Name: induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin
Uploaded: 2019-04-30T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin at JoVE.com

Bu çalışma, Ministero Italiano della Salute 'den (Armando Gabrielli 'ye) bir Grant RF-2011-02352331 tarafından destekleniyordu.

Tüm hayvan bakımı ve deneysel prosedürler Italyan Sağlık Bakanlığı tarafından onaylanmıştır (yetkilendirme n. 456/2016-PR) ve Helsinki beyannamesi kurallarına göre gerçekleştirildi.
1. fareler
<ol><li>Onları satın aldıktan sonra, fareler en az 7 gün enjeksiyon önce gelmesini izin. Not: fareler, patojen içermeyen koşullar altında hayvan tesisinde yer aldı, 12 h ışık/karanlık döngüsünde sabit sıcaklık ve nem altında tutulur ve su ve standart Pelet gıda ?...

<ol>
	<li>Iudici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Where+are+we+going+in+the+management+of+interstitial+lung+disease+in+patients+with+systemic+sclerosis?.">Where are we going in the management of interstitial lung disease in patients with systemic sclerosis?.</a> Autoimmunity Reviews. 14 (7), 575-578 (2015).</li><li>Moore, B. B., Hogaboam, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+pulmonary+fibrosis.">Murine models of pulmonary fibrosis.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (2), L152-L160 (2008).</li><li>Mouratis, M. A., Aidinis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+pulmonary+fibrosis+with+bleomycin.">Modeling pulmonary fibrosis with bleomycin.</a> Current Opinion in Pulmonary Medicine. 17 (5), 355-361 (2011).</li><li>Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bleomycin+animal+model:+a+useful+tool+to+investigate+treatment+options+for+idiopathic+pulmonary+fibrosis?.">The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis?.</a> International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 40 (3), 362-382 (2008).</li><li>Moore, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+fibrotic+lung+disease.">Animal models of fibrotic lung disease.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 49 (2), 167-179 (2013).</li><li>Schrier, D. J., Kunkel, R. G., Phan, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+strain+variation+in+murine+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">The role of strain variation in murine bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> American Review of Respiratory Disease. 127 (1), 63-66 (1983).</li><li>Phan, S. H., Kunkel, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+cytokine+production+in+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis.">Lung cytokine production in bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> Experimental Lung Research. 18 (1), 29-43 (1992).</li><li>Capelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+manipulated+whole+human+umbilical+cord+is+a+rich+source+of+clinical-grade+human+mesenchymal+stromal+cells+expanded+in+human+platelet+lysate.">Minimally manipulated whole human umbilical cord is a rich source of clinical-grade human mesenchymal stromal cells expanded in human platelet lysate.</a> Cytotherapy. 13 (7), 786-801 (2011).</li><li>Beeravolu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Mesenchymal+Stromal+Cells+from+Human+Umbilical+Cord+and+Fetal+Placenta.">Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55224 (2017).</li><li>Moroncini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stromal+cells+from+human+umbilical+cord+prevent+the+development+of+lung+fibrosis+in+immunocompetent+mice.">Mesenchymal stromal cells from human umbilical cord prevent the development of lung fibrosis in immunocompetent mice.</a> PLoS One. 13 (6), e0196048 (2018).</li><li>Shahzeidi, S., Jeffery, P. K., Laurent, G. J., McAnulty, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+type+I+procollagen+mRNA+transcripts+in+the+lungs+of+mice+during+the+development+of+bleomycin-induced+fibrosis.">Increased type I procollagen mRNA transcripts in the lungs of mice during the development of bleomycin-induced fibrosis.</a> European Respiratory Journal. 7 (11), 1938-1943 (1994).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+hMSCs+improve+myocardial+infarction+in+mice+because+cells+embolized+in+lung+are+activated+to+secrete+the+anti-inflammatory+protein+TSG-6.">Intravenous hMSCs improve myocardial infarction in mice because cells embolized in lung are activated to secrete the anti-inflammatory protein TSG-6.</a> Cell Stem Cell. 5 (1), 54-63 (2009).</li><li>Scotton, C. J., Chambers, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleomycin+revisited:+towards+a+more+representative+model+of+IPF?.">Bleomycin revisited: towards a more representative model of IPF?.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (4), L439-L441 (2010).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung.">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).</li><li>Thomas, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation+in+mice+via+direct+laryngoscopy+using+an+otoscope.">Endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), e50269 (2014).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li><li>Dutta, S., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Men+and+mice:+Relating+their+ages.">Men and mice: Relating their ages.</a> Life Sciences. 152, 244-248 (2016).</li><li>Sueblinvong, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predisposition+for+disrepair+in+the+aged+lung.">Predisposition for disrepair in the aged lung.</a> American Journal of Medical Sciences. 344 (1), 41-51 (2012).</li><li>Moodley, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+umbilical+cord+mesenchymal+stem+cells+reduce+fibrosis+of+bleomycin-induced+lung+injury.">Human umbilical cord mesenchymal stem cells reduce fibrosis of bleomycin-induced lung injury.</a> American Journal of Pathology. 175 (1), 303-313 (2009).</li><li>How, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+mediate+the+release+of+interferon+gamma-induced+protein+10+and+alleviate+bleomycin-induced+lung+inflammation+and+fibrosis.">Induced pluripotent stem cells mediate the release of interferon gamma-induced protein 10 and alleviate bleomycin-induced lung inflammation and fibrosis.</a> Shock. 39 (3), 261-270 (2013).</li><li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TSG-6+as+a+biomarker+to+predict+efficacy+of+human+mesenchymal+stem/progenitor+cells+(hMSCs)+in+modulating+sterile+inflammation+in+vivo.">TSG-6 as a biomarker to predict efficacy of human mesenchymal stem/progenitor cells (hMSCs) in modulating sterile inflammation in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (47), 16766-16771 (2014).</li></ol>

Endotrakeal yönetim, eksojen ajanlar akciğerlere teslim etmek için tercihli bir yol. Birkaç yıl sonra, trakea içine bleomisin doğrudan enjeksiyon yaygın pulmoner fibrozis teşvik etmek için kullanılan olmuştur13 ve, son zamanlarda, daha gelişmiş, noninvaziv teknikler bu başarmak için geliştirilen14,15 ,16.
Burada açıklanan yöntem bazı potansiyel sınırlama...

Pulmoner fibrozis, akciğer interstisyumunda, karaciğer fonksiyonuna yol açan, ağırlıklı olarak tip ı kollajen olan, ekstrellüler matris bileşenlerinin aşırı birikmesiyle karakterize Progressive bir patolojik süreçtir. Farklı etiyolojide çeşitli insan akciğer hastalıklarının damgasını taştı ve kötü bir klinik prognostik faktörü temsil eder. Mevcut tedaviler oldukça sınırlı olduğundan1, fare modelleri, hastalığın başlangıcını ve ilerlemesini etkileyen ve yeni Antifibrotik gelişimi için patojenik mekanizmaların daha fazla incelenmesi için hem de önemli bir araç olmaya devam ediyor Stratejiler2,3.
Bugüne kadar, bleomisin yönetimi deneysel olarak indüklenen pulmoner fibrozis en sık uygulanan model olmuştur4. Birden fazla teslim yöntemlerinin (intravenöz, intraperitoneal, subkutan ve inhalasyon dahil) yanında, bleomisin intratrakeal veya endotrakeal enjeksiyonları en sık kullanılan rotalar olarak ortaya çıkmıştır4,5. Burada tarif ettiğimiz Yöntem, bleomisin trakeal mukoza üzerindeki haşlama etkisini önlemek için geliştirilmiştir. Aslında, trakea exteriorizing ve bir işletim mikroskop aracılığıyla görselleştirerek, üst hava yolu herhangi bir dökülme olmadan doğrudan alt havayolu içine bleomisin çözeltisi tüm hacminin instilasyon elde etmek mümkündür. Gerekli cerrahi uzmanlık ve enstrümantasyon mevcut olduğunda, bu yöntem, aşağıda bildirilen gibi, akciğer iltihabı ve fibrozis güvenli, sağlam ve tekrarlanabilir indüksiyon için izin verir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1024px;" width="1023">
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">C57BL/6 mice</td>
			<td style="width:236px;">Charles River</td>
			<td style="width:239px;">Jax Mice Stock n. 000664</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">2,2,2-Tribromoethanol (Avertin)&#160;</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:239px;">T48402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Barraquer Micro Needle Holder</td>
			<td style="width:236px;">Lawton</td>
			<td style="width:239px;">62-3755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Bleomycin sulfate</td>
			<td style="width:236px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>B1141000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">B&#252;rker chamber</td>
			<td style="width:236px;">Brand&#160;</td>
			<td style="width:239px;">718905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">Culture Flasks&#160;</td>
			<td style="width:236px;">EuroClone</td>
			<td style="width:239px;">ET7076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Disposable razors</td>
			<td style="width:236px;">Unigloves</td>
			<td style="width:239px;">4080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Dissecting Forceps</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">BD311R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">DPBS</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Heating pad</td>
			<td style="width:236px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:239px;">557023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Isoflurane Vet</td>
			<td style="width:236px;">Merial Italia</td>
			<td>N01AB06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Operating Microscope</td>
			<td style="width:236px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:239px;">Model OPM 16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;">TrypLE Select Enzyme</td>
			<td style="width:236px;">Gibco</td>
			<td style="width:239px;">12563-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vannas Micro Scissors</td>
			<td style="width:236px;">Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td style="width:239px;">OC498R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:27px;width:369px;">Vicryl Plus 4/0 Absorbable Suture, FS-2 needle 19 mm</td>
			<td style="width:236px;">Ethicon</td>
			<td style="width:239px;">VCP392ZH</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin

Pulmoner fibrozis çeşitli insan akciğer hastalıklarının farklı etiyolojisinde bir damgasını taşımaktadır. Mevcut tedaviler oldukça sınırlı olduğundan, fare modelleri yeni Antifibrotik stratejiler geliştirmek için temel bir araç olmaya devam ediyor. Burada, bleomisin kaynaklı akciğer yaralanmasını zayıflatarak, tüm göbek kordonunda (hUC-MSC) elde edilen insan mezenkimal stromal hücrelerin in vivo Antifibrotik aktivitesini araştırmak için etkili bir yöntem sağlıyoruz. C57BL/6 fareler bleomisin tek bir endotrakeal enjeksiyon almak (1,5 U/kg vücut ağırlığı) bir çift infüzyon takip HUC-msc (2,5 x 105) kuyruk ven içine, 24 h ve 7 gün sonra bleomisin yönetim. 8, 14 veya 21 gün içinde kurban edildikten sonra, enflamatuar ve fibrotik değişiklikler, kollajen içeriği ve açıklayıcı akciğer dokusunda hUC-MSC varlığı analiz edilir. Fare trakea içine bleomisin enjeksiyonu akciğerlerin doğrudan hedefleme sağlar, geniş pulmoner inflamasyon ve fibrozis yol. Bir çift doz HUC-msc sistemik yönetimi bleomisin kaynaklı akciğer yaralanması erken köreltme sonuçlanır. İntravenöz olarak kullanılan hUC-MSC, Anti-inflamatuar ve Antifibrotik aktivitesini yapan fare ciğerlerine kesintisiz olarak engrefindir. Sonuç olarak, bu protokol, insan pulmoner fibrozis deneysel bir fare modeli hUC-MSC preklinik test için başarıyla uygulandı. Ancak, bu teknik, akciğerlerin patofizyolojisi üzerinde farklı endotrakheally uygulanan maddelerin etkisini incelemek ve yeni anti-inflamatuar ve Antifibrotik sistemik tedaviler doğrulamak için hem de kolayca uzatılabilir.

Akciğer hasarı, 100 μL steril tuz içinde bleomisin sülfat 1,5 U/kg vücut ağırlığı tek bir endotrakeal enjeksiyon ile indüklenmiş. Kontrol hayvanları, eşit hacimli bir serum endotrakeal enjeksiyon aldı. HUC-MSC iki çekim (2,5 x 105 ın 200 μL steril tuz) fare kuyruğu ven içine infemeli, 24 h ve 7 gün bleomisin yönetim sonra. Kontrol hayvanları eşit hacimli steril serum intravenöz infüzyon aldı. Fareler akciğer eksplant ve doku işleme için gün 8, 14...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin at JoVE.com

Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin

Burada, C57BL yılında bleomisin endotrakeal enjeksiyonu ile akciğer yaralanması indüksiyonu sonrasında tüm göbek kordonundan elde edilen intravenöz infeksiyon insan mezenkimal stromal hücrelerin Antifibrotik aktivitesini araştırmak için etkili bir yöntem sunuyoruz. /6 fare. Bu protokol, diğer terapinin preklinik testine kolayca uzatılabilir.

Bleomisin endotrakeal enjeksiyon tarafından fare akciğer hasarı indüksiyon

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models ...

Bu protokol hem bleomisin endotrakeal enjeksiyonu ile her iki akciğerde de önemli inflamatuar ve fibrotik yanıtı indüklemek hem de kuyruk damar ı ile yeni anti-inflamatuar ve anti-fibrotik sistemik tedavileri doğrulamak için başarılı bir şekilde uygulanabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı fare trakea içine Bleomisin doğrudan enjeksiyonu akciğer inflamatuar ve fibrozis güvenli, sağlam ve tekrarlanabilir indüksiyon sağlayan üst hava yolunda herhangi bir dökülme olmadan akciğerlerin hızlı hedefleme sağlar. Prosedürü gösteren Dr.Fiorenza Orlando, ortak laboratuarımızdan bir veteriner doktor olacak.Başlamak için, bir cerrahi platform üzerinde sırt üstü yatan anestezili fare konumlandırın. Yerinde tutmak için bacaklarını cerrahi bant şeritleri ile hassas bir şekilde düzeltin. Farenin boynunu hiper uzatmak için, servikal bölgesinin altına diş pamuk rulosu gibi bir destek yerleştirin.Sonra yavaşça boğaz tıraş için bir jilet kullanın. Deriyi çimdiklemek için bir çift anatomik forceps kullanın. Fare sternohyoid kas yazışmalarda uzunluğu yaklaşık yarım santimetre uzunluğunda kısa bir kesi yapmak için kavisli künt makas saplı halka bir çift kullanın.Herhangi bir kanamayı durdurmak için pamuk lu çubuklar kullanın. Sonra künt diseksiyon ile trakea dışlaştırmak ve yavaşça yağ ve diğer dokulardan temizleyin. Fareyi kafasıyla operatöre yönlendirmek için cerrahi platformu döndürün ve enjeksiyon sırasında operatörün şırıngaya düzgün bir şekilde açı yapmasına izin ver.Nefes borusunu görselleştirmek için fareyi çalışan bir mikroskobun altına yerleştirin. Aydınlatmayı ayarlayın ve büyütmeyi 1 ile 1,2 arasında ayarlayın ve ardından odak noktasını ve netliği ayarlayın. Trakea kolayca açıkça görülebilir trakeal halkaları ile beyaz yarı saydam tüp olarak ayırt edilebilir.Bleomisin çözeltisini karıştırmak ve 100 mikrolitreyi 0,5 mililitrelik şırınganın içine, 25 gauge iğneile kabarcık oluşumundan kaçınan bir şırıngaya karıştırmak için hafifçe pipet. Trakea açıkça görüntülendikten sonra, iğne ucuyla 30 derecelik açıyla dikkatlice delin. Yavaş yavaş doğrudan trakea lümen içine Bleomycin 100 mikrolitre enjekte.Tüm ses inin iğneden aşağı inmek için birkaç saniye bekledikten sonra nefes borusundan çıkarın. İğne nefes borusuna doğru bir şekilde yerleştirildiğinde oluşan ve sıvının tüm hacminin solunduğuna dair birkaç saniyelik apne gözlemleyin. Şırıngayı ve iğneyi güvenle atın.Deri altı fasyave deri yarasını 5-0 emilebilir dikişle kapatın ve hayvanın iyileşmesini bekleyin. Fareyi tekrar anestezi ettikten ve bilinç kaybı onaylandıktan sonra fareyi steril bir kaputun altına yerleştirin. Deney boyunca nazik anesteziyi korumak için %1,5 izofluran sürekli akışa sahip bir yüz maskesi kullanın.Vazodilatasyonu teşvik etmek ve daha kolay enjeksiyon için izin vermek için, iki dakika boyunca ılık suda kuyruk ıslatın. Hücre kümeoluşumunu önlemek için hafifçe pipetleme ile insan göbek kordonu mezenkimal stromal hücrelerin in süspansiyon karıştırın. 26 gauge iğne ile bir mililitreşşile baloncuk oluşumunu önleyen 200 mikrolitre aspire edin.Kuyruğu ucundan tutun ve hafifçe düzdüze. Sonra kuyruğun lateral ven bulmak. Yavaşça bir neşter ile kuyruk kazıyın ve% 70 etanol ile silin.Kuyruğun distal kısmından başlayarak, iğneyi 15 derecelik bir açıyla damara takın. Yavaş yavaş insan göbek kordonu mezenkimal stromal hücrelerin infüzyon 200 mikrolitre. Başarılı intravenöz infüzyonu izlemek için, direnç ve ekstravazasyon eksikliği olmadan ven giren sıvı gözlemleyin.Tüm hacim iğne aşağı seyahat edene kadar birkaç saniye bekledikten sonra, damardan çıkarın. Daha sonra kanamayı önlemek ve hayvanın iyileşmesini sağlamak için steril bir gazlı bezle giriş yarasına kısa bir süre basınç uygulayın. İnfüzyondan sonra şırıngayı ve iğneyi güvenle atın.Bleomisin enjeksiyonundan sonra hematoksilin ve Eosin ve Picrosirius Red boyama ile akciğer histopatolojik değişiklikleri, serumfizyolojik sonrası normal akciğer mimarisine göre geniş inflamatuar infiltrasyon ve fibrozis idrakına doğru değerlendirildi. Bleomisin indüklenen akciğer iltihabı ve fibrozis büyük ölçüde insan umbilikal korbiyal korbiyal mezenkimal stromal hücre infüzyonu ile zayıflatılmış, ancak salin ile değil. Kollajen birikimi hidroksiproline titreşme ile ölçüldü.Bleomisin enjeksiyonu sonrasında hidroksiproline düzeyleri 8.günden 14 ve 21. Oysa insan göbek kordonu mezenkimal stromal hücrelerin eklenmesi önemli ölçüde Bleomisin etkilerini azalttı. Tüm akciğer mRNA'sında Col1A1 tip bir kollajen geninin ekspresyon düzeyleri de 8, 14 ve 21.Spesifik antikorlarla immünoleboyama, insan göbek kordonu mezenkimal stromal hücrelerinin hızlı ve etkili bir şekilde fare akciğerlerine ulaştığını, ancak sadece birkaç hücrenin tespit edildiğini gösterdi. Bu veriler, uzun süreli koruyucu etkiye rağmen hücrelerin bölgeden hızlı bir şekilde çıkılabileceğini göstermektedir. Çalışan bir mikroskobun kullanılması, operatörün iğnenin kurulumdan önce fare trakeasına doğru şekilde yerleştirilmesini doğru bir şekilde izlemesine izin vererek yüksek başarı güveni sağlar ve böylece ona zarar verme riskini en aza indirir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Transüretral İndüksiyon Fare İdrar Yolu Enfeksiyonu

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon Fare Hipofiz İmmunogen hazırlanması

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Fare Akciğer Dendritik Hücrelerinin İzolasyonu

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Kaynaklı Akciğer Hasarı Modeli

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Swimbladder Enjeksiyon ile Larva Zebra balığı Mukozal Candidiazis Modelleme

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Felç ve görsel sistem yaralanma tarafından Nöromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4 T hücreleri belirli farelerde indüksiyon

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

Yaklaşım Imaging Multimodal Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Sitotoksik değerlendirilmesi ve insan hassas kesim akciğer dilimleri maddelerin etkileri Immunomodulatory

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation

Tek Taraflı Bronşiyal Asit İnstillasyonu ile Kendi Kendine Sınırlı Akut Akciğer Hasarı Modeli

Selective intra-bronchial instillation of hydrochloric acid (HCl) to the murine left mainstem bronchus causes acute tissue injury with histopathologic ...

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Akciğer Epitel Hücrelerinde Sigara Dumanının Pseudomonas Enfeksiyonu Üzerine Etkilerinin İncelanması

Cigarette smoking is the major etiological cause for lung emphysema and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Cigarette smoking also promotes ...