Name: evaluation of host-pathogen responses and vaccine efficacy in mice
Uploaded: 2019-02-22T13:30:00
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यह काम 1r01ai125560-01 और शुरू हुआ धन ओहियो राज्य विश्वविद्यालय से समर्थित था ।

iacuc दिशानिर्देश के अनुसार ओहियो राज्य विश्वविद्यालय iacuc द्वारा अनुमोदित एक प्रोटोकॉल के बाद जीवित पशुओं के साथ सभी प्रयोगों का आयोजन किया गया । C57BL/6 चूहों सभी टीकाकरण और संक्रमण में इस्तेमाल किया गया । nih ?...

व्यापक प्रोटोकॉल यहां वर्णित करने के लिए वैक्सीन का अध्ययन करने के लिए प्रेरित प्रतिरक्षा बी पर्टुसिस संक्रमण भी अंय रोगजनकों की एक किस्म के लिए मेजबान प्रतिक्रियाओं के मूल्यांकन की अनुमति होगी ?...

टीके 20 वीं सदी के महानतम सार्वजनिक स्वास्थ्य उपलब्धियों में से एक का प्रतिनिधित्व करते हैं, फिर भी हम पूरी तरह से जो सफल टीके सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा को उत्तेजित तंत्र समझ में नहीं आता । आणविक हस्ताक्षरों की पहचान (जैसे, कोशिका सक्रियण मार्करों, सेलुलर उपप्रकारों का विस्तार, और जीन अभिव्यक्ति के पैटर्न) टीकाकरण के बाद प्रेरित एक प्रभावोत्पादक की भविष्यवाणी और सृजन के लिए ढेर सारी जानकारी प्रदान करता है प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया । होस्ट-रोगज़नक़ प्रतिक्रियाओं की जटिलता को विट्रो सेल कल्चर सिस्टम्स1में उपयोग करके पर्याप्त रूप से दोहराया नहीं जा सकता है । vivo में वैक्सीन मॉडल concomitantly मेजबान के भीतर कई प्रतिरक्षा सेल प्रकार का मूल्यांकन करने के लिए डिज़ाइन कर रहे हैं । यह एक लाभ प्रदान करता है जब विशेषता टीका antigen प्रसंस्करण और प्रस्तुति, अंतर साइटोकाइन स्राव, और प्रतिरक्षा कोशिकाओं के विस्तार । यहां वर्णित प्रोटोकॉल प्रणालीगत और स्थानीय प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के मूल्यांकन और ब्याज के ऊतकों में रोगज़नक़ बोझ के परिमाणन के माध्यम से टीका प्रभावकारिता निर्धारित करने के लिए एक विस्तृत विधि प्रदान करता है । यहाँ दिए गए उदाहरण में रोगजनक बोर्डेटेला पर्टुसिस (बी. पर्टुसिस) के लिए प्रयोगात्मक टीके की प्रभावकारिता का परीक्षण किया गया है ।
B. पर्टुसिस एक ग्राम नकारात्मक जीवाणु है कि श्वसन रोग काली खांसी (पर्टुसिस)2,3के ईटियोलॉजिकल एजेंट है । संक्रमित व्यक्तियों के साथ घनिष्ठ संपर्क (रोगसूचक या स्पर्शोन्मुख) संचरण, उपनिवेशन, और रोग की ओर जाता है । महत्वपूर्ण वैश्विक वैक्सीन4कवरेज के बावजूद, पर्टुसिस दुनिया भर के कई देशों में एक रोग resurging माना जाता है और रोके बचपन की मौतों का एक प्रमुख कारण है5,6,7, 8. २०१५ में, बी पर्टुसिस और पर्टुसिस एलर्जी और संक्रामक रोगों के राष्ट्रीय संस्थान में शामिल थे (niaid) उभरते संक्रामक रोगज़नक़/रोग सूची, एक बेहतर वैक्सीन के विकास की आवश्यकता पर बल देते है कि प्रदान लंबे समय तक सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा रहते थे ।
वर्तमान में, जांच का एक सक्रिय क्षेत्र पर्टुसिस पुनरुत्थान को नियंत्रित करने के लिए एक अगली पीढ़ी के एकोशिलर पेटुसिस वैक्सीन (apv) का विकास है, जो पूरे सेल द्वारा विकसित प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की नकल करने के लिए उपन्यास समायोजित करता है और एंटीजन का इष्टतम संयोजन के साथ पर्टुसिस वैक्सीन (wpv)9. वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग करना, हमने हाल ही में बताया है कि एक मौजूदा एफडीए के संशोधन-अनुमोदित apv एक उपंयास सहायक के अलावा द्वारा, बोर्डेटेला उपनिवेशन कारक एक (bcfa), बी की अधिक कुशल कमी के परिणामस्वरूप . पर्टुसिस बैक्टीरियल लोड से माउस फेफड़ों10,11। इस वृद्धि की सुरक्षा के साथ एक alum-प्रेरित Th1/Th2 प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और अधिक सुरक्षात्मक Th1/Th17 प्रतिरक्षा प्रोफ़ाइल के विघूर्णन के साथ किया गया था10। इस प्रोटोकॉल विस्तृत और व्यापक है, जांचकर्ता सक्षम करने के लिए मेजबान और रोगजनकों की एक किस्म के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के समवर्ती मूल्यांकन के माध्यम से अधिक से अधिक जानकारी प्राप्त करते हैं ।
प्रोटोकॉल यहां वर्णित प्रतिनिधि वैक्सीन अनुसूची, चित्रा 1में दिखाया गया है, इष्टतम मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को सुनिश्चित करने के लिए ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:933px;" width="933">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">2L induction chamber</td>
			<td style="width:175px;">Vet Equip</td>
			<td style="width:119px;">941444</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Fluriso</td>
			<td style="width:175px;">Vet One</td>
			<td style="width:119px;">V1 501017</td>
			<td>any brand is appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Bordet Gengou Agar Base</td>
			<td style="width:175px;">BD bioscience</td>
			<td style="width:119px;">248200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Casein</td>
			<td style="width:175px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C-7078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Casamino acids</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">J851-500G</td>
			<td>Strainer Scholte (SS) media components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">L-Glutamic acid</td>
			<td style="width:175px;">Research Products Int</td>
			<td style="width:119px;">G36020-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">L-Proline</td>
			<td style="width:175px;">Research Products Int</td>
			<td style="width:119px;">P50200-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Sodium Chloride</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP358-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Potassium Phosphate monobasic</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP362-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Potassium Chloride</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Magnesium Chloride hexahydrate</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">M2670-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Calcium Chloride</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">C75-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Tris base</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP153-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:333px;">L-cysteine HCl</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP376-100</td>
			<td>SS media suplements</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ferrous Sulfate heptahydrate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F-7002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Niacin</td>
			<td style="width:175px;">Research Products Int</td>
			<td style="width:119px;">N20080-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Glutathione</td>
			<td style="width:175px;">Research Products Int</td>
			<td style="width:119px;">G22010-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:333px;">Ascorbic acid</td>
			<td style="width:175px;">Research Products Int</td>
			<td style="width:119px;">A50040-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">FBS</td>
			<td style="width:175px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F2442-500mL</td>
			<td>&#160;any US source, non-heat inactivated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">gentamicin</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15710064</td>
			<td style="width:307px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">B-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:175px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BP176-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">15mL dounce tissue grinder</td>
			<td style="width:175px;">Wheaton</td>
			<td>357544</td>
			<td>any similar brand is appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Cordless Hand Homogenizer</td>
			<td style="width:175px;">Kontes/Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Z359971-1EA</td>
			<td>any similar brand is appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">Instruments - scissors, curve scissors, forceps, fine forceps, triangle spreaders</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any brand is appropriate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">3mL syringes</td>
			<td style="width:175px;">BD bioscience</td>
			<td style="width:119px;">309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">15mL conical tubes</td>
			<td style="width:175px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:119px;">339651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">1.5mL microfuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">Denville</td>
			<td style="width:119px;">C2170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">70um cell strainers</td>
			<td style="width:175px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:119px;">22363548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">60mm plates</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">130181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">48-well tissue culture plates</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>08-772-1C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">1mL insulin syringe 28G1/2</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific/Excel Int.</td>
			<td style="width:119px;">14-841-31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Mouse IFN-gamma ELISA Ready-SET-Go! Kit</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen / eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">50-173-21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Mouse IL-17 ELISA Ready-SET-Go! Kit</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen / eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">50-173-77</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:333px;">Mouse IL-5 ELISA Ready-SET-Go! Kit</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen / eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">50-172-09</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of host-pathogen responses and vaccine efficacy in mice

टीके एक 20वीं सदी चिकित्सा चमत्कार कर रहे हैं । वे नाटकीय रूप से रुग्णता और संक्रामक रोगों की वजह से मृत्यु दर को कम किया है और दुनिया भर में जीवन प्रत्याशा में एक हड़ताली वृद्धि करने के लिए योगदान दिया । फिर भी, टीका प्रभावकारिता का निर्धारण एक चुनौती बनी हुई है । उभरते सबूत पता चलता है कि वर्तमान अकोशिक वैक्सीन (apv) बोर्डेटेला पर्टुसिस (बी पर्टुसिस) के लिए सबऑप्टिमल प्रतिरक्षा लाती । इसलिए, एक बड़ी चुनौती एक अगली पीढ़ी के टीके को डिजाइन कर रही है जो पूरे सेल वैक्सीन (डब्ल्यूपीवी) के प्रतिकूल दुष्प्रभावों के बिना सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा लाती है । यहां हम एक प्रोटोकॉल का वर्णन है कि हम एक होनहार, उपंयास सहायक है कि एक सुरक्षात्मक Th1/Th17 phenotype के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं skews की प्रभावकारिता का परीक्षण करते थे और एक बी की एक बेहतर मंजूरी को बढ़ावा देता है । मूरीन श्वसन पथ से चुनौती । यह लेख माउस प्रतिरक्षण, बैक्टीरियल टीका, ऊतक संचयन, और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के विश्लेषण के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन करता है । इस विधि का उपयोग करना, हमारे मॉडल के भीतर, हम सफलतापूर्वक एक आशाजनक, अगली पीढ़ी के अकोशिकीय पर्टुसिस टीका द्वारा हासिल महत्वपूर्ण तंत्र आविर्भाव है । यह विधि किसी भी संक्रामक रोग मॉडल के लिए लागू किया जा सकता है ताकि टीका प्रभावकारिता निर्धारित करने के लिए ।

वर्णित मॉडल के लिए एक विधि से पता चलता है टीका दक्षता और मेजबान रोगज़नक़ बातचीत के दौरान प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन । चित्रा 1 के विश्लेषण के लिए चूहों और फसल ऊतकों क...

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Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

यहां हम वैक्सीन प्रभावशीलता और मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के vivo मूल्यांकन में के लिए एक सुरुचिपूर्ण प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । इस प्रोटोकॉल वैक्सीन मॉडल है कि अध्ययन वायरल, बैक्टीरियल, या परजीवी रोगजनकों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है ।

चूहों में मेजबान-रोगज़नक़ प्रतिक्रियाओं और वैक्सीन प्रभावकारिता का मूल्यांकन

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...

प्रोटोकॉल विभिन्न प्रकार के रोगजनकों और वैक्सीन योगों के लिए मेजबान प्रतिक्रियाओं के मूल्यांकन में सक्षम बनाता है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह एक ट्रैक्टेबल पशु मॉडल का उपयोग करके वीवो में बैक्टीरियल बोझ और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के मूल्यांकन की अनुमति देता है। इस प्रक्रिया का प्रदर्शन Kacy Yount, मेरी प्रयोगशाला से एक स्नातक छात्र है ।प्रतिरक्षण के लिए, एक एनेस्थेटाइज्ड, छह से बारह सप्ताह पुराने माउस में अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करें, और ब्याज के टीके के ०.१ मिलीलीटर के साथ २८.५ गेज सुई से सुसज्जित एक मिलीलीटर इंसुलिन सिरिंज लोड करें । एक ४५ डिग्री कोण पर सिरिंज होल्डिंग, बेवेल का सामना करना पड़ के साथ, सुई माउस के deltoid में लगभग पांच मिलीमीटर डालें, और टीका सुई । इंजेक्शन साइट से सुई को धीरे-धीरे वापस लेने से पहले, सुई को पांच से दस सेकंड के लिए मांसपेशियों में डाला जाए, फिर सिरिंज को 180 डिग्री घुमाएं, ताकि बेवेल को सील बनाने के लिए नीचे का सामना करना पड़ रहा है, और वैक्सीन रिसाव को रोकने के लिए, इंजेक्शन साइट से धीरे-धीरे वापस लेना।फिर माउस को अपने पिंजरे में वापस करें, निगरानी के साथ, पूर्ण वसूली तक। बढ़ाने के लगभग दो सप्ताह बाद, प्रतिरक्षित चूहों को संक्रमित करें। कंधे के ब्लेड और गर्दन के पीछे, पृष्ठीय छाती के स्क्रफ द्वारा एक एनेस्थेटाइज्ड माउस को पकड़ें, और नाक तक पहुंचने के लिए माउस को सीधा रखें।200 माइक्रोलिटर पिपेट टिप का उपयोग करके, धीरे-धीरे जानवर के प्रत्येक नार्क में ब्याज के बैक्टीरियल इनोकुलम के 20 से 25 माइक्रोलीटर लागू करें, माउस को तब तक पकड़े रखें जब तक कि पूरे इनोकुलम को साँस नहीं लिया जाता। फिर एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में चूहों के एक समूह के लिए बाँझ PBS की एक समान मात्रा उद्धार । उपयुक्त प्रायोगिक अंत बिंदु पर, एक संक्रमित माउस वेंट्रल साइड को विच्छेदन बोर्ड पर रखें, और अंगों को सुरक्षित करें।70% इथेनॉल के साथ शरीर को गीला करें, और श्रोणि के केंद्र में पेट के नीचे त्वचा को पकड़ने के लिए संदंश का उपयोग करें। तेज कैंची का उपयोग करके, मंडीबल तक एक ऊर्ध्वाधर कट बनाएं, और त्वचा को पेरिटोनियल दीवार से काट लें। बाँझ अंग फसल के लिए एक अबाधित क्षेत्र बनाने के लिए शव के किनारों पर त्वचा ले जाएँ, और रिबकेज के नीचे बरकरार पेरिटोनम समझ, पर या जिगर के पास।निचले पाचन तंत्र को बेनकाब करने के लिए रिबकेज की ओर पेरिटोनम काटें, और तिल्ली प्रकट करने के लिए पेट को बाईं ओर ले जाएं। घुमावदार संदंश का उपयोग करना, तिल्ली को समझें, और कैंची के साथ संयोजी ऊतक को दूर करें। फिर तिल्ली को 15 मिलीलीटर शंकु नली में रखें जिसमें 3 मिलीलीटर आरपीएमआई, और 5% भ्रूण गोजातीय सीरम बर्फ पर होता है।जाइफोड प्रक्रिया में रिबकेज को स्थिर करने के लिए संदंश का उपयोग करें, और डायाफ्राम को खोलें। फेफड़ों को डिफ्लेट करना चाहिए, और रीढ़ की ओर गिर जाना चाहिए। कट छाती को हटाने के लिए किनारों पर रिबकेज खोलें, और फेफड़े की धमनियों और नसों को अलग करने और सही फेफड़े के बेहतर पालि को हटाने के लिए काटें।कम से कम 24 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर 10% तटस्थ बफर फॉर्मेलिन की 15 मिलीलीटर शंकु नली में पालि को ठीक करें, और दाएं और बाएं फेफड़ों के शेष पालि को अलग करें। फिर एक 15 मिलीलीटर शंकु नली में लोब्स रखें, जिसमें बर्फ पर पीबीएस में 1% कैसिन के दो मिलीलीटर होते हैं। छाती गुहा को भरने वाले रक्त को इकट्ठा करने के लिए टिप के साथ एक मिलीलीटर पिपमैन का उपयोग करें, और रक्त को बर्फ पर 1.5 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में पूर्व-लेबल में स्थानांतरित करें।श्वासनली को कवर करने वाले पेरोटिड, सबलिंगुअल, और सबमैक्सिलरी ग्रंथियों और लिम्फ नोड्स को हटा दें, और श्वासनली के आसपास की सुरक्षात्मक झिल्ली को खोलें और हटा दें। ठीक संदंश और कैंची का उपयोग करके, श्वासनली को घेघा से, और किसी अन्य कनेक्टिव ऊतक को हंसली के ऊपर से मंडीबल के नीचे तक अलग करें। श्वासनली को पकड़ने के लिए संदंश का उपयोग करें, और हंसली के शीर्ष पर श्वासनली काटें।लोच को अधिकतम करने के लिए श्वासनली को नीचे खींचें, और गला के ठीक ऊपर, मंडीबल के तल पर श्वासनली को काट लें, लगभग एक सेंटीमीटर ऊतक को अलग करें। फिर अंग को पूर्व-लेबल 1.5 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में रखें, जिसमें बर्फ पर पीबीएस में 1% केसिन के 0.3 मिलीलीटर होते हैं। अब नाक तक स्पष्ट पहुंच के लिए माउस को चालू करें, और सिर को 70% इथेनॉल के साथ स्प्रे करें।मैन्युअल रूप से खोपड़ी के पीछे सीधे जानवर को समझें, और नाक के नीचे से शुरू होकर ऊपर की ओर बढ़ने के लिए थूथन के नरम मांस को काटने के लिए कैंची का उपयोग करें। नाक के चारों ओर से फर, त्वचा और मूंछ निकालें, और नीचे की ओर इशारा करते हुए घटता के साथ कैंची की एक घुमावदार जोड़ी के सुझावों को नारियों में डालें। कट आंखों की ओर नाक मार्ग खोलें, एक वी की तरह गठन का निर्माण।फिर नाक के पट, और गठन के भीतर नरम ऊतक इकट्ठा करने के लिए ठीक संदंश का उपयोग करें, और ऊतक को पूर्व-लेबल 1.5 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में रखें जिसमें पीबीएस में 1% केसिन के 0.3 मिलीलीटर बर्फ पर होते हैं। फेफड़ों के ऊतकों को संसाधित करने के लिए, पूरे फेफड़ों के नमूना ट्यूब सामग्री को बाँझ 15 मिलीलीटर Dounce समरूप में स्थानांतरित करें, और ऊतक को समरूप बनाने के लिए मूसल का उपयोग करें। ऊतक के कोई बड़े कणों रहने तक नमूना अलग, और मूल 15 मिलीलीटर ट्यूब के लिए समरूप निलंबन वापस ।चढ़ाना कॉलोनी बनाने इकाइयों के लिए एक 0.3 मिलीलीटर aliquot निकालें, और अपकेंद्रित्र द्वारा समरूप के बाकी इकट्ठा। एलिजा द्वारा साइटोकिन अभिव्यक्ति विश्लेषण तक 20 डिग्री सेल्सियस पर भंडारण के लिए पूर्व-लेबल माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूबों में सुपरनेट के 0.5 मिलीलीटर। फिर, क्रमिक रूप से सेट के 0.1 मिलीलीटर एलिकोट्स को कमजोर पड़ने के प्रति बाँझ पीबीएस के 0.9 मिलीलीटर में समरूप फेफड़ों के निलंबन को अलग करता है, और प्रत्येक अनुभवजन्य रूप से चुने गए कमजोर पड़ने के 0.1 मिलीलीटर को प्लेट करने के लिए बाँझ त्रिकोण स्प्रेडर का उपयोग करता है 10% बोर्डेट-गेंगोउ प्लस स्ट्रेप्टोमी सिन प्लेट।यहां, एक ऑप्टिकल घनत्व जीवाणु निलंबन को प्राप्त करने के लिए प्रतिनिधि ऑप्टिकल घनत्व 600 माप और गणना, चूहों को वितरित करने के लिए एक सौ गुना पतला बैक्टीरियल इनोकुलम तैयार करने के लिए दिखाया गया है। वैक्सीन एंटीजन उत्तेजना के सात दिनों के बाद, संयोजन वैक्सीन समूह से प्रतिरक्षित तिल्ली कोशिकाओं इंटरफेरॉन गामा का उत्पादन, और IL17, जबकि काफी नीचे IL5 विनियमन, एक टी सहायक को बढ़ावा देने, एक टी सहायक 17 एक बी pertussis संक्रमण के दौरान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के ध्रुवीकरण । बी पर्टुसिस संक्रमित माउस के श्वसन तंत्र के मुद्दों से बरामद बैक्टीरिया की इकाई गणना बनाने कॉलोनी का उपयोग ब्याज के टीके के सुरक्षात्मक प्रभावों का आकलन करने के लिए किया जा सकता है।ऊतक परिगलन से बचने के लिए जितनी जल्दी हो सके और कुशलता से काम करें, और बरामद बैक्टीरिया की व्यवहार्यता को संरक्षित करने के लिए बर्फ पर अलग-थलग ऊतक ों को स्टोर करें। ELISpot प्रवाह साइटोमेट्री और डीएनए और आरएनए अलगाव प्रतिरक्षा कोशिकाओं का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है, विश्लेषण उत्पादन, और एपीजेनेटिक और ट्रांसक्रिप्टोमिक विश्लेषण सक्षम करने के लिए । बोर्डेटेला पर्टुसिस जैसे संक्रामक एजेंटों के साथ काम करते समय, उचित पीपीई पहनना याद रखना महत्वपूर्ण है, और रोगजनक संचरण को रोकने के लिए एक प्रमाणित जैवसेफ्टी कैबिनेट में काम करना महत्वपूर्ण है।यह प्रोटोकॉल श्वसन तंत्र, विशेष रूप से नाक फरेनक्स से सीएलयू गणना का विवरण देता है। नाक में बैक्टीरियल उपनिवेशीकरण को लक्षित करने के बारे में वैक्सीन और संक्रामक रोग क्षेत्रों में सवालों का समाधान करने के लिए।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

गतिशील लाइव सेल इमेजिंग के लिए मेजबान पैथोजन सहभागिता के अध्ययन के लिए एक ऑप्टिकल जाल का प्रयोग करें

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

लंबे समय तक मेजबान रोगज़नक़ सहभागिता निस्र्पक के लिए EpiAirway मॉडल का उपयोग

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

A Comparative Approach to Characterize the Landscape of Host-Pathogen Protein-Protein Interactions

मेजबान पैथोजन प्रोटीन से प्रोटीन सहभागिता के लैंडस्केप विशेषताएँ एक तुलनात्मक दृष्टिकोण

Significant efforts were gathered to generate  large-scale comprehensive protein-protein interaction network maps. This is  instrumental to understand the ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

चूहे में allogeneic सीडी 4 टी सेल प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए तेल त्वचा का प्रत्यारोपण

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

अलगाव साल्मोनेला typhimurium-मैक्रोफेज से युक्त Phagosomes का

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Vivo में मानव टी सेल याद प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक चूषण छाला प्रोटोकॉल

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

थाइमस-निर्भर और थाइमस-स्वतंत्र Immunoglobulin Isotype प्रतिक्रियाओं का प्रयोग चूहों में एंजाइम से जुड़े Immunosorbent परख का लक्षण वर्णन

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

संक्रमित Ifnar1 के Immunoprivileged अंगों में Zika वायरस-विशिष्ट टी-सेल प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन-चूहों/

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Infection of Zebrafish Larvae with Aspergillus Spores for Analysis of Host-Pathogen Interactions

Infection of Zebrafish Larvae with Aspergillus Spores for Analysis of Host-Pathogen Interactions

मेजबान-रोगजनक इंटरैक्शन के विश्लेषण के लिए एस्परगिलस बीजाणुओं के साथ जेब्राफिश लार्वा का संक्रमण

Invasive aspergillosis (IA) is one of&#160;the most common fungal infections among immunocompromised individuals. Despite the availability of antifungal ...

Label-Free Quantitative Proteomics Workflow for Discovery-Driven Host-Pathogen Interactions

डिस्कवरी-संचालित होस्ट-रोगजनक इंटरैक्शन के लिए लेबल-फ्री क्वांटिटेटिव प्रोटेओमिक्स वर्कफ्लो

The technological achievements of mass spectrometry (MS)-based quantitative proteomics opens many undiscovered avenues for analyzing an organism&#8217;s ...