Name: cheek injection model for simultaneous measurement of pain and itch-related behaviors
Uploaded: 2019-09-27T12:30:00
Duration: 4 min 59 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cheek Injection Model for Simultaneous Measurement of Pain and Itch-related Behaviors at JoVE.com

ونحن ممتنون للسيد ستيفن ج. شيمادا وروبرت ه. لأموت (جامعه ييل كليه الطب ، كونيتيكت) من الأساليب التي (المرجع 4) تم تكييف هذه التقنية. ونشكر أيضا السيد كينتارو ميهارا علي إنشاء الرسوم التوضيحية بالفاره. وكانت هذه الدراسة مدعومة بمنحه معونة للبحوث العلمية من وزاره التعليم والثقافة والرياضة والعلوم والتكنولوجيا في اليابان (الرقمان 15H02501 و 15H02501 إلى M.T. و No. 16K21691 إلى H.K.) ومؤسسه اوهارا التذكارية (إلى H.K.). ونحن نقدر إدخال طريقه حقن الخد من قبل البروفيسور لاميوت في جامعه ييل.

تمت الموافقة علي جميع الإجراءات المتعلقة برعاية واستخدام الماشية من قبل لجنه الرعاية الحيوانية والاستخدام المؤسسي للمعهد الوطني للعلوم الطبيعية (16A074) ، ونفذت وفقا للمبادئ التوجيهية للمعهد الوطني العلوم الفسيولوجية.
ملاحظه: تم الإبلاغ عن البروتوكول الأصلي من قبل ستيفن g. Shimada وروبرت h. LaMotte4، ويصف هذا التقرير هذه الأساليب مع العديد من التعديلات ، بما في ذلك أضافه شاشه لمنع الكائنات من رؤية بعضها البعض ، وعدم وجود مراه ، وعدد من الفئران لكل تسجيل ، وسلاله الماوس ، حجم القفص ، ووقت التسجيل.
1. نموذج حقن الخد
<ol><li>
اعداد التجربة
	<ol>
<li>قفص<ol>
<li>تعيين أربعه أقفاص تحت كاميرا كما هو مبين في الشكل 1. تعيين شاشه لمنع الفئران من رؤية بعضها البعض. وضع في كل الماوس لكل قفص وتعيين غطاء الأكريليك لمنع الهروب من الفئران. لاحظ انه يجب اجراء التسجيلات في بيئة يتم فيها التحكم في درجه الحرارة والرطوبة والصوت. ملاحظه: ويمكن أيضا تسجيل السلوكيات دون غطاء إذا كان القفص مرتفعا بما فيه الكفاية.</li>
		</ol>
</li>
		<li>ابره وحقنه<ol>
<li>استخدام ابره 29 g أو 30 G تعلق علي حقنه 0.5 mL لحقن مواد الاختبار. إذا كان الحل ماده اختبار لزجه للغاية ، مطلوب ابر أكبر. ومع ذلك ، يرجى ملاحظه ان الابر الكبيرة تشكل اثار جانبيه ماديه اضافيه. ملاحظه: ويمكن استخدام ابره متصلة حقنه مع أنبوب البولي إيثيلين.</li>
		</ol>
</li>
		<li>كاميرا فيديو<ol>
<li>استخدام كاميرا فيديو وجود معدلات اطار كبيره بما فيه الكفاية (30-60 الإطارات/ثانيه) مع دقه عاليه نسبيا لقياس نوبات الصفر والسلوكيات المسح.</li>
		</ol>
</li>
		<li>برنامج لتحليل الفيديو<ol>
<li>استخدم برنامج تحرير فيديو لتشغيل الفيديو وتحليله. لاحظ ان الوضع السريع الامامي ووضع التشغيل الإطار بالإطار ضروريان للتحليل الدقيق.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig1.jpg"> الشكل 1: كاميرا الفيديو واعداد القفص. وتستخدم أربعه أقفاص الأكريليك مع أغطيه الأكريليك ، لمنع الهروب من الفئران ، وشاشه لمنع حكه معديه. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig1large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.</a>
<ol start="2"><li>
الحقن والتسجيل
	<ol>
<li>قبل يوم واحد من التجربة ، حلق الفراء علي خده الماوس مع مقص الشعر (فيلم 1). قبل الحلاقة ، لا كبح جماح الفئران. ملاحظه: واستخدمت في الغالب الفئران CD-1 أو C57BL/6 في هذا النموذج4,5. في هذه المقالة ، تم استخدام الذكور 6-12 العمر الأسبوع C57BL/6N الفئران. لاحظ ان الحساسية للمواد الكيميائية يمكن ان تكون مختلفه بين سلالات الماوس المختلفة3،6،7.</li>
		<li>بعد يوم واحد من الحلاقة ، حرك الماوس إلى قفص التسجيل لمده 1 ساعة للتاقلم مع ظروف التسجيل. إذا تم استخدام تطبيق موضعي ، تطبيقه خلال هذه الفترة التاقلم. ملاحظه: في هذا التقرير ، تم تطبيق 10 μL من 2 ٪ (w/v) ديفينهيدرامين هيدروكلوريد الملح في المالحة موضعيا 30 دقيقه قبل التسجيل.</li>
		<li>تعيين كاميرا فيديو فوق القفص ، وبدء تسجيل الفيديو قبل حقن ماده الاختبار. حقن 10 μL محلول من ماده الاختبار intradermally في الخد حلق تحت ظروف مستيقظا (فيلم 2). بعد الحقن ، وأعاده الماوس إلى قفص التسجيل. ملاحظه: في هذا التقرير ، 50 ميكروغرام/10 μL الهستامين ، 40 ميكروغرام/10 μL كابسايسين أو المركبة (7 ٪ توين 80 في المحلول الملحي) واستخدمت كمواد اختبار.</li>
		<li>اغلق غطاء القفص واستمر في تسجيل الفيديو لمده 30 دقيقه. ملاحظه: سيعتمد إجمالي وقت التسجيل علي الظروف التجريبية.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
التحليل السلوكي
	<ol>
<li>عد نوبات الخدش والسلوكيات المسح ، علي التوالي. الفئران رفع الساق الخلفية نحو الخد والصفر عده مرات علي واحد أو بضع ثوان ، ثم وضع ساقهم إلى أسفل. يتم احتساب هذه السلسلة من الإجراءات كنوبة خدش واحده. ولا ينبغي حساب خدش المناطق الأخرى. تستخدم الفئران ساقا واحده للمسح ولكل من الأرجل الاماميه للعناية بالنفس. وينبغي التمييز بين هذه الإجراءات. يتم احتساب السلوكيات التي يتم محوها فقط كسلوكيات مرتبطة بالم. ملاحظه: يتم عرض كل اجراء في الشكل 2 والفيلم 3 والفيلم 4 والفيلم 5.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig2.jpg"> الشكل 2: نشاط الماوس النموذجي اثناء التسجيل. اللوحات A-C هي الرسوم التوضيحية التي تمثل السلوك المسح مع الساق اليمني (a) ، والسلوك الخدش مع الساق الخلفية اليمني (ب) والاستمالة السلوك مع كل من الأرجل (ج). الفئران رفع الساق الخلفية نحو الخد والصفر عده مرات علي واحد أو بضع ثوان ، ثم وضع تلك الساق إلى أسفل. يتم احتساب هذه السلسلة من الإجراءات كنوبة خدش واحده. ولا ينبغي حساب خدش المناطق الأخرى. تستخدم الفئران ساقا واحده للمسح ولكل من الأرجل الاماميه للعناية بالنفس. وينبغي التمييز بين هذه الإجراءات. يتم احتساب السلوكيات التي يتم محوها فقط كسلوكيات مرتبطة بالم. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig2large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.</a>
2. نموذج حقن الرقبة
<ol><li>
الحقن والتسجيل
	<ol>
<li>قبل يوم واحد من التجربة ، حلق الفراء علي مؤخر عنق الماوس مع مقص الشعر بعد حوالي 5 ٪ ايزوفلواني استنشاق ل 2-3 دقيقه.</li>
		<li>بعد يوم واحد من الحلاقة ، حرك الماوس إلى قفص التسجيل لمده 1 ساعة للتاقلم مع ظروف التسجيل.</li>
		<li>تعيين كاميرا فيديو فوق القفص (الشكل 1) ، وبدء تسجيل الفيديو قبل حقن ماده الاختبار. حقن 10 μL محلول من ماده الاختبار intradermally في الرقبة حلق تحت ظروف مستيقظا. بعد الحقن ، وأعاده الماوس إلى قفص التسجيل. ملاحظه: في هذه المقالة ، 50 ميكروغرام/10 μL الهستامين ، 10 ميكروغرام/10 μL أو 40 ميكروغرام/10 μL كابسايسين ، أو المركبة (7 ٪ توين 80 في المحلول الملحي) واستخدمت كمواد الاختبار.</li>
		<li>اغلق غطاء القفص واستمر في تسجيل الفيديو لمده 30 دقيقه. ملاحظه: سيعتمد إجمالي وقت التسجيل علي الظروف التجريبية.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
التحليل السلوكي
	<ol>
<li>عد السلوكيات الصفر نوبة. الفئران رفع الساق الخلفية نحو الرقبة والصفر عده مرات علي واحد أو بضع ثوان ، ثم وضع تلك الساق إلى أسفل. يتم احتساب هذه السلسلة من الإجراءات كنوبة خدش واحده. ولا ينبغي حساب خدش المناطق الأخرى. ملاحظه: عمل الخدش مشابه لذلك في نموذج حقن الخد ، الا انه يتم تحويل موقع الخدش إلى الرقبة.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Ikoma, A., Steinhoff, M., Stander, S., Yosipovitch, G., Schmelz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurobiology+of+itch.">The neurobiology of itch.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7 (7), 535-547 (2006).</li><li>Kuraishi, Y., Nagasawa, T., Hayashi, K., Satoh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scratching+behavior+induced+by+pruritogenic+but+not+algesiogenic+agents+in+mice.">Scratching behavior induced by pruritogenic but not algesiogenic agents in mice.</a> European Journal of Pharmacology. 275 (3), 229-233 (1995).</li><li>Kuraishi, Y., Yamaguchi, T., Miyamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Itch-scratch+responses+induced+by+opioids+through+central+mu+opioid+receptors+in+mice.">Itch-scratch responses induced by opioids through central mu opioid receptors in mice.</a> Journal of Biomedical Science. 7 (3), 248-252 (2000).</li><li>Shimada, S. G., LaMotte, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+differentiation+between+itch+and+pain+in+mouse.">Behavioral differentiation between itch and pain in mouse.</a> Pain. 139 (3), 681-687 (2008).</li><li>Kittaka, H., Uchida, K., Fukuta, N., Tominaga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysophosphatidic+acid-induced+itch+is+mediated+by+signalling+of+LPA5+receptor,+phospholipase+D+and+TRPA1/TRPV1.">Lysophosphatidic acid-induced itch is mediated by signalling of LPA5 receptor, phospholipase D and TRPA1/TRPV1.</a> The Journal of Physiology. 595 (8), 2681-2698 (2017).</li><li>Maekawa, T., Nojima, H., Kuraishi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Itch-associated+responses+of+afferent+nerve+innervating+the+murine+skin:+different+effects+of+histamine+and+serotonin+in+ICR+and+ddY+mice.">Itch-associated responses of afferent nerve innervating the murine skin: different effects of histamine and serotonin in ICR and ddY mice.</a> The Japanese Journal of Pharmacology. 84 (4), 462-466 (2000).</li><li>Inagaki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scratching+behavior+in+various+strains+of+mice.">Scratching behavior in various strains of mice.</a> Skin Pharmacology and Applied Skin Physiology. 14 (2), 87-96 (2001).</li><li>Inami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+surfactant-induced+pruritus:+involvement+of+histamine+released+from+epidermal+keratinocytes.">Topical surfactant-induced pruritus: involvement of histamine released from epidermal keratinocytes.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 344 (2), 459-466 (2012).</li><li>Vos, B. P., Hans, G., Adriaensen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+assessment+of+facial+pain+in+rats:+face+grooming+patterns+after+painful+and+non-painful+sensory+disturbances+in+the+territory+of+the+rat's+infraorbital+nerve.">Behavioral assessment of facial pain in rats: face grooming patterns after painful and non-painful sensory disturbances in the territory of the rat's infraorbital nerve.</a> Pain. 76 (1-2), 173-178 (1998).</li><li>Yeo, J. F., Ong, W. Y., Ling, S. F., Farooqui, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebroventricular+injection+of+phospholipases+A2+inhibitors+modulates+allodynia+after+facial+carrageenan+injection+in+mice.">Intracerebroventricular injection of phospholipases A2 inhibitors modulates allodynia after facial carrageenan injection in mice.</a> Pain. 112 (1-2), 148-155 (2004).</li><li>Yeo, J. F., Ling, S. F., Tang, N., Ong, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antinociceptive+effect+of+CNS+peroxynitrite+scavenger+in+a+mouse+model+of+orofacial+pain.">Antinociceptive effect of CNS peroxynitrite scavenger in a mouse model of orofacial pain.</a> Experimental Brain Research. 184 (3), 435-438 (2008).</li><li>Hashimoto, T., Ohata, H., Momose, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Itch-scratch+responses+induced+by+lysophosphatidic+acid+in+mice.">Itch-scratch responses induced by lysophosphatidic acid in mice.</a> Pharmacology. 72 (1), 51-56 (2004).</li><li>Kremer, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysophosphatidic+acid+is+a+potential+mediator+of+cholestatic+pruritus.">Lysophosphatidic acid is a potential mediator of cholestatic pruritus.</a> Gastroenterology. 139 (3), 1008-1018 (2010).</li><li>Alemi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TGR5+receptor+mediates+bile+acid-induced+itch+and+analgesia.">The TGR5 receptor mediates bile acid-induced itch and analgesia.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (4), 1513-1530 (2013).</li><li>Nieto-Posadas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysophosphatidic+acid+directly+activates+TRPV1+through+a+C-terminal+binding+site.">Lysophosphatidic acid directly activates TRPV1 through a C-terminal binding site.</a> Nature Chemical Biology. 8 (1), 78-85 (2011).</li><li>Akiyama, T., Carstens, M. I., Carstens, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+itch-+and+pain-related+behavioral+responses+and+&#181;-opoid+modulation+in+mice.">Differential itch- and pain-related behavioral responses and &#181;-opoid modulation in mice.</a> Acta Dermato-Venereologica. 90 (6), 575-581 (2010).</li></ol>

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

في هذه المقالة ، يتم تقديم نموذج حقن الخد وتبين ان تكون مفيده لتحليل الم والسلوكيات المتعلقة بالحكة.
واظهر تقرير سابق ان المواد الجينات تحفز السلوكيات الخدش في نموذج حقن الرقبة الماوس4. وفي المقابل ، قلل كابسايسين من سلوكيات الخدش في تجارب حقن العنق الأخرى (الشكل 3). ولذلك ، فان تاثير الم علي سلوك الخدش لا يزال غير واضح. التالي فمن الضروري لتطوير طريقه للتحقيق في وقت واحد الم والحكة من خلال الاختبارات السلوكية. باستخدام نموذج حقن الخد ، يمكن تقييم تاثير ماده علي كل من الم والحكة.
وقد سبق الإبلاغ عن ان LPA داخل الخلايا ينشط مباشره TRPV1 و TRPA1 كاليه من حكه المستحثة LPA5. وفقا لذلك ، يمكن ان تكون حكه الناجمة عن LPA الهستامين مستقله. وأظهرت دراسة سابقه أيضا انه يمكن استخدام نموذج حقن الخد لتقييم حكه المستقلة الهستامين16. ولذلك ، يمكن استخدام هذا النموذج لحكه تعتمد علي الهيستامين ومستقله علي حد سواء.
واحده من الخطوات الحاسمة في هذه التجربة هو الحقن. لان هذا هو اختبار سلوكي حاد ، لا يمكن استخدام التخدير في خطوه الحقن لأنه قد يؤثر علي هذه السلوكيات. ولذلك ، الماوس يحتاج إلى ان تعقد بشكل أمن من أجل اجراء حقن دقيق. عندما الإمساك علي الحيوانية ليست أمنه ، وخاصه عند حقن algogens قويه ، قد الفئران النضال ، مما يؤدي إلى حجم الحقن غير دقيقه وعمق ، تليها صعوبة في تفسير النتائج. عند التعامل مع الماوس ، وسحب الجلد علي مؤخر بين الإبهام والسبابة لمنع حركه الماوس.
ومن الخطوات الحاسمة الأخرى التحليل السلوكي. لان الخدش هو سريع جدا ، والفيديو يحتاج إلى ان يراقب بعناية. وعلاوة علي ذلك ، يمكن ان يكون من الصعب التمييز من الاستمالة. ولذلك ، يوصي باستخدام المواد الكيميائية الايجابيه للسيطرة مثل كابسايسين اثناء التجربة الاولي. ويمكن أيضا ان تؤثر شروط التسجيل وأعاده التشغيل علي عد كلا السلوكين. إذا كان من الصعب مراقبه السلوكيات بوضوح ، يمكن استخدام المرايا حول الأقفاص لتعزيز زوايا المشاهدة4.
وتجدر الاشاره إلى ان نموذج حقن الخد قد تظهر دقه كميه منخفضه للمواد الكيميائية المختبرة مما كانت عليه في نموذج حقن الرقبة. كما هو مبين في الشكل 3 والشكل 4، فان نفس الكمية من الهستامين التي تسببت في السلوكيات الخدش أكثر في نموذج الرقبة مما كانت عليه في نموذج الخد ، وأظهرت اختلافا أصغر في نموذج حقن الرقبة. مره واحده وقد ثبت ماده اختبار ان يكون pruritogen مع الآثار الجينات منخفضه مع نموذج حقن الخد, ويوصي نموذج حقن الرقبة للتحليل الكمي اضافيه. حتى مع هذه القيود ، نموذج حقن الخد مفيد للتقييم الدقيق للمواد الاختبار ، وخاصه في مجال البحوث حكه.

وقد وصفت حكه في الأصل بأنها ضجة التي يدفع السلوكيات الخدش لأزاله المواد الضارة من سطح الجلد. ومع ذلك ، كانت حكه التركيز من العلاجات لأحاسيس غير ساره الناجمة عن العديد من الامراض مثل التهاب الجلد التاتبي ، وآلافات العصبية ، وركود صفراوي1. في هذه الحالات ، حكه هو إحساس غير ساره خطيره مماثله للألم. لذلك ، تمثل الحكة هدفا بحثيا هاما. السلوك الخدش هو المؤشر الأساسي للحكة في التجارب الحيوانية ، ويمكن ان يسبب السلوكيات الخدش في الفئران عن طريق حقن pruritogens في الجلد علي رقبتهم2،3. ومع ذلك ، أظهرت دراسة سابقه ان كابسايسين ، algogen ، ويدفع أيضا السلوكيات الخدش في نموذج حقن الرقبة4، مما يجعل من الصعب التمييز حكه من الم في هذا النموذج.  في المقابل, وقد وجد ان كابسايسين خفض السلوكيات الخدش في نموذج حقن الرقبة, مشيرا إلى ان تاثير الم علي السلوكيات الخدش معقده ويعتمد علي الظروف التجريبية.  ولذلك ، فان القياسات المتزامنة للألم والسلوكيات المتعلقة بالحكة من شانها ان تمكن من تحليل دقيق لل pruritogens و algogens. ستيفن g. Shimada وروبرت h. LaMotte نجح في قياسات متزامنة من الم والسلوكيات المتعلقة حكه عن طريق تغيير موقع الحقن من الرقبة إلى الخد4. في نموذج حقن الخد ، كابسايسين المستحثة المسح ، ولكن لا خدش السلوكيات ، في حين الهستامين ، pruritogen ، التي تسببت فقط السلوكيات الخدش. ولذلك ، فان هذا النموذج يتيح التقييم المستقل للحكة والم ، مما يجعل حقن الخد نموذجا مفيدا للبحوث الحكة. عند محاولة تحديد ما إذا كانت ماده اختبار هي pruritogen و/أو algogen ، يوفر هذا النموذج المزيد من المعلومات من نموذج حقن الرقبة. توضح هذه المقالة طريقه عمليه لاجراء حقن الخد وعد نوبات الخدش أو المسح ، وتبين فائده هذه الطريقة لتقييم سلوكيات الخدش المستحثة بحمض الليفوفوسفاتيديك (LPA).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:572px;" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">capsaicin</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M2028</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">diphenhydramine hydrochloride</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">044-19772</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">histamine</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H7125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">iMovie</td>
			<td style="width:71px;">Apple</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">lysophosphatidic acid</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td style="width:119px;">325465-93-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">myjector</td>
			<td style="width:71px;">Terumo</td>
			<td style="width:119px;">ss-05M2913</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">tween-80</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P4780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">video camera</td>
			<td style="width:71px;">Panasonic</td>
			<td style="width:119px;">VX985M</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cheek injection model for simultaneous measurement of pain and itch-related behaviors

تم تعريف الحكة بأنها "إحساس جلدي غير سار يثير الرغبة في الخدش" من قبل روثمان في 1941. في نماذج الماوس ، يتم احتساب نوبات الخدش عاده لتقييم الحكة الناجمة عن pruritogens. ومع ذلك ، فقد أظهرت التقارير السابقة ان المواد الجينات تحفز أيضا سلوكيات الخدش في نموذج حقن الرقبة الماوس ، وهو الاختبار الأكثر شيوعا المستخدمة لسلوكيات الخدش. هذا الاستنتاج يجعل من الصعب دراسة حكه في الفئران.  وعلي النقيض من ذلك, capsaicin, algogen المشتركة, انخفاض السلوكيات الخدش في بعض التجارب حقن الرقبة. ولذلك ، فان تاثير الم علي سلوكيات الخدش لا يزال غير واضح. التالي فمن الضروري لتطوير طريقه للتحقيق في وقت واحد حكه والإحساس بالم باستخدام الاختبارات السلوكية. هنا ، يتم إدخال نموذج حقن الخد الذي يمكن استخدامه في وقت واحد قياس الم-والسلوكيات المتعلقة الحكة. في هذا النموذج ، pruritogens تحفز السلوكيات الخدش في حين ان المواد الجينات تحفز السلوكيات المسح. باستخدام هذا النموذج ، حمض الليفوفوسفاتيديك (lpa) ، وهو الوسيط حكه وجدت في المرضي الركودي مع حكه ، ويظهر للحث علي حصرا حكه ولكن ليس الم. ومع ذلك ، في نماذج الماوس ، وقد أفيد ان LPA علي حد سواء pruritogen و algogen. واظهر التحقيق في اثار LPA في نموذج حقن الخد الماوس ان LPA المستحثة فقط الخدش ، ولكن ليس مسح السلوكيات. وهذا يشير إلى ان LPA بمثابه pruritogen بالمثل في الفئران والبشر ، ويوضح فائده نموذج حقن الخد للبحث حكه.

في نموذج حقن الرقبة, الهستامين المستحثة السلوكيات الخدش قويه (الشكل 3). السيارة (7 ٪ توين 80 في المحلول الملحي) كما تسبب السلوكيات الخدش. واظهر تقرير سابق ان المنظفات الناجمة عن حكه من إنتاج الهيستامين من الخلايا الكيراتينيه8. [توين] 80 استطاع حثثت حكه باليات مماثله, حيث ان [كبستسن] قلل [بسد] يسبب خدش تصرفات, معاكسه إلى تقرير سابقه4. فمن الممكن ان الاختلافات سلاله الماوس يمكن ان تمثل هذه النتائج المختلفة. وتشير هذه النتائج إلى ان تاثير الم علي سلوكيات الخدش معقد. ولذلك ، فان القياس المتزامن للألم والسلوكيات المتعلقة بالحكة قد تمكن من تحليل دقيق لل pruritogens و algogens. في نموذج حقن الخد ، كابسايسين لم يحفز السلوكيات الخدش والسلوكيات فقط التي يسببها المسح ، والتي يعتقد ان تكون ذات صله بالم9،10،11 (الشكل 4). كما زادت حقن كابسايسين سلوكيات الاستمالة (لا تظهر البيانات). بعد الحقن في الخد ، الهيستامين المستحثة أساسا السلوكيات الخدش مع ضعف السلوكيات المسح. تطبيق كاشف مضاد الهيستامين ، ديفينهيدرامين ، تثبيط الخدش. وتشير هذه النتيجة إلى ان السلوكيات التي يسببها الهستامين الخدش بسبب عمل الهستامين علي مستقبلات الهستامين. هنا ، علي سبيل المثال ، تظهر اثار LPA في نموذج حقن الخد (الشكل 5). Lpa هو الوسيط حكه وجدت في المرضي الركودي مع حكه. ومع ذلك ، في نماذج الفئران ، وذكرت lpa علي حد سواء pruritogen و algogen12،13،14،15. ولذلك ، تم التحقيق في اثار LPA في نموذج حقن الخد وأظهرت النتائج ان LPA المستحثة الخدش ، ولكن ليس محو السلوكيات. وهذا يشير إلى ان LPA هو pruritogen ، ولكن ليس algogen ، في الفئران مماثله لأثاره في البشر.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig3.jpg"> الشكل 3: اثار الهستامين والكابسايسين في نموذج حقن الرقبة. (ا) سلوكيات الخدش الناجمة عن حقن المركبة (7% توين 80 في المحلول الملحي ، المربع المفتوح) ، الهستامين (50 ميكروغرام/10 μl لكل موقع ، الدوائر المملوءة) أو كابسايسين ( 10 ميكروغرام/10 μL لكل موقع ، مثلث مفتوح. 40 ميكروغرام/10 μL لكل موقع ، مثلث مملوءة) في الرقبة تم تقييم كل 5 دقائق لما مجموعه 30 دقيقه. (ب) التحليل الكمي لسلوكيات الخدش خلال فتره 30 دقيقه في لوحه ∗ ∗P < 0.01 بواسطة ANOVA تليها bonferroni تصحيح. يتم عرض البيانات كمتوسط ± SEM (n = 6-8). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig3large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig4.jpg"> الشكل 4: اثار pruritogen و algogen في نموذج حقن الخد. المسح (ا) والخدش (ب) السلوكيات الناجمة عن حقن المركبة (7 ٪ توين 80 في المحلول الملحي ، مربع مفتوح) ، الهستامين (50 ميكروغرام/10 μl لكل موقع ، الدوائر المملوءة) أو كابسايسين (40 ميكروغرام/10 μl لكل موقع ، مثلث مملوءة) في الخد الأيمن من الفئران كانت تقييم كل 5 دقائق لما مجموعه 30 دقيقه. تم التعامل مع المجموعة المعروضة كدوائر مفتوحة مع 10 μL من 2% (w/v) ديفينهيدرامين هيدروكلوريد الملح (DHHCL) جلد 30 دقيقه قبل حقن الهيستامين (50 ميكروغرام/10 μL لكل موقع). تم حل DHHCl في المحلول الملحي. التحليل الكمي للسلوك المسح (C) والخدش (D) خلال فتره 30 دقيقه في اللوحتين A و B ؛ n = 8 الحيوانية لكل مجموعه. ∗P < 0.05, ∗ ∗p < 0.01 بواسطة ANOVA تليها تصحيح bonferroni. يتم عرض البيانات كمتوسط ± SEM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig5.jpg"> الشكل 5: lpa يدفع الخدش ، ولكن ليس مسح السلوكيات في نموذج حقن الخد. الخدش (ا) والمسح (ب) السلوكيات الناجمة عن حقن السيارة (المالحة ، والساحات المفتوحة) أو lpa (100 Nmol/10 μl لكل موقع ، والدوائر شغل) في الخد الأيمن من الفئران تم تقييم كل 5 دقائق لما مجموعه 30 دقيقه. التحليل الكمي الخدش (ج) والمسح (د) السلوكيات خلال فتره 30 دقيقه في اللوحات A و B ؛ ن = 17 للمركبة و n = 20 ل LPA. ∗P < 0.05 ، ∗ ∗p &Lt; 0.01 بواسطة ويلش تي الاختبار. يتم عرض البيانات كمتوسط ± SEM. وقد عدل هذا الرقم من كيتاكا وآخرون5. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig5large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Movie 1" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie1.jpg"> فيلم 1: فيلم التظاهر كيفيه حلق الخد الماوس. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_1.mp4" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض هذا الفيديو. (انقر بزر الماوس الأيمن للتحميل.)</a>
<img alt="Movie 2" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie2.jpg"> فيلم 2: فيلم مما يدل علي الحقن في الخد الماوس. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_2.mp4" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض هذا الفيديو. (انقر بزر الماوس الأيمن للتحميل.)</a>
<img alt="Movie 3" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie3.jpg"> الفيلم 3: الفيلم مما يدل علي السلوك المسح النموذجي. يظهر هذا الفيلم بسرعة 25%. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_3.mp4" target="_blank">يرجى النقر هنا لمشاهده هذا الفيديو. (انقر بزر الماوس الأيمن للتحميل.)</a>
<img alt="Movie 4" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie4.jpg"> الفيلم 4: فيلم من سلوك الخدش النموذجية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_4.mp4" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض هذا الفيديو. (انقر بزر الماوس الأيمن للتحميل.)</a>
<img alt="Movie 5" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie5.jpg"> فيلم 5: فيلم من السلوك الاستمالة النموذجية. يظهر هذا الفيلم بسرعة 25%. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_5.mp4" target="_blank">يرجى النقر هنا لمشاهده هذا الفيديو. (انقر بزر الماوس الأيمن للتحميل.)</a>

Watch this Scientific Journal Video about Cheek Injection Model for Simultaneous Measurement of Pain and Itch-related Behaviors at JoVE.com

Cheek Injection Model for Simultaneous Measurement of Pain and Itch-related Behaviors

عاده ، يتم استخدام نموذج حقن الرقبة الماوس لتقييم السلوكيات الخدش المستحثة pruritogen. ومع ذلك ، فان النموذج يوفر المعلومات فقط علي الحكة ، وليس الم. هنا ، يتم إدخال نموذج حقن الخد في الفئران التي يمكن استخدامها لقياس الم والسلوكيات المتعلقة بالحكة في وقت واحد.

نموذج حقن الخد للقياس المتزامن للألم والسلوكيات المتعلقة بالحكة

Itch was defined as &#34;an unpleasant cutaneous sensation that provokes a desire to scratch&#34;&#160;by Rothman in 1941. In mouse models, scratch bouts ...

تشير بياناتنا إلى أن algogens تقلل من سلوكيات الخدش ، ولكن تأثير الكابسايسين على سلوكيات الخدش لا يزال غير واضح. ولذلك فإن القياس المتزامن لكل كمية من الألم مهمة. الطريقة التقليدية توفير المعلومات عن الأحاسيس فقط حكة أو الألم، ولكن نموذج حقن الخد توفير المعلومات عن الحكة والألم، بشكل منفصل وفي وقت واحد.يمكن أن يكون من الصعب حقن الخد في البداية، كما أنه يأخذ ممارسة للتمييز بين خدش، مسح، والاستمالة السلوكيات. يمكن أن يكون عرض الفيديو للحقن والتحليل السلوكي مفيدًا لإتقان التقنيات. لتجربة حقن الخد، في اليوم السابق للتقييم، حلق الفراء على خد كل فأرة مع مقصات الشعر، وجبل كاميرا فيديو مع 30 إلى 60 لقطة في الثانية معدل الإطار على ترايبود، في درجة حرارة، والرطوبة، والبيئة التي تسيطر عليها الصوت.ضع أربعة أقفاص تحت الكاميرا في الاتجاه المشار إليه، ووضع الشاشات بين كل قفص لمنع الفئران من رؤية بعضها البعض. بعد يوم واحد من الحلاقة، ضع فأرًا واحدًا في كل قفص تسجيل لمدة ساعة واحدة لتأقلم الحيوانات مع ظروف التسجيل. إذا كان العلاج الموضعي هو أن تستخدم، وتطبيقه في هذا الوقت.في حين أن الحيوانات هي التأقلم، تحميل مادة اختبار الفائدة في حقنة واحدة 0.5 ملليلتر مجهزة إبرة 29-أو 30 قياس لكل فأرة. في نهاية فترة التأقلم، ابدأ تسجيل الفيديو قبل الحقن. ثم حقن 10 ميكرولتر حل من مادة اختبار intradermally في الخد حلق من الحيوان مستيقظا.ثم العودة إلى الفئران حقن كل منهما ومتابعة تسجيل الفيديو لمدة 30 دقيقة. في نهاية التجربة، قم بتحميل الفيديو في برنامج تحرير فيديو مناسب. عد في كل مرة الماوس يثير ساقاً هدّية نحو الخد وخدوش عدة مرات على مدى ثانية واحدة أو بضع ثوان قبل وضع ساقهم إلى أسفل كنوبة واحدة الصفر.الفئران استخدام foreleg واحد لمسح، وكلاهما forelegs للاستمالة، ولكن يتم احتساب السلوكيات المسح فقط كتصرفات ذات الصلة بالألم. لتجربة حقن الرقبة، قبل يوم واحد من التجربة، حلق الفراء على مؤخر رقبة كل فأر بقصات الشعر. بعد يوم واحد من الحلاقة ، قم بتأقلم الفئران في أقفاص التسجيل لمدة ساعة واحدة قبل حقن 10 ميكرولترات من مادة الاختبار ذات الاهتمام داخل الجلد في الرقبة الحليقة ، في ظل ظروف مستيقظة.إعادة الحيوانات المحقونة إلى أقفاص تسجيل وتسجيل سلوك الماوس لمدة 30 دقيقة. ثم عد نوبات الخدش على الرقبة وأي السلوكيات مسح الوجه كما أظهرت للتو. في نموذج حقن الرقبة, الهستامين يحفز السلوكيات الخدش قوية, في حين أن السيارة يحفز الخدش خفيفة.في نموذج حقن الخد ، لا تحفز الكابسايسين سلوكيات الخدش ، ولكنها تحفز السلوكيات المسحية ، والتي يعتقد أنها مرتبطة بالألم. بعد الحقن في الخد، الهستامين يدفع أساسا خدش السلوكيات مع السلوكيات المسح ضعيفة. تطبيق كاشف مضاد للهستامين يمنع الخدش، مما يشير إلى أن السلوكيات الخدش الناجمة عن الهستامين سببها رد فعل الهستامين على مستقبلات الهستامين.في هذه التجربة ، وتطبيق وسيط حكة الناجمة عن الخدش ، ولكن لا مسح السلوكيات ، مما يدل على أن الوسيط اختبار يعمل كما pruritogen ، ولكن ليس algogen في الفئران ، على غرار آثارها في البشر. هذه الطريقة تسمح الأحاسيس حكة والألم أن يكون بسهولة وبشكل واضح تمييز مع إجراء واحد. يمكن إجراء تحليل سلوكي مفصل من خلال التركيز على الحكة أو الإحساس بالألم.حكة وآلام السلوكيات الاتفاق على استجابات مختلفة. أيضا هذه التقنيات ليست صعبة. حقن الخد وإجراء المراقبة قد تسمح لمختلف من أقراننا التدريب على إتقان.ونحن نقدر إدخال نموذج حقن الخد من قبل البروفيسور لاموت في جامعة ييل.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assessment of Social Interaction Behaviors

تقييم سلوك التفاعل الاجتماعي

Social interactions are a fundamental and adaptive component of the biology of numerous species. Social recognition is critical for the structure and ...

Single Cell Measurement of Dopamine Release with Simultaneous Voltage-clamp and Amperometry

واحدة من خلية قياس إفراز الدوبامين في وقت واحد مع المشبك الجهد وAmperometry

After its release into the synaptic cleft, dopamine exerts its biological properties via its pre- and post-synaptic targets1. The dopamine signal is ...

Simultaneous Electroencephalography, Real-time Measurement of Lactate Concentration and Optogenetic Manipulation of Neuronal Activity in the Rodent Cerebral Cortex

في وقت واحد رسم المخ، في الوقت الحقيقي قياس تركيز اللاكتات والتلاعب Optogenetic من نشاط الخلايا العصبية في القشرة الدماغية القوارض

Although the brain represents less than 5% of the body  by mass, it utilizes approximately one quarter of the glucose used by the body  at rest1. The ...

Simultaneous Electrophysiological Recording and Calcium Imaging of Suprachiasmatic Nucleus Neurons

Simultaneous electrophysiological and fluorescent imaging recording methods were used to study the role of changes of membrane potential or current in ...

Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine

و Laminotomy للوصول إلى العقدة الجذر الظهرية القطنية وحقن في الخنازير

Dorsal root ganglia (DRG) are anatomically well defined structures that contain all primary sensory neurons below the head. This fact makes DRG attractive ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

نموذج رواية في المختبر للانفجار إصابات الدماغ الرضية

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

تحفيز الجافية واختبار فون فراي حول الحجاج في الفئران كنموذج قبل سريري للصداع

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

A Mouse Model to Study Brain Physiology During Cardiac Arrest

Mouse Cardiac Arrest Model for Brain Imaging and Brain Physiology Monitoring During Ischemia and Resuscitation

A Unique Mouse Model of Asphyxia-Induced Cardiac Arrest (Video) | JoVE

نموذج السكتة القلبية للفأر لتصوير الدماغ ومراقبة فسيولوجيا الدماغ أثناء نقص التروية والإنعاش

Most cardiac arrest (CA) survivors experience varying degrees of neurologic deficits. To understand the mechanisms that underpin CA-induced brain injury ...

Mapping Cerebral Blood Flow and Electrical Fields: Electrode Placement in Mice

Placement of Extracranial Stimulating Electrodes and Measurement of Cerebral Blood Flow and Intracranial Electrical Fields in Anesthetized Mice

Stimulation-Based Approach to Improve Cerebral Blood Flow in Alzheimer's Model (Video) | JoVE

وضع أقطاب تحفيز خارج الجمجمة وقياس تدفق الدم الدماغي والمجالات الكهربائية داخل الجمجمة في الفئران المخدرة

The detection of cerebral blood flow (CBF) responses to various forms of neuronal activation is critical for understanding dynamic brain function and ...

A Novel Approach for Pain Assessment from Pain Body Diagrams

Quantifying Pain Location and Intensity with Multimodal Pain Body Diagrams

Quantifying Pain Experience â€“ An Illustrative Approach Using the Pain Body Diagram (Video) | JoVE

تحديد موقع الألم وشدته باستخدام مخططات جسم الألم متعددة الوسائط

To quantify an individual&#39;s subjective pain severity, standardized pain rating scales such as the numeric rating scale (NRS), visual analog scale ...