Name: purification and analytics of a monoclonal antibody from chinese hamster ovary cells using an automated microbioreactor system
Uploaded: 2019-05-01T13:30:00
Duration: 10 min 50 s
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लेखकों विश्लेषणात्मक समर्थन वह प्रदान के लिए स्कॉट Lute शुक्रिया अदा करना चाहते हैं. आंशिक आंतरिक धन और इस काम के लिए समर्थन CDER महत्वपूर्ण पथ कार्यक्रम (सीए #1-13) द्वारा प्रदान की जाती है. इस परियोजना के भाग में जैव प्रौद्योगिकी उत्पाद, अमेरिकी खाद्य एवं औषधि प्रशासन, विज्ञान और शिक्षा के लिए ओक रिज संस्थान द्वारा प्रशासित के कार्यालय में इंटर्नशिप/ अनुसंधान भागीदारी कार्यक्रम के लिए एक नियुक्ति के द्वारा समर्थित है एक के माध्यम से अमेरिकी ऊर्जा विभाग और एफडीए के बीच अंतर एजेंसी समझौते.

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	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmaceutical cGMPs for the 21st Century: A Risk-Based Approach. , (2004).</li><li>New Molecular Entity (NME) Drug and New Biologic Approvals. FDA Available from: <a target="_blank" href="https://www.dfa.gov/Drugs/DevelopmentApprovalProcess/HowDrugsareDevelopedandApproved/DrugandBiologicAprrovalReports/NDAandBLAApprovalReports/ucm373420.htm">https://www.dfa.gov/Drugs/DevelopmentApprovalProcess/HowDrugsareDevelopedandApproved/DrugandBiologicAprrovalReports/NDAandBLAApprovalReports/ucm373420.htm</a> (2015)</li><li>Foltz, I. N., Karow, M., Wasserman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+and+Emergence+of+Therapeutic+Monoclonal+Antibodies.">Evolution and Emergence of Therapeutic Monoclonal Antibodies.</a> Circulation. 127, 2222-2230 (2013).</li><li>Kondragunta, B., Drew, J. L., Brorson, K. A., Moreira, A. R., Rao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+clone+selection+using+high-throughput+bioreactors.">Advances in clone selection using high-throughput bioreactors.</a> Biotechnology Progress. 26 (4), 1095-1103 (2010).</li><li>Hmiel, L., Brorson, K., Boyne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-translational+structural+modifications+of+immunoglobulin+G+and+their+effect+on+biological+activity.">Post-translational structural modifications of immunoglobulin G and their effect on biological activity.</a> Analytical &amp; Bioanalytical Chemistry. 407 (1), 79-94 (2015).</li><li>Rathore, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roadmap+for+implementation+of+quality+by+design+(QbD)+for+biotechnology+products.">Roadmap for implementation of quality by design (QbD) for biotechnology products.</a> Trends in Biotechnology. 27 (9), 546-553 (2009).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Council+for+Harminisation+of+Techinical+Requirements+for+Pharmaceuticals+for+Human+Use.">International Council for Harminisation of Techinical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use.</a> ICH. , (1999).</li><li>Berkowitz, S. A., Engen, J. R., Mazzeo, J. R., Jones, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+tools+for+characterizing+biopharmaceuticals+and+the+implications+for+biosimilars.">Analytical tools for characterizing biopharmaceuticals and the implications for biosimilars.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 11 (7), 527-540 (2012).</li><li>Velugula-Yellela, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+high-throughput+automated+microbioreactor+system+for+production+of+model+IgG1+in+CHO+cells.">Use of high-throughput automated microbioreactor system for production of model IgG1 in CHO cells.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2018).</li><li>Largy, E., Cantais, F., Van Vyncht, G., Beck, A., Delobel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthogonal+liquid+chromatography-mass+spectrometry+methods+for+the+comprehensive+characterization+of+therapeutic+glycoproteins,+from+released+glycans+to+intact+protein+level.">Orthogonal liquid chromatography-mass spectrometry methods for the comprehensive characterization of therapeutic glycoproteins, from released glycans to intact protein level.</a> Journal of Chromatography A. 1498, 128-146 (2017).</li><li>Yang, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+correlation+between+charge+and+glycosylation+of+IgG1+variants+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry.">Investigation of the correlation between charge and glycosylation of IgG1 variants by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Analytical Biochemistry. 448, 82-91 (2014).</li><li>Agarabi, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioreactor+Process+Parameter+Screening+Utilizing+a+Plackett-Burman+Design+for+a+Model+Monoclonal+Antibody.">Bioreactor Process Parameter Screening Utilizing a Plackett-Burman Design for a Model Monoclonal Antibody.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 104 (6), 1919-1928 (2015).</li><li>Wen, J., Arakawa, T., Philo, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-Exclusion+Chromatography+with+On-Line+Light-Scattering,+Absorbance,+and+Refractive+Index+Detectors+for+Studying+Proteins+and+Their+Interactions.">Size-Exclusion Chromatography with On-Line Light-Scattering, Absorbance, and Refractive Index Detectors for Studying Proteins and Their Interactions.</a> Analytical Biochemistry. 240 (2), 155-166 (1996).</li><li>Veurink, M., Stella, C., Tabatabay, C., Pournaras, C. J., Gurny, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+ranibizumab+(Lucentis)+or+bevacizumab+(Avastin)+with+dexamethasone+and+triamcinolone+acetonide:+An+in+vitro+stability+assessment.">Association of ranibizumab (Lucentis) or bevacizumab (Avastin) with dexamethasone and triamcinolone acetonide: An in vitro stability assessment.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 78 (2), 271-277 (2011).</li><li>Li, Y., Weiss, W. F., Roberts, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+high-molecular-weight+nonnative+aggregates+and+aggregation+kinetics+by+size+exclusion+chromatography+with+inline+multi-angle+laser+light+scattering.">Characterization of high-molecular-weight nonnative aggregates and aggregation kinetics by size exclusion chromatography with inline multi-angle laser light scattering.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 98 (11), 3997-4016 (2009).</li><li>Espinosa-de la Garza, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+recombinant+monoclonal+antibodies+by+capillary+zone+electrophoresis.">Analysis of recombinant monoclonal antibodies by capillary zone electrophoresis.</a> Electrophoresis. 34 (8), 1133-1140 (2013).</li><li>Han, H., Livingston, E., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+profiling+of+charge+heterogeneity+in+antibodies+by+microchip+electrophoresis.">High throughput profiling of charge heterogeneity in antibodies by microchip electrophoresis.</a> Analytical Chemistry. 83 (21), 8184-8191 (2011).</li><li>Wheeler, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microchip+zone+electrophoresis+for+high-throughput+analysis+of+monoclonal+antibody+charge+variants.">Microchip zone electrophoresis for high-throughput analysis of monoclonal antibody charge variants.</a> Analytical Chemistry. 86 (11), 5416-5424 (2014).</li><li>Carrillo-Cocom, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+acid+consumption+in+naive+and+recombinant+CHO+cell+cultures:+producers+of+a+monoclonal+antibody.">Amino acid consumption in naive and recombinant CHO cell cultures: producers of a monoclonal antibody.</a> Cytotechnology. 67 (5), 809-820 (2015).</li><li>Chen, P., Harcum, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+amino+acid+additions+on+ammonium+stressed+CHO+cells.">Effects of amino acid additions on ammonium stressed CHO cells.</a> Journal of Biotechnology. 117 (3), 277-286 (2005).</li><li>Xing, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+amino+acid+composition+of+CHO+cell+culture+media+for+a+fusion+protein+production.">Optimizing amino acid composition of CHO cell culture media for a fusion protein production.</a> Process Biochemistry. 46 (7), 1423-1429 (2011).</li><li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+acid+and+glucose+metabolism+in+fed-batch+CHO+cell+culture+affects+antibody+production+and+glycosylation.">Amino acid and glucose metabolism in fed-batch CHO cell culture affects antibody production and glycosylation.</a> Biotechnology and Bioengineering. 112 (3), 521-535 (2015).</li><li>Read, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fermentanomics+informed+amino+acid+supplementation+of+an+antibody+producing+mammalian+cell+culture.">Fermentanomics informed amino acid supplementation of an antibody producing mammalian cell culture.</a> Biotechnology Progress. 29 (3), 745-753 (2013).</li><li>Mazzer, A. R., Perraud, X., Halley, J., O'Hara, J., Bracewell, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+A+chromatography+increases+monoclonal+antibody+aggregation+rate+during+subsequent+low+pH+virus+inactivation+hold.">Protein A chromatography increases monoclonal antibody aggregation rate during subsequent low pH virus inactivation hold.</a> Journal of Chromatography. A. 1415, 83-90 (2015).</li><li>Zhang, L., Luo, S., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycan+analysis+of+therapeutic+glycoproteins.">Glycan analysis of therapeutic glycoproteins.</a> MAbs. 8 (2), 205-215 (2016).</li><li>Wahl, O., Holzgrabe, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+acid+analysis+for+pharmacopoeial+purposes.">Amino acid analysis for pharmacopoeial purposes.</a> Talanta. 154, 150-163 (2016).</li><li>Le, A., Ng, A., Kwan, T., Cusmano-Ozog, K., Cowan, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid,+sensitive+method+for+quantitative+analysis+of+underivatized+amino+acids+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+(LC-MS/MS).">A rapid, sensitive method for quantitative analysis of underivatized amino acids by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS).</a> Journal of Chromatography B. 944, 166-174 (2014).</li></ol>

यह प्रकाशन लेखक के विचारों को दर्शाता है और एफडीए के विचारों या नीतियों का प्रतिनिधित्व करने के लिए नहीं लगाया जाना चाहिए.

एचसीसीएफ मलबे और बड़े कणों कि रोकना और महंगा इंस्ट्रूमेंटेशन को नष्ट कर सकते हैं शामिल हैं, इस प्रकार संस्कृति स्पष्टीकरण आगे बहाव प्रसंस्करण से पहले की जरूरत है। सेंट्रीफ्यूगेशन आम तौर पर निस्पंदन के बाद प्रोटीन से कोशिकाओं और अन्य अघुलनशील कणों को अलग करने का पहला दृष्टिकोण है। इस फ़िल्टर्ड एचसीएफ तो शुद्धीकरण के लिए फास्ट प्रोटीन तरल क्रोमैटोग्राफी (FPLC) के अधीन है। उत्पाद प्राप्त करने के लिए स्वचालित माइक्रोबायोरिएक्टरों से एचसीएफ का शुद्धिकरण डाउनस्ट्रीम प्रोसेसिंग में एक महत्वपूर्ण कदम है। यहां, एक प्रोटीन ए कॉलम के साथ एक बेंचटॉप एफपीएलसी प्रणाली एचसीसीएफ से मोनोक्लोनल एंटीबॉडी प्राप्त करने के लिए प्रयोग किया जाता है। अपस्ट्रीम प्रक्रियाओं के लिए Analytics सेल व्यवहार में उपयोगी अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकता है और जैव प्रक्रिया डिज़ाइन का मार्गदर्शन कर सकता है, जिससे संगत और विश्वसनीय गुणवत्ता उत्पाद प्राप्त करने में मदद मिल सकती है. Analytics हमें क्रिटिकल क्वालिटी एट्रिब्यूट (CQAs) को अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम प्रक्रियाओं से लिंक करने की भी अनुमति देता है. यहाँ प्रस्तुत चार परख है कि आमतौर पर monoclonal एंटीबॉडी की विशेषता में उपयोग किया जाता है. इन तकनीकों को मजबूत कर रहे हैं, विश्वसनीय, और आसानी से अपस्ट्रीम स्रोतों जो केवल आंशिक रूप से शुद्ध कर रहे हैं और अभी भी डीएनए और एचसीपी के अवशिष्ट स्तर हो सकता है की एक किस्म से प्रक्रिया और उत्पाद विश्लेषण के लिए deployable.
जब विश्लेषिकी के लिए नमूने की सफाई, एक महत्वपूर्ण संतुलन एक नमूना है कि विश्लेषण के लिए पर्याप्त रूप से साफ है, जबकि bioreacter में मौजूद परिवर्तनशीलता के संरक्षण बनाने के बीच मारा जाना चाहिए. उत्पाद को प्रभावित करने वाले दो सबसे आम संदूषक डीएनए और एचसीपी हैं, जिन्हें 260/280 एनएम पर अनुपात अवशोषण को मापने के द्वारा और एसडीएस-पेज या जेडसीई-एसडीएस के माध्यम से जांच की जा सकती है। यहाँ प्रस्तुत परख डीएनए सामग्री के निम्न स्तर के प्रति संवेदनशील नहीं हैं. उत्पाद की शुद्धता है और 95% शुद्ध है, के रूप में द्वारा निर्धारित किया गया है $CE-SDS.
एक microcapillary electrophoresis प्रणाली के साथ प्रभारी संस्करण विश्लेषण एक उच्च throughput विधि चार्ज वेरिएंट की पहचान करने के लिए प्रदान करता है, चिप्स और अभिकर्मकों कि अपेक्षाकृत लागू करने के लिए आसान कर रहे हैं के साथ. तकनीक की प्रकृति और लेबलिंग अभिकर्मक के रसायन दोनों excipients और अन्य प्राथमिक amines के प्रति संवेदनशील हैं, इस प्रकार सबसे नमूना matrixes के लिए एक desalting कदम की आवश्यकता होती है. अनुभव से, डीएनए के निम्न स्तर लेबलिंग प्रतिक्रिया से मुक्त डाई के साथ सह-प्रवास करते हैं और परिणामों की गुणवत्ता को प्रभावित नहीं करते हैं। जबकि बुनियादी, मुख्य, और अम्लीय शिखर परिमाणीकरण की परिवर्तनशीलता आम तौर पर है;1%, डीएनए और अन्य contaminants के उच्च स्तर परख की परिवर्तनशीलता को बढ़ा सकते हैं. यह प्रोटीन लेबलिंग के साथ संगत होना और बोतल से हटाने और डाई के साथ मिलाया जा रहा है के बाद DMF के शीघ्र उपयोग सुनिश्चित करने के लिए अत्यंत महत्वपूर्ण है. Lysine और/या histidine मानकों लेबलिंग नियंत्रण के रूप में सिफारिश कर रहे हैं. समय के साथ और नमूना गुणवत्ता के आधार पर, चिप्स बेईमानी कर सकते हैं या microfluidics चैनलों पर कोटिंग खो, अधिक से अधिक शोर करने के लिए अग्रणी, भूत चोटियों की उपस्थिति, और अधिक से अधिक नमूना करने के लिए नमूना भिन्नता. इस घटना की पहचान करने के लिए, रिक्त स्थान और एक सिस्टम उपयुक्तता मानक (यानी NISTmAb) समवर्ती नियमित अंतराल पर नमूनों के साथ विश्लेषण किया गया. जब चिप मुद्दों उठता है, चिप्स भंडारण समाधान के साथ धोया जा सकता है या बदला.
चिकित्सीय ग्लाइकोप्रोटीन के ग्लिकन विश्लेषण के लिए उपयोग की जाने वाली विधियों में मुख्य रूप से तरल क्रोमैटोग्राफी (एलसी) और/या मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एमएस) शामिल है, जिसमें लैक्टिन माइक्रोरे विश्लेषण को तीसरे विकल्प25के रूप में लोकप्रियता प्राप्त हो रही है। इस पेपर में वर्णित विधि LC और MS दोनों का उपयोग करता है, जिसमें लाभ और नुकसान हैं. मास स्पेक्ट्रोमेमीट्रिक तरीकों का विश्लेषण glycans के बड़े पैमाने पर सत्यापन का लाभ है, जो एक फ्लोरोसेंट का पता लगाने के उत्पादन या लैक्टिन microarrays का उपयोग कर LC आधारित तरीकों के साथ संभव नहीं है. इस विधि एक dextran सीढ़ी मानक करने के लिए प्रतिधारण समय तुलना का उपयोग कर ग्लाइकैन पहचान आवंटित करने के लिए एलसी और फ्लोरोसेंट का पता लगाने का उपयोग करता है. फ्लोरोसेंट निगरानी इसकी पहचान की आसानी के कारण बढ़ी हुई संवेदनशीलता और परिमाणीकरण के लिए अनुमति देता है, जहां एमएस अकेले ओलिगोसैकेराइड की खराब आयनीकरण दक्षता के कारण कम बहुतायत प्रजातियों की मात्रा निर्धारित करने में सक्षम नहीं हो सकता है। एमएस से जन जानकारी ग्लिकन पहचान की पुष्टि करने के लिए उपयोग किया जाता है, लेकिन संसाधन सॉफ़्टवेयर प्राथमिक असाइनमेंट मापदंड के रूप में जन जानकारी का उपयोग नहीं करता है। इसलिए, reproduible क्रोमैटोग्राफी और आसानी से resolvable चोटियों के बिना, इस विधि ग्लिकन कार्य के बारे में पीड़ित कर सकते हैं. सौभाग्य से, जन जानकारी ग्लिकन असाइनमेंट के साथ उन परिस्थितियों में भी मदद कर सकती है जब क्रोमैटोग्राफी उपपार होती है, जैसे कि अवधारण समय में बदलाव जो reproduible ग्लाइकन असाइनमेंट में बाधा डालती है। एमएस के बिना इस विधि का उपयोग किया जाता है, तो क्रोमैटोग्राफी उच्चतम स्तर पर होना चाहिए क्योंकि निवास समय बहाव के लिए जन जानकारी का उपयोग नहीं किया जा सकता है।
यहाँ वर्णित एमिनो एसिड विश्लेषण विधि कच्चे सेल संस्कृति मीडिया में underivatized एमिनो एसिड के तेजी से परिमाणीकरण के लिए LC-MS का इस्तेमाल करता है. वैकल्पिक एमिनो एसिड विश्लेषण विधियों एमिनो एसिड derivatization एजेंटों यूवी पता लगाने26सक्षम करने के लिए की आवश्यकता है. LC-MS विधि LC-UV विधि पर महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करता है: यह दोनों प्रतिधारण समय और आयन द्रव्यमान के रूप में LC-UV विधि है, जो बड़े पैमाने पर लक्षण की कमी के द्वारा सीमित है के रूप में पहचान के लिए अनुमति देता है. इसके अलावा, एलसी-एमएस विधि समय और पुन: उत्पादनीयता लाभ प्रदान करती है, क्योंकि एलसी-यूवी विधि के लिए समय लेने वाली डेरीवासीकरण प्रतिक्रिया की आवश्यकता होती है, जो नमूना परिवर्तनशीलता27प्रदान कर सकती है। हालांकि, एलसी-एमएस विधि में कच्चे सेल संस्कृति मीडिया के इंजेक्शन आयन स्किमर दूषण के कारण एमएस संकेत पर हानिकारक प्रभाव पैदा कर सकता है। एक अंशांकन सीढ़ी एक प्रणाली उपयुक्तता की जांच के रूप में अक्सर इंजेक्शन है, और नमूना आदेश डेटा में पूर्वाग्रह को रोकने के लिए यादृच्छिक है.
माइक्रोबायोरिएक्टरों का उपयोग करके एंटीबॉडी उत्पादन के लिए कोशिका संवर्धन प्रक्रिया को पहले9बताया गया है . इस अध्ययन में, मोनोक्लोनल एंटीबॉडी विशेषता विधियों के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल जो सीमित नमूना मात्रा से प्राप्त डेटा को अधिकतम करते हैं, अच्छी तरह से परिभाषित होते हैं। काटा सेल संस्कृति तरल पदार्थ की सीमित मात्रा में कभी कभी उत्पाद प्राप्त की जानकारी और उत्पाद की गुणवत्ता डेटा प्राप्त करने के लिए सही विश्लेषणात्मक प्रक्रियाओं का चयन प्रतिबंधित कर सकते हैं आवश्यक है. Analytics उत्पाद की गुणवत्ता में परिवर्तनों के लिए अपस्ट्रीम प्रक्रिया पैरामीटर को एक साथ लिंक करना महत्वपूर्ण है. यहाँ, एक दिशानिर्देश उपयोगकर्ताओं के लिए प्रदान की जाती है जब microbioreactors के साथ काम कर mAbs की विशेषता है.

प्रोटीन चिकित्सा ऊतक प्रत्यारोपण जटिलताओं, autoimmune विकारों, और कैंसर1सहित चिकित्सा शर्तों की बढ़ती विविधता के इलाज के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है. 2004 के बाद से, संयुक्त राज्य अमेरिका के खाद्य एवं औषधि प्रशासन (USFDA) दवा मूल्यांकन और अनुसंधान के लिए केंद्र द्वारा विनियमित सभी अनुमोदनों के जीवविज्ञान लाइसेंस अनुप्रयोगों (BLAs) की बढ़ती अनुपात प्रलेखित किया गया है , BLAs के साथ 25% से अधिक के लिए लेखांकन 2014 और 20152में |
इस विस्तार बाजार को ध्यान में रखते हुए, biopharmaceutical निर्माताओं जल्दी से लगातार गुणवत्ता के साथ और अधिक उत्पाद देने के साथ चुनौती दी है. उत्पाद उपज बढ़ाने के प्रयास ों को चो सेल इंजीनियरिंग और उत्पादन लाइन स्क्रीनिंग पर ध्यान केंद्रित किया है, हालांकि सबसे महत्वपूर्ण सुधार मीडिया / फ़ीड रणनीति अनुकूलन और सेल संस्कृति पर्यावरण नियंत्रण1में अग्रिम के कारण कर रहेहैं, 3 , 4 , 5 विनिर्माण प्रक्रिया के दौरान.
चूंकि mAbs एक जैविक प्रणाली में उत्पादित कर रहे हैं, वहाँ निहित प्रोटीन परिवर्तनशीलता हो सकता है. एंटीबॉडी संरचना को अनुवाद के बाद बदला जा सकता है, जैसे ग्लाइकोसिलेशन या निम्नीकरण या एंजाइमी प्रतिक्रियाओं से प्रभावित। इन संरचनात्मक विविधताओं खतरनाक प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं भड़काने या एंटीबॉडी बंधन है, जो बारी में कम या इरादा चिकित्सीय समारोह5को खत्म कर सकते हैं बदल सकते हैं. इस प्रकार, मोनोक्लोनल एंटीबॉडी की महत्वपूर्ण गुणवत्ता विशेषताओं (सीक्यूए) - एन-ग्लिकन प्रोफाइल, चार्ज संस्करण वितरण, और मोनोमेरिक रूप में एंटीबॉडी का प्रतिशत - के दौरान डिजाइन (क्यूबीडी) दृष्टिकोण द्वारा एक गुणवत्ता के भाग के रूप में नियमित रूप से निगरानी और नियंत्रित किया जाता है विनिर्माणप्रक्रिया1,6. एक विनियमित उत्पादन वातावरण में, चिकित्सीय प्रोटीन स्वीकृति मानदंडों को पूरा करने के लिए एक अनुमोदित वाणिज्यिक दवा उत्पाद7के रूप में लाइसेंस प्राप्त करना चाहिए. यहाँ प्रस्तुत तरीकों आम तौर पर एक एंटीबॉडी के लिए गुणवत्ता विशेषता प्रक्रिया का हिस्सा होगा7,8, और किसी भी प्रोटीन वैज्ञानिक उनके उपयोग से परिचित हो जाएगा.
पूर्व कार्य9में अपस्ट्रीम जैव प्रसंस्करण में सेल कल्चर की स्थिति की उच्च थ्रूपुट स्क्रीनिंग के लिए माइक्रोबायोरिएक्टरों के अनुप्रयोग और प्रचालन का वर्णन किया गया है। अलग-अलग मीडिया स्थितियों से प्राप्त शुद्ध उत्पाद एन-ग्लिकन विश्लेषण के अधीन है चिकित्सीय प्रोटीन के LC-MS. Glycosylation पैटर्न का उपयोग कर पता लगाया जा सकता है और LC-MS तकनीक का उपयोग कर विशेषता10,11, और विभिन्न ग्लिकन प्रजातियों की उपस्थिति फ़ीड रणनीति, पीएच, और तापमान12के रूप में जैव प्रक्रिया मानकों से जोड़ा गया है। उत्पाद की गुणवत्ता पर अलग मीडिया की स्थिति का प्रभाव, एकमेरिक रूप में जिसके परिणामस्वरूप आईजीजी के प्रतिशत से संकेत दिया, भी आकार बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी के साथ मूल्यांकन किया जाता है- मल्टी-एंगल लाइट स्कैटरिंग (एसईसी-मेल्स)13,14 , 15. प्रभारी संस्करण प्रोफ़ाइल16 संशोधनों की एक संख्या है कि एक उत्पाद के समारोह को प्रभावित कर सकता है का प्रतिनिधित्व करता है. माइक्रोकैपिलरी ज़ोन इलेक्ट्रोफोरोसिस (एमसीजेडई) एक तकनीक है जो पारंपरिक धन विनिमय (सीईएक्स) क्रोमैटोग्राफी और केशिका आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग (सीआईईएफ) तरीकों की तुलना में काफी तेजी से विश्लेषण समय प्रदान करता है जो चार्ज संस्करण विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जाता है17 ,18. खर्च bioreacter मीडिया प्रोटीन उत्पादन के दौरान एमिनो एसिड की खपत को ट्रैक करने के लिए विश्लेषण किया गया था के रूप में यह एंटीबॉडी की पहचान गुण में परिवर्तन से संबंधित है19,20,21,22 , 23.
प्रोटीन विश्लेषण हमें प्रक्रिया आदानों और CQAs में परिवर्तन के बीच संबंधों के आधार पर महत्वपूर्ण प्रक्रिया पैरामीटर (CPPs) की पहचान करने की अनुमति देते हैं। bioprocess विकास के दौरान, की पहचान करने और सीजीपी को मापने मौलिक प्रक्रिया नियंत्रण को दर्शाता है और यह सुनिश्चित करता है कि उत्पाद नहीं बदला है, जो अत्यधिक विनियमित विनिर्माण वातावरण में आवश्यक है. इस पत्र में, उत्पाद CQAs (एन ग्लिकन प्रोफ़ाइल, चार्ज वेरिएंट, और आकार एकरूपता) के लिए सबसे उचित प्रोटीन की जैव रासायनिक विशेषताओं में से कुछ को मापने के लिए विश्लेषणात्मक तकनीक प्रस्तुत कर रहे हैं।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:899px;" width="898">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:373px;">CHO DG44 Cell Line</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:157px;">A1100001</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Akta Avant 25</td>
			<td>General Electric Life Sciences</td>
			<td>28930842</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pro Sep vA Ultra Chromatography Resin</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>115115830</td>
			<td>Purification Stationary Phase</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:373px;">Omnifit 10cm Column</td>
			<td style="width:191px;">Diba Fluid Intelligence</td>
			<td>006EZ-06-10-AA</td>
			<td style="width:177px;">Housing for Stationary Phase</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tris Base</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP154-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Superloop 10 mL</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>18-1113-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">&#181;Dawn Multi Angle Light Scattering Detector</td>
			<td>Wyatt</td>
			<td>WUDAWN-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">0.22 &#181;m Millex GV Filter Unit PVDF Membrane</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLGV033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">10X Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-013-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">12 mL Syringe</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8881512878</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">1290 Infinity Binary Pump</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>G4220A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">1290 Infinity DAD&#160;</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>G4212A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">1290 Infinity Sampler</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>G4226A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">1290 Infinity Thermostat</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>G1330B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">1290 Infinity Thermostatted Column Compartment</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>G1316C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">15 mL Falcon tube</td>
			<td>Corning Inc.</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">150 uL Glass Inserts with Polymer Feet&#160;</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>5183-2088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">50 mL Falcon tube</td>
			<td>Corning Inc.</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">96-Well Plate</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>127737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Acetic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>695072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Acetonitrile</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>BPA996-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ACQUITY I-Class UPLC BSM</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>18601504612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">ACQUITY I-Class UPLC Sample Manager</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186015000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ACQUITY UPLC FLR Detector</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>176015029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;">Amicon Ultra-4 100 kDa centrifugal filters</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>UFC810096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;">Amino Acid Standard, 1 nmol/&#181;L&#160;</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>5061-3330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Amino Acid Supplement</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>5062-2478</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ammonium Formate Solution - Glycan Analysis</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186007081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Blue Screw Caps with Septa</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>5182-0717</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">CD OptiCHO AGT Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1122205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Centrifuge Tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Charge Variant Chip</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>760435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Charge Variant Reagent Kit</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>CLS760670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Chromatography Water (MS Grade)</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>W6-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dimethylformamide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>20673</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Extraction Plate Manifold for Oasis 96-Well Plates</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186001831</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Formic Acid</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>A117-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">GlycoWorks RapiFlour-MS N-Glycan Starter Kit - 24 Sample</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>176003712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">GXII Buffer Tubes</td>
			<td>E&#38;K Scientific</td>
			<td>697075- NC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">GXII Detection Window Cleaning Cloth</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21912-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">GXII HT Touch</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>CLS138160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">GXII Ladder Tubes</td>
			<td>Genemate</td>
			<td>C-3258-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">GXII Lint-Free Swab</td>
			<td>ITW Texwipe</td>
			<td>TX758B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hydrochloric Acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A144-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Intact mAb Mass Check Standard</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186006552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Intrada Amino Acid Column 150 x 2 mm</td>
			<td>Imtakt</td>
			<td>WAA25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>840274100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Optilab UT-rEX Differential Refractive Index Detector</td>
			<td>Wyatt</td>
			<td>WTREX-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Perchloric acid</td>
			<td>Aldrich Chemistry</td>
			<td>311421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pipet Tips with Microcapillary for Loading Gels</td>
			<td>Labcon</td>
			<td>1034-960-008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Polypropylene 96-Well Microplate, F-bottom, Chimney-style, Black</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>655209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">RapiFlour-MS Dextran Calibration Ladder</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186007982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Screw Top Clear Vial 2mL</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>5182-0715</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium Iodide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>383112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TSKgel UP-SW3000 4.6mm ID x 30 cm L</td>
			<td>Tosoh Biosciences</td>
			<td>003449</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">UNIFI Scientific Information System</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>667005138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vacuum Manifold Shims</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186007986</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vacuum Pump</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>725000604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Xevo G2 Q-ToF</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>186005597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Zeba Spin Desalting Column, 0.5 mL</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>89883</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification and analytics of a monoclonal antibody from chinese hamster ovary cells using an automated microbioreactor system

मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (mAbs) आज निर्मित सबसे लोकप्रिय और अच्छी तरह से विशेषता जैविक उत्पादों में से एक है। सबसे अधिक चीनी हम्सटर अंडाशय (सीएचओ) कोशिकाओं, संस्कृति और प्रक्रिया की स्थिति का उपयोग कर उत्पादित एंटीबॉडी titers को अधिकतम करने और लक्ष्य गुणवत्ता प्रोफाइल को प्राप्त करने के लिए अनुकूलित किया जाना चाहिए। आमतौर पर, इस अनुकूलन स्वचालित microscale bioreactors (15 एमएल) समानांतर में एकाधिक प्रक्रिया शर्तों स्क्रीन करने के लिए उपयोग करता है. अनुकूलन मापदंड संस्कृति प्रदर्शन और मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (mAb) उत्पाद है, जो इसकी प्रभावकारिता और सुरक्षा को प्रभावित कर सकते हैं की महत्वपूर्ण गुणवत्ता गुण (CQAs) शामिल हैं. संस्कृति प्रदर्शन मैट्रिक्स सेल विकास और पोषक तत्वों की खपत में शामिल हैं, जबकि CQAs है mAb एन ग्लाइकोसिलेशन और एकत्रीकरण प्रोफाइल, प्रभारी वेरिएंट, और आणविक वजन शामिल हैं. इस विस्तृत प्रोटोकॉल शुद्ध और बाद में मूल्यवान प्रदर्शन मैट्रिक्स और outputs हासिल करने के लिए एक स्वचालित microbioreactor प्रणाली द्वारा उत्पादित एचसीएफ नमूनों का विश्लेषण करने के लिए कैसे वर्णन करता है। सबसे पहले, एक स्वचालित प्रोटीन एक तेजी से प्रोटीन तरल क्रोमैटोग्राफी (FPLC) विधि काटा सेल संस्कृति के नमूने से mAb को शुद्ध करने के लिए प्रयोग किया जाता है। एक बार केंद्रित, ग्लिकन प्रोफाइल एक विशिष्ट मंच का उपयोग कर बड़े पैमाने पर स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा विश्लेषण कर रहे हैं (सामग्री की तालिका कोदेखें). एंटीबॉडी आणविक वजन और एकत्रीकरण प्रोफाइल आकार बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी-एकाधिक कोण प्रकाश प्रकीर्णन (एसईसी-MALS) का उपयोग कर निर्धारित कर रहे हैं, जबकि प्रभारी वेरिएंट माइक्रोचिप केशिका क्षेत्र इलेक्ट्रोफोरोसिस (एमसीईई) का उपयोग कर विश्लेषण कर रहे हैं। bioreacter प्रक्रिया के दौरान कब्जा कर लिया संस्कृति प्रदर्शन मैट्रिक्स के अलावा (यानी, संस्कृति व्यवहार्यता, सेल मायने रखता है, और glutamine, ग्लूकोज, लैक्टेट, और अमोनिया सहित आम चयापचयों), खर्च मीडिया के लिए सीमित पोषक तत्वों की पहचान करने के लिए विश्लेषण किया है खिला रणनीतियों और समग्र प्रक्रिया डिजाइन में सुधार होगा. इसलिए, खर्च किए गए मीडिया के तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस) द्वारा एमिनो एसिड के निरपेक्ष परिमाणीकरण के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का भी वर्णन किया गया है। इस प्रोटोकॉल में उपयोग की गई विधियाँ बड़ी संख्या में छोटे-मात्रा नमूने के लिए संगत हैं जो उच्च-थ्रूपुट प्लेटफॉर्म्स का लाभ ले।

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Purification and Analytics of a Monoclonal Antibody from Chinese Hamster Ovary Cells Using an Automated Microbioreactor System

स्वचालित microbioreactors की काटा सेल संस्कृति तरल पदार्थ (HCCF) से एक monoclonal एंटीबॉडी के शोधन और बाद में विश्लेषण के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है. महत्वपूर्ण गुणवत्ता विशेषताओं (CQAs) का निर्धारण करने और महत्वपूर्ण जानकारी निकालने के लिए सीमित नमूना मात्रा को अधिकतम करने के लिए विश्लेषिकी का उपयोग भी प्रस्तुत किया जाता है।

चीनी हम्सटर अंडाशय कोशिकाओं से एक मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का शोधन और विश्लेषण एक स्वचालित माइक्रोबायोरिएक्टर सिस्टम का उपयोग करते हुए

Monoclonal antibodies (mAbs) are one of the most popular and well-characterized biological products manufactured today. Most commonly produced using ...

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