Name: live cell analysis of shear stress on pseudomonas aeruginosa using an automated higher-throughput microfluidic system
Uploaded: 2019-01-16T14:15:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Analysis of Shear Stress on Pseudomonas aeruginosa Using an Automated Higher-Throughput Microfluidic System at JoVE.com

هذا العمل قد أمكن من المنح المقدمة من المعهد الوطني للعامة الطبية العلوم (نيجمس) (5P20GM103427)، مكون من المعاهد الوطنية للصحة (NIH)

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

مناقشة إجراءات تحليل النظام وصورة موائع جزيئية هنا يركز على تنفيذ تجارب بيوفيلم موائع جزيئية لتحديد الخصائص المورفولوجية التي لا تتطلب المعلومات كاملة ثلاثية الأبعاد التي توجد عادة من [كنفوكل] دراسات المجهر. وشملت هذه ميكروكولوني التحتية التغطية (نسبة التغطية)، يقاس بمعامل خشونة، والتكوينية الانتروبيا خشونة السطح. تقدم طريقة لتقدير تراكم الخلية بيوفيلم النسبية الإجمالية أيضا يمكن أن تحسب من معدلات النمو الذي سجل في المرحلة.
وهناك عدة خطوات صغيرة ولكنها هامة ينبغي إبرازها في هذا الأسلوب. مسح الواجهة مع الكحول يساعد على تجنب تلوث بكتيريا الأخرى في الانتقال من التجربة للتجربة ولكن أيضا من بئر في تجربة واحدة. فتيلة والبذر أيضا جداً مهم لأنه يسمح للمستخدم بتحديد القنوات التي يتم السماح لوسائل الإعلام لتدفق من خلال القنوات دون أي اضطرابات من فتيلة أو انسداد. كما ينبغي أن تكون قنوات لا يقلقها (أي أنها ينبغي الدوام الكامل لوسائل الإعلام) بعد فتيلة لزيادة فرص تجربة ناجحة مع لا فقاعات الهواء أو انسداد. يمكن أن تختلف وفقا لنوع البكتيريا خطوة البذر وهكذا ينبغي أن يكون الأمثل لمرفق خلية. على سبيل المثال، إذا الخلايا لا يبدو أن نعلق، التعديلات السطحية وقد تحدث على لوحة موائع جزيئية قبل البذر أو أوقات أطول في إينكوباتيونس قد تكون مطلوبة. من المهم أيضا أن نتأكد من أن المجهر تم إعداده بشكل صحيح للحصول على صورة في التركيز، وينبغي أن ترصد بشكل دوري في جميع أنحاء هذه التجربة لضمان الحصول على صور عالية الجودة. إذا كان التركيز، المجهر يمكن وينبغي تعديلها حسب ما زالت التجربة. خلال فترة اقتناء الصورة، يجب تعيين الطول الموجي الماضي إلى إغلاق جميع تجنبا لتعرض المرشحات والإضاءة لقناة واحدة فقط خلال فترة الانتظار التي تحدث بين امتلاك الصورة. أيضا، تحليل الصور التي تحدد تغطية سطح % صمم في البيت لأنه دليل البرامج المونتاج لم تصف صراحة الإجراء. وعلاوة على ذلك، بغية توسيع نطاق تحليل الصور وتحديد الخصائص الأخرى مثل خشونة السطح، إلخ.، وفتح مصدر التعليمات البرمجية على أساس بيثون45 وضعت في منزل والمشتركة في المستودع gitHub. وهناك أيضا قيود على كمية البيانات التي يمكن تخزين وإدارتها على محرك الأقراص الثابت المحلي، حيث هناك حاجة إلى محرك القرص الثابت الخارجي أو تبادل البيانات على شبكة الإنترنت مثل سيفيرسي46.
المفاعلات الحيوية التقليدية، مثل المفاعل مركز السيطرة على الأمراض، و مفاعل بالتنقيط تدفق34، تتطلب الكثير من وسائل الإعلام، وتوفير عدد أقل من حجم العينة، والطلب على كمية عالية من التعقيم للمعدات. وفي المقابل، مزايا هذا المنهاج إنتاجية أعلى وتشمل القدرة على مراقبة القص، معدلات التدفق، ويشابه الافتراض بأن التجارب في المختبر عن كثب الأوضاع في فيفو . عيوب النظام تتضمن الملحقات متعددة، والبرمجيات التي تتطلب الإعداد الدقيق أنه يجب أن يتم بالترتيب الصحيح للأحداث. وعلاوة على ذلك، الدليل التي يتم توفيرها للمعدات لا يفسر تماما كل خطوة من هذه التجارب، وأوامر البرمجيات، ونتيجة لذلك، تحدث أخطاء كثيرة خلال هذه التجارب، بما في ذلك انسداد القنوات، نقص النمو أو الحجز، أو عدم جودة عالية مجهرية الصور أو الأفلام. الصك نفسه، والمواد الاستهلاكية، مثل لوحات موائع جزيئية، وهي أيضا مكلفة نسبيا مع سعرها أكثر من 200 دولار للوحة الواحدة وليست قابلة لإعادة الاستخدام. وهكذا، بينما الأسلوب الذي يعطي نتائج قوية، الخبرة الفنية اللازمة لاستخدامها مرتفع نسبيا ويتطلب التدريب المتكررة من جانب الخبراء في هذا المجال. ويحاول هذا التقرير حل هذه المشكلة عن طريق توفير دليل للمستخدمين الجدد لهذه المفاعلات الحيوية لدراسة خصائص الأغشية الحيوية.
اكتسب نظام موائع جزيئية، وقادرة على القيام بالتحليل الخلوي، قدرا كبيرا من الاهتمام لمختلف الطرائق العلمية، كما هو الحال في علم الأحياء الدقيقة وعلم المناعة، وأمراض الدم، الأورام وبحوث الخلايا الجذعية. وبشكل أكثر تحديداً، أدى العديد من منشورات تصف المواضيع التي وثيقة الصلة بالتطبيقات الطبية37،47، بما في ذلك الجراثيم الالتصاق الشفوي48، تحديد الآثار المترتبة على التكنولوجيا استضافة بيوسورفاكتانتس الزائفة الزّنجاريّة و المكوّرات العنقودية الذهبية49،50، التفاعلات بين العوامل الممرضة في كولاي51، العقدية التقيد52، والعلاج من التليف الكيسي53. ونظرا لحقيقة أن هذا النظام موائع جزيئية شديد التنوع، فمن المتوقع أنه سيتم توزيع أنظمة أكثر وأكثر في جميع أنحاء العالم.
ينبغي النظر بعناية في بعض الخطوات المحددة في البروتوكول. وسائل الإعلام يمكن أن تضعف إلى 50% مع dH2س للمساعدة في منع الفقاعات وانسداد ولكن لم يكن مطلوباً في هذه الحالة. يجب تحديد قيمة محددة OD600 المستخدمة لبذر استخدام يدير المحاكمة من تجربة النمو لمعرفة ما يعمل بشكل أفضل لمجموعة معينة من الظروف المستخدمة. يمكن أن يؤدي إلى فقاعات في قنوات موائع جزيئية فقاعات في الآبار قبل الختم وينبغي إزالة أي برزت أو امتص بها مع تلميح ماصة. من المهم أن تبقى البكتيريا خارج القنوات السربنتين الصغيرة. بوجود كميات متساوية من وسائل الإعلام في الإدخال والإخراج أثناء عملية البذر، فسيتم التحكم تدفق بسبب الضغط من حجم السائل وبالتالي تدفق فقط بسبب ضغوط النظام المطبق. وينبغي إعداد المسافات المعايرة أثناء التثبيت ممثل الشركة. هذه الإعدادات محددة لكل كاميرا.
وهناك العديد من التحديات التي تحدث عند العثور على عتبة الأكثر تمثيلاً لصورة. تعيين قيم الحد الأقصى يمكن أن يكون صعباً إذا كانت كثافة بكسل المتوسط عبر المناطق الخلفية غير متناسقة تسببها أما تحديد موقف مرحلة التي ليست في المركز للقناة أو من الحطام على اللوحة. إطار قياسي MM، انقر فوق العملية، ومن ثم حدد أداة أساسية وتصحيح التظليل لتصحيح حالات عدم التناسق هذه. ومع ذلك، هذه الأداة عموما فقط مفيداً إذا كان المستخدم قد اتخذت صوراً القنوات قبل البذر التي يمكن استخدامها كمرجع الصور. أو، إذا كان مرجع تظليل الخلفية/الصور غير متوفرة، وسوف يحتاج المستخدم إلى استخدام حكمهم لتعيين قيمة عتبة التي تغطي معظم منطقة الخلية دون بما في ذلك الخلفية للصورة بأكملها. وبدلاً من ذلك، حدد المناطق تمثيلاً لقياس أن استبعاد مناطق عدم تناسق من فوق منطقة مستطيلةأو منطقة القطع الناقصأو المنطقة تتبع تحديد منطقة وحدد المنطقة النشطة بدلاً من كامل صورة في إطار إظهار إحصائيات المنطقة (تحت أدوات التحليل). إذا كان يستخدم منطقة ممثل للعتبة صورة مشرقة الميدانية، ينبغي أن تستخدم نفس المنطقة لقياس الصورة فيتك المقابلة. أنه من المفيد أن تسجل الإحصاءات المكانية محددة (غادر، أعلى، العرض، الارتفاع، و منطقة، و محيط) المرتبطة بتلك المنطقة الممثل حيث سيتم العثور على نفس المنطقة و قياس الصورة فيتك المقابلة.
لمنع تراكم البيانات على محرك الأقراص الثابت الذي سوف يؤدي إلى إبطاء الكمبيوتر، يمكن شراء قرص صلب خارجي لتخزين البيانات. وثمة خيار آخر لتخزين البيانات، وتيسير تبادل البيانات هو منصة المعلوماتية الحيوية سيفيرسي. إنشاء حساب على نظام سيفيرسي بالذهاب إلى http://www.cyverse.org/. بمجرد تسجيل الدخول، شن "البيئة الاكتشاف" ثم حدد "سجل في سيفيرسي". حدد "البيانات"، ثم انتقل إلى كنت المجلد. إذا كان المكدس الصورة على الكمبيوتر المحلي ثم حدد "تحميل"، ثم "تحميل بسيطة من سطح المكتب". العثور على الملف المكدس الصورة وحدد للتحميل. الملف أو مجلد يمكن تقاسمها مع المتعاونين إذا كان لديك حساب في سيفيرسي، ويتم منح الإذن. تتطلب مشاركة المجلد البيانات للجمهور العام تضاف هذه البيانات الوصفية لكل ملف باستخدام سيفيرسي الموافقة على المعايير. هذا الإجراء لن تناقش هنا لأن هذا ليس في نطاق هذا العمل.

هنا، وسوف ندلل على طريقة لقياس تأثير إجهاد القص على تشكيل الفلورسنت الأغشية الحيوية PA01 الزائفة الزّنجاريّة (P. الزّنجاريّة) استخدام نظام الآلي موائع جزيئية أعلى من الناتج.
الأغشية الحيوية هي مجتمعات من الكائنات المجهرية، مثل البكتيريا، تنظمها مادة البوليمر خارج الخلية التي يتم إرفاقها دعم، وتوجد عادة في مجال التفاعل بين سائل و سطحية صلبة1. يمكن أن تكون هذه المجتمعات بيوفيلم مفيدة للبيئة، مثل تحسين نوعية المياه في خطوط الإمداد بالمياه والمعالجة البيولوجية لوعورة المركبات2،3. لكن، يمكن أيضا أن الأغشية الحيوية جداً ضارة بصحة الإنسان بعواقب غير مرغوب فيها. على سبيل المثال، الأجهزة الطبية، مثل يزرع في الورك والركبة، هي نوع واحد من السطح حيث تراكم بيوفيلم تحديا ويتسبب في مضاعفات طبية خطيرة4،5. الأغشية الحيوية يمكن أيضا إدخال نظم المياه الطبيعية، مثل الأنهار والبحيرات، واختراق أنابيب الإمداد بالمياه مما يؤدي إلى تلوث البكتيريا في مياه الشرب أدى إلى إصابة6،،من78. تلتزم السفن وأخرى من صنع الإنسان ركائز الأغشية الحيوية التي شكلت في البيئات البحرية وتقديم مشكلة اقتصادية وبيئية كبيرة زيادة الاحتكاك يؤدي إلى زيادة استهلاك الوقود9،10. الطلاءات المضادة للميكروبات، مثل ثلاثي بوتيل القصدير، وقد وضعت لمنع هذه المشاكل ولكن سامة للحياة البحرية11.
P. الزّنجاريّة بكتيريا سلبية الغرام مع قدرات عالية مزدهرة في مجموعة متنوعة من الظروف البيئية ونوتريمينتال12. P. الزّنجاريّة هو سبب الشائع للعدوى المكتسبة من المجتمع، ومستشفى، ووجدت أن تكون وثيقة المرتبطة بالإصابات، مثل الحروق الشديدة، ويستضيف المناعة، كما هو الحال في التليف الكيسي (CF)5،12، 13، والإيدز، ومرضى السرطان5،13. تم ربط تشكيل P. الزّنجاريّة الأغشية الحيوية الأكثر جدية لقوات التحالف، حيث التهابات الرئة المزمن هي السبب الرئيسي لوفاة هذا المرض5.
سلالة مرجعية من P. الزّنجاريّة، PA01، ويستخدم في هذا التقرير وهو محوره وراثيا للتعبير عن تعزيز بروتين فلورية خضراء (السلطة الفلسطينية-اجفب). اجفب يمثل شكلاً متحولة للتجارة والنقل مع خصائص fluorescence أكبر مما يسمح بتحليل بيوفيلم في الموقع استخدام fluorescence مجهرية14،،من1516. هذا النوع من التحليل الأسفار مفيد لدراسة الأغشية الحيوية للتجارة والنقل لا تتداخل إلى حد كبير مع نمو الخلايا ووظيفة17. على سبيل المثال، نمت خلايا الإشريكيّة القولونية التي تم تمييزها بالتجارة والنقل جيد ومستمر دون عانى أي تأثيرات سامة بالمقارنة ب البكتريا التحكم17. تقارير أخرى تثبت هذا الادعاء18،،من1920. وعلاوة على ذلك، استخدام مراسل الفلورسنت مثل اجفب سريعة وبسيطة، ومع ذلك سيتم قياس الخلايا الحية فقط نظراً لتوقف الخلايا الميتة بسرعة فلوريس21.
الأغشية الحيوية يمكن أن تنمو تحت ظروف بيئية مختلفة بما في ذلك تلك التي لديها معدلات تدفق مختلفة. على سبيل المثال، يمكن أن تنمو الأفلام في إجهاد القص عالية، كما هو الحال في الأنهار، حيث تؤدي ظروف تدفق المياه العالية إلى تنوع الميكروبي أكبر22. على النقيض من ذلك، تجربة المياه الراكدة في البرك أو الأغشية الحيوية عن طريق الفم كثير أقل قص قوة23. بالإضافة إلى معدل التدفق، وهناك عوامل أخرى تؤثر على التصاق بيوفيلم، بما في ذلك خشونة السطح وهيدروفوبيسيتي، تركيب وسائل الإعلام، وحتى البكتريا الخلية السطحية1،،من47، 24-شروط يمكن أيضا أن يسبب الاختلاف في الهيكل المكاني أو مورفولوجية بيوفيلم. وهذا يشمل الظروف البيئية مثل إجهاد القص تمارسها سائل تتحرك أو التدرجات في توافر المغذيات والعوامل البيولوجية مثل الأنواع الموجودة في النظام وحركية من الخلايا والبروتينات المحددة الموجودة في الخلية مادة البوليمر25،،من2627. في ظل بعض الظروف، سيكون بيوفيلم الشبيهة بالحديقة (السلس وشقة)، في حين في ظل ظروف أخرى بيوفيلم سوف تكون خشنة، رقيق، أو حتى مثل فطر28. بينما الفرق النوعي بين المروج بيوفيلم والهياكل فطر يمكن رؤيتها بوضوح في الصور المجهرية، فهم العلاقة بين بنية الفيلم والعمليات البيولوجية داخل الفيلم يتطلب منهجية والكمية أساليب وصف مورفولوجية. تتضمن الخصائص المورفولوجية اقترحه الباحثون لدراسة المسامية، البعد كسورية، وطول ديفوسيونال، منطقة ميكروكولوني التحتية وحجم ميكروكولوني، ومعامل الخشونة، والتكوينية الانتروبيا29،30 .
وتستخدم المفاعلات الحيوية في دراسة الأغشية الحيوية لتحاكي ظروف الحياة الحقيقية31. بالتنقيط تدفق المفاعلات (الترميد) تمثل بيئة القص المنخفض حيث تدفق المواد المغذية في وسائل الإعلام ببطء عبر الخلايا التي يتم إرفاق إلى سطح على مر الزمن لتشكيل بيوفيلم مع خلية عالية كثافة32. مفاعلات مركز السيطرة على الأمراض بالمفاعلات الحيوية التي تخلق بيئة السوائل عالية القص إجهاد عن السيطرة على قضيب إثارة يدور باستمرار داخل وسائط الإعلام ملء خزان33. هذه الأنواع من المفاعلات الحيوية بسيطة لإعداد، ولكن محدودة في نطاقها بسبب حجم العينة منخفضا نسبيا، الاستهلاك المرتفع لوسائط الإعلام، وكميات كبيرة من النفايات اوتوكلاف المنتجة من وسائل الإعلام بالتنقيط التدفقات تتراوح بين 125 ميليلتر الدقيقة للمفاعلات تدفق بالتنقيط إلى أكثر من 1 مل/دقيقة لمفاعلات مركز السيطرة على الأمراض، والحاجة إلى اﻷوتوكﻻف كميات كبيرة من الأواني الزجاجية والنفايات الوسائط34. الأغشية الحيوية لا تنمو بشكل متساو عبر السطح في مفاعل تدفق بالتنقيط لأنه يسبب القص المنخفض لوسائل الإعلام زائدة على طول تكتلات أكبر من P. الزّنجاريّة البكتيريا ولذلك، نمو بيوفيلم ليس سلس جداً ولا يمكن أن تكون العينات غير متكافئ حلل بسهولة مع الأسفار مجهرية35،36 .
يتم التغلب على بعض القيود الشائعة في مفاعل حيوي باستخدام مفاعل حيوي موائع جزيئية الإنتاجية المتوسطة، حيث مطلوبة فقط ملليلتر من وسائل الإعلام، ولوحات رد فعل صغيرة ويسهل التخلص منها بعد التعقيم37. وعلاوة على ذلك، تبعاً لعدد الآبار، تكرار العديد من يمكن أن يؤديها في مفاعل واحد فقط تشغيل، مما يوفر كمية كافية من البيانات لإجراء التحليل الإحصائي ذات مغزى. ويرد في الشكل 1، المكونات المختلفة لنظام الفحص المجهري موائع جزيئية تسمح لظروف خاضعة للرقابة، بما في ذلك درجة الحرارة وتدفق معدل38،،من3940،. مفاعل حيوي يقترن بالأسفار الفحص المجهري لتصور الأسفار علامة اجفب في PA01 تحت تطبيق منخفضة من خلال شروط القص العالية التي سوف تحاكي سيناريوهات أكثر واقعية التي تتم مواجهتها في البيئة أو في مجال الطب الحيوي.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58926/58926fig1.jpg"> الشكل 1 : المكونات الفردية لنظام موائع جزيئية. يتم سرد المكونات الفردية من اليسار إلى اليمين: 1. كاميرا CCD، 2. "المجهر المقلوب القرار عالية" مع المرحلة الآلي والآلي وحدة الأسفار، وضبط تلقائي للصورة النمطية، 3. "لوحة المرحلة" 4: نظام واجهة، 5 التصوير: "دليل المجهر المرحلة" التحكم، 6: مصيدة بخار، 7: نظام تحكم (بما في ذلك درجة الحرارة)، 8 التصوير: "وحدات تحكم الأجهزة"، 9: Fluorescence تحكم، 10: "إمداد الطاقة غير المتقطعة"، 11: محرك قرص "ثابت خارجي" "تخزين الصور"، 12: كمبيوتر محطة عمل. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58926/58926fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
ويرد في الشكل 2مقتطفات من لوحة موائع جزيئية. لوحات الأكثر شيوعاً تتكون من 48 بئرا. تجربة واحدة يتطلب مدخل واحد والآبار منفذ واحد، ومجموعة من الآبار 2. وهذا يسمح ل 24 تجارب المتزامنة التي يمكن تنفيذها مع مختلف الظروف التجريبية، مثل السلالات البكتيرية، العلاجات المضادة للميكروبات، ووسائل الإعلام تختلف من قناة إلى قناة، والتحكم في تدفق القص لكل عمود من ست قنوات. تسيطر درجة الحرارة التجريبية أيضا مع إعداد واحد من درجة الحرارة في جميع أنحاء اللوحة. قنوات موائع جزيئية تبين أن كل قناة منطقة السربنتين توفير الضغط الخلفي كافية والقص التي تسيطر عليها.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58926/58926fig2.jpg"> الشكل 2: التصور قنوات موائع جزيئية ونافذة عرض. يتم تمييز بئرين مدخل ومخرج مع القنوات موائع جزيئية ربطها مع الأصباغ الحمراء والخضراء. الصبغ يجعل تظهر منطقة السربنتين في كل قناة مما يخلق ضغطاً كافياً على الظهر والقص الخاضعة للرقابة أثناء تدفق السائل. يمكن تصويرها كل قناة العرض (داخل الدائرة الحمراء) مع أطوال موجية المرجوة. يظهر هي ميدان مشرق (أعلى) ونيون (أسفل) صور مجهرية من قناة واحدة مع بيوفيلم PA01-اجفب استخدام هدفا X 20. شريط المقياس = 80 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58926/58926fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
ويرد دليل خطوة بخطوة للسماح للمستخدمين من موائع جزيئية المفاعلات الحيوية التي تقترن بالأسفار الفحص المجهري لإجراء تجارب بيوفيلم رواية استخدام بيئات مختلفة القص. سيسمح هذا الأسلوب لتوسيع نطاق التجارب التي تشمل الكائنات الحية الدقيقة الأخرى إلى جانب البكتيريا، مثل الفطريات، والطحالب، والتي تحتوي على التطبيقات الطبية والبيئية41،،من4243. نهج مفصل يصف كيف لثقافة PA01-اجفب وتطعيم لوحة 48-جيدا وقم بإعداد الجهاز موائع جزيئية والبرمجيات وإعداد مجهر فلوري ويثبت تحليل البرامج للحصول على تغطية بيوفيلم، معدل النمو، و الخصائص المورفولوجية مثل خشونة السطح.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:800px;" width="801">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:263px;">Ammonium Chloride, ACS</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BDH9208-500G</td>
			<td style="width:304px;">Part of the minimal media composition</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:263px;">BioFlux 1000 48 Well Low Shear Plate</td>
			<td style="width:115px;">Fluxion Biosciences</td>
			<td>910-0047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:263px;">BioFlux 1000Z Microfluidic Imaging System</td>
			<td style="width:115px;">Fluxion Biosciences</td>
			<td>BF 1000Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Calcium Chloride Dihydride, ACD Grade</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td>97061-904</td>
			<td>Part of the minimal media composition</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextrose, Anhydrous, ACS</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td>BDH9230-500G</td>
			<td>Part of the minimal media composition</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnesium Sulfate ACS Grade</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td>EM-MX0070-1</td>
			<td>Part of the minimal media composition</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:263px;">Potassium Phosphate Monobasic, ACS Grade</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td>BDH9268-500G</td>
			<td>Part of the minimal media composition</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:263px;">Pseudomonas Aeurginosa GFP</td>
			<td style="width:115px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">15692GFP</td>
			<td style="width:304px;">Pseudomonas aeurinosa bacterial strain PA01 with GFP modification used for this study.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:263px;">Sodium Chloride, ACS</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">BDH9286-500G</td>
			<td>Part of the minimal media composition</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:263px;">Sodium Phosphate, Monobasic, Anhydrous, Reagent Grade</td>
			<td style="width:115px;">VWR</td>
			<td>97061-942</td>
			<td>Part of the minimal media composition</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live cell analysis of shear stress on pseudomonas aeruginosa using an automated higher-throughput microfluidic system

وقد استخدمت موائع جزيئية أعلى إنتاجية في المختبر مفاعل حيوي مقترنة بالأسفار الفحص المجهري لدراسة النمو البكتيري بيوفيلم ومورفولوجيا، بما فيها الزائفة الزّنجاريّة (P. الزّنجاريّة). وهنا، نحن سوف تصف كيف يمكن استخدام هذا النظام لدراسة حركية النمو والخصائص المورفولوجية مثل خشونة السطح والتكوينية اعتلاج سلالة P. الزّنجاريّة PA01 أن تعرب عن تعزيز بروتين فلورية خضراء (PA01-اجفب ). بروتوكول مفصل سوف تصف كيفية النمو والبذور الثقافات PA01-اجفب، وكيفية تعيين مجهر والتشغيل التلقائي، وإجراء تحليل الصورة لتحديد معدل النمو والخصائص المورفولوجية باستخدام مجموعة متنوعة من قوي القص التي يسيطر عليها جهاز موائع جزيئية. هذه المادة سوف توفر وصفاً مفصلاً لتقنية لتحسين دراسة الأغشية الحيوية PA01-اجفب التي يمكن تطبيقها في نهاية المطاف نحو أخرى سلالات من البكتيريا أو الفطريات أو الطحالب من الأغشية الحيوية باستخدام منصة موائع جزيئية.

الشكل 4 يوضح منطقة ثريشولديد في المائة على مر الزمن من ح 24 تشغيل في تدفقات القص 0.2 و 0.5 و 1.0 داين/سم2. بيوفيلم التغطية أو المئة عتبة المساحة السطحية (ج [%]) كان مختلفاً بالنسبة لجميع القص ثلاثة إعدادات. وكانت تغطية بيوفيلم الأسرع في 1.0 داين/سم2 القص، حيث زادت منطقة العتبة من 2-5% إلى 100% بعد 200 دقيقة للنمو ووصلت إلى مرحلة ثابتة بعد دقيقة 400. في 0.5 داين/سم2، تأخر التغطية بيوفيلم وبدأت تزيد على 400 دقيقة التوصل إلى تغطية بنسبة 100% بعد 800 دقيقة. القص أدنى 0.2 داين/سم2 بوضوح زيادة أبطأ في تغطية بيوفيلم، حيث نسبة التغطية بدأت تزيد على 500 دقيقة لكن لم تصل ابدأ إلى خارج منطقة عتبة 65%. وأشارت هذه النتائج إلى القص كان لها تأثير مباشر في تغطية سطح بيوفيلم. ويبدو القص أعلى يكون شرطا أكثر أمثل للنمو بيوفيلم، وربما يرجع ذلك إلى حقيقة أن وسائط الإعلام توفير البكتيريا مع المزيد من المواد الغذائية بحيث يمكن أن تتكاثر بيوفيلم أسرع.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58926/58926fig4.jpg"> الشكل 4: منطقة عتبة المئة وتراكم بيوفيلم مجموع ومعامل الخشونة، والتكوينية الانتروبيا. عتبة أ) نسبة المجال (ج [%]) على مر الزمن باستخدام 0.2 و 0.5 و 1.0 داين/سم2 على مدى 24 ساعة فترة زمنية. تم الحصول على البيانات من قناة واحدة لكل شرط الإمالة. ب) مجموع تراكم بيوفيلم (قياس نسبي) كدالة للوقت باستخدام 0.2 و 0.5 و 1.0 داين/سم2 على مدى 24 ساعة الفترة الزمنية. خطوط سوداء المربعات الصغرى لتناسب نموذج آسيه. تم الحصول على البيانات من قناة واحدة لكل شرط الإمالة. ج) معامل خشونة PA01-اجفب استخدام قيم إجهاد القص من 0.2 و 0.5 و 1.0 داين/سم2 رصد ما يزيد على 24 h. البيانات تم الحصول من قناة واحدة لكل شرط الإمالة. د) اعتلاج التكوينية PA01-اجفب باستخدام قيم إجهاد القص 0.2 و 0.5 و 1.0 داين/سم2. تم الحصول على البيانات من قناة واحدة لكل شرط القص (فالقوير-فلين، حاء، سوتليف، أ. ل.، وينتوورث، ماديرا، 2018). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58926/58926fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
الشكل 4 ب يتسق مع النتائج هو موضح في الشكل 4. وتم قياس تراكم بيوفيلم (N[rel]) استناداً إلى افتراض أن إشارة بروتينات فلورية خضراء في نقطة في صورة تتناسب مع كثافة الخلايا الحية في هذا الموضع. فإنه يوضح أن زيادة تراكم بيوفيلم مجموع القياس النسبي كدالة للوقت باستخدام 0.2 و 0.5 و 1.0 داين/سم2 على مدى 24 ساعة فترة زمنية، وانخفض معدل النمو من أعلى القص الإجهاد إلى أدنى إجهاد القص. وهناك فترة زمنية واضحة تعطي النمو الأسى التي يمكن من خلالها حساب معدل نمو كمي.
الشكل 4 ج يوضح أن معامل الخشونة (ص) في التدفقات القص 0.2 و 0.5 و 1.0 داين/سم2. خشونة السطح، كمياً بأن معامل الخشونة، يقيس الفرق في التشكيل الجانبي لسمك الفيلم. التعريف الرسمي
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58926/58926eq1.jpg">
حيث Tأنا هو أنا-ال سمك القياس، T سمك متوسط، و N هو عدد قياس سمك30. الإجراء الموضح في هذا التحقيق يقيس سمك المرتبطة بالخلايا الحية. ترتيب شقة من الخلايا سوف تسفر عن معامل خشونة صفر بينما سوف تسفر عن اختلافات كبيرة من سمك من المتوسط معامل خشونة أكبر من واحد. مماثل لتأثير القص على معدل النمو وعتبة نسبة التغطية للفيلم، الأغشية الحيوية عرضت تصاميم مختلفة على مر الزمن. إجمالاً، ص انخفضت على مر الزمن لكل شروط القص مما يشير إلى أن جميع الأسطح وأصبحت أكثر سلاسة. لكن بالمقارنة مع القص أقل من 0.2 داين/سم، الإعدادات القص أعلى من 0.5 و 1.0 داين/سم2 أدى إلى سطح أكثر سلاسة مع مرور الوقت مشيراً إلى أن تدفق قص أسرع أسهم سطح أكثر سلاسة وأكثر توازناً، والقص أعلى من 1.0 داين/سم2 التوصل إلى أدناه 0.2 ص.
يمكن أيضا التعبير عن نعومة أو الانتظام، أو خشونة السطح في الانتروبيا التكوينية (TE). الشركة المصرية للاتصالات خاصية تستخدم في تحليل الصور لقياس درجة العشوائية في صورة ثنائية الأبعاد. يستند إلى الحساب المصفوفة التواجد المشترك مستوى رمادي، يحددها هاراليك et al.، الذي يبحث في ما إذا كانت ترتبط قيم بكسل في موقع واحد مع قيم بكسل في مكان آخر44. درجة عالية من الارتباط سيؤدي إلى الانتروبيا منخفضة. الشكل 4 ويصور د تي في تدفقات القص 0.2 و 0.5 و 1.0 داين/سم2. الشركة المصرية للاتصالات زيادة مع مرور الوقت لجميع شروط القص ولكن الإجهاد القص أعلى في 1.0 داين/سم بلغ أقصى TE (1.0) أقدم من القص وتشدد على انخفاض في 900 دقيقة. وكان القص أقل من 0.2 داين/سم2 TE أدنى (0.8) الوصول إلى الحد الأقصى بعد دقيقة 1,000. بيد إجهاد القص المتوسطة 0.5 داين/سم2 بلغ به الشركة المصرية للاتصالات الحد الأقصى (1.2) بعد ذلك بكثير من ظروف الإجهاد القص عالية أو منخفضة.
قياس معامل خشونة والشركة المصرية للاتصالات ميزات مختلفة. بينما سيكون فيلم شقة معامل خشونة منخفضة ومنخفضة الانتروبيا، فيلما مع تباين كبير في سمك معامل خشونة عالية لكن يمكن أن يكون لا يزال الانتروبيا منخفضة إذا كان الاختلاف جيبية بدلاً من العشوائية. وفي هذه الحالة، ص انخفضت مع زيادة إجهاد القص والوقت بينما اتجاهات الشركة المصرية للاتصالات لا ترتبط بالقص الإجهاد المطبقة على تشكيل بيوفيلم مع مرور الوقت.
<img alt="Supplemental Figure 1" src="/files/ftp_upload/58926/58926figS1.jpg"> الرقم S1 : صورة القبض على مراقبة البرامج windows. فتح نافذة البرنامج مع "اكتساب متعدد الأبعاد" القائمة (أعلى). تعيين وحدة التحكم التشغيل التلقائي (أسفل). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58926/58926figS1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Supplemental Figure 2" src="/files/ftp_upload/58926/58926figS2.jpg"> الرقم S2 صورة التقاط البرامج لاستعراض البيانات. إطار التطبيق بعد تحديد مجموعة البيانات المتعلقة بالاهتمام باستخدام أداة مراجعة بيانات متعددة الأبعاد من القائمة أدوات التحليل . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58926/58926figS2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Analysis of Shear Stress on Pseudomonas aeruginosa Using an Automated Higher-Throughput Microfluidic System at JoVE.com

Live Cell Analysis of Shear Stress on Pseudomonas aeruginosa Using an Automated Higher-Throughput Microfluidic System

هنا، يمكننا وصف استخدام موائع جزيئية أعلى إنتاجية مفاعل حيوي مقترنة مجهر فلوري لتحليل آثار إجهاد القص على الأغشية الحيوية الزائفة الزّنجاريّة معربا عن البروتينات الفلورية الخضراء، بما في ذلك الصك قم بإعداد، تحديد التغطية بيوفيلم ومعدل النمو والخصائص المورفولوجية.

يعيش "خلية التحليل من إجهاد القص" على الزائفة الزّنجاريّة باستخدام نظام موائع جزيئية العالي الإنتاجية الآلي

A higher-throughput microfluidic in vitro bioreactor coupled with fluorescence microscopy has been used to study bacterial biofilm growth and morphology, ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية حول تطوير الأفلام الحيوية، مثل كيفية تحديد الظروف البيئية الرئيسية، التي تؤثر على نمو الأفلام الحيوية والخصائص السلوكية أثناء التطوير. والميزة الرئيسية لهذه التقنية، هي أن لوحات متعددة القنوات، ومائعة الصغر، تسمح للحصول السريع على نتائج ذات دلالة إحصائية. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في بنية بيو فيلم، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على دراسة العلاجات بالمضادات الحيوية، والعلاج الحيوي.عموما، سوف الأفراد جديدة لهذا الأسلوب النضال، لأن الاهتمام الدقيق لتفاصيل البروتوكول والمهارات الدقيقة، وهناك حاجة. لتجنب خطأ في اتصال الجهاز إلى البرنامج، قم بتشغيل محطة عمل الكمبيوتر أولاً، متبوعة بوحدة الفلوريسانس. تأكد من تشغيل مصراع الفلوريسنس، ثم قم بتشغيل وحدات تحكم الأجهزة.بعد ذلك، قم بتشغيل وحدة تحكم نظام التصوير وكاميرا CCD. ثم قم بتشغيل محطة التصوير. عندما تكون جميع المعدات جاهزة، ابدأ تطبيق التحكم، وأدخل رقم اللوحة، الموجود على الملصق على جانب اللوحة.لالفْرَة، أولاً قم بإزالة 48 لوحة مُمَولة صغيرة من العبوة، دون لمس سطح الزجاج في الجزء السفلي من اللوحة، ونظف الشريحة الزجاجية في قاع اللوحة، مع نسيج العدسة. لر رئيسية القنوات الصغيرة fluidic، ماص 200 ميكرولترات من 37 درجة مئوية الحد الأدنى المتوسطة في الإنتاج جيدا، مع الحرص على تجنب فقاعات. ثم ضع لوحة على خشبة المسرح لوحة.امسح الواجهة بالإيثانول، وختمه على خشبة المسرح بمجرد أن يجف الإيثانول. في الوضع اليدوي على وحدة التحكم، تعيين السائل كما مرق لوريا-بيرتاني في 37 درجة مئوية، والحد الأقصى للدرجة خمسة dym لكل سنتيمتر مربع. انقر فوق آبار الإخراج لتنشيط التدفق من الناتج إلى الإدخال بشكل جيد ، إلى رئيس الوزراء القنوات.بعد خمس دقائق، وقف تدفق للتحضير للبذاءة، وإزالة بعناية لوحة من المرحلة. ثم، التعرق أي وسيط المتبقية من الانتاج جيدا دون إزالة أي وسيلة من الدائرة الداخلية التي تؤدي إلى القنوات مائع الصغرى. لزرع القنوات التجريبية، إضافة 300 ميكرولترات من الحد الأدنى من المتوسطة في جيدا المدخلات، تليها إضافة 300 ميكرولترات من الثقافة البكتيرية، في الإنتاج جيدا.أعيدي اللوحة إلى مرحلة التصوير مع التأكد من مسح الواجهة بالإيثانول قبل وضعها على اللوحة، واستخدام تغذية الكاميرا المباشرة للتركيز على قناة واحدة. أثناء مراقبة البث المباشر بصريًا ، استئناف التدفق من 1 إلى 2 dym لكل سنتيمتر مربع لمدة 2 إلى 4 ثوان تقريبًا ، للسماح للخلايا بدخول القناة التجريبية ولكن ليس القنوات الثعبانية ، وترك اللوحة على درجة الحرارة التي تسيطر عليها لمدة ساعة واحدة ، للسماح للخلايا بالتصاق. في نهاية فترة المرفق، وإزالة لوحة بعناية من المرحلة وpirate البكتيريا من الإخراج بشكل جيد دون إزعاج القناة.ثم استخدم طرف ماص جديد لإزالة الوسيطة من الآبار المدخلة. في البرنامج ، وفتح متعددة الأبعاد اقتناء للسيطرة على الحصول على صورة المجهر ، وتحديد الفاصل الزمني ، وظائف مرحلة متعددة ، وأطوال موجية متعددة. في علامة التبويب الحفظ، قم بإنشاء اسم أساسي بسيط، مع التأكد من أن incroments الاسم الأساسي في حالة وجود ملف، يتم التحقق منه.تضمين أي تفاصيل أساسية عن التجربة في الوصف. انقر فوق تحديد الدليل، لتحديد المجلد الذي سيتم حفظ كافة الملفات فيه تحت علامة التبويب الفاصل الزمني، وضبط مدة الوقت التجريبي، إلى 24 ساعة، وتعيين الفاصل الزمني للحصول على الصور كل خمس دقائق خلال التجربة. استخدم تغذية الكاميرا المباشرة والهدف 10x لتعيين مواضع المرحلة ، مع التركيز على مركز القناة ، الموجود فوق أو أسفل أرقام القناة المحفورة على اللوحة.قم بالتبديل إلى الهدف 20x، وحدد موقع منطقة العرض المثالية والطائرة البؤرية داخل القناة. ثم قم بإضافة موضع المرحلة إلى القائمة مع الإعدادات الجديدة. تحت قائمة الأطوال الموجية، تعيين عدد الأطوال الموجية إلى 3، وتعيين الطول الموجي الأول إلى الكاميرا 100٪ فيتك، مع عشر مللي ثانية وقت التعرض، الطول الموجي الثاني إلى كاميرا brightfield 50٪ مرئية 50٪، مع الحد الأدنى من وقت التعرض من 3 مللي ثانية وطول الموجة الثالث إلى جميع مغلقة، لذلك لا يبقى أي ضوء على القناة الأخيرة بين أوقات الاستحواذ.في القائمة تحرير التشغيل التلقائي، افتح علامة تبويب إعداد البروتوكول، ثم قم بتعيين بروتوكول جديد لمدة 24 ساعة مع ضبط التدفق في الاتجاه الأمامي بمعدل القص التجريبي المناسب. انقر فوق إضافة وحفظ كما لحفظ البروتوكول وفتح علامة التبويب إعداد التسلسل. لإعداد تسلسل جديد، حدد مرق Luria-Bertani عند 37 درجة، كسائل افتراضي لجميع القنوات.ضمن الخطوة التكرار 1 للقنوات من 1 إلى 12، حدد البروتوكول مع معدل القص التجريبي الأول وتمكين كافة القنوات. بالنسبة للقنوات من 13 إلى 24، حدد البروتوكول مع معدل القص التجريبي الثاني وتمكين جميع القنوات. ثم حدد تطبيق وحفظ باسم، لحفظ التسلسل وفتح القائمة التشغيل التلقائي لتحديد التسلسل المحفوظ لاستخدامه في التشغيل التلقائي.لإعداد تجربة بيو فيلم النمو في الوقت المناسب، إضافة ما يصل إلى 1300 ميكرولترات من المتوسط العقيم الحد الأدنى في بئر المدخلات من لوحة صغيرة fluidic، والعودة لوحة إلى مرحلة التصوير. ثم، مسح واجهة مع الإيثانول، وختم لوحة. تأكد من إعداد البروتوكولات والتسلسلات بشكل صحيح.حدد بدء تشغيل التشغيل التلقائي، وانقر فوق الحصول على الفور لبدء مجموعة الصور المجهر. في نهاية الحصول على الصورة الأولى، انقر على إيقاف مؤقت وحدد وضع الصورة المباشرة في الطول الموجيfieldfield. حدد الانتقال إلى لعرض كل موضع مرحلة، وحدد مجموعة إلى الحالي، لتعيين الإعدادات الجديدة.ثم انقر فوق استئناف، قبل البدء في عملية الاستحواذ المجدولة التالية. في هذه التجربة التمثيلية لنمو الأغشية الحيوية، كانت تغطية البيوفيلم، أو مساحة السطح في المائة، مختلفة بالنسبة لجميع إعدادات القص الثلاثة، مما يشير إلى أن القص كان له تأثير مباشر على تغطية سطح البيوفيلم. وقد زاد مجموع القياس النسبي لتراكم الغشاء الحيوي، كدالة للوقت، مع انخفاض معدل النمو من أعلى إجهاد القص إلى أدنى إجهاد القص.وفي ظل كل حالة، كانت هناك أيضا فترة واضحة من النمو الأسي يمكن أن تحسب منها معدلات النمو الكمي. وبشكل عام، انخفض معامل الخشونة بمرور الوقت في ظل جميع ظروف القص، مما يشير إلى أن جميع أسطح البيوفيلم أصبحت أكثر سلاسة. ومع ذلك، مقارنة بأقل القص، أدت إعدادات القص الأعلى إلى سطح أكثر سلاسة بمرور الوقت، مما يشير إلى أن تدفق القص الأسرع يساهم في سطح أكثر سلاسة وأكثر سلاسة.علاوة على ذلك ، زادت الكونتروبيا التركيبية ، أو العشوائية في المورفولوجيا ، بمرور الوقت لجميع ظروف القص. أثناء تنفيذ هذا الإجراء من المهم أن نتذكر أن تتبع التسلسل المحدد وأن تأخذ من الوقت لتنفيذ كل خطوة بدقة. المهارات اللازمة يمكن أن يستغرق بضعة أشواط لإتقان.بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل HBLC أو GCMS للإجابة على أسئلة إضافية حول تركيزات الركائز، مثل الجلوكوز، التي يتم استهلاكها. بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الأفلام الحيوية لاستكشاف بيئات التدفق العام في الوقت الحقيقي مع الظروف التجريبية الخاضعة للرقابة وأخذ عينات من العلاج المائي. لا تنس أن العمل مع سلالات BSL2 البكتيرية يمكن أن تكون خطرة للغاية، وأن الاحتياطات مثل ارتداء معدات الحماية المناسبة واستخدام بروتوكولات النفايات المناسبة ينبغي اتخاذها دائما أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Live Cell Analysis of Shear Stress on Pseudomonas aeruginosa Using an Automated Higher-Throughput Microfluidic System

Microfluidic-based Electrotaxis for On-demand Quantitative Analysis of Caenorhabditis elegans' Locomotion

Microfluidic-based Electrotaxis for On-demand Quantitative Analysis of Caenorhabditis elegans' Locomotion

انجذاب كهربي المستندة ميكروفلويديك للتحليل الكمي بناء على الطلب<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em&gt; &#39;تنقل

The nematode Caenorhabditis elegans is a versatile model organism for biomedical research because of its conservation of disease-related genes and ...

Microfluidic Picoliter Bioreactor for Microbial Single-cell Analysis: Fabrication, System Setup, and Operation

In this protocol the fabrication, experimental setup and basic operation of the recently introduced microfluidic picoliter bioreactor (PLBR) is described ...

Systematic Analysis of In Vitro Cell Rolling Using a Multi-well Plate Microfluidic System

Systematic Analysis of In Vitro Cell Rolling Using a Multi-well Plate Microfluidic System

التحليل المنهجي لل<em&gt; في المختبر</em&gt; الخليوي المتداول باستخدام نظام ميكروفلويديك لوحة متعددة جيدا

A major challenge for cell-based therapy is the inability to systemically target a large quantity of viable cells with high efficiency to tissues of ...

Using Adhesive Patterning to Construct 3D Paper Microfluidic Devices

باستخدام لاصق الزخرفة لانشاء 3D ورقة أجهزة ميكروفلويديك

We demonstrate the use of patterned aerosol adhesives to construct both planar and nonplanar 3D paper microfluidic devices. By spraying an aerosol ...

Designing Microfluidic Devices for Studying Cellular Responses Under Single or Coexisting Chemical/Electrical/Shear Stress Stimuli

تصميم الأجهزة ميكروفلويديك لدراسة الردود الخليوي تحت واحدة أو تتعايش الكيميائية / الكهربائية / إجهاد القص المحفزات

Microfluidic devices are capable of creating a precise and controllable cellular micro-environment of pH, temperature, salt concentration, and other ...

Rapid Subtractive Patterning of Live Cell Layers with a Microfluidic Probe

الزخرفة مطروح السريع لطبقات الخلايا الحية مع التحقيق ميكروفلويديك

The microfluidic probe (MFP) facilitates performing local chemistry on biological substrates by confining nanoliter volumes of liquids. Using one ...

Fabrication and Validation of an Organ-on-chip System with Integrated Electrodes to Directly Quantify Transendothelial Electrical Resistance

تلفيق والتحقق من صحة نظام الجهاز على رقاقة مع أقطاب متكاملة لقياس المقاومة الكهربائية ترانسيندوثيليال مباشرة

Organs-on-chips, in vitro models involving the culture of (human) tissues inside microfluidic devices, are rapidly emerging and promise to provide useful ...

Automated Slide Scanning and Segmentation in Fluorescently-labeled Tissues Using a Widefield High-content Analysis System

مسح الشرائح الآلي وتجزئة في الأنسجة المسمى فلوريسسينتلي باستخدام نظام تحليل ويديفيلد عالية-المحتوى

Automated slide scanning and segmentation of fluorescently-labeled tissues is the most efficient way to analyze whole slides or large tissue sections. ...

An Ultrahigh-throughput Microfluidic Platform for Single-cell Genome Sequencing

منصة موائع جزيئية أولتراهيغ الإنتاجية لتسلسل جينوم خلية واحدة

Sequencing technologies have undergone a paradigm shift from bulk to single-cell resolution in response to an evolving understanding of the role of ...

Light-sheet Fluorescence Microscopy to Capture 4-Dimensional Images of the Effects of Modulating Shear Stress on the Developing Zebrafish Heart

مجهرية Fluorescence ورقة الضوء لالتقاط الصور 4-الأبعاد من آثار تحوير إجهاد القص في قلب الزرد النامي

The hemodynamic forces experienced by the heart influence cardiac development, especially trabeculation, which forms a network of branching outgrowths ...