Name: induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin
Uploaded: 2019-04-30T12:30:00
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Diese Arbeit wurde durch ein Stipendium RF-2011-02352331 von Ministero Italiano della Salute (an Armando Gabrielli) unterstützt.

Alle Tierpflege- und Versuchsverfahren wurden vom italienischen Gesundheitsministerium genehmigt (Genehmigung N. 456/2016-PR) und gemäß der Erklärung der Helsinki-Konventionen durchgeführt.
1. Mäuse
<ol><li>Nach dem Kauf lassen Sie die Mäuse mindestens 7 Tage vor der Injektion akklimatisieren. HINWEIS: Mäuse wurden in der Tieranlage unter pathogenfreien Bedingungen untergebracht, wurden bei konstanter Temperatur und Luftfeuchtigkeit in einem 12-h-Licht-/Dunkelzyklus gehalten und er...

<ol>
	<li>Iudici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Where+are+we+going+in+the+management+of+interstitial+lung+disease+in+patients+with+systemic+sclerosis?.">Where are we going in the management of interstitial lung disease in patients with systemic sclerosis?.</a> Autoimmunity Reviews. 14 (7), 575-578 (2015).</li><li>Moore, B. B., Hogaboam, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+pulmonary+fibrosis.">Murine models of pulmonary fibrosis.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (2), L152-L160 (2008).</li><li>Mouratis, M. A., Aidinis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+pulmonary+fibrosis+with+bleomycin.">Modeling pulmonary fibrosis with bleomycin.</a> Current Opinion in Pulmonary Medicine. 17 (5), 355-361 (2011).</li><li>Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bleomycin+animal+model:+a+useful+tool+to+investigate+treatment+options+for+idiopathic+pulmonary+fibrosis?.">The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis?.</a> International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 40 (3), 362-382 (2008).</li><li>Moore, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+fibrotic+lung+disease.">Animal models of fibrotic lung disease.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 49 (2), 167-179 (2013).</li><li>Schrier, D. J., Kunkel, R. G., Phan, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+strain+variation+in+murine+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">The role of strain variation in murine bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> American Review of Respiratory Disease. 127 (1), 63-66 (1983).</li><li>Phan, S. H., Kunkel, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cytokine+production+in+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">Lung cytokine production in bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> Experimental Lung Research. 18 (1), 29-43 (1992).</li><li>Capelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+manipulated+whole+human+umbilical+cord+is+a+rich+source+of+clinical-grade+human+mesenchymal+stromal+cells+expanded+in+human+platelet+lysate.">Minimally manipulated whole human umbilical cord is a rich source of clinical-grade human mesenchymal stromal cells expanded in human platelet lysate.</a> Cytotherapy. 13 (7), 786-801 (2011).</li><li>Beeravolu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Mesenchymal+Stromal+Cells+from+Human+Umbilical+Cord+and+Fetal+Placenta.">Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55224 (2017).</li><li>Moroncini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stromal+cells+from+human+umbilical+cord+prevent+the+development+of+lung+fibrosis+in+immunocompetent+mice.">Mesenchymal stromal cells from human umbilical cord prevent the development of lung fibrosis in immunocompetent mice.</a> PLoS One. 13 (6), e0196048 (2018).</li><li>Shahzeidi, S., Jeffery, P. K., Laurent, G. J., McAnulty, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+type+I+procollagen+mRNA+transcripts+in+the+lungs+of+mice+during+the+development+of+bleomycin-induced+fibrosis.">Increased type I procollagen mRNA transcripts in the lungs of mice during the development of bleomycin-induced fibrosis.</a> European Respiratory Journal. 7 (11), 1938-1943 (1994).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+hMSCs+improve+myocardial+infarction+in+mice+because+cells+embolized+in+lung+are+activated+to+secrete+the+anti-inflammatory+protein+TSG-6.">Intravenous hMSCs improve myocardial infarction in mice because cells embolized in lung are activated to secrete the anti-inflammatory protein TSG-6.</a> Cell Stem Cell. 5 (1), 54-63 (2009).</li><li>Scotton, C. J., Chambers, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleomycin+revisited:+towards+a+more+representative+model+of+IPF?.">Bleomycin revisited: towards a more representative model of IPF?.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (4), L439-L441 (2010).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).</li><li>Thomas, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation+in+mice+via+direct+laryngoscopy+using+an+otoscope.">Endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), e50269 (2014).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li><li>Dutta, S., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Men+and+mice:+Relating+their+ages.">Men and mice: Relating their ages.</a> Life Sciences. 152, 244-248 (2016).</li><li>Sueblinvong, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predisposition+for+disrepair+in+the+aged+lung.">Predisposition for disrepair in the aged lung.</a> American Journal of Medical Sciences. 344 (1), 41-51 (2012).</li><li>Moodley, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+umbilical+cord+mesenchymal+stem+cells+reduce+fibrosis+of+bleomycin-induced+lung+injury.">Human umbilical cord mesenchymal stem cells reduce fibrosis of bleomycin-induced lung injury.</a> American Journal of Pathology. 175 (1), 303-313 (2009).</li><li>How, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+mediate+the+release+of+interferon+gamma-induced+protein+10+and+alleviate+bleomycin-induced+lung+inflammation+and+fibrosis.">Induced pluripotent stem cells mediate the release of interferon gamma-induced protein 10 and alleviate bleomycin-induced lung inflammation and fibrosis.</a> Shock. 39 (3), 261-270 (2013).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TSG-6+as+a+biomarker+to+predict+efficacy+of+human+mesenchymal+stem/progenitor+cells+(hMSCs)+in+modulating+sterile+inflammation+in+vivo.">TSG-6 as a biomarker to predict efficacy of human mesenchymal stem/progenitor cells (hMSCs) in modulating sterile inflammation in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (47), 16766-16771 (2014).</li></ol>

Die endotracheale Verabreichung ist der bevorzugte Weg für die Abgabe exogener Wirkstoffe in die Lunge. Seit einigen Jahren ist die direkte Injektion von Bleomycin in die Luftröhre weit verbreitet, um Lungenfibrose13 zu induzieren, und in jüngster Zeit wurden fortgeschrittenere, nichtinvasive Techniken entwickelt, um diese14,15 zu erreichen. ,16.
Die hier beschriebene Metho...

Lungenfibrose ist ein progressiver pathologischer Prozess, der sich durch die übermäßige Ablagerung von extrazellulären Matrixkomponenten, hauptsächlich Kollagen Typ I, im Lungeninterstitium auszeichnet, was zu einer eingeschränkten Lungenfunktion führt. Es ist das Kennzeichen mehrerer menschlicher Lungenerkrankungen mit einer anderen Ätiologie und stellt einen schlechten klinischen Prognosefaktor dar. Da die derzeitigen Therapien eher begrenzt sind1, sind Mausmodelle weiterhin ein wesentliches Werkzeug sowohl für die weitere Untersuchung der pathogenen Mechanismen, die den Beginn und das Fortschreiten der Krankheit beeinflussen, als auch für die Entwicklung neuer Antifibrotikums. Strategien2,3.
Bis heute war die Verabreichung von Bleomycin das am häufigsten angewandte Modell der experimentell induzierten Lungenfibrose4. Neben mehreren Liefermethoden (einschließlich intravenöser, intraperitonealer, subkutaner und inhalationsaler), intratrachealen oder endotrachealen Injektionen von Bleomycin haben sich als die am häufigsten verwendeten Routen4,5herauskristallisiert. Die Methode, die wir hier beschreiben, wurde entwickelt, um die Verbrühungswirkung von Bleomycin auf die Trachealschleimhaut zu vermeiden. Durch die Ausgliederung der Luftröhre und ihre Visualisierung durch ein Operationsmikroskop ist es möglich, das gesamte Volumen der Bleomycinlösung direkt in die untere Atemwege zu übertragen, ohne dass die obere Atemwege verschüttet wird. Wenn das erforderliche chirurgische Know-how und die erforderliche Instrumentierung zur Verfügung stehen, ermöglicht diese Methode eine sichere, robuste und reproduzierbare Induktion von Lungenentzündungen und Fibrose, wie unten berichtet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1024px;" width="1023">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">C57BL/6 mice</td>
			<td style="width:236px;">Charles River</td>
			<td style="width:239px;">Jax Mice Stock n. 000664</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">2,2,2-Tribromoethanol (Avertin)&#160;</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:239px;">T48402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Barraquer Micro Needle Holder</td>
			<td style="width:236px;">Lawton</td>
			<td style="width:239px;">62-3755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Bleomycin sulfate</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>B1141000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">B&#252;rker chamber</td>
			<td style="width:236px;">Brand&#160;</td>
			<td style="width:239px;">718905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Culture Flasks&#160;</td>
			<td style="width:236px;">EuroClone</td>
			<td style="width:239px;">ET7076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Disposable razors</td>
			<td style="width:236px;">Unigloves</td>
			<td style="width:239px;">4080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Dissecting Forceps</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">BD311R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">DPBS</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Heating pad</td>
			<td style="width:236px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:239px;">557023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Isoflurane Vet</td>
			<td style="width:236px;">Merial Italia</td>
			<td>N01AB06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Operating Microscope</td>
			<td style="width:236px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:239px;">Model OPM 16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">TrypLE Select Enzyme</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">12563-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vannas Micro Scissors</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">OC498R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vicryl Plus 4/0 Absorbable Suture, FS-2 needle 19 mm</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon</td>
			<td style="width:239px;">VCP392ZH</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin

Lungenfibrose ist ein Kennzeichen mehrerer menschlicher Lungenerkrankungen mit einer anderen Ätiologie. Da die derzeitigen Therapien eher begrenzt sind, sind Mausmodelle nach wie vor ein wesentliches Werkzeug für die Entwicklung neuer antifibrotischer Strategien. Hier bieten wir eine effektive Methode zur Untersuchung der antifibrotischen In-vivo-Aktivität menschlicher mesenchymaler Stromalzellen, die aus der ganzen Nabelschnur (hUC-MSC) bei mildernden Bleomycin-induzierten Lungenverletzungen gewonnen werden. C57BL/6-Mäuse erhalten eine einmalige endotracheale Injektion von Bleomycin (1,5 U/kg Körpergewicht), gefolgt von einer doppelten Infusion von hUC-MSC (2,5 x 105) in die Schwanzvene, 24 h und 7 Tage nach der Bleomycin-Verabreichung. Nach Opfern an den Tagen 8, 14 oder 21 werden entzündliche und fibrotische Veränderungen, Kollagengehalt und hUC-MSC-Präsenz im explantierten Lungengewebe analysiert. Die Injektion von Bleomycin in die Mausluftröhre ermöglicht die direkte Ausrichtung der Lunge, was zu umfangreichen Lungenentzündungen und Fibrose führt. Die systemische Verabreichung einer doppelten Dosis von hUC-MSC führt zur frühen Abstumpfung der bleomycin-induzierten Lungenverletzung. Intravenös infundierte hUC-MSC werden vorübergehend in die Mauslunge eingraviert, wo sie ihre entzündungshemmende und antifibrotische Aktivität ausüben. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass dieses Protokoll erfolgreich für die präklinische Prüfung von hUC-MSC in einem experimentellen Mausmodell der menschlichen Lungenfibrose angewendet wurde. Diese Technik kann jedoch leicht erweitert werden, um sowohl die Wirkung verschiedener endotracheal verabreichter Substanzen auf die Pathophysiologie der Lunge zu untersuchen als auch neue entzündungshemmende und antifibrotische systemische Therapien zu validieren.

Lungenverletzungen wurden durch eine einmalige endotracheale Injektion von 1,5 U/kg Körpergewicht von Bleomycinsulfat in 100 l steriler Salinin induziert. Kontrolltiere erhielten eine endotracheale Injektion von gleichem Volumen von Saline. Zwei Aufnahmen von hUC-MSC (2,5 x 105 in 200 l steriler Salin) wurden in die Schwanzvene der Maus infundiert, 24 h und 7 Tage nach der Bleomycin-Verabreichung. Kontrolltiere erhielten eine intravenöse Infusion mit einem gleichen Volumen st...

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Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin

Hier stellen wir eine wirksame Methode zur Untersuchung der antifibrotischen Aktivität intravenös infundierter menschlicher mesenchymaler Stromalzellen vor, die nach der Induktion einer Lungenverletzung durch eine endotracheale Injektion von Bleomycin in C57BL aus der gesamten Nabelschnur gewonnen wurden. /6 Mäuse. Dieses Protokoll kann leicht auf die präklinische Prüfung anderer Therapeutika ausgedehnt werden.

Induktion der Maus Lungenverletzung durch Endotracheal Injektion von Bleomycin

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models ...

Dieses Protokoll kann erfolgreich angewendet werden, um sowohl wichtige entzündliche und fibrotische Reaktion in beiden Lungen durch endotracheale Injektion von Bleomycin zu induzieren und neue entzündungshemmende und antifibrotische systemische Therapien durch Schwanzveneninfusion zu validieren. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass die direkte Injektion von Bleomycin in die Mausluftröhre eine schnelle Ausrichtung der Lunge ohne Verschüttungen in der oberen Atemwege gewährleistet, was eine sichere, robuste und reproduzierbare Induktion von Lungenentzündung und Fibrose ermöglicht. Demonstriert wird das Verfahren von Dr.Fiorenza Orlando, einem Tierarzt aus unserem Kooperierenden Labor.Positionieren Sie zunächst die anästhesierte Maus auf dem Rücken auf einer chirurgischen Plattform. Befestigen Sie seine Beine zart mit chirurgischen Bandstreifen, um sie an Ort und Stelle zu halten. Um den Hals der Maus hyper zu verlängern, legen Sie eine Stütze wie Zahnbaumwolle Rolle unter seinem Zervixbereich.Dann verwenden Sie eine Rasierklinge, um die Kehle sanft zu rasieren. Verwenden Sie ein Paar anatomische Zangen, um die Haut zu kneifen. Verwenden Sie ein Paar Ring gehandhabt gekrümmte stumpfe Schere, um einen kurzen Schnitt etwa einen halben Zentimeter in der Länge in Übereinstimmung mit der Maus sternohyoid Muskel zu machen.Verwenden Sie Wattestäbe, um Blutungen zu stoppen. Dann die Luftröhre durch stumpfe Sezieren aussen und sanft von Fett und anderen Geweben reinigen. Drehen Sie die chirurgische Plattform, um die Maus mit dem Kopf an dem Bediener zu orientieren, was es dem Bediener während der Injektion ermöglicht, die Spritze richtig zu winkeln.Um die Luftröhre zu visualisieren, stellen Sie die Maus unter ein Operationsmikroskop. Stellen Sie die Beleuchtung ein und stellen Sie die Vergrößerung zwischen 1 und 1,2 ein, und passen Sie dann den Fokus und die Schärfe an. Die Luftröhre kann leicht als weißes transluzentes Rohr mit gut sichtbaren Trachealringen unterschieden werden.Pipette vorsichtig zur Mischung der Bleomycin-Lösung und Aspirieren von 100 Mikrolitern in eine 0,5-Milliliter-Spritze mit einer 25-Grad-Nadel, die Blasenbildung vermeidet. Sobald die Luftröhre klar visualisiert ist, punktieren Sie sie vorsichtig mit der Nadelspitze in einem 30-Grad-Winkel. 100 Mikroliter Bleomycin langsam direkt in das Lumen der Luftröhre injizieren.Nachdem Sie einige Sekunden gewartet haben, bis das gesamte Volumen die Nadel hinunterfährt, entfernen Sie sie aus der Luftröhre. Beobachten Sie ein paar Sekunden Apnoe auftreten, wenn die Nadel richtig in die Luftröhre eingeführt wird, was darauf hindeutet, dass das gesamte Flüssigkeitsvolumen eingeatmet wurde. Entsorgen Sie die Spritze und die Nadel sicher.Schließen Sie die subkutane Faszien und die Hautwunde mit einer 5-0 resorbierbaren Naht und lassen Sie das Tier sich erholen. Nach der erneuten Anästhesisierung der Maus und sobald die Bewusstlosigkeit bestätigt ist, legen Sie die Maus unter eine sterile Kapuze. Verwenden Sie eine Gesichtsmaske mit einem kontinuierlichen Fluss von 1,5%isoflurane, um eine sanfte Anästhesie während des Experiments aufrechtzuerhalten.Um die Vasodilatation zu fördern und eine einfachere Injektion zu ermöglichen, den Schwanz zwei Minuten in warmes Wasser einweichen. Mischen Sie eine Suspension der menschlichen Nabelschnur mesenchymale stromale Zellen durch sanfte Pipettieren, um Zellklumpenbildung zu vermeiden. 200 Mikroliter in eine Ein-Milliliter-Spritze mit einer 26-Spur-Nadel aspirieren, um Blasenbildung zu vermeiden.Halten Sie den Schwanz an der Spitze und richten Sie ihn sanft. Dann lokalisieren Sie die seitliche Vene des Schwanzes. Den Schwanz vorsichtig mit einem Skalpell kratzen und mit 70% Ethanol abwischen.Ausgehend vom distalen Teil des Schwanzes, legen Sie die Nadel in die Vene in einem 15-Grad-Winkel. Langsam infundieren 200 Mikroliter menschlichen Nabelschnur mesenchymale stromal Zellen. Um eine erfolgreiche intravenöse Infusion zu überwachen, beobachten Sie die Flüssigkeit, die ohne Widerstand und mangelnde Extravasation in die Vene gelangt.Nachdem Sie einige Sekunden gewartet haben, bis das gesamte Volumen die Nadel hinunterfährt, entfernen Sie sie aus der Vene. Dann drücken Sie kurz mit einer sterilen Gaze Druck auf die Eingangswunde, um Blutungen zu verhindern und das Tier erholen zu lassen. Entsorgen Sie die Spritze und die Nadel nach der Infusion sicher.Nach der Bleomycin-Injektion wurden die histopathologischen Veränderungen der Lunge durch Hämatoxylin und Eosin und Picrosirius Red Staining bewertet, die eine extensive entzündliche Infiltration und Fibrose im Vergleich zur normalen Lungenarchitektur nach salinöser Injektion bestätigten. Bleomycin-induzierte Lungenentzündung und Fibrose wurden weitgehend durch menschliche Nabelschnur mesenchymale Stromalzellinfusion, aber nicht durch Salin abgeschwächt. Die Kollagenablagerung wurde mit Hydroxyprolin-Assay gemessen.Nach Bleomycin-Injektion, Hydroxyprolinspiegel schrittweise erhöht von Tag acht auf Tag 14 und 21. Während die Zugabe von menschlichen Nabelschnur mesenchymale stromale Zellen deutlich reduziert die Auswirkungen von Bleomycin. Expressionsniveaus des Col1A1-Typ-eins-Kollagengens in der gesamten Lungen-mRNA zeigten auch an den Tagen acht, 14 und 21 einen progressiven Anstieg, der durch die Behandlung der menschlichen Nabelschnur mesenchymal stromal zelliert teilweise reduziert wurde.Die Immunfärbung mit spezifischen Antikörpern zeigte, dass infundierte menschliche Nabelschnur mesenchymale Stromalzellen schnell und effektiv die Lungen der Maus erreichten, obwohl nur wenige Zellen nachgewiesen wurden. Diese Daten deuten auf eine schnelle Dislokation der Zellen von der Standortverletzung trotz der anhaltenden Schutzwirkung hin. Der Einsatz eines Operationsmikroskops sorgt für hohe Erfolgssicherheit, da der Bediener die korrekte Platzierung der Nadel in die Mausluftröhre vor der Installation genau überwachen kann, wodurch das Risiko einer Beschädigung minimiert wird.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Transurethrale Induktion von Maus Harnwegsinfekt

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Vorbereitung der Maus Pituitary Immunogen für die Induktion der experimentellen autoimmunen Hypophysitis

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Isolierung von Maus Lung Dendritischen Zellen

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa induzierte Lungenschädigung-Modell

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Modellierung Mucosal Candidiasis in Zebrafisch-Larven von Schwimmblase Injection

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induktion von Lähmung und visuelles System Verletzungen bei Mäusen durch T-Zellen spezifisch für Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

Eine multimodale Bildgebung Ansatz basierend auf Mikro-CT und Fluoreszenz Molekulare Computertomographie für längs-Bewertung der Bleomycin-induzierten Lungenfibrose bei Mäusen

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Bewertung der zytotoxischen und immunmodulatorische Wirkung von Substanzen im menschlichen Precision-Cut Lung Slices

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation

Ein Modell der selbstbegrenzten akuten Lungenverletzung durch einseitige Intra-Bronchialsäure-Instillation

Selective intra-bronchial instillation of hydrochloric acid (HCl) to the murine left mainstem bronchus causes acute tissue injury with histopathologic ...

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Studium der Auswirkungen von Zigarettenrauch auf Pseudomonas-Infektion in Lungenepithelzellen

Cigarette smoking is the major etiological cause for lung emphysema and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Cigarette smoking also promotes ...