Name: in vitro assays to evaluate the migration, invasion, and proliferation of immortalized human first-trimester trophoblast cell lines
Uploaded: 2019-03-05T12:30:00
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Gli autori ringraziano il Dr. Gil Mor per fornire le cellule di Sw.71. Questa ricerca è stata sostenuta da un Albert McKern Scholar Award a S.W.

1. cella preparazione
<ol><li>Mantenere le cellule in boccette di T-75 in media standard crescita a 37 ° C, 5% CO2e 95% di umidità. Nota: Le cellule utilizzate in questi esperimenti erano l'immortalizzate linee cellulari di primo-acetonide trofoblasto Swan.71 (Sw.71) e HTR-8/SVneo9,10. Le cellule Sw.71 sono state mantenute in DMEM/F-12 completati con 10% inattivati siero bovino fetale (FBS), piruvato di sodio 1.0 mM, 10 mM HEPES...

<ol>
	<li>Ji, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+trophoblast+cell+differentiation:+Physiological+regulation+and+pathological+relevance+to+preeclampsia.">Placental trophoblast cell differentiation: Physiological regulation and pathological relevance to preeclampsia.</a> Molecular Aspects of Medicine. 34 (5), 981-1023 (2013).</li><li>Caniggia, I., Winter, J., Lye, S., Post, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+and+placental+development+during+the+first+trimester:+implications+for+the+pathophysiology+of+pre-eclampsia.">Oxygen and placental development during the first trimester: implications for the pathophysiology of pre-eclampsia.</a> Placenta. 21, S25-S30 (2000).</li><li>Norwitz, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+implantation+and+placentation:+laying+the+blueprint+for+pregnancy+complications.">Defective implantation and placentation: laying the blueprint for pregnancy complications.</a> Reproductive Biomedicine Online. 13 (4), 591-599 (2006).</li><li>Ness, R. B., Sibai, B. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+and+characterization+of+a+novel+telomerase+immortalized+first+trimester+trophoblast+cell+line,+Swan+71.">The isolation and characterization of a novel telomerase immortalized first trimester trophoblast cell line, Swan 71.</a> Placenta. 30 (11), 939-948 (2009).</li><li>Graham, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+first+trimester+human+trophoblast+cells+with+extended+lifespan.">Establishment and characterization of first trimester human trophoblast cells with extended lifespan.</a> Experimental Cell Research. 206 (2), 204-211 (1993).</li><li>Liang, C. C., Park, A. Y., Guan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+scratch+assay:+a+convenient+and+inexpensive+method+for+analysis+of+cell+migration+in+vitro.">In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro.</a> Nature Protocols. 2 (2), 329-333 (2007).</li><li>Kisanga, E. P., Tang, Z., Guller, S., Whirledge, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoid+signaling+regulates+cell+invasion+and+migration+in+the+human+first-trimester+trophoblast+cell+line+Sw.+71.">Glucocorticoid signaling regulates cell invasion and migration in the human first-trimester trophoblast cell line Sw. 71.</a> American Journal of Reproductive Immunology. , e12974 (2018).</li><li>Berthois, Y., Katzenellenbogen, J. A., Katzenellenbogen, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenol+red+in+tissue+culture+media+is+a+weak+estrogen:+implications+concerning+the+study+of+estrogen-responsive+cells+in+culture.">Phenol red in tissue culture media is a weak estrogen: implications concerning the study of estrogen-responsive cells in culture.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83 (8), 2496-2500 (1986).</li><li>Cummings, B. S., Schnellmann, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cell+death+in+mammalian+cells.">Measurement of cell death in mammalian cells.</a> Current Protocols in Pharmacology. , (2004).</li></ol>

Questa procedura si basa sull'uso di migrazione e invasione saggi per includere il tasso di proliferazione delle cellule come un potenziale collaboratore di differenze misurate nel movimento delle cellule di trofoblasto. Utilizzati insieme, questi saggi in vitro sono metodi semplici ed efficaci che possono essere utilizzati per identificare le vie cellulari che regolano la migrazione di trofoblasto. Come descritto in precedenza, le cellule del trofoblasto possono essere trattate con ormoni, citochine, fattori di crescita...

Sviluppo placenta è un passo fondamentale nella creazione della gravidanza, un impatto di salute sia materna che fetale. Tuttavia, la base meccanicistica per cui questo processo avviene completamente non è capita. Migrazione delle cellule è un processo biologico importante che contribuisce alla costituzione e funzioni della placenta durante la gravidanza. A seguito dell'impianto di blastocisti, delle cellule trofoblastiche differenzia in trofoblasti villosi, che coprono la superficie dei villi coriali e sono coinvolti in gas e lo scambio di nutrienti, ed extravillous trofoblasto (EVTs), che migrano fuori da villi e invadere la materna decidua e sistema vascolare1. Migrazione del EVTs è essenziale per rimodellamento arterie a spirale materna e circolazione uteroplacentare per supportare la crescita fetale2. Invasione del trofoblasto inadeguata durante la gravidanza provoca lo sviluppo placenta anormale e può contribuire alle complicanze della gravidanza come la preeclampsia, ipertensione gestazionale, restrizione della crescita intrauterina e nascita pretermine3, 4. Di conseguenza, comprensione dei fattori che influiscono sulla motilità di trofoblasto è essenziale per determinare i percorsi necessari per placentazione normale.
Migrazione di trofoblasto è controllata da una complessa rete di molecole, tra cui fattori di crescita, citochine, ormoni e di fattori angiogenici5di segnalazione. A causa delle limitazioni di studiare la placenta in vivo, saggi in vitro utilizzando immortalato delle cellule del trofoblasto umano linee sono stati essenziali per identificare i fattori che contribuiscono alla motilità del trofoblasto. Analisi zero e di invasione sono stati ampiamente utilizzate per valutare quantitativamente il ruolo delle singole molecole il trofoblasto cella migrazione6,7,8. Tuttavia, mentre utile in tandem per indagare come cambiamenti nella migrazione possono essere causati da cambiamenti nell'invasività delle cellule, questi due test non conto di ulteriori meccanismi che possono contribuire a alterato i tassi di migrazione delle cellule. Ad esempio, riduzioni del tasso di proliferazione delle cellule possono provocare meno cellule disponibili per la migrazione.
Qui, descriviamo metodi quantitativi in vitro per la valutazione della migrazione di trofoblasto utilizzando zero, proliferazione delle cellule e le analisi di invasione delle cellule. Nell'analisi della memoria virtuale, una ferita uniforme viene creata in un monostrato di cellule e la migrazione delle cellule per colmare il divario è misurata da formazione immagine automatizzata, time-lapse della dimensione della ferita e densità delle cellule all'interno della ferita. L'analisi di proliferazione delle cellule è basato sul calcolo del rapporto delle cellule in ogni punto di tempo rispetto ad una quantità nota di partenza delle cellule. Nell'analisi di invasione delle cellule, cellule sono seminate in cima a un alloggiamento di inserto della coltura cellulare rivestite con matrice extracellulare (ad es. Transwell) e il numero di cellule che invadono attraverso la matrice extracellulare in risposta alla chemio-attractant è contato.
Il dosaggio zero è uno strumento semplice ed efficace che può essere utilizzato per determinare come le diverse condizioni ambientali influiscono sulla migrazione delle cellule. I saggi di proliferazione ed invasione possono essere utilizzati successivamente per determinare il contributo di proliferazione delle cellule e l'invasività di cambiamenti globali nella migrazione cellulare. Collettivamente, questi saggi forniscono misurazioni robusti dei processi biologici che possono contribuire alla motilità cellulare. Due linee cellulari immortalizzate primo-acetonide trofoblasto sono state utilizzate nelle analisi descritte, Swan.71 (Sw.71) e HTR-8/SVneo9,10. Tuttavia, queste analisi possono anche essere ottimizzate per l'utilizzo in altri tipi cellulari per identificare la chiave modulatori della migrazione cellulare e invasione.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4% Trypan blue stain</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5% Trypsin-EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.0 M HEPES</td>
			<td>AmericanBio</td>
			<td>AB06021-00100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mM MEM non-essential amino acids</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mM sodium pyruvate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate transwell inserts</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3422</td>
			<td>Contain polycarbonate filters with an 8 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charcoal dextran-stripped FBS</td>
			<td>Gemini Bio-Products</td>
			<td>100-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess II Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal Violet</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal 60</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone (Dex; 1, 4-pregnadien-9&#945;-fluoro-16&#945;-methyl-11&#946;, 17, 21-triol-3, 20-dione; &#8805;98% TLC)</td>
			<td>Steraloids</td>
			<td>P0500-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/Ham&#8217;s F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11330-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IncuCyte 24-well ImageLock Plates</td>
			<td>Essen BioScience</td>
			<td>4365</td>
			<td>If using the IncuCyte Zoom imaging system, seed cells onto IncuCyte ImageLock Plates. These plates have fiducial markers on the bottom of the plate that are used as a reference for repeat imaging in a constant field of view.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IncuCyte software</td>
			<td>Essen BioScience</td>
			<td>2010A Rev2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IncuCyte ZOOM system</td>
			<td>Essen BioScience</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Scratch assay images were captured and analyzed using the preset &#8220;Scratch Wound&#8221; parameters on the IncuCyte ZOOM system. Other time-lapse microscopes may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>356231</td>
			<td>Growth factor reduced, phenol-red free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Slides</td>
			<td>VWR International, LLC</td>
			<td>48311-7003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover glass</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-545-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus IX71 inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin (10,000 units/mL)/streptomycin (10,000 &#181;g/mL)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>151-40-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol-red free DMEM/Ham&#39;s F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11039-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-automatic wound maker tool</td>
			<td>Essen BioScience</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro assays to evaluate the migration, invasion, and proliferation of immortalized human first-trimester trophoblast cell lines

Movimento delle cellule è una proprietà critica di trofoblasto durante lo sviluppo placenta e la gravidanza iniziale. Il significato del trofoblasto corretta migrazione e l'invasione è dimostrato da disturbi di gravidanza come restrizione della crescita intrauterina e di pre-eclampsia, che sono associati con l'invasione del trofoblasto inadeguata del vasculature materno. Purtroppo, la nostra comprensione dei meccanismi da cui la placenta si sviluppa dalla migrazione trofoblasto è limitato. Analisi in vitro di migrazione delle cellule via l'analisi gratta e Vinci sono uno strumento utile nell'identificazione dei fattori che regolano la capacità migratoria trofoblasto. Tuttavia, questo test da solo non definisce i cambiamenti cellulari che possono provocare la migrazione cellulare alterata. Questo protocollo descrive tre diversi saggi in vitro utilizzati collettivamente per valutare il movimento delle cellule di trofoblasto: il dosaggio di gratta e Vinci, l'analisi di invasione e il saggio di proliferazione. I protocolli descritti qui possono essere modificati anche per l'uso in altre linee cellulari per quantificare il movimento cellulare in risposta agli stimoli. Questi metodi consentono ai ricercatori di identificare fattori individuali che contribuiscono al movimento delle cellule e forniscono un esame approfondito dei meccanismi potenziali cambiamenti apparenti nella migrazione cellulare.

Le linee cellulari immortalizzate trofoblasto di primo-acetonide umano Sw.71 e HTR-8/SVneo sono state utilizzate in questi esperimenti per determinare il ruolo dei glucocorticoidi nel trofoblasto cella migrazione12. I glucocorticoidi sono stati utilizzati in questi esperimenti, come recentemente sono stati indicati per alterare le funzioni del trofoblasto, sebbene trattamenti alternativi potrebbero essere usate12. Entrambe le linee cellulari...

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In Vitro Assays to Evaluate the Migration, Invasion, and Proliferation of Immortalized Human First-trimester Trophoblast Cell Lines

Qui, presentiamo un protocollo altamente accessibile per valutare il movimento delle cellule in cellule del trofoblasto umano utilizzando tre saggi in vitro: l'analisi di gratta e Vinci, l'analisi di invasione di transwell e l'analisi di proliferazione delle cellule.

Test in Vitro per valutare la migrazione, invasione e la proliferazione di linee cellulari immortalizzate umano primo-acetonide Trophoblast

Cell movement is a critical property of trophoblasts during placental development and early pregnancy. The significance of proper trophoblast migration ...

Questi metodi possono essere utilizzati per determinare fattori che influenzano l'invasione dei trofoblasti che possono fornire informazioni sui principali esiti ostetrici avversi. Il vantaggio di questa tecnica è che fornisce un'analisi visiva e quantitativa di diversi fattori che possono influenzare l'invasione dei trofoblasti tra cui la proliferazione e la migrazione. Per iniziare il test dei graffi, seminare il numero appropriato di cellule in una piastra da 24 po 'per ottenere il 100% di confluenza in 48 ore.Il giorno dopo, cambia i supporti in mezzi liberi rosso fenolo integrati con FBS rimosso dal carbone inattivato dal calore. Il giorno del graffio, aggiungere il trattamento desiderato al supporto in ogni bene per pretrattare le cellule per 30 minuti. Per creare ferite uniformi, posizionare punte sterili di pipetta da 10 microliter sui perni dello strumento di creazione delle ferite.Abbassare le punte nella prima fila di pozzi e spostare la piastra lungo la pista del produttore della ferita fino a quando le punte delle pipette raggiungono l'altro lato del pozzo. Quindi spostare la piastra di nuovo nella posizione di partenza per garantire una ferita costante attraverso il diametro del pozzo. Abbassare le punte nella riga successiva dei pozzi e ripetere fino a quando tutti i pozzi non sono graffiati.Verificare che il graffio copra la larghezza del pozzo osservando la piastra al microscopio. Successivamente, aspirare attentamente il supporto e lavare delicatamente le cellule con 1x PBS due volte. Dopo un lavaggio finale, aggiungere il fenolo integrato rosso libero spogliato o basso fbs media con un trattamento desiderato.Quindi, posizionare la piastra con i pozzi graffiati in un imager automatico timelapse alloggiato in un incubatore che contiene 37 gradi Celsius di temperatura e 5% di anidride carbonica all'atmosfera di umidità del 95%. Immagini le cellule a intervalli regolari in base alle esigenze per consentire alle cellule di completare la guarigione delle ferite. Per iniziare il test di invasione, seminare il numero appropriato di cellule in piastre a sei pozzi in un'incubatrice che mantiene la temperatura di 37 gradi Celsius e il 5% di anidride carbonica all'atmosfera di umidità del 95%.Consentire alle celle di raggiungere il 90% di confluenza in 48 ore. Il giorno dopo, cambia i supporti in mezzi liberi rosso fenolo integrati con FBS rimosso dal carbone inattivato dal calore. Mettere una fiala di 10 milligrammi per millilitro matrice extracellulare in un frigorifero sul ghiaccio e lasciare scongelare durante la notte.Il giorno dopo, utilizzare punte di pipetta refrigerate per diluire 10 milligrammi per millilitro della matrice extracellulare con il mezzo privo di siero rosso fenolo a una concentrazione finale di cinque milligrammi per millilitro. Quindi aggiungere 100 millilitri della matrice extracellulare diluita agli inserti refrigerati che sono stati posizionati nella piastra refrigerata da 24 porri. Incubare la piastra a 37 gradi Celsius per consentire alla matrice di indurirsi.Per predire le cellule per il test di invasione, lavare le cellule con un millilitro di 1x PBS. Quindi aspirare il PBS e aggiungere 500 microlitri di 1x Trypsin EDTA ad ogni pozzo. Posizionare la piastra a sei pozzi nell'incubatore che mantiene la temperatura di 37 gradi Celsius e il 5% di anidride carbonica all'atmosfera di umidità del 95% fino a quando tutte le cellule non si sono staccate dal fondo della piastra.Una volta che le cellule si sono staccate, aggiungere 500 microlitri del supporto privo di siero rosso fenolo ad ogni pozzo delle cellule tripsicinate. Quindi trasferire 1.000 microlitri di cellule staccate su un tubo di microcentrifugo e girare verso il basso per cinque minuti a 400 volte g a quattro gradi Celsius. Successivamente, aspirare il supporto e rimossare le cellule nel supporto privo di siero rosso fenolo.Contare le celle utilizzando un contatore di celle automatizzato e regolare il volume della sospensione cellulare per una concentrazione finale di 0,5 milioni di cellule per millilitro. Aggiungere 600 microlitri del supporto di crescita completo ad ogni pozzo della piastra da 24 pozza e posizionarlo in esso. Quindi aggiungere 200 microlitri di celle sopra ogni inserto di cella pre-rivestito per un totale di 0,1 milioni di celle.Posizionare la piastra di 24 pozzi nell'incubatore che mantiene la temperatura di 37 gradi Celsius e il 5% di anidride carbonica all'atmosfera di umidità del 95% per 24 ore. Dopo l'incubazione notturna, aspirare il supporto rimanente dalle camere superiore e inferiore senza disturbare la matrice extracellulare. Quindi rimuovere con cura la matrice extracellulare e le cellule non invase dalla parte superiore degli inserti con un batuffolo di cotone.Lavare ogni inserto tre volte aggiungendo 1x PBS alle camere superiore e inferiore del pozzo. Aspirare PBS dopo ogni lavaggio. Per fissare le celle attaccate agli inserti, posizionare gli inserti in metanolo freddo al 100% a quattro gradi Celsius per 30 minuti.Lavare gli inserti tre volte con 1x PBS e rimuovere PBS dopo il lavaggio finale. Macchiare le cellule attaccate agli inserti con 0,2% di viola cristallo nel 20%etanolo per 10 minuti. Risciacquare con acqua deionizzata tre volte e aspirare acqua deionizzata dopo il lavaggio finale.Inserti ad aria secca a temperatura ambiente per un'ora. Infine, utilizzando forcep e una lama di rasoio, tagliare con cura la membrana inferiore dell'inserto e montarla su uno scivolo di vetro con il lato inferiore rivolto verso l'alto. Utilizzando un microscopio a luce con un obiettivo 20X, ottenere almeno quattro immagini uniche delle cellule invase per campione.Per iniziare il test di proliferazione, utilizzare un contatore di celle automatizzato per contare le cellule tripsinziate dal pallone. Cellule di semi in piastre a sei pozzi ad una densità di 0,2 milioni di cellule per pozzo nei mezzi di crescita standard. Quindi posizionare le cellule nell'incubatore che mantiene una temperatura di 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica al 95% di atmosfera di umidità per quattro ore o fino a quando le cellule non hanno aderito.Successivamente, cambiare il supporto in supporti senza fenolo rosso integrato con fbs spogliato di carbone inattivato dal calore e trattamento desiderato. Posizionare la piastra a sei pozzi nell'incubatore che mantiene la temperatura di 37 gradi Celsius e il 5% di anidride carbonica all'atmosfera di umidità del 95%. Quindi sostituire il supporto con il supporto fresco integrato con il trattamento desiderato ogni 48 ore.Dopo 24, 48 o 72 ore di trattamento, lavare le cellule con un millilitro di 1x PBS e aggiungere 500 microlitri di Trypsin EDTA ad ogni pozzo. Posizionare una piastra di sei po 'nell'incubatrice fino a quando le cellule non si sono staccate dalla piastra. Una volta che le cellule si sono staccate dalla piastra, aggiungere 500 microlitri del supporto libero rosso fenolo integrato per disattivare la tripina.Infine aggiungere cinque microlitri delle cellule tripsicinate a cinque microlitri di Trypan Blue in un tubo separato e mescolare mediante pipettazione. Utilizzare un contatore di celle automatico per contare le celle di ogni pozzo in duplicato. Cigno del primo trimestre umano immortalato.71 cellule sono state trattate per zero, otto e 18 ore con veicolo 1x PBS o 100 micromolare del desametasone glucocorticoide sintetico nel saggio scratch. Misurazione della dimensione della ferita e della densità della ferita in Swan. 71 e le cellule HTR-8/SVneo trattate con veicolo o 100 dex nanomolare hanno mostrato che il trattamento con dex riduceva il tasso di chiusura della ferita indicando che i glucocorticoidi potevano inibire la migrazione cellulare.A seguito del saggio di invasione, il trattamento con glucocorticoide ha ridotto l'invasività cellulare, come dimostrato da una riduzione del 15% del numero di Cigni invasi. 71 e cellule HTR-8/SVneo trattate con 100 dex nanomolare per 24 ore rispetto alle cellule trattate con veicolo. A seguito del test di proliferazione cellulare, il trattamento con glucocorticoidi ha ridotto la proliferazione cellulare come indicato da meno Cigno.71 e cellule HTR-8/SVneo trattate con 100 dex nanomolare rispetto alle cellule trattate con veicolo. I metodi per valutare la morte cellulare potrebbero essere usati in combinazione con questa procedura per determinare se l'apoptosi o la necrosi contribuiscono alle funzioni del trofoblasto alterato. Abbiamo adottato in modo univoco l'uso di tecniche standard abitualmente utilizzate nella biologia del cancro per lo studio della funzione del trofoblasto.Non ci sono pericoli associati a questi metodi. L'unica precauzione che gli spettatori dovrebbero prendere è usare una tecnica sterile per la coltura tissutale.

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A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

Un test a blot di 5 mc quantificando il livello di metilazione del DNA della dedifferentiation di condrociti<em&gt; In vitro</em

The dedifferentiation of hyaline chondrocytes into fibroblastic chondrocytes often accompanies monolayer expansion of chondrocytes in vitro. The global ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Imaging Live di Mouse Seconda Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Corneal Tissue Engineering: An In Vitro Model of the Stromal-nerve Interactions of the Human Cornea

Corneal Tissue Engineering: An In Vitro Model of the Stromal-nerve Interactions of the Human Cornea

Ingegneria tissutale corneale: Un In Vitro modello delle interazioni Stromal-nervo della Cornea umana

Tissue engineering has gained substantial recognition due to the high demand for human cornea replacements with an estimated 10 million people worldwide ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cella di aggregazione saggi per valutare l'associazione della tacca della drosofila con Trans-ligandi e la sua inibizione di Cis-ligandi

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...