Name: preclinical model of hind limb ischemia in diabetic rabbits
Uploaded: 2019-06-02T13:00:00
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Os autores reconhecem com gratidão o financiamento através do departamento de defesa do programa de pesquisa dirigida pelo Congresso (DOD CDMRP; W81XWH-16-1-0582) para ABB e RS. Os autores igualmente reconhecem o financiamento através da associação americana do coração (17IRG33410888), do DOD CDMRP (W81XWH-16-1-0580) e dos institutos nacionais da saúde (1R21EB023551-01; 1R21EB024147-01A1; 1R01HL141761-01) a ABB.

Estudos envolvendo animais foram realizados com a aprovação da Universidade do Texas em Austin e o centro de ciência UTHealth no Comitê de cuidados e uso de animais institucionais de Houston (IACUC), o serviço de revisão de cuidados e uso de animais (ACURO) do exército dos Estados Unidos Pesquisa médica e materiel Command Office de proteções de pesquisa, e de acordo com as diretrizes da NIH para o cuidado dos animais.
1. indução de diabetes e hiperlipidemia
<ol><li>Transição do...

Nós apresentamos um modelo pré-clínico para induzir a isquemia do membro traseiro nos coelhos com diabetes e hyperlipidemia. Em muitos estudos, há ambigüidade à técnica utilizada para criar isquemia de membro posterior em coelhos. Em camundongos, a severidade e a recuperação da isquemia dos membros posteriores é altamente dependente da localização da ligadura e da técnica utilizada para induzir isquemia. O significado da técnica apresentada neste trabalho é que permite a indução consistente da isquemia q...

A doença arterial periférica (PAD) é um distúrbio circulatório comum em que a progressão da formação da placa aterosclerótica leva a um estreitamento dos vasos sanguíneos nos membros do corpo. O recente aumento dos fatores de risco para a aterosclerose, incluindo diabetes, obesidade e inatividade, tem levado ao aumento da prevalência de doença vascular1. Atualmente, estima-se que 12% – 20% da população geral acima de 60 anos de idade tenha doença arterial periférica2. Uma consequência importante da doença arterial periférica é o desenvolvimento de isquemia periférica, mais comumente encontrada nos membros inferiores. Em casos graves, os pacientes podem desenvolver isquemia crítica do membro, um estado em que há dor constante devido à falta de fluxo sanguíneo. Os pacientes com isquemia crítica do membro têm uma probabilidade de 50% de ter um membro amputado dentro de um ano do diagnóstico. Além disso, pacientes com diabetes apresentam maior incidência de doença arterial periférica e desfechos mais pobres após intervenções para revascularização3,4. As terapias atuais para a isquemia periférica incluem intervenções percutaneous tais como o aterectomia e stenting ou o desvio cirúrgico. Entretanto, para muitos pacientes estes tratamentos fornecem somente benefícios a curto prazo e muitos não são saudáveis bastante para procedimentos cirúrgicos principais. Neste trabalho, descrevemos um modelo animal pré-clínico para testar novos tratamentos visando a doença vascular periférica que incorpora a geração de isquemia periférica em coelhos através da ligadura cirúrgica no contexto do estado da doença diabética.
O modelo de isquemia do membro Hind em coelhos tem sido utilizado como modelo fisiológico para doença vascular obstrutiva e precursor pré-clínico para estudos humanos há mais de meio século5,6. Os coelhos são muitas vezes uma espécie preferida para estudos sobre isquemia periférica devido à musculatura desenvolvida do tornozelo e do músculo da panturrilha, em contraste com grandes modelos animais comuns que são ungulados (animais com cascos). Várias revisões recentes abordaram o uso desse modelo e outros na modelagem da doença vascular periférica em humanos7,8. Modelos semelhantes, utilizando isquemia de membro posterior em coelhos, foram utilizados em estudos pré-clínicos de fatores de crescimento9,10,11,12,13,14, 15,16,17,18,19,20, terapia genética21,22,23, 24,25,26,27,28,29,30,31,32, 33,34,35,36,37,38,39,40,41, 42,43,44, e células-tronco45,46,47,48,49,50 ,51para neovascularização terapêutica nos membros. Infelizmente, os ensaios clínicos que seguiram estes estudos animais bem sucedidos não mostraram benefícios significativos para os pacientes52.
Uma explanação sugerida da razão para esta falha translacional é que a condição da isquemia periférica em pacientes humanos é uma que inclui a resistência aos sinais angiogênico53,54,55, 56 , 57 , 58 , 59. vários estudos demonstraram defeitos nas vias de sinalização angiogênica em diabetes e hiperglicemia. Diabetes e hiperlipidemia levam a uma perda de proteoglicanos de sulfato de heparan e um aumento de enzimas que cortam o sulfato de heparan, apresentando um potencial mecanismo de resistência à angiogênese terapêutica/arteriogênese com fatores de crescimento60 , 61. assim, uma característica fundamental de um modelo de isquemia periférica deve incluir um aspecto da resistência terapêutica para que as terapias possam ser avaliadas no contexto do estado da doença presente em pacientes humanos.
Neste trabalho, nós descrevemos um modelo do coelho da isquemia periférica com a ligadura cirúrgica das artérias femoral. Um lead-in período com a indução de diabetes e hiperlipidemia é incorporado no modelo. Comparou-se este modelo a outro modelo que incorpora uma dieta mais gorda sem diabetes e constatou que o modelo com diabetes e menor nível de hiperlipidemia foi mais eficaz na redução do crescimento dos vasos sanguíneos. Nosso modelo combina avanços que têm sido utilizados por grupos distintos, com o objetivo de fornecer um método prático e padronizado para alcançar resultados consistentes na pesquisa de doenças vasculares periféricas.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1537468 / 1531434</td>
			<td>250 mL bag / 1000 mL irrigation btl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Syringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309695</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>23-245684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27G Needle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89219-288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Syringe</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Dextrose</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-800-9689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acepromazine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>VEDC207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alfaxalone</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-891-6051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alginate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PHR1471-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alloxan Monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiography Equipment</td>
			<td>Toshiba</td>
			<td>Infinix-i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiography Injector</td>
			<td>Medrad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Ab Alexa 594</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11032</td>
			<td>Secondary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Rabbit Ab Alexa 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11008</td>
			<td>Secondary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>a-SMA Antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5694</td>
			<td>Primary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baytril</td>
			<td>Bayer Animal Health</td>
			<td>724089904201</td>
			<td>Enrofloxacin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Chemistry Panel</td>
			<td>IDEXX</td>
			<td>2616</td>
			<td>Rabbit Panel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Pressure Cuff</td>
			<td>WelchAllyn</td>
			<td></td>
			<td>Flexiport Disposable BP Cuff-infant size 7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood Pressure Monitor</td>
			<td>Vmed Technology</td>
			<td></td>
			<td>Vmed Vet-Dop2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>6023287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>42023017905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Sulfate</td>
			<td>CB Minerals</td>
			<td></td>
			<td>Food and Pharmaceutical Grade USP and FCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine Scrub</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-888-4598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>C298-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>62248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ear Vein Catheter</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>SR-OX165</td>
			<td>Surflo IV catheters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotracheal tube</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td></td>
			<td>Sheridan Brand, Depends on Rabbit Size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucometer</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B001A67WH2</td>
			<td>Accu-Chek Aviva</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucometer Test Strips</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>788222</td>
			<td>Accu-Chek Aviva Plus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guidewire</td>
			<td>Boston Scientific</td>
			<td>39122-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Clippers</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B000CQZI3Q</td>
			<td>Oster #40 blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>Cincinnati Subzero</td>
			<td>273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad Pump</td>
			<td>Gaymar</td>
			<td></td>
			<td>Gaymar T/Pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13009-12</td>
			<td>Curved Mosquito Hemostat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insertion Tool</td>
			<td>Merit Medical Systems</td>
			<td>MAP550</td>
			<td>metal wire insertion tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>HPB Pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Novalin R &#38; Novalin N</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringes</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>942674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Introducer</td>
			<td>Cook Medical</td>
			<td>G28954</td>
			<td>3F Check Flo Performer Introducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1100734</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>856440301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactated Ringers</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>186662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>239936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine/Prilocaine cream</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>761240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ligaloop</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td>CH117 / CH116</td>
			<td>White Mini / Yellow Mini</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mazola Corn Oil</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B0049IIVCI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medrad Syringe</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>346920</td>
			<td>150 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal ball sutures</td>
			<td>Ethicon-Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>K891H</td>
			<td>4-0 silk C-1 30&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14019-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1215470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitroglycerin</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>927528</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PECAM Antibody</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NB600-562</td>
			<td>Primary Antibody for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion Pump</td>
			<td>Masterflex</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pigtail Catheter</td>
			<td>Merit Medical Systems</td>
			<td>1310-21-0053</td>
			<td>3F pigtail</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydioxanone (PDS II) suture</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>129271</td>
			<td>4-0 taper RB-1 (needle comes on suture)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydioxanone (PDS II) suture</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>129031</td>
			<td>4-0 reverse cutting FS-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyglactin 910 (Vicryl) suture</td>
			<td>Butler</td>
			<td>7233-41</td>
			<td>3-0 taper RB-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyglactin 910 (Vicryl) suture</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>104373</td>
			<td>4-0 reverse cutting FS-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Chow (Alfalfa)</td>
			<td>LabDiet</td>
			<td>5321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Restrainer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10718-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rib Cutters</td>
			<td>V. Mueller</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10015-00</td>
			<td>#15 blade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Sutures</td>
			<td>Ethicon-Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>A183H</td>
			<td>4-0 silk ties 18&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Ball</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>1598K23</td>
			<td>3-mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Drapes</td>
			<td>Gepco</td>
			<td>8204S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>DRE Veterinary</td>
			<td></td>
			<td>Versaflow VF-300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Visipaque contrast media</td>
			<td>McKesson Medical-Surgical</td>
			<td>509055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weitlaner Retractor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>17012-13</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preclinical model of hind limb ischemia in diabetic rabbits

A doença vascular periférica é um problema clínico generalizado que afeta milhões de pacientes em todo o mundo. Uma consequência importante da doença vascular periférica é o desenvolvimento de isquemia. Em casos graves, os pacientes podem desenvolver isquemia crítica do membro em que experimentam a dor constante e um risco aumentado de amputação do membro. As terapias atuais para isquemia periférica incluem cirurgia de bypass ou intervenções percutâneas, como angioplastia com stent ou aterectomia para restaurar o fluxo sanguíneo. Entretanto, estes tratamentos falham frequentemente à progressão continuada da doença vascular ou do reestenose ou são contra-indicado devido à saúde pobre total do paciente. Uma abordagem potencial promissora para tratar a isquemia periférica envolve a indução de neovascularização terapêutica para permitir que o paciente desenvolva vasculatura colateral. Esta rede recém-formada alivia a isquemia periférica, restaurando a perfusão para a área afetada. O modelo pré-clínico mais freqüentemente empregado para isquemia periférica utiliza a criação de isquemia de membros posteriores em coelhos sadios através da ligadura da artéria femoral. No passado, no entanto, houve uma forte desconexão entre o sucesso dos estudos pré-clínicos e o fracasso dos ensaios clínicos em relação aos tratamentos para isquemia periférica. Os animais sadios têm tipicamente regeneração vascular robusta em resposta à isquemia cirurgicamente induzida, em contraste com a redução da vascularização e regeneração em pacientes com isquemia periférica crônica. Aqui, nós descrevemos um modelo animal aperfeiçoado para a isquemia periférica nos coelhos que inclui o hiperlipidemia e o diabetes. Este modelo reduziu a formação colateral e a recuperação da pressão sanguínea em comparação com um modelo com uma dieta mais elevada do colesterol. Assim, o modelo pode proporcionar melhor correlação com pacientes humanos com angiogênese comprometida a partir das comorbidades comuns que acompanham a doença vascular periférica.

Após a indução do diabetes e a iniciação da dieta do colesterol de 0,1%, o colesterol total para os coelhos com dieta do diabetes e do colesterol era 123,3 ± 35,1 mg/dL (n = 6 coelhos masculinos) média de pontos de tempo totais e coelhos. O nível de BGL para esses coelhos foi de 248,3 ± 50,4 mg/dL (n = 6 coelhos machos). Um curso do tempo para químicas do sangue e relações da pressão sanguínea do pé em um coelho típico é mostrado em Figura 3 em comparaç?...

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Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Nós descrevemos um procedimento cirúrgico usado para induzir a isquemia periférica nos coelhos com hiperlipidemia e diabetes. Esta cirurgia actua como um modelo pré-clínico para as circunstâncias experimentadas na doença de artéria periférica nos pacientes. A angiografia também é descrita como um meio de medir a extensão da isquemia introduzida e a recuperação da perfusão.

Modelo pré-clínico de isquemia de membros posteriores em coelhos diabéticos

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

Um tratamento regenerativo para doença arterial periférica seria extremamente benéfico e este modelo animal pode ser capaz de testar melhor se tratamentos experimentais poderiam funcionar em pacientes humanos. Nosso procedimento visa apresentar um modelo melhorado. Uma que replica com mais precisão a resistência terapêutica encontrada em pacientes com diabetes ou hiperlipidemia.Este modelo animal pode ser usado para testar novas terapias para isquemia periférica e fornece um modelo pré-clínico que comprometeu a neovascularização à isquemia. Depois de confirmar a falta de resposta à beliscação da pata traseira em um coelho diabético e hiperlipidêmico anestêmico de quatro a seis meses, use um bisturi com uma lâmina número 15 para fazer uma incisão de quatro a cinco centímetros de comprimento apenas lateral para o lado direito da traqueia e usar dissecção sem corte para expor a artéria carótida comum certa. Use pequenos retráteis Weitlaner para abrir a incisão e isolar cuidadosamente a artéria carótida da veia jugular e do nervo vago.Quando a artéria carótida estiver totalmente separada da veia nervosa e jugular, coloque uma sutura de seda 4-O nas extremidades proximal e distal da artéria exposta e amarre a extremidade distal do carótida com o nó de um cirurgião e quatro nós quadrados. Na extremidade proximal, use uma gravata de silicone vascular para permitir o aperto ou afrouxamento do vaso, conforme necessário. Em seguida, aplique aproximadamente 0,5 mililitros de 1%lidocaína ao longo da artéria carótida exposta e nervo para promover a vasodilatação e reduzir a irritação nervosa.Administre 500 unidades internacionais de heparina IV.Coloque uma ferramenta de inserção de fio de quatro polegadas na artéria. Alimente um fio-guia de 0,014 polegadas por 185 centímetros através da ferramenta de inserção para a bifurcação aórtica na crista ilíaca na aorta descendente, e avance um cateter angiográfico de três rabos-de-cavalo franceses sobre o fio. Avance o cateter de rabo de cavalo para dois centímetros proximal à bifurcação aórtica na crista ilíaca na aorta descendente, posicionando a ponta do cateter entre a sétima lombar e a primeira vértebra sacral.Teste a localização do cateter injetando manualmente de dois a quatro mililitros de agente de contraste. Uma vez confirmado o posicionamento correto, administre uma injeção intraarterial de 100 microgramas de nitroglicerina através do cateter para aumentar a vasodilatação. Em seguida, administre 0,8 a um mililitro de 1%lidocaína através do cateter para auxiliar na vasodilatação e lave o cateter com soro fisiológico heparinizado.Conecte a tubulação para o injetor angiográfico automatizado ao cateter, certificando-se de remover qualquer ar da linha. Use o injetor angiográfico automatizado para fornecer nove mililitros de meio de contraste através do cateter a três mililitros por segundo e realize a angiografia de subtração digital a seis quadros por segundo. Selecione as imagens seriais e altere a imagem do angiograma usando menos 40% de configuração para minimizar a aparência do osso e capturar uma imagem completa da perfusão do vaso com contraste.Para isolar a artéria femoral, use uma lâmina de bisturi número 15 para fazer uma incisão longitudinal da pele sobre a artéria femoral direita, certificando-se de que a incisão se estende inferiormente do ligamento inguinal e termina na área apenas proximal à patela. Use dissecção contundente para expor a artéria femoral e abrir a incisão com retratores Weitlaner. Aplique aproximadamente 0,5 mililitros de 1%lidocaína localmente para reduzir a irritação nervosa e promover a vasodilatação.Continue a dissecção contundente dos tecidos para liberar toda a extensão da artéria femoral juntamente com todos os seus ramos, incluindo as artérias epigástricas inferiores, femorais profundas, circunflexos laterais e epigástricas superficiais. Disseque ao longo das artérias popliteal e safena, bem como a artéria ilíaca externa, hidratando periodicamente a área com soro fisiológico para proteger contra danos teciduais. Separe cuidadosamente a artéria femoral da veia femoral e do nervo e coloque duas suturas de seda 4-0 na artéria femoral com espaço suficiente entre as suturas para permitir que a artéria seja cortada.Em seguida, use uma tesoura pequena Metzenbaum para cortar entre os dois laços da artéria ligada. Extite a artéria femoral de onde a artéria bifurca para formar as artérias safenas e popliteais, trabalhando proximamente, amarrando qualquer ramo lateral para extircar o resto da artéria femoral até logo abaixo da artéria epigástrica. Para a angiografia repetida, use uma folha silastic com uma bola de aço inoxidável de três milímetros montada.Para fixar a bola de aço inoxidável na parte superior do músculo quadríceps com suturas de seda 4-O. Puxe a pele sobre a bola quando ela estiver no lugar. Administre uma injeção intraarterial de 100 microgramas de nitroglicerina através do cateter para aumentar a vasodilatação.Se necessário, administre outro 0,8 a um mililitro de 1%lidocaína através do cateter para auxiliar na vasodilatação e lave com soro fisiológico heparinizado. Use o injetor angiográfico automatizado nas mesmas configurações para injetar outros nove mililitros de meio de contraste. Em seguida, realize outro angiograma, como demonstrado.No final do procedimento, remova o cateter da artéria direita e amarre a artéria usando a sutura de seda 4-O já em vigor ao redor da artéria. Em seguida, feche as camadas musculares e subcuticulares com polidioxanona 4-O ou 3-O poliglactina 910 suturas em uma agulha de taper em um padrão de sutura contínua e feche a pele usando polidioxanona 4-O ou 4-O poliglactina 910 suturas em uma agulha de corte reversa em um padrão de sutura subcuticular contínua enterrada. Em animais não diabéticos, mesmo com colesterol mais elevado, há uma recuperação aumentada da pressão arterial no membro isquêmico e vascularização nos angiogramas no momento final em comparação com animais diabéticos.Histologicamente, alterações na estrutura muscular consistentes com edema e danos isquêmicos são observadas como perda ou ruptura das fibras musculares. Além disso, a imunostaining para PECAM um e alfa smooth muscle actin pode ser usada para identificar o número e o tamanho dos vasos nas seções teciduais. Outros métodos de imagem, como ultrassom Doppler, imagem do doppler laser, termografia infravermelha e ressonância magnética podem ser adicionados para um monitoramento adicional da reperfusão do membro isquêmico.Com essa incorporação da resistência terapêutica, nosso modelo imita com mais precisão a isquemia em estado doente, avançando na avaliação de novas terapias para doença arterial periférica.

Research

JoVE Journal

Medicine

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