Name: preclinical model of hind limb ischemia in diabetic rabbits
Uploaded: 2019-06-02T13:00:00
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Gli autori riconoscono con gratitudine il finanziamento attraverso il dipartimento di difesa Congressionalmente diretto programma di ricerca (DOD CDMRP; W81XWH-16-1-0582) a ABB e RS. Gli autori riconoscono anche il finanziamento attraverso l'American Heart Association (17IRG33410888), il DOD CDMRP (W81XWH-16-1-0580) e gli istituti nazionali di sanità (1R21EB023551-01; 1R21EB024147-01A1; 1R01HL141761-01) ad ABB.

Gli studi che coinvolgono gli animali sono stati condotti con l'approvazione dell'Università del Texas ad Austin e il centro scientifico Utheivita presso il Comitato istituzionale di cura e uso degli animali di Houston (IACUC), l'ufficio di revisione degli animali e dell'uso (ACURO) dell'esercito degli Stati Uniti Ricerca medica e Materiel comando ufficio di protezioni di ricerca, e in conformità con le linee guida NIH per la cura degli animali.
1. induzione del diabete e iperlipidemia
<ol...

Abbiamo presentato un modello preclinico per indurre l'ischemia degli arti posteriori nei conigli con diabete e iperlipidemia. In molti studi, c'è ambiguità alla tecnica utilizzata per creare l'ischemia degli arti posteriori nei conigli. Nei topi, la gravità e il recupero dall'ischemia degli arti posteriori dipendono fortemente dalla posizione della legatura e della tecnica utilizzata per indurre l'ischemia. Il significato della tecnica presentata in questo lavoro è che permette l'induzione costante di ischemia che n...

La malattia arteriosa periferica (PAD) è un disturbo circolatorio comune in cui la progressione della formazione di placca aterosclerotica porta ad un restringimento dei vasi sanguigni negli arti del corpo. Il recente aumento dei fattori di rischio per l'aterosclerosi, compreso il diabete, l'obesità e l'inattività, ha portato ad aumentare la prevalenza della malattia vascolare1. Attualmente, si stima che il 12% – 20% della popolazione generale oltre 60 anni ha una malattia arteriosa periferica2. Una delle principali conseguenze della malattia arteriosa periferica è lo sviluppo dell'ischemia periferica, più comunemente trovata negli arti inferiori. Nei casi più gravi, i pazienti possono sviluppare ischemia critica degli arti, uno stato in cui c'è dolore costante a causa di una mancanza di flusso sanguigno. I pazienti con ischemia critica degli arti hanno una probabilità 50% di avere un arto amputato entro un anno dalla diagnosi. Inoltre, i pazienti con diabete hanno una maggiore incidenza di arteriopatia periferica e risultati più poveri dopo interventi per la rivascolarizzazione3,4. Le attuali terapie per l'ischemia periferica includono interventi percutanei come aterectomia e stenting o bypass chirurgico. Tuttavia, per molti pazienti questi trattamenti forniscono solo benefici a breve termine e molti non sono abbastanza sani per le principali procedure chirurgiche. In questo lavoro, descriviamo un modello animale preclinico per testare nuovi trattamenti mirati alla malattia vascolare periferica che incorpora la generazione di ischemia periferica nei conigli attraverso la legazione chirurgica nel contesto dello stato di malattia diabetica.
Il modello di ischemia degli arti posteriori nei conigli è stato utilizzato come modello fisiologico per la malattia vascolare ostruttiva e precursore preclinico di studi umani per oltre mezzo secolo5,6. I conigli sono spesso una specie preferita per gli studi sull'ischemia periferica a causa della muscolatura sviluppata del muscolo della caviglia e del vitello, in contrasto con i comuni modelli animali di grandi dimensioni che sono ungulati (animali con zoccoli). Diverse recensioni recenti hanno affrontato l'uso di questo modello e altri nella modellazione della malattia vascolare periferica in esseri umani7,8. Modelli simili che utilizzano l'ischemia degli arti posteriori nei conigli sono stati usati negli studi preclinici sui fattori di crescita9,10,11,12,13,14, 15,16,17,18,19,20, terapia genica21,22,23, 24,25,26,27,28,29,30,31,32, 33,34,35,36,37,38,39,40,41, 42,43,44e cellule staminali45,46,47,48,49,50 ,51per la neovascolarizzazione terapeutica negli arti. Sfortunatamente, le sperimentazioni cliniche che hanno seguito questi studi animali di successo non hanno mostrato benefici significativi per i pazienti52.
Una spiegazione suggerita della ragione di questo fallimento traslazionale è che la condizione dell'ischemia periferica nei pazienti umani è quella che include la resistenza ai segnali angiogenici53,54,55, 56 a , 57 a , 58 a , 59. diversi studi hanno evidenziato difetti nelle vie di segnalazione angiogenica nel diabete e nell'iperglicemia. Il diabete e l'iperlipidemia portano ad una perdita di proteoglicani eparan solfato e un aumento degli enzimi che tagliano il solfato di eparan, presentando un potenziale meccanismo per la resistenza all'angiogenesi terapeutica/arteriogenesi con fattori di crescita60 , 61. Pertanto, una caratteristica fondamentale di un modello per l'ischemia periferica dovrebbe includere un aspetto della resistenza terapeutica in modo che le terapie possano essere valutate nel contesto dello stato di malattia presente nei pazienti umani.
In questo lavoro, descriviamo un modello di coniglio di ischemia periferica attraverso la legazione chirurgica delle arterie femorali. Un periodo di piombo con l'induzione del diabete e dell'iperlipidemia è incorporato nel modello. Abbiamo confrontato questo modello con un altro modello che incorpora una dieta grassa più alta senza diabete e ha scoperto che il modello con diabete e basso livello di iperlipidemia era più efficace nel ridurre la crescita dei vasi sanguigni. Il nostro modello combina i progressi che sono stati utilizzati da gruppi separati, con l'obiettivo di fornire un metodo pratico e standardizzato per ottenere risultati coerenti nella ricerca sulle malattie vascolari periferiche.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1537468 / 1531434</td>
			<td>250 mL bag / 1000 mL irrigation btl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Syringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309695</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>23-245684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Syringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Dextrose</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-800-9689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acepromazine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>VEDC207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alfaxalone</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-891-6051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alginate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PHR1471-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alloxan Monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiography Equipment</td>
			<td>Toshiba</td>
			<td>Infinix-i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiography Injector</td>
			<td>Medrad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Ab Alexa 594</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11032</td>
			<td>Secondary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Rabbit Ab Alexa 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11008</td>
			<td>Secondary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>a-SMA Antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5694</td>
			<td>Primary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baytril</td>
			<td>Bayer Animal Health</td>
			<td>724089904201</td>
			<td>Enrofloxacin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Chemistry Panel</td>
			<td>IDEXX</td>
			<td>2616</td>
			<td>Rabbit Panel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Pressure Cuff</td>
			<td>WelchAllyn</td>
			<td></td>
			<td>Flexiport Disposable BP Cuff-infant size 7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Pressure Monitor</td>
			<td>Vmed Technology</td>
			<td></td>
			<td>Vmed Vet-Dop2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>6023287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>42023017905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Sulfate</td>
			<td>CB Minerals</td>
			<td></td>
			<td>Food and Pharmaceutical Grade USP and FCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine Scrub</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-888-4598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>C298-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>62248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ear Vein Catheter</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>SR-OX165</td>
			<td>Surflo IV catheters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotracheal tube</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td></td>
			<td>Sheridan Brand, Depends on Rabbit Size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucometer</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B001A67WH2</td>
			<td>Accu-Chek Aviva</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucometer Test Strips</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>788222</td>
			<td>Accu-Chek Aviva Plus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guidewire</td>
			<td>Boston Scientific</td>
			<td>39122-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Clippers</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B000CQZI3Q</td>
			<td>Oster #40 blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>Cincinnati Subzero</td>
			<td>273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad Pump</td>
			<td>Gaymar</td>
			<td></td>
			<td>Gaymar T/Pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13009-12</td>
			<td>Curved Mosquito Hemostat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insertion Tool</td>
			<td>Merit Medical Systems</td>
			<td>MAP550</td>
			<td>metal wire insertion tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>HPB Pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Novalin R &#38; Novalin N</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringes</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>942674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Introducer</td>
			<td>Cook Medical</td>
			<td>G28954</td>
			<td>3F Check Flo Performer Introducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1100734</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>856440301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactated Ringers</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>186662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>239936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine/Prilocaine cream</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>761240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ligaloop</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH117 / CH116</td>
			<td>White Mini / Yellow Mini</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mazola Corn Oil</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B0049IIVCI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medrad Syringe</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>346920</td>
			<td>150 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal ball sutures</td>
			<td>Ethicon-Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>K891H</td>
			<td>4-0 silk C-1 30&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14019-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1215470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitroglycerin</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>927528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PECAM Antibody</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NB600-562</td>
			<td>Primary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion Pump</td>
			<td>Masterflex</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pigtail Catheter</td>
			<td>Merit Medical Systems</td>
			<td>1310-21-0053</td>
			<td>3F pigtail</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydioxanone (PDS II) suture</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>129271</td>
			<td>4-0 taper RB-1 (needle comes on suture)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydioxanone (PDS II) suture</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>129031</td>
			<td>4-0 reverse cutting FS-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyglactin 910 (Vicryl) suture</td>
			<td>Butler</td>
			<td>7233-41</td>
			<td>3-0 taper RB-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyglactin 910 (Vicryl) suture</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>104373</td>
			<td>4-0 reverse cutting FS-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Chow (Alfalfa)</td>
			<td>LabDiet</td>
			<td>5321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Restrainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10718-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rib Cutters</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10015-00</td>
			<td>#15 blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Sutures</td>
			<td>Ethicon-Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>A183H</td>
			<td>4-0 silk ties 18&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Ball</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>1598K23</td>
			<td>3-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drapes</td>
			<td>Gepco</td>
			<td>8204S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>DRE Veterinary</td>
			<td></td>
			<td>Versaflow VF-300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Visipaque contrast media</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>509055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weitlaner Retractor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17012-13</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preclinical model of hind limb ischemia in diabetic rabbits

La malattia vascolare periferica è un problema clinico diffuso che colpisce milioni di pazienti in tutto il mondo. Una delle principali conseguenze della malattia vascolare periferica è lo sviluppo di ischemia. Nei casi più gravi, i pazienti possono sviluppare ischemia critica degli arti in cui sperimentano dolore costante e un aumento del rischio di amputazione degli arti. Le attuali terapie per l'ischemia periferica includono la chirurgia di bypass o interventi percutanei come angioplastica con stenting o aterectomia per ripristinare il flusso sanguigno. Tuttavia, questi trattamenti spesso non riescono a progressione continua della malattia vascolare o ristenosi o sono controindicati a causa della scarsa salute generale del paziente. Un promettente approccio potenziale per il trattamento dell'ischemia periferica comporta l'induzione della neovascolarizzazione terapeutica per consentire al paziente di sviluppare vascolarizzazione collaterale. Questa rete appena formata allevia l'ischemia periferica ripristinando la perfusione all'area interessata. Il modello preclinico più frequentemente impiegato per l'ischemia periferica utilizza la creazione di ischemia degli arti posteriori nei conigli sani attraverso la legazione dell'arteria femorale. In passato, tuttavia, c'è stata una forte disconnessione tra il successo degli studi preclinici e il fallimento di sperimentazioni cliniche riguardanti trattamenti per l'ischemia periferica. Gli animali sani in genere hanno una solida rigenerazione vascolare in risposta a ischemia indotta chirurgicamente, in contrasto con la ridotta vascolarizzazione e rigenerazione in pazienti con ischemia periferica cronica. Qui, descriviamo un modello animale ottimizzato per l'ischemia periferica nei conigli che include iperlipidemia e diabete. Questo modello ha ridotto la formazione collaterale e il recupero della pressione sanguigna in confronto ad un modello con una dieta di colesterolo superiore. Così, il modello può fornire una migliore correlazione con i pazienti umani con angiogenesi compromessa dalle commorbilità comuni che accompagnano la malattia vascolare periferica.

Dopo l'induzione del diabete e l'inizio della dieta di colesterolo 0,1%, il colesterolo totale per i conigli con diabete e dieta di colesterolo è stato 123,3 ± 35,1 mg/dL (n = 6 conigli maschi) media dei punti di tempo complessivi e conigli. Il livello BGL per questi conigli è stato di 248,3 ± 50,4 mg/dL (n = 6 conigli maschi). Un corso di tempo per le sostanze chimiche del sangue e i rapporti di pressione sanguigna delle gambe in un coniglio tipico è mostrato nella Figura 3<...

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Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Descriviamo una procedura chirurgica utilizzata per indurre l'ischemia periferica nei conigli con iperlipidemia e diabete. Questo intervento chirurgico agisce come un modello preclinico per le condizioni sperimentate nella malattia dell'arteria periferica nei pazienti. L'angiografia è anche descritta come un mezzo per misurare l'entità dell'ischemia introdotta e il recupero della perfusione.

Modello preclinico di ischemia degli arti posteriori nei conigli diabetici

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

Un trattamento rigenerativo per le malattie arteriosa periferiche sarebbe estremamente vantaggioso e questo modello animale potrebbe essere in grado di testare meglio se i trattamenti sperimentali potrebbero funzionare in pazienti umani. La nostra procedura mira a presentare un modello migliore. Uno che replica più accuratamente la resistenza terapeutica riscontrata nei pazienti con diabete o iperlipidemia.Questo modello animale può essere utilizzato per testare nuove terapie per l'ischemia periferica e fornisce un modello pre-clinico che ha compromesso la neovascolarizzazione all'ischemia. Dopo aver confermato la mancanza di risposta al pizzico della zampa posteriore in un coniglio diabetico e iperlipidemico anestetizzato di quattro-sei mesi, usa un bisturi con una lama numero 15 per fare un'incisione lunga da quattro a cinque centimetri appena laterale sul lato destro della trachea e usa la dissezione smussata per esporre la giusta arteria carotide comune. Utilizzare piccoli retrattori Weitlaner per aprire l'incisione e isolare accuratamente l'arteria carotide dalla vena giugulare e dal nervo vago.Quando l'arteria carotide è stata completamente separata dal nervo e dalla vena giugulare, posizionare una sutura di seta 4-O alle estremità prossimali e distali dell'arteria esposta e legare l'estremità distale della carotide con un nodo del chirurgo e quattro nodi quadrati. All'estremità prossimale, utilizzare una cravatta in silicone vascolare per consentire il serraggio o l'allentamento del vaso, se necessario. Successivamente, applicare circa 0,5 millilitri di 1%lidocaina lungo l'arteria carotide esposta e il nervo per promuovere la vasodilatazione e ridurre l'irritazione nervosa.Amministrare 500 unità internazionali di eparina IV.Posizionare uno strumento di inserimento del filo da quattro pollici nell'arteria. Alimentare un filo guida di 0,014 pollici per 185 centimetri attraverso lo strumento di inserimento alla biforcazione aortica alla cresta iliaca nell'aorta discendente e far avanzare un catetere angiografico a tre code sul filo. Far avanzare il catetere a coda di maiale a due centimetri prossimale alla biforcazione aortica alla cresta iliaca nell'aorta discendente, posizionando la punta del catetere tra la settima vertebra lombare e la prima vertebra sacrale.Testare la posizione del catetere iniettando manualmente da due a quattro millilitri di agente di contrasto. Una volta confermato il corretto posizionamento, somministrare un'iniezione intraarteriale di 100 microgrammi di nitroglicerina attraverso il catetere per aumentare la vasodilatazione. Quindi somministrare da 0,8 a un millilitro di lidocaina all'1% attraverso il catetere per aiutare con la vasodilatazione e sciacquare il catetere con soluzione salina eparinizzata.Collegare i tubi per l'iniettore angiografico automatizzato al catetere, assicurandosi di rimuovere l'aria dalla linea. Utilizzare l'iniettore angiografico automatico per fornire nove millilitri di mezzo di contrasto attraverso il catetere a tre millilitri al secondo ed eseguire l'angiografia di sottrazione digitale a sei fotogrammi al secondo. Selezionare le immagini seriali e modificare l'immagine dell'angiogramma utilizzando l'impostazione meno 40% per ridurre al minimo l'aspetto dell'osso e acquisire un quadro completo della perfusione del vaso con contrasto.Per isolare l'arteria femorale, utilizzare una lama bisturi numero 15 per fare un'incisione longitudinale della pelle sull'arteria femorale destra, assicurandosi che l'incisione si estenda in modo inferiore dal legamento inguinale e finisca nell'area appena prossimale alla rotula. Utilizzare la dissezione smussata per esporre l'arteria femorale e aprire l'incisione con i retrattori Weitlaner. Applicare localmente circa 0,5 millilitri di lidocaina all'1% per ridurre l'irritazione nervosa e promuovere la vasodilatazione.Continuare la dissezione smussata dei tessuti per liberare l'intera lunghezza dell'arteria femorale insieme a tutti i suoi rami, comprese le arterie epigastriche, femorali profonde, circumflesse laterali e epigastriche superficiali inferiori. Sezionare lungo le arterie poplitee e saphenous, così come l'arteria iliaca esterna, idratando periodicamente l'area con soluzione salina per proteggere dai danni ai tessuti. Separare accuratamente l'arteria femorale dalla vena femorale e dal nervo e posizionare due suture di seta 4-O sull'arteria femorale con abbastanza spazio tra le suture per consentire la recisa dell'arteria.Quindi usa piccole forbici Metzenbaum per tagliare tra le due cravatte dell'arteria legata. Asportare l'arteria femorale da dove l'arteria biforca per formare le arterie safenose e poplitee, lavorando prossimalmente, legando qualsiasi rami laterali per asportare il resto dell'arteria femorale appena sotto l'arteria epigastrica. Per l'angiografia ripetuta, utilizzare un foglio silastico con una sfera montata in acciaio inossidabile da tre millimetri.Per attaccare la palla in acciaio inossidabile nella parte superiore del muscolo quadricipite con suture di seta 4-O. Tirare la pelle sopra la palla quando è in posizione. Somministrare un'iniezione intraarteriale di 100 microgrammi di nitroglicerina attraverso il catetere per aumentare la vasodilatazione.Se necessario, somministrare un altro 0,8 a un millilitro di 1%lidocaina attraverso il catetere per aiutare con vasodilatazione e lavare con soluzione salina eparinizzata. Utilizzare l'iniettore angiografico automatico alle stesse impostazioni per iniettare altri nove millilitri di mezzo di contrasto. Quindi eseguire un altro angiogramma, come dimostrato.Al termine della procedura, rimuovere il catetere dall'arteria destra e legare l'arteria utilizzando la sutura di seta 4-O già in posizione intorno all'arteria. Quindi chiudere gli strati muscolari e sottocuticolari con suture 4-O polidioxanone o poliglactina 3-O 910 su un ago di cono in un modello di sutura continua e chiudere la pelle usando suture 4-O polidiossanone o 4-O poliglactina 910 su un ago da taglio inverso in un modello di sutura sottocuticolare continua sepolta. Negli animali non diabetici, anche con colesterolo più alto, c'è un aumento del recupero della pressione sanguigna nell'arto ischemico e vascolarizzazione negli angiogrammi nel momento finale rispetto agli animali diabetici.Istologicamente, i cambiamenti nella struttura muscolare coerenti con l'edema e il danno ischemico sono osservati come perdita o interruzione delle fibre muscolari. Inoltre, l'immunostaining per PECAM one e alfa smooth muscle actin può essere utilizzato per identificare il numero e le dimensioni dei vasi nelle sezioni tissutali. Altri metodi di imaging, come gli ultrasuoni Doppler, l'imaging doppler laser, la termografia a infrarossi e la risonanza magnetica possono essere aggiunti per un ulteriore monitoraggio della riperfusione degli arti ischemici.Con questa incorporazione della resistenza terapeutica, il nostro modello imita più accuratamente l'ischemia in uno stato mato, avanzando la valutazione di nuove terapie per le malattie arteriosa periferiche.

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Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Valutazione dell'angiogenesi terapeutica in un modello Murine di Ischemia hindlimb

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Establishment of a Severe Dry Eye Model Using Complete Dacryoadenectomy in Rabbits

Istituzione di un modello di occhio secco severo utilizzando la dacrigofectomia completa nei conigli

Dry eye disease (DED) is a complex disease with multiple etiologies and variable symptoms, having ocular surface inflammation as its key pathophysiologic ...

Taking the Next Step: a Neural Coaptation Orthotopic Hind Limb Transplant Model to Maximize Functional Recovery in Rat

Fare il passo successivo: un modello di trapianto di arto hind di coaptation neurale per massimizzare il recupero funzionale nel ratto

Limb transplant in particular and vascularized composite allotransplant (VCA) in general have wide therapeutic promise that have been stymied by current ...