Name: induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin
Uploaded: 2019-04-30T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin at JoVE.com

עבודה זו נתמכת על ידי מענק RF-2011-02352331 מ Ministero איטלקית דלה הצדעה (כדי ארמנדו גבריאלי).

כל טיפול בעלי חיים והליכים ניסיוניים אושרו על ידי משרד הבריאות האיטלקי (הרשאה נ. 456/2016-PR) והתבצע בהתאם למוסכמות הצהרת הלסינקי.
1. עכברים
<ol><li>לאחר רכישת אותם, לאפשר לעכברים כדי התאקלם לפחות 7 ימים לפני הזריקה. הערה: עכברים שוכנו במתקן לבעלי חיים בתנאים ללא פתוגן, שמרו תחת טמפר...

<ol>
	<li>Iudici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Where+are+we+going+in+the+management+of+interstitial+lung+disease+in+patients+with+systemic+sclerosis?.">Where are we going in the management of interstitial lung disease in patients with systemic sclerosis?.</a> Autoimmunity Reviews. 14 (7), 575-578 (2015).</li><li>Moore, B. B., Hogaboam, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+pulmonary+fibrosis.">Murine models of pulmonary fibrosis.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (2), L152-L160 (2008).</li><li>Mouratis, M. A., Aidinis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+pulmonary+fibrosis+with+bleomycin.">Modeling pulmonary fibrosis with bleomycin.</a> Current Opinion in Pulmonary Medicine. 17 (5), 355-361 (2011).</li><li>Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bleomycin+animal+model:+a+useful+tool+to+investigate+treatment+options+for+idiopathic+pulmonary+fibrosis?.">The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis?.</a> International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 40 (3), 362-382 (2008).</li><li>Moore, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+fibrotic+lung+disease.">Animal models of fibrotic lung disease.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 49 (2), 167-179 (2013).</li><li>Schrier, D. J., Kunkel, R. G., Phan, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+strain+variation+in+murine+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">The role of strain variation in murine bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> American Review of Respiratory Disease. 127 (1), 63-66 (1983).</li><li>Phan, S. H., Kunkel, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cytokine+production+in+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">Lung cytokine production in bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> Experimental Lung Research. 18 (1), 29-43 (1992).</li><li>Capelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+manipulated+whole+human+umbilical+cord+is+a+rich+source+of+clinical-grade+human+mesenchymal+stromal+cells+expanded+in+human+platelet+lysate.">Minimally manipulated whole human umbilical cord is a rich source of clinical-grade human mesenchymal stromal cells expanded in human platelet lysate.</a> Cytotherapy. 13 (7), 786-801 (2011).</li><li>Beeravolu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Mesenchymal+Stromal+Cells+from+Human+Umbilical+Cord+and+Fetal+Placenta.">Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55224 (2017).</li><li>Moroncini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stromal+cells+from+human+umbilical+cord+prevent+the+development+of+lung+fibrosis+in+immunocompetent+mice.">Mesenchymal stromal cells from human umbilical cord prevent the development of lung fibrosis in immunocompetent mice.</a> PLoS One. 13 (6), e0196048 (2018).</li><li>Shahzeidi, S., Jeffery, P. K., Laurent, G. J., McAnulty, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+type+I+procollagen+mRNA+transcripts+in+the+lungs+of+mice+during+the+development+of+bleomycin-induced+fibrosis.">Increased type I procollagen mRNA transcripts in the lungs of mice during the development of bleomycin-induced fibrosis.</a> European Respiratory Journal. 7 (11), 1938-1943 (1994).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+hMSCs+improve+myocardial+infarction+in+mice+because+cells+embolized+in+lung+are+activated+to+secrete+the+anti-inflammatory+protein+TSG-6.">Intravenous hMSCs improve myocardial infarction in mice because cells embolized in lung are activated to secrete the anti-inflammatory protein TSG-6.</a> Cell Stem Cell. 5 (1), 54-63 (2009).</li><li>Scotton, C. J., Chambers, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleomycin+revisited:+towards+a+more+representative+model+of+IPF?.">Bleomycin revisited: towards a more representative model of IPF?.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (4), L439-L441 (2010).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).</li><li>Thomas, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation+in+mice+via+direct+laryngoscopy+using+an+otoscope.">Endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), e50269 (2014).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li><li>Dutta, S., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Men+and+mice:+Relating+their+ages.">Men and mice: Relating their ages.</a> Life Sciences. 152, 244-248 (2016).</li><li>Sueblinvong, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predisposition+for+disrepair+in+the+aged+lung.">Predisposition for disrepair in the aged lung.</a> American Journal of Medical Sciences. 344 (1), 41-51 (2012).</li><li>Moodley, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+umbilical+cord+mesenchymal+stem+cells+reduce+fibrosis+of+bleomycin-induced+lung+injury.">Human umbilical cord mesenchymal stem cells reduce fibrosis of bleomycin-induced lung injury.</a> American Journal of Pathology. 175 (1), 303-313 (2009).</li><li>How, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+mediate+the+release+of+interferon+gamma-induced+protein+10+and+alleviate+bleomycin-induced+lung+inflammation+and+fibrosis.">Induced pluripotent stem cells mediate the release of interferon gamma-induced protein 10 and alleviate bleomycin-induced lung inflammation and fibrosis.</a> Shock. 39 (3), 261-270 (2013).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TSG-6+as+a+biomarker+to+predict+efficacy+of+human+mesenchymal+stem/progenitor+cells+(hMSCs)+in+modulating+sterile+inflammation+in+vivo.">TSG-6 as a biomarker to predict efficacy of human mesenchymal stem/progenitor cells (hMSCs) in modulating sterile inflammation in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (47), 16766-16771 (2014).</li></ol>

הממשלה הקיימת מהווה מסלול מועדף לאספקת סוכנים אקגניים לריאות. מאז מספר שנים, הזרקה ישירה של ליאומיצין לתוך קנה הנשימה כבר בשימוש נרחב כדי לגרום פיברוזיס הריאות13 ו, לאחרונה, יותר מתקדם, טכניקות לא פולשני פותחו כדי להשיג את זה14,15 ,...

פיברוזיס ריאתי הוא תהליך פתולוגי מתקדם המאופיין על ידי הפקדת מוגזמת של רכיבי מטריקס המתכלים, בעיקר סוג אני קולגן, בריאות interstitium, המוביל לתפקוד ריאות לקויי. זהו סימן ההיכר של מחלות ריאה אנושית עם אטיולוגיה שונה ומייצגת גורם התחזיות הקליני המסכן. מאז הטיפולים הנוכחיים הם מוגבלים למדי1, מודלים העכבר להמשיך להיות כלי חיוני הן עבור חקירה נוספת של מנגנוני פתוגניים המשפיעים על התחלתה ואת ההתקדמות של המחלה לפיתוח אנטיפיברוטיקה חדשה אסטרטגיות2,3.
עד כה, המינהל של ליאומיצין היה המודל הנפוץ ביותר של פיברוזיס הריאות המושרה בניסויים4. לצד מספר שיטות מרובות (כולל לעירוי, תוך הצפק, תת עורית ושאיפה), הליאומיצין באופן תדיר או בזריקות האנדוקנה, הופיעו כמסלולים הנפוצים ביותר4,5. השיטה שאנו מתארים להלן פותחה כדי למנוע את ההשפעה הרותח של ליאומיצין על רירית הקנה. למעשה, על ידי העברת הקנה ומדמיין אותו באמצעות מיקרוסקופ הפעלה, ניתן להשיג את החוסר של הנפח כולו של הפתרון ליאומיצין ישירות לתוך נתיב האוויר התחתון ללא כל נשפך בנתיב האוויר העליון. כאשר המומחיות והמכשור הכירורגי הנדרשים זמינים, שיטה זו מאפשרת בטיחות, חזקה, השראה האינדוקציה של דלקת ריאות פיברוזיס, כפי שדווח להלן.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1024px;" width="1023">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">C57BL/6 mice</td>
			<td style="width:236px;">Charles River</td>
			<td style="width:239px;">Jax Mice Stock n. 000664</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">2,2,2-Tribromoethanol (Avertin)&#160;</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:239px;">T48402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Barraquer Micro Needle Holder</td>
			<td style="width:236px;">Lawton</td>
			<td style="width:239px;">62-3755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Bleomycin sulfate</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>B1141000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">B&#252;rker chamber</td>
			<td style="width:236px;">Brand&#160;</td>
			<td style="width:239px;">718905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Culture Flasks&#160;</td>
			<td style="width:236px;">EuroClone</td>
			<td style="width:239px;">ET7076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Disposable razors</td>
			<td style="width:236px;">Unigloves</td>
			<td style="width:239px;">4080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Dissecting Forceps</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">BD311R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">DPBS</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Heating pad</td>
			<td style="width:236px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:239px;">557023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Isoflurane Vet</td>
			<td style="width:236px;">Merial Italia</td>
			<td>N01AB06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Operating Microscope</td>
			<td style="width:236px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:239px;">Model OPM 16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">TrypLE Select Enzyme</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">12563-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vannas Micro Scissors</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">OC498R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vicryl Plus 4/0 Absorbable Suture, FS-2 needle 19 mm</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon</td>
			<td style="width:239px;">VCP392ZH</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin

פיברוזיס ריאתי הוא סימן ההיכר של מספר מחלות ריאות האדם עם אטיולוגיה שונים. מאז הטיפולים הנוכחיים הם מוגבלים למדי, מודלים העכבר להמשיך להיות כלי חיוני לפיתוח אסטרטגיות אנטיפיברוטית חדשה. כאן אנו מספקים שיטה יעילה כדי לחקור בפעילות vivo antifibrotic של התאים האדם סטרומה mesenchymal שהתקבלו מחוט הטבור השלם (huc-MSC) בתוך החליש ליאומיצין פציעה ריאה. C57BL/6 עכברים לקבל הזרקה אנדוקנה הנשימה יחיד של ליאומיצין (1.5 U/ק"ג משקל הגוף) ואחריו עירוי כפול של hUC-MSC (2.5 x 105) לתוך הווריד האחורי, 24 h ו -7 ימים לאחר הממשל ליאומיצין. עם ההקרבה בימים 8, 14, או 21, שינויים דלקתיים ופיברוטית, תוכן קולגן, נוכחות hUC-MSC הסבר רקמת הריאה מנתחים. ההזרקה של ליאומיצין לתוך קנה הנשימה של העכבר מאפשר המיקוד הישיר של הריאות, המוביל לדלקת ריאות נרחבת פיברוזיס. הניהול הסיסטמתי של מנה כפולה של hUC-MSC תוצאות בתחילת blunting של פציעת הריאה ליאומיצין המושרה. באופן פנימי מוחדרת הווג-MSC לתוך הריאות העכבר, שם הן מפעילות את פעילותם האנטי-דלקתית והאנטיפיברוטית. לסיכום, פרוטוקול זה הוחל בהצלחה עבור בדיקות טרום קליני של hUC-MSC במודל עכבר ניסיוני של פיברוזיס ריאתי האדם. עם זאת, טכניקה זו יכולה להיות מורחבת בקלות הן כדי ללמוד את ההשפעה של חומרים שונים בעלי הקנה מנוהל באופן שונה על הפתופסולוגיה של הריאות וכלה לאמת טיפולים מערכתית אנטי דלקתיות ואנטיפיברוטית חדשה.

פגיעה בריאה המושרה על ידי הזרקה אנדוקנה הנשימה יחיד של 1.5 U/ק"ג משקל הגוף של ליאומיצין סולפט ב 100 μL של תמיסת מלח סטרילי. שליטה בעלי חיים קיבל הזרקה אנדוקנה. של נפח שווה של תמיסת מלח שתי יריות של hUC-MSC (2.5 x 105 ב 200 μl של תמיסת מלח סטרילי) הוחדרת לתוך הווריד זנב העכבר, 24 h ו -7 ימ?...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin at JoVE.com

Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin

כאן אנו מציגים שיטה יעילה כדי לחקור את הפעילות האנטיפיברוטית של תאים בעלי מזון מסטרומה האנושית מתוך הגוף הפנימי שהתקבלו מן החבל הטבור כולו בעקבות אינדוקציה של פגיעה בריאה על ידי הזרקה אנדוקנה של ליאומיצין ב C57BL /6 עכברים. פרוטוקול זה ניתן להרחיב בקלות לבדיקה טרום קלינית של therapeutics אחרים.

אינדוקציה של פגיעה בריאות העכבר על ידי הזרקת אנדוקנה של ליאומיצין

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models ...

פרוטוקול זה יכול להיות מיושם בהצלחה הן כדי לגרום לתגובה דלקתית ופיברוטית חשובה בשתי הריאות על ידי הזרקת אנדוטראצ'ין של Bleomycin ולאמת טיפולים מערכתיים אנטי דלקתיים ואנטי פיברוטיים חדשים על ידי עירוי וריד הזנב. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי הזרקה ישירה של Bleomycin לתוך קנה הנשימה של העכבר מבטיח מיקוד מהיר של הריאות ללא כל נשפך בדרכי הנשימה העליונות המאפשר אינדוקציה בטוחה, חזקה להתרבות של דלקת ריאות פיברוזיס. הדגמת ההליך תהיה ד"ר פיורנזה אורלנדו, רופאה וטרינרית מהמעבדה שלנו.כדי להתחיל, למקם את העכבר הרדמה שוכב על גבו על פלטפורמה כירורגית. בעדינות לתקן את רגליו עם רצועות סרט כירורגי להחזיק אותו במקום. כדי להאריך את צוואר העכבר, מניחים תמיכה כגון גליל כותנה דנטלית מתחת לאזור צוואר הרחם שלה.לאחר מכן השתמש בסכין גילוח כדי לגלח בעדינות את הגרון. השתמש בזוג מדפים אנטומיים כדי לצבוט את העור. השתמש זוג טבעת טיפל מספריים קהה מעוקל לעשות חתך קצר כחצי סנטימטר אורך בהתכתבות לשריר sternohyoid העכבר.השתמש מקלות צמר גפן כדי לעצור כל דימום. לאחר מכן החיצוני קנה הנשימה על ידי ניתוח קהה בעדינות לנקות אותו משומן ורקמות אחרות. סובב את הפלטפורמה הכירורגית כדי לכוון את העכבר עם ראשו לכיוון המפעיל המאפשר למפעיל במהלך ההזרקה לזווית את המזרק כראוי.כדי לדמיין את קנה הנשימה, מניחים את העכבר תחת מיקרוסקופ הפעלה. התאם את התאורה והגדר הגדלה בין 1 ל- 1.2 ולאחר מכן התאם את המוקד ואת החדות. קנה הנשימה ניתן להבדיל בקלות כמו צינור שקוף לבן עם טבעות קנה הנשימה גלוי בבירור.בעדינות פיפטה לערבב את פתרון Bleomycin ולשם 100 microliters לתוך מזרק 0.5 מיליליטר עם מחט מד 25 הימנעות היווצרות בועה. לאחר קנה הנשימה הוא דמיין בבירור, בזהירות לנקב אותו עם קצה המחט בזווית של 30 מעלות. לאט להזריק 100 microliters של Bleomycin ישירות לתוך לומן של קנה הנשימה.לאחר המתנה של כמה שניות עבור כל נפח לנסוע במורד המחט, להסיר אותו מן קנה הנשימה. שים לב כמה שניות של דום נשימה המתרחשים כאשר המחט מוכנס כראוי לתוך קנה הנשימה המציין כי כל נפח הנוזל כבר בשאיפה. השלך בבטחה את המזרק והמחט.סגור את fascia תת עורית ואת פצע העור עם תפר 5-0 נספג ולאפשר את החיה להתאושש. לאחר הרדמה של העכבר שוב ופעם חוסר הכרה אושר, מניחים את העכבר מתחת למכסה המנוע סטרילי. השתמשו במסכת פנים עם זרימה רציפה של 1.5% איזופלורן כדי לשמור על הרדמה עדינה לאורך כל הניסוי.כדי לקדם vasodilation ולאפשר הזרקה קלה יותר, להשרות את הזנב במים חמים במשך שתי דקות. מערבבים השעיה של תאים סטרומה mesenchymal חבל הטבור האנושי על ידי צינור בעדינות כדי למנוע היווצרות גוש התא. שאפת 200 microliters לתוך מזרק מיליליטר אחד עם מחט 26 מד הימנעות היווצרות בועה.החזק את הזנב בקצה ויישר אותו בעדינות. לאחר מכן אתר את הוריד האחורי של הזנב. מגרדים בעדינות את הזנב עם אזמל ומנגבים אותו עם 70% אתנול.החל מהחלק הדיסטלי של הזנב, הכנס את המחט לווריד בזווית של 15 מעלות. לאט להחדיר 200 microliters של תאים סטרומליים חבל הטבור האנושי. כדי לפקח על עירוי תוך ורדם מוצלח, להתבונן בנוזל הנכנס לווריד ללא התנגדות וחוסר פזרנות.לאחר המתנה של מספר שניות עד שכל אמצעי האחסון נע במורד המחט, הסר אותה מהווריד. לאחר מכן להפעיל בקצרה לחץ על פצע הכניסה עם גזה סטרילית כדי למנוע דימום ולאפשר את החיה להתאושש. השלך בבטחה את המזרק ואת המחט לאחר העירוי.לאחר הזרקת Bleomycin, שינויים היסטופתולוגיים ריאות הוערכו על ידי Hematoxylin ו אאוסין ו Picrosirius אדום כתמים המאשר חדירה דלקתית נרחבת פיברוזיס לעומת ארכיטקטורת ריאות נורמלית לאחר הזרקת מלוחים. דלקת ריאות הנגרמת על ידי בלומיצין ופיברוזיס הוחלשו במידה רבה על ידי עירוי תאי סטרומה של חבל הטבור האנושי, אך לא על ידי תמיסת מלח. תצהיר קולגן נמדד על ידי מטח הידרוקסיפרולין.בעקבות הזרקת Bleomycin, רמות הידרוקסיפרולין גדל בהדרגה מהיום השמיני ליום 14 ו 21. בעוד התוספת של תאים סטרומה mesenchymal חבל הטבור האנושי הפחית באופן משמעותי את ההשפעות של Bleomycin. רמות הביטוי של גן קולגן מסוג Col1A1 ב- mRNA של ריאות שלמות הראו גם עלייה הדרגתית בימים 8, 14 ו -21 אשר הופחתה חלקית על ידי טיפול בתא סטרומה של חבל הטבור האנושי.כשל חיסוני בנוגדנים ספציפיים הראה כי תאי סטרומה של חבל הטבור האנושי החדיר במהירות וביעילות הגיעו לריאות העכבר, אם כי רק תאים מעטים זוהו. נתונים אלה מצביעים על נקע מהיר של התאים מהפגיעה באתר למרות אפקט ההגנה הממושך. השימוש במיקרוסקופ הפעלה מבטיח ביטחון גבוה בהצלחה בכך שהוא מאפשר למפעיל לנטר במדויק את המיקום הנכון של המחט לקנה הנשימה של העכבר לפני ההתקנה, ובכך למזער את הסיכון לפגיעה בו.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

אינדוקציה Transurethral של דלקת בדרכי השתן עכבר

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

הכנת Immunogen עכבר יותרת המוח עבור אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימונית ניסויית

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

בידוד של ריאות תאים דנדריטים עכבר

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa מושרה ריאות פגיעה דגם

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

דוגמנות רירית פטרת בזחל דג הזברה על ידי הזרקת Swimbladder

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

אינדוקציה של שיתוק ופציעה מערכת הראייה אצל עכברים מאת T תאים ספציפיים עבור אופטיקה Neuromyelitis Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

יחידנית או משולבת הדמיה גישה המבוססת על מיקרו-CT וקרינה פלואורסצנטית טומוגרפיה מולקולרית להערכת האורך של ריאות הנגרמת Bleomycin פיברוזיס בעכברים

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

הערכת ציטוטוקסיות ואפקטים Immunomodulatory של חומרים אמבריולוגיה דיוק-לחתוך פרוסות

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation

מודל של פגיעה עצמית מוגבלת בריאה חריפה על ידי ברונכיט חד צדדית של חומצה בסימפונות

Selective intra-bronchial instillation of hydrochloric acid (HCl) to the murine left mainstem bronchus causes acute tissue injury with histopathologic ...

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

מחקר השפעות של עשן סיגריות על זיהום פסאודומונס בתאי אפיתל ריאות

Cigarette smoking is the major etiological cause for lung emphysema and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Cigarette smoking also promotes ...