Name: evaluation of host-pathogen responses and vaccine efficacy in mice
Uploaded: 2019-02-22T13:30:00
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Diese Arbeit wurde von 1R01AI125560-01 und Start-up-Fonds von der Ohio State University unterstützt.

Alle Experimente mit lebenden Tieren wurden nach ein Protokoll genehmigt von der Ohio State University IACUC nach IACUC-Richtlinien durchgeführt. C57BL/6 Mäusen wurden in alle Impfungen und Infektionen eingesetzt. Sowohl weibliche als auch männliche Mäuse sind in jeder Gruppe nach NIH-Richtlinien verwendet. Die Anzahl der Tiere pro Gruppe wurde durch macht Berechnungen auf Grundlage der prognostizierten unterschiedlichen Ausgang unter experimentellen Gruppen bestimmt. Beispielsweise ergibt 8 Mäuse pro Gruppe 80 % Le...

Das umfassende Protokoll hier beschriebenen um Impfstoff induzierte Immunität gegen B. Pertussis -Infektion zu studieren wird auch Bewertung der Host Antworten auf eine Vielzahl von anderen Krankheitserregern ermöglichen. Das Protokoll beschreibt Methoden liefern Impfungen, bestimmen Impfstoff Wirksamkeit folgende Erreger Herausforderung und parallele Dissektion der Immunfunktion. Bei der Anpassung des Protokolls um andere Krankheitserreger zu studieren, müssten mehrere Parameter geändert werden. Diese beinh...

Impfstoffe sind eines der größten öffentlichen Gesundheit Errungenschaften des 20. Jahrhunderts, doch wir immer noch nicht vollständig verstehen die Mechanismen, durch die erfolgreiche Impfstoffe schützende Immunität anregen. Die Identifizierung von molekularen Signaturen (zB., Zelle Aktivierungsmarker, Erweiterung der zellulären Subtypen und Muster der Genexpression) induziert nach der Impfung bietet eine Fülle von Informationen für die Vorhersage und erzeugen eine wirksame Immunantwort. Die Komplexität der Wirt-Pathogen-Antworten kann nicht angemessen mit in-vitro- Zelle Kultur Systeme1repliziert werden. In Vivo Impfstoff Modelle sind entworfen, um damit auch mehrere Immunzelle Arten innerhalb des Hosts zu bewerten. Dies bietet einen Vorteil, wenn Impfstoff Antigen Verarbeitung und Präsentation, differenzielle Zytokin-Sekretion und Ausbau der Immunzellen zu charakterisieren. Das hier beschriebene Protokoll sieht eine detaillierte Methode zum Bestimmen der Impfstoffwirksamkeit durch Auswertung der systemische und lokale Immunantwort und Quantifizierung der Erreger Belastung in Geweben von Interesse. Das hier angegebene Beispiel testet die Wirksamkeit von einer experimentellen Impfstoff gegen den Erreger Bordetella Pertussis (B. Pertussis).
B. Pertussis ist ein gramnegatives Bakterium, das die ätiologische Agent der Erkrankung der Atemwege Husten Keuchhusten (Pertussis)2,3ist. Engen Kontakt mit infizierten Personen (symptomatisch oder asymptomatisch) führt zur Übertragung, Kolonisierung und Krankheit. Trotz erheblichen globalen Impfstoff Abdeckung4Keuchhusten gilt eine aufrappelte Krankheit in vielen Ländern auf der ganzen Welt und ist die Hauptursache für vermeidbare Kindheit Todesfälle5,6,7, 8. 2015, B. Pertussis und der Pertussis wurden in das National Institute of Allergy und infectious Diseases (NIAID) emerging Pathogen/Infektionskrankheiten Liste, unter Betonung der Notwendigkeit für die Entwicklung besserer Impfstoffe zur Verfügung stehen, das verleiht langlebige schützende Immunität.
Derzeit ist ein aktives Gebiet der Untersuchung, Pertussis Wiederaufleben Steuern Entwicklung von einer nächsten Generation azellulären Pertussis-Impfstoff (aPV) mit einer optimalen Kombination von neuartige Adjuvantien und Antigenen, die Immunantwort ausgelöst durch die ganze Zelle zu imitieren Pertussis-Impfstoff (wPV)9. Mit dem Protokoll beschrieben, berichtet wir kürzlich, dass die Änderung von einer aktuellen FDA-zugelassene aPV durch die Zugabe von ein neuartiges Adjuvans Bordetella Kolonisation Faktor A (BcfA), führte eine effizientere Reduzierung von B. Pertussis Keimbelastung von Maus Lunge10,11. Diese erhöhte Schutz wurde durch die Schiefstellung einer Alaun-induzierte Th1/Th2-Immunantwort, die schonender Th1/Th17 immun Profil10begleitet. Dieses Protokoll ist detailliert und umfassend, die Ermittler maximale Informationen durch gleichzeitige Auswertung von Host und immunen Antworten zu einer Vielzahl von Krankheitserregern zu ermöglichen.
Das hier beschriebene Protokoll folgt der repräsentativen Impfstoff Zeitplan, in Abbildung 1gezeigt, um optimale Host Immunantworten zu gewährleisten.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:933px;" width="933">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">2L induction chamber</td>
			<td style="width:175px;">Vet Equip</td>
			<td style="width:119px;">941444</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Fluriso</td>
			<td style="width:175px;">Vet One</td>
			<td style="width:119px;">V1 501017</td>
			<td>any brand is appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Bordet Gengou Agar Base</td>
			<td style="width:175px;">BD bioscience</td>
			<td style="width:119px;">248200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Casein</td>
			<td style="width:175px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C-7078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Casamino acids</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">J851-500G</td>
			<td>Strainer Scholte (SS) media components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">L-Glutamic acid</td>
			<td style="width:175px;">Research Products Int</td>
			<td style="width:119px;">G36020-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">L-Proline</td>
			<td style="width:175px;">Research Products Int</td>
			<td style="width:119px;">P50200-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Sodium Chloride</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP358-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Potassium Phosphate monobasic</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP362-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Potassium Chloride</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Magnesium Chloride hexahydrate</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">M2670-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Calcium Chloride</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">C75-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Tris base</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP153-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:333px;">L-cysteine HCl</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP376-100</td>
			<td>SS media suplements</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ferrous Sulfate heptahydrate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F-7002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Niacin</td>
			<td style="width:175px;">Research Products Int</td>
			<td style="width:119px;">N20080-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Glutathione</td>
			<td style="width:175px;">Research Products Int</td>
			<td style="width:119px;">G22010-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:333px;">Ascorbic acid</td>
			<td style="width:175px;">Research Products Int</td>
			<td style="width:119px;">A50040-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">FBS</td>
			<td style="width:175px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F2442-500mL</td>
			<td>&#160;any US source, non-heat inactivated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">gentamicin</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15710064</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">B-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:175px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BP176-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">15mL dounce tissue grinder</td>
			<td style="width:175px;">Wheaton</td>
			<td>357544</td>
			<td>any similar brand is appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Cordless Hand Homogenizer</td>
			<td style="width:175px;">Kontes/Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Z359971-1EA</td>
			<td>any similar brand is appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">Instruments - scissors, curve scissors, forceps, fine forceps, triangle spreaders</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any brand is appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">3mL syringes</td>
			<td style="width:175px;">BD bioscience</td>
			<td style="width:119px;">309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">15mL conical tubes</td>
			<td style="width:175px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:119px;">339651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">1.5mL microfuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">Denville</td>
			<td style="width:119px;">C2170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">70um cell strainers</td>
			<td style="width:175px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:119px;">22363548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">60mm plates</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">130181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">48-well tissue culture plates</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>08-772-1C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">1mL insulin syringe 28G1/2</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific/Excel Int.</td>
			<td style="width:119px;">14-841-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Mouse IFN-gamma ELISA Ready-SET-Go! Kit</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen / eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">50-173-21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Mouse IL-17 ELISA Ready-SET-Go! Kit</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen / eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">50-173-77</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:333px;">Mouse IL-5 ELISA Ready-SET-Go! Kit</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen / eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">50-172-09</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of host-pathogen responses and vaccine efficacy in mice

Impfstoffe sind ein 20th Jahrhundert medizinische Wunder. Sie haben drastisch reduziert die Morbidität und Mortalität durch Infektionskrankheiten verursacht und trugen zu einem markanten Anstieg der Lebenserwartung rund um den Globus. Bestimmung der Impfstoffwirksamkeit bleibt jedoch eine Herausforderung. Anzeichen dafür deutet darauf hin, dass die aktuelle azelluläre Impfstoff (aPV) für Bordetella Pertussis (B. Pertussis) suboptimal Immunität induziert. Daher ist eine große Herausforderung einen nächsten Generation Impfstoff entwerfen, der schützende Immunität ohne die negativen Nebenwirkungen von einer ganzen Zelle Impfstoff (wPV) induziert. Hier beschreiben wir ein Protokoll, das wir verwendet, um die Wirksamkeit von vielversprechenden, neuartigen Adjuvans zu testen, die verzerrt Immunantworten auf einen schützenden Th1/Th17-Phänotyp und fördert eine bessere Clearance von B. Pertussis Herausforderung aus murinen Atemwege. Dieser Artikel beschreibt das Protokoll für Maus-Immunisierung, bakterielle Inokulation, Gewebe zu ernten und Analyse von Immunreaktionen. Mit dieser Methode, innerhalb unseres Modells haben wir entscheidende Mechanismen ausgelöst durch eine vielversprechende, nächste Generation azellulären Pertussis-Impfstoff erfolgreich aufgeklärt. Diese Methode kann auf jede Infektionskrankheit Modell angewendet werden, um Impfstoffwirksamkeit zu bestimmen.

Das Modell beschrieben zeigt eine Methode zur Bewertung von Impfstoff Effizienz und Immunreaktionen während Wirt-Pathogen Interaktionen. Abbildung 1 zeigt die repräsentative Impfstoff Zeitplan zu immunisieren und Mäuse zu infizieren und zu ernten Gewebe für die Analyse verwendet. Abbildung 2 zeigt das Setup des Systems, Anästhesie, Mäuse, induzieren Ermittler Impfungen und bakterielle Befallsdruck zu ermöglichen. <strong c...

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Hier präsentieren wir eine elegante Protokoll für in Vivo Evaluierung der Impfstoff Wirksamkeit und Host Immunantworten. Dieses Protokoll kann für Impfstoff-Modelle, die studieren, virale, bakterielle oder parasitäre Erreger angepasst werden.

Bewertung der Wirt-Pathogen-Antworten und Wirksamkeit des Impfstoffes bei Mäusen

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...

Das Protokoll ermöglicht die Bewertung von Wirtsreaktionen auf eine Vielzahl von Krankheitserregern und Impfstoffformulierungen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie die Bewertung der bakteriellen Belastung und Immunantworten in vivo ermöglicht, mit einem landebaren Tiermodell. Das demonstriert Kacy Yount, eine Studentin aus meinem Labor.Bestätigen Sie für die Immunisierung einen Mangel an Reaktion auf Zehenkniff in einer anästhesierten, sechs bis zwölf Wochen alten Maus, und laden Sie eine Insulinspritze mit einem Milliliter, die mit einer 28,5-Meter-Nadel mit einem 0,1 Milliliter des Interessenimpfstoffs ausgestattet ist. Halten Sie die Spritze in einem 45-Grad-Winkel, wobei die Abschrägung nach oben gerichtet ist, legen Sie die Nadel etwa fünf Millimeter in das Delta der Maus ein und injizieren Sie den Impfstoff. Halten Sie die Nadel in den Muskel für fünf bis zehn Sekunden eingeführt, dann drehen Sie die Spritze um 180 Grad, so dass die Abschrägung nach unten, um eine Dichtung zu schaffen, und um Impfstoff Leckage zu verhindern, bevor langsam die Nadel von der Injektionsstelle zurück.Dann kehren Sie die Maus in ihren Käfig zurück, mit Überwachung, bis zur vollständigen Wiederherstellung. Etwa zwei Wochen nach dem Aufsteigern, immunisierte Mäuse infizieren. Greifen Sie eine anästhesierte Maus durch die Schürzung des dorsalen Thorax, hinter den Schulterblättern und Hals, und positionieren Sie die Maus aufrecht, um auf die Nase zuzugreifen.Mit einer 200-Mikroliter-Pipettenspitze, langsam 20 bis 25 Mikroliter des bakteriellen Inokulums von Interesse auf jeden Nare des Tieres auftragen, halten Sie die Maus, bis das gesamte Inokulum eingeatmet wurde. Dann liefern Sie eine gleiche Menge an sterilem PBS an eine Gruppe von Mäusen als negative Kontrolle. Legen Sie am entsprechenden experimentellen Endpunkt eine infizierte Maus-Ventralseite auf eine Sezierplatte und sichern Sie die Gliedmaßen.Befeuchten Sie den Körper mit 70% Ethanol, und verwenden Sie Zangen, um die Haut unter dem Bauch in der Mitte des Beckens zu umklammern. Mit einer scharfen Schere, machen Sie einen vertikalen Schnitt bis zum Unterkiefer, und sezieren Sie die Haut von der Peritonealwand. Bewegen Sie die Haut an die Seiten des Schlachtkörpers, um ein ungehindertes Feld für die sterile Organernte zu schaffen, und greifen Sie das intakte Peritoneum unterhalb des Brustkorbs, an oder in der Nähe der Leber.Schneiden Sie das Peritoneum in Richtung des Brustkorbs, um den unteren Verdauungstrakt freizulegen, und bewegen Sie den Doppelpunkt nach links, um die Milz zu offenbaren. Mit gekrümmten Zangen, greifen Sie die Milz, und sezieren Sie das Bindegewebe mit der Schere. Dann legen Sie die Milz in eine 15 Milliliter konische Röhre mit 3 Milliliter RPMI und 5% fetalem Rinderserum auf Eis.Verwenden Sie Zangen, um den Brustkorb beim Xyphoidenprozess zu stabilisieren, und schneiden Sie die Membran auf. Die Lunge sollte sich entleeren und in Richtung Der Wirbelsäule fallen. Schneiden Sie den Brustkorb an den Seiten, um die Brustplatte zu entfernen, und schneiden Sie die Lungenarterien und Venen, um den oberen Lappen der rechten Lunge zu isolieren und zu entfernen.Fixieren Sie den Lappen in einem 15 Milliliter konischen Rohr von 10%neutral gepuffertem Formalin bei Raumtemperatur für mindestens 24 Stunden, und isolieren Sie die verbleibenden Lappen der rechten und linken Lunge. Dann legen Sie Lappen in einem 15 Milliliter konischen Rohr, enthält zwei Milliliter von 1%Casein in PBS auf Eis. Verwenden Sie einen Ein-Milliliter-Pipettier mit Spitze, um das Blut zu sammeln, das die Brusthöhle füllt, und übertragen Sie das Blut in eine vorbeschriftete 1,5 Milliliter Mikrozentrifugenröhre auf Eis.Entfernen Sie die Ohrspeicheldrüsen, sublingualen und submaxillären Drüsen und Lymphknoten, die die Luftröhre bedecken, und öffnen und entfernen Sie die Schutzmembranen, die die Luftröhre umgeben. Mit feinen Zangen und Scheren, trennen Sie sorgfältig die Luftröhre von der Speiseröhre, und jedes andere Bindegewebe von der Oberseite der Schlüsselbeine bis zum Boden des Unterkiefers. Verwenden Sie Zangen, um die Luftröhre zu halten, und schneiden Sie die Luftröhre an der Oberseite des Schlüsselbeins.Ziehen Sie die Luftröhre nach unten, um die Elastizität zu maximieren, und schneiden Sie die Luftröhre an der Unterkieferunterkiefer, direkt über dem Kehlkopf, isolieren etwa einen Zentimeter Gewebe. Legen Sie das Organ dann in ein vorbeschriftetes 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenrohr, das 0,3 Milliliter 1%Casein in PBS auf Eis enthält. Drehen Sie nun die Maus für einen klaren Zugang zur Nase und sprühen Sie den Kopf mit 70% Ethanol.Greifen Sie das Tier direkt hinter dem Schädel manuell und schneiden Sie mit einer Schere das weiche Fleisch der Schnarbe weg, beginnend vom Nasenboden und nach oben. Entfernen Sie das Fell, die Haut und die Schnurrhaare um die Nase herum, und legen Sie die Spitzen einer gekrümmten Schere in die Nares mit den nach unten gerichteten Kurven ein. Öffnen Sie den Nasengang zu den Augen und bilden Sie eine V-ähnliche Formation.Verwenden Sie dann feine Zangen, um das Nasenseptum und Weichgewebe innerhalb der Formation zu sammeln, und legen Sie das Gewebe in einem vorbeschrifteten 1,5 Milliliter Mikrozentrifugenrohr mit 0,3 Millilitern 1%Casein in PBS, auf Eis. Um das Lungengewebe zu verarbeiten, übertragen Sie den gesamten Inhalt der Lungenprobe in einen sterilen 15 Milliliter Dounce Homogenisator und verwenden Sie einen Stößel, um das Gewebe zu homogenisieren. Dissoziieren Sie die Probe, bis keine großen Gewebepartikel übrig bleiben, und geben Sie die homogenisierte Suspension in das ursprüngliche 15-Milliliter-Rohr zurück.Entfernen Sie einen 0,3 Milliliter Aliquot für die Beschichtung koloniebildender Einheiten, und sammeln Sie den Rest des Homogenats durch Zentrifugation. Aliquot 0,5 Milliliter Überstand in vorbeschrifteten Mikrozentrifugenröhren zur Lagerung bei 20 Grad Celsius bis zur Zytokinexpressionsanalyse durch Eliza. Dann, seriell verdünnen 0,1 Milliliter Aliquots der beiseite gelegten homogenisierten Lungensuspension in 0,9 Milliliter sterilen PBS pro Verdünnung, und verwenden Sie einen sterilen Dreieckstreuer auf Platte 0,1 Milliliter jeder empirisch gewählten Verdünnung auf vorbeschrifteten 10%Bordet-Gengou plus Streptomycinplatten.Hier werden repräsentative optische Dichte 600 Messungen und Berechnungen gezeigt, um eine bakterielle Suspension mit einer optischen Dichte zu erreichen, um ein hundertfach verdünntes bakterielles Inokulum vorzubereiten, das Mäusen zugeführt werden soll. Nach sieben Tagen Impfantigenstimulation produzieren immunisierte Milzzellen aus der Kombinationsimpfstoffgruppe Interferon-Gamma und IL17, während sie IL5 deutlich nach unten regulieren und einen T-Helfer, einen T-Helfer 17 Polarisation der Immunantwort während einer B-Pertussis-Infektion, fördern. Die Aufzählung von Bakterien, die sich aus Atemwegsproblemen einer B-Pertussis-infizierten Maus erholt haben, kann verwendet werden, um die schützende Wirkung des Impfstoffs von Interesse zu bewerten.Arbeiten Sie so schnell und effizient wie möglich, um Gewebenekrose zu vermeiden, und lagern Sie das isolierte Gewebe auf Eis, um die Lebensfähigkeit der zurückgewonnenen Bakterien zu erhalten. ELISpot-Flow-Zytometrie und DNA- und RNA-Isolation können durchgeführt werden, um Immunzellen zu bewerten, die Analytproduktion zu analysieren und epigenetische und transkriptomische Analysen zu ermöglichen. Bei der Arbeit mit Infektionserregern wie Bordetella pertussis ist es wichtig, daran zu denken, die entsprechende PSA zu tragen und in einem zertifizierten Biosicherheitsschrank zu arbeiten, um die Übertragung von Krankheitserregern zu verhindern.Dieses Protokoll beschreibt die CFU-Aufzählung aus den Atemwegen, insbesondere dem Nasenrachnx. Um Fragen im Bereich der Impfstoffe und Infektionskrankheiten über die gezielte bakterielle Besiedlung in der Nase zu beantworten.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging (Video) | JoVE

Die Verwendung einer optischen Falle für das Studium der Wirt-Pathogen-Interaktionen für Dynamic Live Cell Imaging

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions (Video) | JoVE

Die Nutzung der EpiAirway Modell zur Charakterisierung Langfristige Host-Pathogen Interactions

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

A Comparative Approach to Characterize the Landscape of Host-Pathogen Protein-Protein Interactions

A Comparative Approach to Characterize the Landscape of Host-Pathogen Protein-Protein Interactions (Video) | JoVE

Komparativen Ansatz, um die Landschaft von Wirt-Pathogen-Protein-Protein-Wechselwirkungen charakterisieren

Significant efforts were gathered to generate  large-scale comprehensive protein-protein interaction network maps. This is  instrumental to understand the ...

Protective Efficacy and Pulmonary Immune Response Following Subcutaneous and Intranasal BCG Administration in Mice

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Die protektive Wirksamkeit und pulmonale Immunantwort nach subkutaner und intranasale BCG Verabreichung an Mäuse

Despite global coverage of intradermal BCG vaccination, tuberculosis remains one of the most prevalent infectious diseases in the world. Preclinical data ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

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Isolierung von Salmonella Typhimurium-mit Phagosom von Makrophagen

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

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Ein Saug Blister-Protokoll, menschliche T-Zelle Recall Antworten In Vivo zu studieren

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay (Video) | JoVE

Charakterisierung der Thymus-abhängig und Thymus-unabhängige Immunglobulin Isotype Antworten bei Mäusen mit Enzym-linked Immunosorbentprobe Assay

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice (Video) | JoVE

Bewertung der Zika-Virus-spezifischen T-Zell-Reaktionen in Organe der Immunabwehr von infizierten Ifnar1- / - Mäusen

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Infection of Zebrafish Larvae with Aspergillus Spores for Analysis of Host-Pathogen Interactions

Infection of Zebrafish Larvae with Aspergillus Spores for Analysis of Host-Pathogen Interactions (Video) | JoVE

Infektion von Zebrafischlarven mit Aspergillus Sporen zur Analyse von Wirts-Pathogen-Wechselwirkungen

Invasive aspergillosis (IA) is one of&#160;the most common fungal infections among immunocompromised individuals. Despite the availability of antifungal ...

Label-Free Quantitative Proteomics Workflow for Discovery-Driven Host-Pathogen Interactions

Label-Free Quantitative Proteomics Workflow for Discovery-Driven Host-Pathogen Interactions (Video) | JoVE

Etikettenfreier quantitativer Proteomik-Workflow für Discovery-gesteuerte Host-Pathogen-Interaktionen

The technological achievements of mass spectrometry (MS)-based quantitative proteomics opens many undiscovered avenues for analyzing an organism&#8217;s ...