Name: in vitro assays to evaluate the migration, invasion, and proliferation of immortalized human first-trimester trophoblast cell lines
Uploaded: 2019-03-05T12:30:00
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저자 박사 길 Mor Sw.71 세포를 제공 감사 합니다. 이 연구는 남서에 앨버트 McKern 학자 포상에 의해 지원 되었다

1. 세포 준비
<ol><li>37 ° C, 5% CO2, 그리고 95% 습도에서 표준 성장 미디어 T-75 플라스 크에 세포를 유지 합니다. 참고: 이 실험에 사용 된 세포는 불멸 하 게 했다 처음 임신 trophoblast 셀 라인 Swan.71 (Sw.71) 및 HTR-8/SVneo9,10. Sw.71 셀 DMEM/F-12와 10% 열 비활성화 태아 둔감 한 혈 청 (FBS), 1.0 m m 나트륨 pyruvate, 10 mM HEPES, 0.10 m m MEM 비필수 아미노?...

<ol>
	<li>Ji, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+trophoblast+cell+differentiation:+Physiological+regulation+and+pathological+relevance+to+preeclampsia.">Placental trophoblast cell differentiation: Physiological regulation and pathological relevance to preeclampsia.</a> Molecular Aspects of Medicine. 34 (5), 981-1023 (2013).</li><li>Caniggia, I., Winter, J., Lye, S., Post, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+and+placental+development+during+the+first+trimester:+implications+for+the+pathophysiology+of+pre-eclampsia.">Oxygen and placental development during the first trimester: implications for the pathophysiology of pre-eclampsia.</a> Placenta. 21, S25-S30 (2000).</li><li>Norwitz, E. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+and+characterization+of+a+novel+telomerase+immortalized+first+trimester+trophoblast+cell+line,+Swan+71.">The isolation and characterization of a novel telomerase immortalized first trimester trophoblast cell line, Swan 71.</a> Placenta. 30 (11), 939-948 (2009).</li><li>Graham, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+first+trimester+human+trophoblast+cells+with+extended+lifespan.">Establishment and characterization of first trimester human trophoblast cells with extended lifespan.</a> Experimental Cell Research. 206 (2), 204-211 (1993).</li><li>Liang, C. C., Park, A. Y., Guan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+scratch+assay:+a+convenient+and+inexpensive+method+for+analysis+of+cell+migration+in+vitro.">In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro.</a> Nature Protocols. 2 (2), 329-333 (2007).</li><li>Kisanga, E. P., Tang, Z., Guller, S., Whirledge, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoid+signaling+regulates+cell+invasion+and+migration+in+the+human+first-trimester+trophoblast+cell+line+Sw.+71.">Glucocorticoid signaling regulates cell invasion and migration in the human first-trimester trophoblast cell line Sw. 71.</a> American Journal of Reproductive Immunology. , e12974 (2018).</li><li>Berthois, Y., Katzenellenbogen, J. A., Katzenellenbogen, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenol+red+in+tissue+culture+media+is+a+weak+estrogen:+implications+concerning+the+study+of+estrogen-responsive+cells+in+culture.">Phenol red in tissue culture media is a weak estrogen: implications concerning the study of estrogen-responsive cells in culture.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83 (8), 2496-2500 (1986).</li><li>Cummings, B. S., Schnellmann, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+cell+death+in+mammalian+cells.">Measurement of cell death in mammalian cells.</a> Current Protocols in Pharmacology. , (2004).</li></ol>

이 절차는 마이그레이션 및 침략의 사용 trophoblast 셀 운동 측정된 차이에 잠재적인 참가자로 셀 확산의 속도 포함 분석 실험 바탕. 함께 사용이 생체 외 분석 실험은 trophoblast 마이그레이션 조절 세포 경로 식별 하기 위해 사용할 수 있는 간단 하 고 효과적인 방법입니다. 위에서 설명한 대로 호르몬, cytokines, 성장 인자, 또는 다른 분자 trophoblast 운동에 미치는 영향을 확인 하려면 trophoblast 세포를 치...

Placental 발달은 임신, 산 모와 태아 모두 건강에 영향을 미치는의 설립에 중요 한 단계 이다. 그러나, 기계적으로이 프로세스는 발생 합니다 완전히 이해 하지는. 셀 마이그레이션 임신 중의 태 반 기능과 설립에 기여 하는 중요 한 생물 학적 과정 이다. Blastocyst 주입, 다음은 trophectoderm villous trophoblasts 융 villi의 표면을 커버 하 고 가스 및 영양소 교환에 관련 된, 그리고는 villi에서 마이그레이션할 extravillous trophoblasts (EVTs)으로 차별화 그리고 침략 모성 decidua 및 맥 관 구조1. EVTs의 마이그레이션 모성 나선형 동맥을 개장 하 고 태아 성장2를 지 원하는 uteroplacental 순환 설정에 대 한 필수적입니다. 임신 중 부족 trophoblast 침공 비정상적인 태 반 개발 결과 자간 전 증, 임 신성 고혈압, 자 궁 내 성장 제한, 조산3, 등 임신 합병증에 기여할 수 있습니다. 4. 따라서, trophoblast 운동에 영향을 주는 요소를 이해 정상적인 placentation에 필요한 경로 결정 하는 것이 필수적입니다.
Trophoblast 마이그레이션 신호 분자, 성장 인자, cytokines, 호르몬, 신생 요인5등의 복잡 한 네트워크에 의해 제어 됩니다. Vivo에서 태 반 연구의 제한으로 인해 활용 생체 외 분석 실험 불후 인간의 trophoblast 셀 라인 trophoblast 운동에 기여 하는 요소를 식별 하는 중요 한 되었습니다. 스크래치 및 침입 분석 양적 trophoblast 셀 마이그레이션6,,78에 개별 분자의 역할을 평가 하기 위해 광범위 하 게 사용 되었습니다. 그러나, 어떻게 변화 마이그레이션에 의해 발생할 수 있습니다 변경 셀 침입에 조사에 유용한,이 두 개의 분석 셀 마이그레이션 변경 된 요금에 기여할 수 있는 추가적인 메커니즘에 대 한 계정을 하지 않습니다. 예를 들어 마이그레이션할 수 적은 세포 세포 확산의 속도를 감소 발생할 수 있습니다.
여기, trophoblast 마이그레이션 스크래치, 세포 증식, 세포 침입 분석 실험을 사용 하 여 평가 하기 위한 정량 생체 외에서 방법을 설명 합니다. 스크래치 분석 결과에서 균일 한 상처 셀 단층에서 만들어지고 격차를 채우기 위해 셀의 마이그레이션 자동화, 시간 경과 상처 크기의 영상과 상처 내의 세포의 조밀도 의해 측정 된다. 셀 확산 분석 결과 셀의 알려진된 시작 수량에 비해 각 시간 지점에서 세포의 비율을 계산 기준으로 합니다. 셀 침공 분석 결과, 세포는 세포 외 매트릭스 코팅 셀 문화 삽입 챔버 (예: Transwell), 위에 시드 그리고 항 암 치료-유인에 기질을 통해 침입 하는 셀의 수 계산 됩니다.
스크래치 분석 결과 어떻게 다른 환경 조건을 결정 하는 데 사용할 수 있는 간단 하 고 효과적인 도구 셀 마이그레이션에 영향을 미칠 것 이다. 침공과 확산 분석 실험 이후에 세포 확산과 침입 셀 마이그레이션에 전반적인 변화에의 기여를 확인 하려면 사용할 수 있습니다. 샨 다, 이러한 분석 셀 운동에 기여할 수 있는 생물 학적 프로세스의 강력한 측정을 제공 합니다. 2 개의 불멸 하 게 첫 임신 trophoblast 셀 라인 HTR-8/SVneo9,10, Swan.71 (Sw.71) 기술된 분석에서 사용 되었다. 그러나, 이러한 분석 셀 이동과 침략의 주요 변조기를 식별 하기 위해 다른 셀 형식에 사용 하기 위해 최적화 또한 수 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4% Trypan blue stain</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5% Trypsin-EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.0 M HEPES</td>
			<td>AmericanBio</td>
			<td>AB06021-00100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mM MEM non-essential amino acids</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mM sodium pyruvate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate transwell inserts</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3422</td>
			<td>Contain polycarbonate filters with an 8 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charcoal dextran-stripped FBS</td>
			<td>Gemini Bio-Products</td>
			<td>100-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess II Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal Violet</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal 60</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone (Dex; 1, 4-pregnadien-9&#945;-fluoro-16&#945;-methyl-11&#946;, 17, 21-triol-3, 20-dione; &#8805;98% TLC)</td>
			<td>Steraloids</td>
			<td>P0500-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/Ham&#8217;s F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11330-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IncuCyte 24-well ImageLock Plates</td>
			<td>Essen BioScience</td>
			<td>4365</td>
			<td>If using the IncuCyte Zoom imaging system, seed cells onto IncuCyte ImageLock Plates. These plates have fiducial markers on the bottom of the plate that are used as a reference for repeat imaging in a constant field of view.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IncuCyte software</td>
			<td>Essen BioScience</td>
			<td>2010A Rev2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IncuCyte ZOOM system</td>
			<td>Essen BioScience</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Scratch assay images were captured and analyzed using the preset &#8220;Scratch Wound&#8221; parameters on the IncuCyte ZOOM system. Other time-lapse microscopes may also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Membrane Matrix</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>356231</td>
			<td>Growth factor reduced, phenol-red free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Slides</td>
			<td>VWR International, LLC</td>
			<td>48311-7003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover glass</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-545-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus IX71 inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin (10,000 units/mL)/streptomycin (10,000 &#181;g/mL)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>151-40-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol-red free DMEM/Ham&#39;s F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11039-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Semi-automatic wound maker tool</td>
			<td>Essen BioScience</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro assays to evaluate the migration, invasion, and proliferation of immortalized human first-trimester trophoblast cell lines

셀 운동은 placental 개발 및 임신 초기 동안 trophoblasts의 중요 한 속성 이다. 적절 한 trophoblast 마이그레이션 및 침략의 중요성 모성 맥 관 구조의 부적당 한 trophoblast 침공과 관련 된 사전 eclampsia 및 자궁내 성장 제한 같은 임신 장애에 의해 증명 됩니다. 불행히도, 메커니즘의 우리의 이해는 태에서 마이그레이션 개발 trophoblasts 제한 됩니다. 스크래치 분석 결과 통해 셀 이동의 생체 외 분석 trophoblast 철새 용량을 조절 하는 요소 식별에 유용한 도구입니다. 그러나, 혼자이 분석 결과 변경 된 셀 이동에서 발생할 수 있는 세포 변화를 정의 하지 않습니다. 이 프로토콜 설명 trophoblast 셀 운동 평가를 공동으로 사용 되는 세 가지 다른 생체 외 분석 실험: 스크래치 분석 결과, 침공 분석 결과 및 확산 분석 결과. 여기에 설명 된 프로토콜 계량 셀 운동 자극에 대 한 응답에서을 다른 셀 라인에 사용 하기 위해 수정할 수 있습니다. 이 메서드는 셀 운동에 기여 하 고 기본 셀 마이그레이션에 명백한 변경 잠재적인 메커니즘의 철저 한 검사를 제공 하는 개별 요소 식별에 조사 수 있습니다.

불멸 하 게 인간의 첫 번째 임신 trophoblast 셀 라인 Sw.71 및 HTR-8/SVneo trophoblast 셀 마이그레이션12스테로이드 제제의 역할을 결정 하기 위해이 실험에 사용 되었다. 그들은 최근에 보였다 trophoblast 기능 변경 대체 치료 사용된12수 있지만 스테로이드 제제가이 실험에 사용 했다. 두 셀 라인 차량 (1 x PBS) 또는 100로 치료 했다 모든 실험에 대 한...

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In Vitro Assays to Evaluate the Migration, Invasion, and Proliferation of Immortalized Human First-trimester Trophoblast Cell Lines

여기, 우리는 3 개의 생체 외 분석 실험을 사용 하 여 인간의 trophoblast 셀에 셀 운동 평가 위한 매우 액세스할 수 있는 프로토콜 제시: 스크래치 분석 결과, transwell 침략 분석 결과 및 세포 확산 분석 실험.

마이그레이션, 침공, 불멸 하 게 인간의 첫 번째 임신 Trophoblast 셀 라인의 확산을 평가를 생체 외 분석 실험에서

Cell movement is a critical property of trophoblasts during placental development and early pregnancy. The significance of proper trophoblast migration ...

이러한 방법은 주요 불리 한 산부인과 결과에 대 한 통찰력을 제공할 수 있는 trophoblast 침략에 영향을 미치는 요인을 결정 하기 위해 활용 될 수 있습니다. 이 기술의 장점은 증식 및 마이그레이션을 포함한 트로포블라스트 침공에 영향을 미칠 수 있는 여러 요인에 대한 시각적 및 정량적 분석을 제공한다는 것입니다. 스크래치 분석서를 시작하려면 적절한 수의 세포를 24웰 플레이트로 시드하여 48시간 만에 100%의 인플루엔기를 달성합니다.다음 날, 열을 비활성화 탄 dextran 박탈 FBS로 보충 페놀 레드 무료 미디어로 미디어를 변경합니다. 스크래치 당일, 각 우물의 미디어에 원하는 치료를 추가하여 30 분 동안 세포를 퇴각시하십시오. 균일한 상처를 만들려면 멸균 10 마이크로리터 파이펫 팁을 상처 제조자 도구의 핀에 놓습니다.팁을 우물의 첫 번째 행으로 낮추고 파이펫 팁이 우물의 반대편에 도달 할 때까지 상처 메이커의 트랙을 따라 접시를 이동합니다. 그런 다음 플레이트를 다시 시작 위치로 이동하여 우물의 직경에 걸쳐 일정한 상처를 보장합니다. 팁을 다음 우물행으로 낮추고 모든 우물이 긁히때까지 반복합니다.스크래치가 현미경으로 플레이트를 관찰하여 우물의 폭을 커버하는지 확인합니다. 다음으로, 조심스럽게 미디어를 흡인하고 부드럽게 두 번 1x PBS로 세포를 씻어. 마지막 세척 후, 원하는 치료와 보충 페놀 레드 프리 스트립 또는 낮은 FBS 미디어를 추가합니다.다음으로, 긁힌 우물이 있는 접시를 섭씨 37도, 습도 가 95%의 습도 대기시 이산화탄소 5%가 들어 있는 인큐베이터에 보관된 자동 타임랩스 이미저에 놓습니다. 세포가 상처 치유를 완료할 수 있도록 필요에 따라 정기적으로 세포를 이미지합니다. 침략 분석서를 시작하려면 적절한 수의 세포를 섭씨 37도, 습도 가95%의 습도 대기에서 5%의 이산화탄소를 유지하는 인큐베이터에서 적절한 수의 세포를 6웰 플레이트로 시드합니다.세포가 48시간 안에 90%의 합류에 도달할 수 있도록 합니다. 다음 날, 열을 비활성화 탄 dextran 박탈 FBS로 보충 페놀 레드 무료 미디어로 미디어를 변경합니다. 얼음에 냉장고에 밀리리터 세포 외 매트릭스 당 10 밀리그램의 유리병을 배치하고 하룻밤 해동하자.다음 날, 차가운 파이펫 팁을 사용하여 페놀 레드 프리 세럼 프리 미디어와 세포외 매트릭스의 밀리리터 당 10 밀리그램을 희석하여 밀리리터당 5밀리그램의 최종 농도로 희석합니다. 그런 다음 희석된 세포외 매트릭스의 100 밀리리터를 차가운 24웰 플레이트에 넣은 차가운 인서츠에 추가합니다. 매트릭스가 경화 할 수 있도록 섭씨 37도에서 플레이트를 배양합니다.침략 분석에 대한 세포를 준비하려면 1 x PBS의 1 밀리리터로 세포를 씻으하십시오. 그런 다음 PBS를 흡인하고 각 우물에 1x 트립신 EDTA의 500 마이크로 리터를 추가합니다. 모든 세포가 플레이트 바닥에서 분리 될 때까지 섭씨 37도 의 온도와 5 %의 습도 대기를 유지하는 인큐베이터에 6 웰 플레이트를 놓습니다.세포가 분리되면, 트립시네이드 셀의 각 웰에 페놀 레드 프리 세럼 무료 매체의 500 마이크로리터를 추가합니다. 그런 다음 분리 된 세포의 1, 000 마이크로 리터를 미세 원심 분리기 튜브로 옮기고 섭씨 400 회에서 5 분 동안 회전합니다. 다음으로, 미디어를 흡인하고 페놀 레드 프리 세럼 프리 미디어에서 세포를 재분리한다.자동 세포 카운터를 사용하여 세포를 계산하고 밀리리터 당 0.5 백만 세포의 최종 농도에 대한 세포 현탁액의 볼륨을 조정합니다. 전체 성장 매체의 600 마이크로리터를 24웰 플레이트의 각 웰에 추가하고 미리 코팅된 인서트를 넣습니다. 그런 다음 총 010만 개의 세포에 대해 미리 코팅된 각 세포 인서치 위에 200마이크로리터의 셀을 추가합니다.섭씨 37도, 이산화탄소 5%를 24시간 동안 95% 습도 대기에 보관하는 인큐베이터에 24웰 플레이트를 배치합니다. 하룻밤 잠복 에 이어, 세포 외 매트릭스를 방해하지 않고 상부 및 하부 챔버에서 나머지 미디어를 흡입. 그런 다음 면봉을 가진 인서트 의 상부에서 세포외 매트릭스및 비침범된 세포를 조심스럽게 제거합니다.웰의 상부 및 하부 챔버에 1x PBS를 추가하여 각 삽입을 세 번 세척합니다. 세척 할 때마다 PBS를 흡인하십시오. 인서트에 부착된 세포를 고정하려면 인서트를 섭씨 4도에서 100%의 얼음 차가운 메탄올에 넣고 30분간 놓습니다.1x PBS로 세 번 인서트를 세척하고 최종 세척 후 PBS를 제거합니다. 10 분 동안 20 %의 에탄올에 0.2 %의 크리스탈 바이올렛으로 삽입에 부착 된 세포를 얼룩. 탈이온된 물로 세 번 헹구고 최종 세척 후 탈화물 이온수를 흡수합니다.실온에서 1시간 동안 공기 건조 인서트. 마지막으로 집게와 면도날을 사용하여 인서트의 하단 멤브레인을 조심스럽게 잘라 하단면이 위로 향하는 유리 슬라이드에 장착하십시오. 20X 목표를 가진 광 현미경을 사용하여, 샘플 당 침략 된 세포의 적어도 네 개의 고유 한 이미지를 얻을.증식 분석서를 시작하려면 자동화된 셀 카운터를 사용하여 플라스크에서 트립시화된 셀을 계산합니다. 종자 세포는 표준 성장 매체에서 우물 당 0.2 백만 세포의 밀도로 6 웰 플레이트로 종자 세포. 그런 다음 세포를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%를 4시간 동안 또는 세포가 부착할 때까지 95%의 습도 대기에 보관합니다.다음으로, 열을 비활성화 한 숯 dextran 박탈 FBS와 원하는 치료로 보충 페놀 레드 프리 미디어로 미디어를 변경합니다. 섭씨 37도, 이산화탄소 5%를 유지하며 습도가 95%에 달하는 인큐베이터에 6웰 플레이트를 배치합니다. 그런 다음 미디어를 48시간마다 원하는 치료로 보충한 신선한 매체로 대체합니다.24, 48, 또는 72 시간 치료 후, 1 x PBS의 1 밀리리터로 세포를 세척하고 각 우물에 트립신 EDTA의 500 마이크로 리터를 추가합니다. 세포가 플레이트에서 분리 될 때까지 인큐베이터에 6 웰 플레이트를 놓습니다. 세포가 접시에서 분리되면 트립신을 비활성화하기 위해 보충 페놀 레드 프리 미디어의 500 마이크로 리터를 추가합니다.마지막으로 트립시닉 된 세포의 5 마이크로 리터를 별도의 튜브에 Trypan Blue의 5 마이크로 리터에 추가하고 파이펫팅으로 혼합하십시오. 자동화된 셀 카운터를 사용하여 각 웰의 셀을 복제하여 계산합니다. 불멸의 인간 최초의 삼보격 트로포블라스트 백조.71세포는 스크래치 분석에서 합성 글루코코르티코이드 덱사메타손의 차량 1x PBS 또는 100 마이크로몰로 0, 8, 18시간 동안 처리되었다. 백조의 상처 크기와 상처 밀도의 측정. 71 및 HTR-8/SVneo 세포는 차량 또는 100 나노몰러 덱스로 치료되어 덱스 처리가 글루코코르티코이드가 세포 이동을 저해할 수 있음을 나타내는 상처 폐쇄 속도를 감소시키는 것으로 나타났다.침략 분석 에 이어, 글루코코르티코이드 치료는 침략된 백조의 수에 있는 15% 감소에 의해 도시된 바와 같이 세포 침략을 감소시다. 71 및 HTR-8/SVneo 세포는 차량으로 처리된 세포에 비해 24시간 동안 100 나노몰러 덱스로 처리하였다. 세포 증식 분석에 따라, 글루코코르티코이드 치료는 적은 백조에 의해 표시된 대로 세포 증식을 감소시켰다.71 및 HTR-8/SVneo 세포는 차량으로 처리된 세포에 비해 100 나노몰러 덱스로 처리하였다. 세포 사멸을 평가하는 방법은 세포 사멸 또는 괴사 변경 된 trophoblast 기능에 기여 여부를 결정하기 위해이 절차와 함께 사용할 수 있습니다. 우리는 트로프토블라스트 기능 연구를 위해 암 생물학에서 일상적으로 사용되는 표준 기술의 사용을 독특하게 채택했습니다.이러한 방법과 관련된 위험은 없습니다. 시청자가 취해야 할 유일한 예방 조치는 조직 배양을 위해 멸균 기술을 사용하는 것입니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

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생산 및 선택적으로 형질 도입 기본 희소 돌기 아교 세포 전구체 세포에 렌티 바이러스의 사용을위한<em&gt; 체외</em&gt; 수초 분석

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

연구

발생학

Assessment of Maternal Vascular Remodeling During Pregnancy in the Mouse Uterus

마우스 자궁에서 임신 기간 동안 산모의 혈관 재 평가

The placenta mediates the exchange of factors such as gases and nutrients between mother and fetus and has specific demands for supply of blood from the ...

Establishment of Genome-edited Human Pluripotent Stem Cell Lines: From Targeting to Isolation

게놈 편집 인간 다 능성 줄기 세포의 설립 : 분리에 타겟팅에서

Genome-editing of human pluripotent stem cells (hPSCs) provides a genetically controlled and clinically relevant platform from which to understand human ...

Initiating Differentiation in Immortalized Multipotent Otic Progenitor Cells

불멸화 된 다 능성 귀의 전구 세포의 분화를 초기화

Use of human induced pluripotent stem cells (iPSC) or embryonic stem cells (ESC) for cell replacement therapies holds great promise. Several limitations ...

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

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개발<em&gt; 체외</em&gt; 분석은 중간 엽 세포를 시행 한 상피 - 중간 엽 전환의 수축 기능을 평가하는

Fibrosis is often involved in the pathogenesis of various chronic progressive diseases such as interstitial pulmonary disease. Pathological hallmark is ...

Human Primary Trophoblast Cell Culture Model to Study the Protective Effects of Melatonin Against Hypoxia/reoxygenation-induced Disruption

인간의 기본 영양막 세포 멜라토닌에 대해 저산소증의 보호 효과를 연구하기 위해 세포 배양 모델 / 재산 소화에 의한 혼란

This protocol describes how villous cytotrophoblast cells are isolated from placentas at term by successive enzymatic digestions, followed by density ...

A 5-mC Dot Blot Assay Quantifying the DNA Methylation Level of Chondrocyte Dedifferentiation In Vitro

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연골 세포 분열 분열의 DNA 메틸화 수준을 정량화하는 5-mC Dot Blot Assay<em&gt; 체외에서</em

The dedifferentiation of hyaline chondrocytes into fibroblastic chondrocytes often accompanies monolayer expansion of chondrocytes in vitro. The global ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Mouse Secondary Palate Fusion의 라이브 이미징

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Corneal Tissue Engineering: An In Vitro Model of the Stromal-nerve Interactions of the Human Cornea

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각 막 조직 공학:는 생체 외에서 의 모델 인간 각 막의 실질 신경 상호 작용

Tissue engineering has gained substantial recognition due to the high demand for human cornea replacements with an estimated 10 million people worldwide ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

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트랜스와 초파리 노치의 바인딩을 평가를 집계 분석 셀-Ligands 및 Cis에 의해 그것의 억제-Ligands

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...