Name: induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin
Uploaded: 2019-04-30T12:30:00
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Questo lavoro è stato sostenuto da una sovvenzione RF-2011-02352331 da Italiano Della Salute (a Armatondo Gabrielli).

Tutte le cure e le procedure sperimentali per gli animali sono state approvate dal Ministero della Salute italiano (autorizzazione n. 456/2016-PR) e eseguite secondo le convenzioni della Dichiarazione di Helsinki.
1. Topi
<ol><li>Dopo averli acquisti, lasciare che i topi si acclimatino per almeno 7 giorni prima dell'iniezione. NOTA: I topi sono stati alloggiati nell'impianto animale in condizioni prive di agenti patogeni, sono stati mantenuti a temperatura e umidità costanti su un ciclo ...

<ol>
	<li>Iudici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Where+are+we+going+in+the+management+of+interstitial+lung+disease+in+patients+with+systemic+sclerosis?.">Where are we going in the management of interstitial lung disease in patients with systemic sclerosis?.</a> Autoimmunity Reviews. 14 (7), 575-578 (2015).</li><li>Moore, B. B., Hogaboam, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+pulmonary+fibrosis.">Murine models of pulmonary fibrosis.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (2), L152-L160 (2008).</li><li>Mouratis, M. A., Aidinis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+pulmonary+fibrosis+with+bleomycin.">Modeling pulmonary fibrosis with bleomycin.</a> Current Opinion in Pulmonary Medicine. 17 (5), 355-361 (2011).</li><li>Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bleomycin+animal+model:+a+useful+tool+to+investigate+treatment+options+for+idiopathic+pulmonary+fibrosis?.">The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis?.</a> International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 40 (3), 362-382 (2008).</li><li>Moore, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+fibrotic+lung+disease.">Animal models of fibrotic lung disease.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 49 (2), 167-179 (2013).</li><li>Schrier, D. J., Kunkel, R. G., Phan, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+strain+variation+in+murine+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">The role of strain variation in murine bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> American Review of Respiratory Disease. 127 (1), 63-66 (1983).</li><li>Phan, S. H., Kunkel, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cytokine+production+in+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">Lung cytokine production in bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> Experimental Lung Research. 18 (1), 29-43 (1992).</li><li>Capelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+manipulated+whole+human+umbilical+cord+is+a+rich+source+of+clinical-grade+human+mesenchymal+stromal+cells+expanded+in+human+platelet+lysate.">Minimally manipulated whole human umbilical cord is a rich source of clinical-grade human mesenchymal stromal cells expanded in human platelet lysate.</a> Cytotherapy. 13 (7), 786-801 (2011).</li><li>Beeravolu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Mesenchymal+Stromal+Cells+from+Human+Umbilical+Cord+and+Fetal+Placenta.">Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55224 (2017).</li><li>Moroncini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stromal+cells+from+human+umbilical+cord+prevent+the+development+of+lung+fibrosis+in+immunocompetent+mice.">Mesenchymal stromal cells from human umbilical cord prevent the development of lung fibrosis in immunocompetent mice.</a> PLoS One. 13 (6), e0196048 (2018).</li><li>Shahzeidi, S., Jeffery, P. K., Laurent, G. J., McAnulty, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+type+I+procollagen+mRNA+transcripts+in+the+lungs+of+mice+during+the+development+of+bleomycin-induced+fibrosis.">Increased type I procollagen mRNA transcripts in the lungs of mice during the development of bleomycin-induced fibrosis.</a> European Respiratory Journal. 7 (11), 1938-1943 (1994).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+hMSCs+improve+myocardial+infarction+in+mice+because+cells+embolized+in+lung+are+activated+to+secrete+the+anti-inflammatory+protein+TSG-6.">Intravenous hMSCs improve myocardial infarction in mice because cells embolized in lung are activated to secrete the anti-inflammatory protein TSG-6.</a> Cell Stem Cell. 5 (1), 54-63 (2009).</li><li>Scotton, C. J., Chambers, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleomycin+revisited:+towards+a+more+representative+model+of+IPF?.">Bleomycin revisited: towards a more representative model of IPF?.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (4), L439-L441 (2010).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).</li><li>Thomas, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation+in+mice+via+direct+laryngoscopy+using+an+otoscope.">Endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), e50269 (2014).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li><li>Dutta, S., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Men+and+mice:+Relating+their+ages.">Men and mice: Relating their ages.</a> Life Sciences. 152, 244-248 (2016).</li><li>Sueblinvong, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predisposition+for+disrepair+in+the+aged+lung.">Predisposition for disrepair in the aged lung.</a> American Journal of Medical Sciences. 344 (1), 41-51 (2012).</li><li>Moodley, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+umbilical+cord+mesenchymal+stem+cells+reduce+fibrosis+of+bleomycin-induced+lung+injury.">Human umbilical cord mesenchymal stem cells reduce fibrosis of bleomycin-induced lung injury.</a> American Journal of Pathology. 175 (1), 303-313 (2009).</li><li>How, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+mediate+the+release+of+interferon+gamma-induced+protein+10+and+alleviate+bleomycin-induced+lung+inflammation+and+fibrosis.">Induced pluripotent stem cells mediate the release of interferon gamma-induced protein 10 and alleviate bleomycin-induced lung inflammation and fibrosis.</a> Shock. 39 (3), 261-270 (2013).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TSG-6+as+a+biomarker+to+predict+efficacy+of+human+mesenchymal+stem/progenitor+cells+(hMSCs)+in+modulating+sterile+inflammation+in+vivo.">TSG-6 as a biomarker to predict efficacy of human mesenchymal stem/progenitor cells (hMSCs) in modulating sterile inflammation in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (47), 16766-16771 (2014).</li></ol>

La somministrazione endotrale è la via preferenziale per la consegna di agenti esogeni nei polmoni. Da diversi anni, l'iniezione diretta di bleomycin nella trachea è stata ampiamente utilizzata per indurre la fibrosi polmonare13 e, recentemente, sono state sviluppate tecniche non invasive più avanzate per realizzare questo14,15 ,16.
Il metodo descritto di seguito offre dive...

La fibrosi polmonare è un processo patologico progressivo caratterizzato dall'eccessiva deposizione di componenti della matrice extracellulare, principalmente collagene di tipo I, nell'interstizio polmonare, che porta a una funzione polmonare compromessa. È il segno distintivo di diverse malattie polmonari umane con un'eziologia diversa e rappresenta un fattore prognostico clinico povero. Poiché le terapie attuali sono piuttosto limitate di1, i modelli murini continuano ad essere uno strumento essenziale sia per l'ulteriore indagine dei meccanismi patogeni che influenzano l'insorgenza e la progressione della malattia, sia per sviluppare nuovi antifibrotici strategie2,3.
Ad oggi, la somministrazione di bleomycin è stato il modello più comunemente applicato di fibrosi polmonare indotta sperimentalmente4. Accanto a più metodi di fornitura (tra cui per via endovenosa, intraperitoneale, sottocutanea e inalazionale), le iniezioni intratracheali o endotracheali di bleomycin sono emerse come le rotte più utilizzate4,5. Il metodo che descriviamo qui è stato sviluppato per evitare l'effetto scottante della bleomycin sulla mucosa tracheale. L'esterno della trachea e la visualizzazione attraverso un microscopio operativo, infatti, è possibile ottenere l'instillazione dell'intero volume della soluzione di bleomycina direttamente nelle vie aeree inferiori senza fuoriuscite nelle vie aeree superiori. Quando sono disponibili le competenze chirurgiche e la strumentazione richieste, questo metodo consente l'induzione sicura, robusta e riproducibile dell'infiammazione polmonare e della fibrosi, come riportato di seguito.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1024px;" width="1023">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">C57BL/6 mice</td>
			<td style="width:236px;">Charles River</td>
			<td style="width:239px;">Jax Mice Stock n. 000664</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">2,2,2-Tribromoethanol (Avertin)&#160;</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:239px;">T48402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Barraquer Micro Needle Holder</td>
			<td style="width:236px;">Lawton</td>
			<td style="width:239px;">62-3755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Bleomycin sulfate</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>B1141000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">B&#252;rker chamber</td>
			<td style="width:236px;">Brand&#160;</td>
			<td style="width:239px;">718905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Culture Flasks&#160;</td>
			<td style="width:236px;">EuroClone</td>
			<td style="width:239px;">ET7076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Disposable razors</td>
			<td style="width:236px;">Unigloves</td>
			<td style="width:239px;">4080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Dissecting Forceps</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">BD311R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">DPBS</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Heating pad</td>
			<td style="width:236px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:239px;">557023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Isoflurane Vet</td>
			<td style="width:236px;">Merial Italia</td>
			<td>N01AB06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Operating Microscope</td>
			<td style="width:236px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:239px;">Model OPM 16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">TrypLE Select Enzyme</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">12563-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vannas Micro Scissors</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">OC498R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vicryl Plus 4/0 Absorbable Suture, FS-2 needle 19 mm</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon</td>
			<td style="width:239px;">VCP392ZH</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin

La fibrosi polmonare è un segno distintivo di diverse malattie polmonari umane con un'eziologia diversa. Poiché le terapie attuali sono piuttosto limitate, i modelli murini continuano ad essere uno strumento essenziale per lo sviluppo di nuove strategie antifibrotiche. Qui forniamo un metodo efficace per studiare l'attività antifibrotica in vivo delle cellule stromali mesenchymale umane ottenute da intero cordone ombelicale (hUC-MSC) nell'attenuazione della lesione polmonare indotta dalla bleomicina. I topi C57BL/6 ricevono una singola iniezione endotracheale di bleomycin (1,5 U/kg di peso corporeo) seguita da una doppia infusione di hUC-MSC (2,5 x 105)nella vena posteriore, 24 h e 7 giorni dopo la somministrazione della bleomycina. Al sacrificio ai giorni 8, 14, o 21, vengono analizzati i cambiamenti infiammatori e fibrotici, il contenuto di collagene e la presenza di hUC-MSC nel tessuto polmonare espiantato. L'iniezione di bleomycin nella trachea del topo consente il targeting diretto dei polmoni, portando a un'estesa infiammazione polmonare e fibrosi. La somministrazione sistemica di una doppia dose di hUC-MSC provoca la rapida smussatura della lesione polmonare indotta dalla bleomicina. Intravenosamente infuso hUC-MSC sono transitoriamente intrisi nei polmoni di topo, dove esercitano la loro attività antinfiammatoria e antifibrotica. In conclusione, questo protocollo è stato applicato con successo per il test preclinico di hUC-MSC in un modello murino sperimentale di fibrosi polmonare umana. Tuttavia, questa tecnica può essere facilmente estesa sia per studiare l'effetto di diverse sostanze somministrate endotrachealmente sulla patofisiologia dei polmoni sia per convalidare nuove terapie sistemiche antinfiammatorie e antifibrotiche.

Lesione polmonare sono state indotte da una singola iniezione endotracheale di 1,5 U/kg di peso corporeo di sonfato per la bleomicina in 100 l di salina sterile. Gli animali di controllo hanno ricevuto un'iniezione endotracheale di pari volume di salina. Due scatti di hUC-MSC (2,5 x 105 in 200 gradi l di salina sterile) sono stati infusi nella vena della coda del topo, 24 h e 7 giorni dopo la somministrazione di bleomycin. Gli animali di controllo hanno ricevuto un'infusione en...

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Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin

Qui presentiamo un metodo efficace per studiare l'attività antifibrotica delle cellule manomalifonde umane infuso infuso ottenuto da tutto il cordone ombelicale in seguito all'induzione della lesione polmonare da un'iniezione endotracheale di bleomycina nel C57BL /6 topi. Questo protocollo può essere facilmente esteso ai test preclinici di altre terapie.

Induzione di lesioni polmonari del topo da Iniezione endotracheale di Bleomycin

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models ...

Questo protocollo può essere applicato con successo sia per indurre un'importante risposta infiammatoria e fibrotica in entrambi i polmoni mediante iniezione endotracheale di Bleomicina sia per convalidare nuove terapie sistemiche antinfiammatorie e anti-fibrotiche mediante infusione di vene di coda. Il vantaggio principale di questa tecnica è che l'iniezione diretta di Bleomicina nella trachea del topo garantisce un rapido targeting dei polmoni senza fuoriuscite nelle vie aeree superiori consentendo un'induzione sicura, robusta e riproducibile di infiammatori e fibrosi polmonari. A dimostrare la procedura sarà la Dott.ssa Fiorenza Orlando, medico veterinario del nostro laboratorio di collaborazione.Per iniziare, posizionare il mouse anestetizzato sdraiato sulla schiena su una piattaforma chirurgica. Fissare delicatamente le gambe con strisce di nastro chirurgico per tenerlo in posizione. Per estendere iper estendere il collo del mouse, posizionare un supporto come il rotolo di cotone dentale sotto la sua regione cervicale.Quindi usa una lama di rasoio per radere delicatamente la gola. Usa un paio di forcep anatomiche per pizzicare la pelle. Usa un paio di forbici smussate curve a maniglia ad anello per fare una breve incisione lunga circa mezzo centimetro in corrispondenza del muscolo sternoioideo del topo.Usa bastoncini di cotone per fermare qualsiasi sanguinamento. Quindi esternalizza la trachea con dissezione smussata e puliscila delicatamente dal grasso e da altri tessuti. Ruotare la piattaforma chirurgica per orientare il mouse con la testa verso l'operatore che consente all'operatore durante l'iniezione di inclinare correttamente la siringa.Per visualizzare la trachea, posizionare il mouse al microscopio operativo. Regolare l'illuminazione e impostare l'ingrandimento tra 1 e 1,2, quindi regolare la messa a fuoco e la nitidezza. La trachea può essere facilmente distinta come un tubo bianco traslucido con anelli tracheali chiaramente visibili.Pipettare delicatamente per mescolare la soluzione di Bleomicina e aspirare 100 microlitri in una siringa da 0,5 millilitri con un ago calibro 25 evitando la formazione di bolle. Una volta che la trachea è chiaramente visualizzata, forarla con cura con la punta dell'ago con un angolo di 30 gradi. Iniettare lentamente 100 microlitri di Bleomicina direttamente nel lume della trachea.Dopo aver aspettato alcuni secondi che l'intero volume percorre l'ago, rimuoverlo dalla trachea. Osservare alcuni secondi di apnea che si verificano quando l'ago viene inserito correttamente nella trachea indicando che l'intero volume di liquido è stato inalato. Scartare in modo sicuro la siringa e l'ago.Chiudere la fascia sottocutanea e la ferita della pelle con una sutura assorbibile 5-0 e consentire all'animale di riprendersi. Dopo aver anestetizzato di nuovo il mouse e una volta confermata l'incoscienza, posizionare il mouse sotto un cappuccio sterile. Utilizzare una maschera facciale con un flusso continuo dell'1,5% di isoflurane per mantenere un'anestesia delicata durante l'esperimento.Per promuovere la vasodilatazione e consentire un'iniezione più facile, immergere la coda in acqua tiepida per due minuti. Mescolare una sospensione delle cellule stromali mesenchimali del cordone ombelicale umano con pipettando delicatamente per evitare la formazione di ciuffi cellulari. Aspira 200 microlitri in una siringa da un millilitro con un ago calibro 26 evitando la formazione di bolle.Tenere la coda vicino alla punta e raddrizzare delicatamente. Quindi individuare la vena laterale della coda. Raschiare delicatamente la coda con un bisturi e pulirla con il 70% di etanolo.Partendo dalla porzione distale della coda, inserire l'ago nella vena con un angolo di 15 gradi. Infondere lentamente 200 microlitri di cellule stromali mesenchimali del cordone ombelicale umano. Per monitorare l'infusione endovenosa di successo, osservare il liquido entrare nella vena senza resistenza e mancanza di estravasazione.Dopo aver aspettato alcuni secondi fino a quando l'intero volume viaggia lungo l'ago, rimuoverlo dalla vena. Quindi applicare brevemente la pressione sulla ferita d'ingresso con una garza sterile per prevenire il sanguinamento e consentire all'animale di riprendersi. Scartare in modo sicuro la siringa e l'ago dopo l'infusione.Dopo l'iniezione di bleomicina, i cambiamenti istopatologici polmonari sono stati valutati da Epossilina ed Eosina e Picrosirius Colorazione Rossa confermando ampie infiltrazioni infiammatorie e fibrosi rispetto alla normale architettura polmonare dopo iniezione salina. L'infiammazione polmonare indotta dalla bleomicina e la fibrosi sono state in gran parte attenuate dall'infusione di cellule stromali mesenchimali del cordone ombelicale umano, ma non dalla soluzione salina. La deposizione di collagene è stata misurata mediante saggio idrossiprolina.Dopo l'iniezione di bleomicina, i livelli di idrossiprolina sono progressivamente aumentati dall'ottavo al giorno 14 e 21. Mentre l'aggiunta di cellule stromali mesenchimali del cordone ombelicale umano ha ridotto significativamente gli effetti della bleomicina. I livelli di espressione del gene collagene Col1A1 di tipo uno nell'mRNA polmonare intero hanno anche mostrato un aumento progressivo ai giorni otto, 14 e 21 che è stato parzialmente ridotto dal trattamento cellulare stromale mesenchimale del cordone ombelicale umano.L'immunostaining con anticorpi specifici ha mostrato che le cellule stromali mesenchimali del cordone ombelicale umano infuse hanno raggiunto rapidamente ed efficacemente i polmoni del topo, anche se sono state rilevate solo poche cellule. Questi dati suggeriscono una rapida lussazione delle cellule dalla lesione del sito nonostante l'effetto protettivo prolungato. L'uso di un microscopio operativo garantisce un'elevata fiducia di successo consentendo all'operatore di monitorare con precisione il corretto posizionamento dell'ago nella trachea del mouse prima dell'installazione, riducendo così al minimo il rischio di danneggiarlo.

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Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Studiare gli effetti del fumo di sigaretta sull'infezione da pseudomona nelle cellule epiteliali polmonari

Cigarette smoking is the major etiological cause for lung emphysema and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Cigarette smoking also promotes ...