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">TrypLE Select Enzyme</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">12563-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vannas Micro Scissors</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">OC498R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vicryl Plus 4/0 Absorbable Suture, FS-2 needle 19 mm</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon</td>
			<td style="width:239px;">VCP392ZH</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin

Pulmonale fibrose is een kenmerk van verschillende menselijke longziekten met een verschillende etiologie. Aangezien de huidige therapieën vrij beperkt zijn, blijven Muismodellen een essentieel hulpmiddel voor het ontwikkelen van nieuwe antifibrotische strategieën. Hier bieden we een effectieve methode om te onderzoeken in vivo antifibrotische activiteit van menselijke mesenchymale stromale cellen verkregen uit gehele navelstreng (Huc-msc) in verzwakkende bleomycine-geïnduceerde long letsel. C57BL/6 muizen krijgen een enkelvoudige Endotracheale injectie met bleomycine (1,5 U/kg lichaamsgewicht) gevolgd door een dubbele infusie met hUC-MSC (2,5 x 105) in de staart ader, 24 uur en 7 dagen na de toediening van bleomycine. Na opoffering op dag 8, 14 of 21 worden inflammatoire en fibrotische veranderingen, collageengehalte en hUC-MSC aanwezigheid in explanted longweefsel geanalyseerd. De injectie van bleomycine in de luchtpijp van de muis maakt de directe targeting van de longen mogelijk, wat leidt tot uitgebreide pulmonale ontsteking en fibrose. De systemische toediening van een dubbele dosis van hUC-MSC resulteert in de vroege afstomting van de bleomycine-geïnduceerde long letsel. Intraveneus geïnfundeerd hUC-MSC worden transiënt in de muis longen, waar ze hun ontstekingsremmende en antifibrotische activiteit uitoefenen. Tot slot, dit protocol is met succes toegepast voor de preklinische testen van hUC-MSC in een experimenteel muismodel van menselijke pulmonale fibrose. Deze techniek kan echter gemakkelijk worden uitgebreid, zowel om het effect van verschillende endotracheally toegediende stoffen op de pathofysiologie van de longen te bestuderen als om nieuwe ontstekingsremmende en antifibrotische systemische therapieën te valideren.

Long letsel werd veroorzaakt door een enkelvoudige Endotracheale injectie van 1,5 e/kg lichaamsgewicht van bleomycine sulfaat in 100 μL steriele zoutoplossing. Controledieren kregen een Endotracheale injectie van een gelijk volume zoutoplossing. Twee schoten van hUC-MSC (2,5 x 105 in 200 μL steriele zoutoplossing) werden geïnfundeerd in de staart ader van de muis, 24 uur en 7 dagen na de toediening van bleomycine. Controledieren kregen een intraveneuze infusie van een gelijk...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin at JoVE.com

Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin

Hier presenteren we een effectieve methode voor het onderzoeken van de antifibrotische activiteit van intraveneus geïnfundeerde humane mesenchymale stromale cellen verkregen uit de gehele navelstreng na de inductie van long letsel door een Endotracheale injectie van bleomycine in C57BL /6 muizen. Dit protocol kan eenvoudig worden uitgebreid tot de preklinische testen van andere therapieën.

Inductie van muis long letsel door Endotracheale injectie van bleomycine

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models ...

Dit protocol kan met succes worden toegepast om belangrijke ontstekings- en fibrotische respons in beide longen te induceren door endotracheale injectie van Bleomycine als om nieuwe ontstekingsremmende en antifolbrotische systemische therapieën door staartaderinfusie te valideren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat directe injectie van Bleomycine in de muispijplucht zorgt voor een snelle targeting van de longen zonder morsen in de bovenste luchtwegen, waardoor een veilige, robuuste en reproduceerbare inductie van longontsteking en fibrose mogelijk is. Het aantonen van de procedure zal Dr.Fiorenza Orlando, een dierenarts van onze samenwerkende laboratorium.Om te beginnen, plaats de verdoofde muis liggend op zijn rug op een chirurgisch platform. Voorzichtig vast te stellen zijn benen met chirurgische tape strips om het op zijn plaats te houden. Om de hals van de muis hyper uit te breiden, plaatst u een ondersteuning zoals tandkatoenrol onder het cervicale gebied.Gebruik dan een scheermesje om de keel voorzichtig te scheren. Gebruik een paar anatomische tangen om de huid te knijpen. Gebruik een paar ring behandeld gebogen stompe schaar om een korte incisie ongeveer een halve centimeter in lengte in correspondentie met de muis sternohyoid spier te maken.Gebruik wattenstokjes om bloeden te stoppen. Vervolgens exterioriseren de luchtpijp door stompe dissectie en voorzichtig reinigen van vet en andere weefsels. Draai het chirurgische platform om de muis met zijn hoofd naar de operator te oriënteren, waardoor de operator tijdens de injectie de spuit goed kan schuinzetten.Om de luchtpijp te visualiseren, plaats de muis onder een operatiemicroscoop. Pas de verlichting aan en stel vergroting in tussen 1 en 1.2 en pas vervolgens de focus en scherpte aan. De luchtpijp is gemakkelijk te onderscheiden als een witte doorschijnende buis met duidelijk zichtbare tracheale ringen.Voorzichtig pipette om de Bleomycine oplossing te mengen en 100 microliter aan tezuiden in een 0,5 milliliter spuit met een 25-meter naald het vermijden van bellen vorming. Zodra de luchtpijp duidelijk is gevisualiseerd, zorgvuldig doorboren met de naald tip in een hoek van 30 graden. Injecteer langzaam 100 microliter Bleomycine rechtstreeks in het lumen van de luchtpijp.Na een paar seconden wachten op het hele volume te reizen naar beneden de naald, verwijder het uit de luchtpijp. Let op een paar seconden apneu die optreedt wanneer de naald correct in de luchtpijp wordt ingebracht, wat aangeeft dat het volledige volume vloeistof is ingeademd. Gooi de spuit en naald veilig weg.Sluit de onderhuidse fascia en de huidwond met een 5-0 absorbeerbare hechting en laat het dier herstellen. Na het verdoven van de muis opnieuw en zodra bewusteloosheid is bevestigd, plaats de muis onder een steriele kap. Gebruik een gezichtsmasker met een continue stroom van 1,5% isoflurane om zachte anesthesie te behouden gedurende het hele experiment.Om vasodilatatie te bevorderen en zorgen voor een gemakkelijkere injectie, weken de staart in warm water gedurende twee minuten. Meng een suspensie van menselijke navelstreng mesenchymale stromale cellen door zachtjes pipetten om celklontervorming te voorkomen. Aspirate 200 microliters in een een milliliter spuit met een 26-gauge naald het vermijden van bellen vorming.Houd de staart bij de punt en strek hem voorzichtig recht. Zoek dan de zijader van de staart. Schraap de staart voorzichtig met een scalpel en veeg deze af met 70% ethanol.Vanaf het distale gedeelte van de staart, steek de naald in de ader in een hoek van 15 graden. Langzaam infuus 200 microliters van menselijke navelstreng mesenchymale stromal cellen. Om een succesvolle intraveneuze infusie te monitoren, moet u de vloeistof observeren die de ader binnendringt zonder weerstand en een gebrek aan extravasatie.Na een paar seconden wachten tot het hele volume naar beneden de naald reist, verwijder deze uit de ader. Breng vervolgens kort druk uit op de binnenwond met een steriel gaas om bloedingen te voorkomen en het dier te laten herstellen. Gooi de spuit en de naald na de infusie veilig weg.Na bleomycine injectie, long histopathologische veranderingen werden beoordeeld door Hematoxylin en Eosin en Picrosirius Rode kleuring bevestigen uitgebreide ontstekingsinfiltratie en fibrose in vergelijking met normale longarchitectuur na zoutoplossing injectie. Bleomycine-geïnduceerde longontsteking en fibrose werden grotendeels verzwakt door menselijke navelstreng mesenchymale stromale celinfusie, maar niet door zoutoplossing. Collageen depositie werd gemeten door hydroxyproline test.Na bleomycine injectie, hydroxyproline niveaus geleidelijk toegenomen van dag acht tot dag 14 en 21. Terwijl de toevoeging van menselijke navelstreng mesenchymale stromale cellen de effecten van Bleomycine aanzienlijk verminderde. Expressie niveaus van Col1A1 type een collageen gen in hele long mRNA toonde ook een progressieve toename op dagen acht, 14 en 21 die gedeeltelijk werd verminderd door menselijke navelstreng mesenchymale stromale celbehandeling.Immunostaining met specifieke antilichamen toonde aan dat toegediende menselijke navelstreng mesenchymale stromale cellen snel en effectief de muizenlongen bereikten, hoewel slechts een paar cellen werden gedetecteerd. Deze gegevens suggereren een snelle dislocatie van de cellen van de site letsel ondanks de langdurige beschermende werking. Het gebruik van een bedieningsmicroscoop zorgt voor een hoog vertrouwen in succes door dat de operator de juiste plaatsing van de naald in de muispijp voor de installatie nauwkeurig kan controleren, waardoor het risico op beschadiging ervan wordt geminimaliseerd.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Transurethrale Inductie van Mouse urineweginfectie

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Voorbereiding van de muis hypofyse Immunogeen voor de inductie van experimentele auto-immune Hypophysitis

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Isolatie van Mouse Lung dendritische cellen

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Modelleren candidiasis van de slijmvliezen in larvale zebravis door zwemblaas Injection

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Inductie van verlamming en visuele systeem schade in muizen door T cellen specifiek voor Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

Een multimodale Imaging aanpak op basis van Micro-CT en fluorescentie moleculaire tomografie voor longitudinale beoordeling van bleomycine-geïnduceerde Lung Fibrosis in muizen

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Beoordeling van de cytotoxische en immunomodulerende effecten van stoffen in menselijke precisie-cut Lung plakjes

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation

Een model van zelf beperkte acute long letsel door unilaterale intra-bronchiale zuur Instillatie

Selective intra-bronchial instillation of hydrochloric acid (HCl) to the murine left mainstem bronchus causes acute tissue injury with histopathologic ...

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Het bestuderen van effecten van sigarettenrook op pseudomonas infectie in longepitheelcellen

Cigarette smoking is the major etiological cause for lung emphysema and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Cigarette smoking also promotes ...